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干细胞修复面神经损伤的作用与潜力 预览
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作者 肖广庆 伦志刚 +1 位作者 陈慧珍 李爱民 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第21期3439-3444,共6页
背景:面神经损伤极为常见,其治疗“金标准”自体神经移植具有一定的局限性,因此,干细胞疗法用于面神经损伤成为近些年的研究热点。目的:从实验动物模型、组织工程应用及各类干细胞的特点和应用几个方面进行综述,阐述目前面神经损伤在基... 背景:面神经损伤极为常见,其治疗“金标准”自体神经移植具有一定的局限性,因此,干细胞疗法用于面神经损伤成为近些年的研究热点。目的:从实验动物模型、组织工程应用及各类干细胞的特点和应用几个方面进行综述,阐述目前面神经损伤在基础研究方面的进展。方法:检索2005至2018年期间收录在PubMed、中国知网、万方等数据库相关文章,检索词为“干细胞、组织工程、面神经”“stem cell、tissue engineering、facial nerve”,检索文献包括实验研究和综述,共纳入文献54篇。结果与结论:用于面神经损伤修复研究方面的干细胞主要有神经干细胞、骨髓间充质干细胞、脂肪干细胞、牙源性干细胞、骨骼肌干细胞、嗅干细胞等,具有种类多、来源广、快速增殖和多元分化等特点,干细胞疗法具有极大的潜力在将来代替自体神经移植成为治疗面神经损伤的主要手段。 展开更多
关键词 神经干细胞 骨髓间充质干细胞 脂肪干细胞 牙源性干细胞 骨骼肌干细胞 嗅干细胞 面神经损伤 替代疗法
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3种间充质干细胞成软骨分化潜能比较
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作者 韩俊柱 朱勋兵 +2 位作者 武世伍 李徽徽 王胜 《现代生物医学进展》 CAS 2019年第12期2252-2255,共4页
目的:比较骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、滑膜间充质干细胞3种间充质干细胞的成软骨分化潜能,为软骨组织工程中种子细胞的选择提供实验依据。方法:采用贴壁法分别分离提取兔骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、滑膜间充质干细... 目的:比较骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、滑膜间充质干细胞3种间充质干细胞的成软骨分化潜能,为软骨组织工程中种子细胞的选择提供实验依据。方法:采用贴壁法分别分离提取兔骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、滑膜间充质干细胞3种间充质干细胞,并进行传代培养,绘制3种间充质干细胞的生长曲线并比较其倍增时间。将3种间充质干细胞成软骨诱导14 d后,行甲苯胺蓝染色及II型胶原免疫组化染色以观测3种细胞成软骨分化能力。结果:脂肪间充质干细胞的倍增时间短于骨髓间充质干细胞,滑膜间充质干细胞的倍增时间最短;3种细胞成软骨诱导14 d后均产生糖胺聚糖和II型胶原,且组与组之间II型胶原表达水平的差异有统计学意义,骨髓间充质干细胞组高于脂肪间充质干细胞组(P<0.01),滑膜间充质干细胞组高于骨髓间充质干细胞组(P<0.01)。结论:在一定的培养条件下,3种间充质干细胞均有一定的成软骨细胞分化潜能,滑膜间充质干细胞最快的增殖速度及最强的成软骨分化潜能。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓间充质干细胞 脂肪间充质干细胞 滑膜间充质干细胞 成软骨分化
牙髓干细胞来源条件培养基促进组织修复与再生的研究进展 预览
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作者 秦杰 王晓春 《医学综述》 2019年第12期2316-2320,共5页
间充质干细胞(MSCs)在再生医学中具有很大的应用潜力。目前,以MSCs为基础的治疗方法的研究正在进行,其中,牙髓干细胞(DPSCs)在是组织工程研究的热点,其具有很强的自我更新和修复组织和器官的能力,并可调节免疫系统。DPSCs的获取方法简... 间充质干细胞(MSCs)在再生医学中具有很大的应用潜力。目前,以MSCs为基础的治疗方法的研究正在进行,其中,牙髓干细胞(DPSCs)在是组织工程研究的热点,其具有很强的自我更新和修复组织和器官的能力,并可调节免疫系统。DPSCs的获取方法简单、无痛、无创伤,无伦理等顾虑。DPSCs的分泌因子可在其条件培养基(CM)中找到,其介导的旁分泌机制在修复过程中起主要作用,可用于修复牙体组织、血管组织、神经组织、骨组织等。DPSCs-CM具有许多优势,可用于同种异体治疗。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 间充质干细胞 骨髓间充质干细胞 条件培养基 再生医学
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干细胞治疗阿尔茨海默病的研究现状及发展趋势 预览
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作者 许革新 张云霞 张海英 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第33期5378-5384,共7页
背景:阿尔茨海默病是一种脑退行性疾病,目前药物对其治疗无明显效果,干细胞移植为其提供了一个新的治疗手段。目的:揭示干细胞治疗阿尔茨海默病的主题、演进路径和研究进展,以期对阿尔茨海默病的研究和临床治疗提供参考。方法:检索中国... 背景:阿尔茨海默病是一种脑退行性疾病,目前药物对其治疗无明显效果,干细胞移植为其提供了一个新的治疗手段。目的:揭示干细胞治疗阿尔茨海默病的主题、演进路径和研究进展,以期对阿尔茨海默病的研究和临床治疗提供参考。方法:检索中国知网、中国生物医学文献数据库、ISI Web of Knowledge数据库和Embace数据库,以"Alzheimer’s disease""stem cell""阿尔茨海默病""干细胞"+"阿尔茨海默病"为关键词检索相关文献,运用Cite Space软件对干细胞治疗阿尔茨海默病进行可视化知识图谱分析和文献梳理。结果与结论:干细胞治疗阿尔茨海默病研究的演进路径与干细胞移植研究密切相关。该研究主线单一且突出,围绕"阿尔茨海默病——干细胞、神经干细胞——移植——骨髓间充质干细胞、间充质干细胞、人脐带间充质干细胞、β-淀粉样蛋白——组织工程"等关键词和由其构成的核心领域而展开和实施的。人类干细胞临床试验也已处于初期阶段,应重视使用干细胞的安全性、有效性及伦理问题,将干细胞分化调控作为研究重点,尽早实现个体化的干细胞治疗,为阿尔茨海默病患者带来曙光。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 神经干细胞 骨髓间充质干细胞 脐带间充质干细胞 CITESPACE 国家自然科学基金
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3种口腔颌面部来源的间充质干细胞成血管内皮分化潜能的比较研究 预览
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作者 谢静 赵玉鸣 +7 位作者 饶南荃 汪晓彤 方滕姣子 李晓霞 翟越 李静芝 葛立宏 王媛媛 《北京大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期900-906,共7页
目的:研究来自口腔颌面部的脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)、牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSC)和颌骨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)的增殖能力及成... 目的:研究来自口腔颌面部的脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)、牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSC)和颌骨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)的增殖能力及成血管内皮细胞分化潜能,为血管组织工程再生种子细胞的选择提供依据。方法:取临床乳牙和恒牙牙髓组织及颌骨组织并采用酶消化法分离培养相应的间充质干细胞,流式细胞技术检测间充质干细胞相关表面抗原的表达。采用CCK-8(cell counting kit-8)法检测细胞的增殖能力。通过Matrigel三维培养技术诱导间充质干细胞成血管内皮细胞分化,并通过管腔计数及real-time PCR技术比较3种间充质干细胞的成血管内皮细胞分化能力。采用鸡胚绒毛尿囊膜(chick embryo chorioallantoic membrane,CAM)技术观察3种不同间充质干细胞新生血管能力。结果:3种干细胞均阳性表达CD73、CD90、CD105、CD146,阴性表达CD34、CD45,符合间充质干细胞表面标记物的表达规律。SHED和DPSC的CD146表达率多于BMSC,CCK-8法检测显示SHED的增殖能力最强。诱导后的3种细胞均可在Matrigel基质胶上形成管腔样结构,诱导后SHED和BMSC形成的血管总长度大于DPSC,SHED形成的管腔数多于BMSC和DPSC。real-time PCR结果显示几种成血管相关的细胞因子在不同细胞间表达存在差别。诱导后SHED的CD31、VEGFR2、vWF表达显著高于另外两种细胞。BMSC的VEGFR1表达量高于其他组,SHED高于DPSC。VEGF的表达在4组之间差异无统计学意义。3种细胞在CAM上计数新生血管数目显示较空白对照组差异无统计学意义,SHED组血管总长度较空白对照和BMSC大。结论:SHED、DPSC及BMSC均能向成血管内皮细胞方向诱导分化且在Matrigel培养基上形成血管和管腔,SHED具有更强的分化和形成管腔的能力,同时SHED较BMSC及DPSC具有更强的增殖能力。 展开更多
关键词 脱落乳牙牙髓干细胞 牙髓干细胞 颌骨骨髓间充质干细胞 血管内皮细胞分化 细胞增殖
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淫羊藿苷干预磷酸钙骨水泥/骨髓间充质干细胞复合体修复兔股骨缺损 预览
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作者 贾丙申 张熙明 +5 位作者 于鹏 李明 李君 云大科 王晟 胡帅 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第30期4757-4762,共6页
背景:已有研究显示磷酸钙骨水泥与骨髓间充质干细胞复合物有助于修复软骨缺损。淫羊藿苷是一类黄酮类物质,其对细胞增殖和分化有明显促进作用。目的:观察淫羊藿苷干预下磷酸钙骨水泥/骨髓间充质干细胞复合体修复兔股骨缺损的效果。方法:... 背景:已有研究显示磷酸钙骨水泥与骨髓间充质干细胞复合物有助于修复软骨缺损。淫羊藿苷是一类黄酮类物质,其对细胞增殖和分化有明显促进作用。目的:观察淫羊藿苷干预下磷酸钙骨水泥/骨髓间充质干细胞复合体修复兔股骨缺损的效果。方法:取30只新西兰大白兔(海南医学院实验动物中心提供),随机分为3组并制作右侧股骨末端骨缺损模型:空白组股骨缺损不填充材料,对照组骨缺损处植入成骨诱导培养的骨髓间充质干细胞与磷酸钙骨水泥复合物,实验组股骨缺损处植入淫羊藿苷干预且经成骨诱导培养的骨髓间充质干细胞与磷酸钙骨水泥复合物。术后4,8,12周进行骨缺损部位影像学、生物力学分析。动物实验获得海南医学院第一附属医院伦理委员会批准。结果与结论:①术后4,8,12周Micro-CT显示,实验组成骨速度明显优于空白组和对照组;术后第12周,对照组中磷酸钙骨水泥有部分被新骨代替,骨痂未完全包绕,实验组股骨缺损区已完全有新骨生成,植入的磷酸钙骨水泥已完全降解;实验组和对照组术后12周的骨小梁模式因子、骨体积分数、骨小梁数量均明显高于空白组(P<0.05),并且实验组各项指标优于对照组(P<0.05);②实验组术后4,8,12周的骨密度高于对照组、空白组(P<0.05);③实验组术后12周的骨标本抗弯曲能力的最大应力、最大负荷力和破坏能量明显高于对照组、空白组(P<0.05);④结果表明,淫羊藿苷干预后的骨髓间充质干细胞/磷酸钙骨水泥复合物能有效促进新骨形成,加快骨修复。 展开更多
关键词 磷酸钙骨水泥 淫羊藿苷 骨髓间充质干细胞 股骨缺损 骨密度 生物力学 骨形成 骨修复
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差速离心、密度梯度离心、超滤离心技术在骨髓间充质干细胞外泌体提取中的应用对比观察 预览
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作者 罗靖莹 贺宏丽 +2 位作者 郭阳 黄玮玮 黄晓波 《山东医药》 CAS 2019年第12期48-52,共5页
目的观察差速离心、密度梯度离心、超滤离心技术在骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体提取中的应用,筛选外泌体最佳离心提取方法。方法取BMSCs培养48 h后收集细胞上清,平均分成A、B、C组,分别使用差速离心技术、密度梯度离心技术、超滤离心... 目的观察差速离心、密度梯度离心、超滤离心技术在骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体提取中的应用,筛选外泌体最佳离心提取方法。方法取BMSCs培养48 h后收集细胞上清,平均分成A、B、C组,分别使用差速离心技术、密度梯度离心技术、超滤离心技术提取外泌体;记录各组外泌体提取时间;采用负染色技术观察各组外泌体形态;使用纳米颗粒跟踪分析仪测算各组外泌体浓度及大小;采用BCA法测定外泌体总蛋白浓度;采用Western blotting法检测各组外泌体表面标志蛋白CD9、CD63、Alix。将肺微血管内皮细胞(PMVECs)分成5组,EC组上室加入PMVECs及培养基;LPS组上室加入PMVECs及含LPS的培养基(构建内皮细胞损伤模型);A、B、C组上室加入方法同LPS组,下室分别加入A、B、C组外泌体;采用葡聚糖渗漏实验检测外泌体内皮细胞通透性(观察外泌体对内皮细胞的修复作用),以内皮细胞通透指数表示。结果 A、B、C组的外泌体的提取时间分别为(180±8)、(203±10)、(40±5) min,A、B组外泌体的提取时间与C组相比,P均<0. 05。各组外泌体均为大小不等的椭圆形或圆形的膜性结构,边界清晰,但仅A组外泌体可见到典型的杯状结构。A、B、C组的外泌体浓度分别为(4. 46±0. 38)×10^8/m L、(5. 11±0. 16)×10^8/m L、(2. 18±0. 17)×10^8/m L,A、B组与C组外泌体浓度相比,P均<0. 05。A、B、C组的外泌体大小均为20~100 nm。A、B组外泌体总蛋白浓度及CD63、Alix的相对表达量均显著高于C组(P均<0. 05)。A、B、C、LPS、EC组的内皮细胞通透指数分别为2. 17±0. 15、1. 77±0. 32、2. 37±0. 42、2. 93±0. 15、1. 00±0. 00,A、B、C、LPS组的内皮细胞通透指数与EC组相比,P均<0. 05;A、B组的内皮细胞通透指数与LPS组相比,P均<0. 05。结论密度梯度离心技术虽耗时较长,但提取的外泌体纯度、浓度较高,对内皮细胞的修复作用较强,可以作为科研和临床研究的首选外泌体离� 展开更多
关键词 外泌体 外泌体提取方法 差速离心技术 密度梯度离心技术 超滤离心技术 间充质干细胞 骨髓间充质干细胞 肺微血管内皮细胞
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骨髓间充质干细胞调节Notch表达可有效治疗放射性唾液腺损伤 预览
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作者 罗孟亚男 赵娜 +1 位作者 戢楠楠 王武峰 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第25期3967-3972,共6页
背景:胆碱能受体激动剂可促进放射性唾液腺损伤患者残存唾液细胞的分泌,但长期用药存在严重的不良反应且对严重放射性唾液腺损伤的治疗效果有限。骨髓间充质干细胞是一种具有多向分化潜能和几乎无限增殖能力的细胞,具备治疗放射性唾液... 背景:胆碱能受体激动剂可促进放射性唾液腺损伤患者残存唾液细胞的分泌,但长期用药存在严重的不良反应且对严重放射性唾液腺损伤的治疗效果有限。骨髓间充质干细胞是一种具有多向分化潜能和几乎无限增殖能力的细胞,具备治疗放射性唾液腺损伤的潜力。目的:探索骨髓间充质干细胞修复放射性唾液腺损伤的效果和机制。方法:①从小鼠骨髓中提取骨髓间充质干细胞,采用3D共培养系统,将其与第2代唾液腺腺泡细胞共培养24 h;②取150只C57小鼠,随机等分为正常对照组、放射性唾液腺损伤组以及骨髓间充质干细胞组,后2组通过电子直线加速器以15 Gy照射剂量建立放射性唾液腺损伤小鼠模型。照射后1周,骨髓间充质干细胞组于唾液腺局部多点皮下注射2×10^9 L^-1骨髓间充质干细胞悬液,另2组注射等量生理盐水。结果与结论:经共培养24 h后,骨髓间充质干细胞可以向唾液腺腺泡细胞分化,类似多角形,并表达α-淀粉酶。与正常对照组相比,放射性唾液腺损伤组小鼠唾液流量、唾液腺质量以及唾液淀粉酶水平明显减少,腺泡细胞结构出现明显损伤,唾液腺中Notch的表达水平降低;而与放射性唾液腺损伤组相比,骨髓间充质干细胞组小鼠唾液流量、唾液腺质量以及唾液淀粉酶水平明显恢复,腺泡细胞结构损伤减轻,唾液腺中Notch的表达水平恢复。说明骨髓间充质干细胞移植可有效治疗放射性唾液腺损伤,且其作用可能是通过调节Notch的表达水平实现的。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 细胞移植 唾液腺 放射性损伤 腺泡细胞 唾液淀粉酶 NOTCH 干细胞
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骨髓间充质干细胞膜片和脐静脉内皮细胞共培养模型的构建及鉴定 预览
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作者 周震 王亚敏 +3 位作者 任飞 张兆强 曾曙光 杨熙 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第25期3951-3955,共5页
背景:细胞膜片技术是近年来热门的组织工程学技术,但是膜片中间部位的营养供给和移植后血供问题易导致失败,所以预血管化是提高组织工程材料移植后存活率的关键。目的:比较在不同氧含量下,人骨髓间充质干细胞和脐静脉内皮细胞共培养形... 背景:细胞膜片技术是近年来热门的组织工程学技术,但是膜片中间部位的营养供给和移植后血供问题易导致失败,所以预血管化是提高组织工程材料移植后存活率的关键。目的:比较在不同氧含量下,人骨髓间充质干细胞和脐静脉内皮细胞共培养形成预血管化骨髓间充质干细胞膜片的生物学性能。方法:实验分2组:常氧共培养组即常氧(体积分数20%O2)条件下形成人骨髓间充质干细胞膜片,常氧条件下加入人脐静脉内皮细胞共培养;低氧共培养组,即低氧(体积分数2%O2)条件下形成人骨髓间充质干细胞膜片,常氧条件下加入人脐静脉内皮细胞共培养。采用免疫荧光染色技术观察并比较共培养7d两组的微血管生成情况,并通过ELISA法比较不同氧含量下骨髓间充质干细胞膜片内血管内皮生长因子的水平。结果与结论:①与常氧共培养组比较,低氧共培养组的血管更长、血管密度更高、管间交互连接更多(P <0.05);②低氧共培养组的血管内皮生长因子水平高于常氧共培养组(P <0.05);③结果证实,低氧共培养组较常氧共培养组膜片更利于血管生长,对于建立优化的预血管化膜片具有可行性。 展开更多
关键词 低氧 常氧 细胞膜片 骨髓间充质干细胞 免疫荧光染色 脐静脉内皮细胞 血管内皮生长因子 干细胞 血管化 组织工程
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MRL/lpr狼疮鼠骨髓间充质干细胞表面粘附分子N-钙粘附蛋白表达增高并伴有骨髓中B淋巴细胞生成障碍
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作者 王丽霞 陆化 +4 位作者 费小明 汤郁 史伟 陆萍 朱彦 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期964-969,共6页
目的:观察MRL/lpr狼疮鼠骨髓的血液生成情况及骨髓微环境中骨髓间充质干细胞(bone marrow masenchymal stem cell,BMMSC)表面的粘附分子N-钙粘附蛋白(N-cadherin)的表达水平。方法:采集MRL/lpr狼疮鼠外周血进行血细胞计数;流式细胞术检... 目的:观察MRL/lpr狼疮鼠骨髓的血液生成情况及骨髓微环境中骨髓间充质干细胞(bone marrow masenchymal stem cell,BMMSC)表面的粘附分子N-钙粘附蛋白(N-cadherin)的表达水平。方法:采集MRL/lpr狼疮鼠外周血进行血细胞计数;流式细胞术检测和分析狼疮鼠骨髓各系血细胞的比例;甲基纤维素半固体集落形成试验(CFU)检测狼疮鼠骨髓中CFU-pre-B、BFU-E、CFU-GM数目。分离培养狼疮鼠的BMMSC,Western blot检测其N-cadherin的表达。最后,分别用BMP/Smad通路的激动剂BMP-2和抑制剂Noggin处理BMMSC,尔后观察狼疮鼠BMMSC的N-cadherin的表达变化。结果:与C57BL/6小鼠比较,狼疮鼠的血红蛋白、红细胞计数和血细胞比容显著降低(P<0.01;n=7);狼疮鼠骨髓中B220+细胞比例和CFU-pre-B数目均明显下降(P<0.05;n=5)。狼疮鼠BMMSC的粘附分子N-cadherin的表达水平明显高于对照组(P<0.05;n=3)。BMP-2处理狼疮鼠BMMSC后N-cadherin的水平下降,而在Noggin处理后N-cadherin表达则上调(P<0.05;n=3)。结论:MRL/lpr狼疮小鼠骨髓中B淋巴细胞生成障碍。此外,小鼠骨髓微环境中BMMSC表面的粘附分子N-cadherin水平升高,其可能参与了MRL/lpr狼疮小鼠的骨髓血液生成异常。 展开更多
关键词 系统性红斑狼疮 B淋巴细胞生成 骨髓微环境 骨髓间充质干细胞 N-cadherin
骨髓间充质干细胞复合支架材料治疗骨缺损:研究现状及前景展望 预览
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作者 池玉磊 卜宪敏 +3 位作者 查玉梅 王海滨 孟纯阳 吴彬 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第29期4749-4756,共8页
背景:骨缺损是临床常见且较难解决的问题,骨髓间充质干细胞复合支架材料治疗骨缺损是目前研究的热点。目的:总结骨髓间充质干细胞复合支架材料治疗骨缺损的最新研究进展,为临床应用提供理论依据。方法:文章第一作者通过检索中国知网、... 背景:骨缺损是临床常见且较难解决的问题,骨髓间充质干细胞复合支架材料治疗骨缺损是目前研究的热点。目的:总结骨髓间充质干细胞复合支架材料治疗骨缺损的最新研究进展,为临床应用提供理论依据。方法:文章第一作者通过检索中国知网、万方、维普、PubMed、Embase和Web of Science数据库2009年1月至2018年12月相关文献,检索词为“骨髓间充质干细胞,分离培养,支架材料,骨缺损,骨组织工程,成骨分化,新生血管,骨膜,细胞外基质”“bone marrow mesenchymal stem cells,isolation,scaffolds,bone defects,bone tissue engineering,osteogenesis,angiogenesis,periosteum,extracellular matrix”。最终选取符合纳入标准的文献共计95篇。结果与结论:大量研究表明,骨髓间充质干细胞是治疗骨缺损的理想种子细胞,其与支架材料复合能够促进骨缺损修复。目前,骨髓间充质干细胞复合支架材料治疗骨缺损正处于新的发展时代,是一种很有前景的骨缺损治疗方法,其中在骨髓间充质干细胞的分离培养、定向分化及支架材料研究方面取得了很大的进展,并进一步证明了新生血管、骨膜和细胞外基质在整个骨组织工程中的重要作用,这一研究对未来临床治疗骨缺损具有重大意义。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 支架材料 骨缺损 骨组织工程 成骨分化 新生血管 骨膜 细胞外基质 国家自然科学基金
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慢病毒介导BMP-2过表达质粒转染骨髓间充质干细胞联合丝素蛋白支架向成骨细胞转化的实验研究 预览
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作者 范少鹏 李晓辉 +2 位作者 时彩霞 范春霞 叶发刚 《中国骨伤》 CAS CSCD 2019年第9期853-860,共8页
目的:探究慢病毒介导BMP-2过表达质粒转染骨髓间充质干细胞联合丝素蛋白支架向成骨细胞转化的作用效果。方法:构建慢病毒BMP-2过表达载体,培养骨髓间充质干细胞,构建细胞核支架的联合培养体系,体外实验利用茜素红染色和碱性磷酸酶染色... 目的:探究慢病毒介导BMP-2过表达质粒转染骨髓间充质干细胞联合丝素蛋白支架向成骨细胞转化的作用效果。方法:构建慢病毒BMP-2过表达载体,培养骨髓间充质干细胞,构建细胞核支架的联合培养体系,体外实验利用茜素红染色和碱性磷酸酶染色检测骨髓间充质干细胞的成骨转化。选择10只新西兰大白兔,体重3.2~4.5 kg,平均3.9 kg;年龄(2.89±0.45)岁;使用口腔钻在兔子胫骨钻孔(长度5 mm、宽度2 mm、深度3 mm的锥形胫骨缺损)构建兔子胫骨骨缺损模型,HE染色观察动物模型内骨缺损的修复。实验组造模后植入丝素蛋白支架+转染BMP-2过表达载体骨髓间充质干细胞复合物,阴性对照组造模后植入丝素蛋白支架+未转染骨髓间充质干细胞复合物。结果:实验组(丝素蛋白支架+转染BMP-2过表达载体骨髓间充质干细胞复合物)中支架表面黏附的细胞与对照组(丝素蛋白支架+未转染骨髓间充质干细胞)相比,细胞数明显增多。实验组细胞外基质分泌与对照组相比,支架间细胞外基质含量明显增多。对照组支架表面元素EDX分析显示钙离子含量为0.22%,实验组支架表面元素EDX分析显示钙离子含量为0.86%,可见实验组诱导钙离子形成的能力要比对照组强。钙结节茜素红染色结果显示,对照组肉眼观无明显变化,镜下观察可见少量钙结节点。实验组肉眼观可见明显红色区域染色,镜下观察可见大量钙结节点。碱性磷酸酶染色结果显示,对照组肉眼观无明显变化,镜下观察未见明显变化。实验组肉眼观可见紫色区域染色,镜下观察可见ALP染色呈强阳性。丝素蛋白支架与骨髓间充质干细胞联合培养体系可以对软骨缺损有较好的修复作用,转染BMP-2骨髓间充质干细胞后修复作用明显优于未转染组。HE染色结果显示,对照组炎性细胞减少,支架略有消失。实验组炎性细胞明显减少,支架消失,血管生成。结论:慢 展开更多
关键词 丝素蛋白支架 骨髓间充质干细胞 骨形态发生蛋白 骨缺损
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转染BMP-2基因的骨髓MSC复合多孔磷酸钙骨水泥构建组织工程化骨对兔骨缺损的修复作用研究 预览
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作者 陈波 郭祥 +1 位作者 张寿 钟海波 《临床和实验医学杂志》 2019年第17期1815-1818,共4页
目的研究骨髓间充质干细胞(MSC)经骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因转染后与多孔磷酸钙骨水泥(CPC)进行复合而建立组织工程化骨,分析其修复骨缺损的效果。方法取新西兰白兔32只,构建双侧股骨髁缺损的动物模型,双侧均植入骨髓MSC复合CPC组织... 目的研究骨髓间充质干细胞(MSC)经骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因转染后与多孔磷酸钙骨水泥(CPC)进行复合而建立组织工程化骨,分析其修复骨缺损的效果。方法取新西兰白兔32只,构建双侧股骨髁缺损的动物模型,双侧均植入骨髓MSC复合CPC组织工程化骨,其中右侧植入未转染BMP-2基因为对照组,左侧植入BMP-2基因为转染组。分别于植入后1、3个月,取两组双侧股骨髁,通过Van-Gieson染色法观察骨组织形态学变化,计算新骨形成面积在总缺损区中的占比;于植入后3个月,对两组新骨形成情况进行免疫荧光标记检测。结果植入后1个月,对照组仅于CPC外周出现少量新骨组织,转染组出现诸多新骨组织生成,以CPC外周孔隙为多见。植入后3个月,对照组植入区出现诸多新骨组织向CPC周围至中心区生长,但支架材料吸收效果并不明显;转染组人工骨内部出现诸多新骨组织生成,外周编织骨进展为成熟的小梁骨,外周区可见支架材料吸收较明显,部分被新骨组织所取代。相比植入后1个月,两组植入后3个月新骨面积在总缺损区的比率均明显提高(P <0. 01);相比对照组,转染组植入后1、3个月新骨面积在总缺损区的比率均明显提高(P <0. 01)。植入后3个月,转染组的组织工程化骨成骨速率为(5. 73±1. 24) m/d,较对照组的(3. 09±0. 98) m/d显著提高(P <0. 01)。结论通过基因转染的方法,将BMP-2基因转染至骨髓MSC,使之复合CPC材料,可明显提高新骨形成速率,从而可有效增强组织工程化骨对骨缺损的修复作用。 展开更多
关键词 骨缺损 骨髓间充质干细胞 骨形态发生蛋白-2 多孔磷酸钙骨水泥 基因转染
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慢病毒介导骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165双基因转染骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨治疗兔股骨头坏死 预览
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作者 马跃刚 李强 +3 位作者 陶旋 周桢杰 朱伦井 段江涛 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第33期5275-5280,共6页
背景:骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165均在骨修复过程中扮演着重要角色。利用慢病毒介导这2种基因转染骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨治疗骨损伤具有重要意义。目的:观察慢病毒介导骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165基因共... 背景:骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165均在骨修复过程中扮演着重要角色。利用慢病毒介导这2种基因转染骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨治疗骨损伤具有重要意义。目的:观察慢病毒介导骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165基因共转染骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨治疗兔股骨头坏死的效果,以此来探讨双基因在未来骨损伤修复过程中的可行性。方法:采用液氮冰冻联合髓芯减压方法制备股骨头坏死模型,将造模成功的实验兔分为3组(n=12):(1)未转染组:植入骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨;(2)单基因转染组:植入骨形态发生蛋白2转染的骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨;(3)双基因转染组:植入骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165共转染的骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨。术后3,6,9周各组分别处死4只兔子,Westernblot检测股骨头内骨形态发生蛋白2蛋白的表达量;苏木精-伊红染色观察股骨头坏死修复情况。实验方案经桂林医学院动物实验伦理委员会批准。结果与结论:(1)术后3,6,9周各组均有骨形态发生蛋白2阳性表达,单基因转染组、双基因转染组表达量均高于未转染组(P<0.05),且呈递增趋势;术后3周,单基因转染组、双基因转染组骨形态发生蛋白2表达差异无显著性意义(P>0.05);术后第6,9周,双基因转染组骨形态发生蛋白2表达量明显高于单基因转染组(P<0.05);(2)术后9周,双基因转染组新生骨痂可填满股骨头缺损处,未转染组、单基因转染组虽有骨痂形成,但均未填满缺损处;苏木精-伊红染色示未转染组有初级骨小梁形成,但骨细胞坏死较多,骨小梁较少;单基因转染组有大量骨小梁形成,形态较好,仅有部分中断,仍不及正常骨组织;双基因转染组形成大量成熟致密骨小梁,形态与正常骨组织无明显差异;(3)结果表明,慢病毒介导骨形态发生蛋白2和血管内� 展开更多
关键词 慢病毒 骨髓间充质干细胞 骨形态发生蛋白2 血管内皮生长因子165 脱钙松质骨 双基因转染 股骨头坏死 国家自然科学基金
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3D打印技术制备聚磷酸钙/淫羊藿苷骨支架诱导骨髓间充质干细胞成骨分化治疗骨缺损 预览
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作者 石永新 逄增金 +4 位作者 羊明智 彭立军 李富琴 宋晖 罗福薇 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第21期3309-3315,共7页
背景:随着组织工程学的快速发展,寻找最佳的支架材料、诱导细胞成骨分化的因子以及分化增殖能力强、来源充足的干细胞,成为骨科领域研究的热点。目的:探讨聚磷酸钙/淫羊藿苷骨支架诱导骨髓间充质干细胞成骨分化治疗骨缺损的效果。方法:... 背景:随着组织工程学的快速发展,寻找最佳的支架材料、诱导细胞成骨分化的因子以及分化增殖能力强、来源充足的干细胞,成为骨科领域研究的热点。目的:探讨聚磷酸钙/淫羊藿苷骨支架诱导骨髓间充质干细胞成骨分化治疗骨缺损的效果。方法:采用3D打印技术制备聚磷酸钙/淫羊藿苷复合骨支架,分离和培养兔骨髓间充质干细胞。36只新西兰大白兔根据随机数字法分为对照组和实验组,每组18只,均建立股骨髁骨缺损模型并植入聚磷酸钙/淫羊藿苷骨支架复合体,然后实验组大白兔经股静脉注入骨髓间充质干细胞1.5mL(1×10^9L^-1),对照组大白兔经股静脉注入等量生理盐水。术后4,8,12周每组取6只大白兔,分离培养骨髓间充质干细胞,Transwell小室测定骨髓间充质干细胞迁移能力,qRT-PCR法测定骨髓间充质干细胞Ⅰ型胶原蛋白、CD44mRNA水平;然后取兔股骨髁标本,X射线片观察复合骨支架以及周围骨痂形成情况,Van-Gieson染色观察骨组织学变化,免疫组化染色法测定骨痂神经生长因子水平。结果与结论:①实验组兔骨髓间充质干细胞迁移数均高于对照组(P<0.05);实验组兔骨髓间充质干细胞Ⅰ型胶原蛋白、CD44mRNA水平均高于对照组(P<0.05);②X射线检查和组织学观察结果显示实验组骨痂形成速度和效果优于对照组;③实验组骨痂神经生长因子水平均高于对照组(P<0.05);④结果表明3D打印技术制备的聚磷酸钙/淫羊藿苷骨支架可诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,在骨缺损治疗中具有较好效果。 展开更多
关键词 股骨髁 骨缺损 聚磷酸钙 淫羊藿苷 复合骨支架 3D打印技术 骨髓间充质干细胞 成骨分化
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麦门冬汤对大鼠骨髓间充质干细胞向肺泡上皮细胞分化的影响 预览
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作者 刘锐 雷宁宁 +2 位作者 伍娟娟 叶传冬 陈斯宁 《天津中医药》 CAS 2019年第2期171-175,共5页
[目的]观察麦门冬汤含药血清对促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)向肺泡上皮细胞分化的影响。[方法]分别予麦门冬汤大鼠血清、肺纤维化模型大鼠血清、肺纤维化模型大鼠+麦门冬汤血清对绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞(GFP-BMSC)进行干... [目的]观察麦门冬汤含药血清对促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)向肺泡上皮细胞分化的影响。[方法]分别予麦门冬汤大鼠血清、肺纤维化模型大鼠血清、肺纤维化模型大鼠+麦门冬汤血清对绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞(GFP-BMSC)进行干预14d,通过免疫组化、实时荧光定量聚核酶链反应(qPCR)方法,检测各组GFPBMSC细胞肺表面活性蛋白(SP-C)、水通道蛋白-5(AQP-5)蛋白及mRNA的表达。[结果]模型组、模型+麦门冬汤组SP-C、AQP5蛋白表达明显高于DMEM对照组、麦门冬汤组(P<0.01),其中模型+麦门冬汤组SP-C、AQP5表达明显高于模型组(P<0.01)。[结论]麦门冬汤在肺纤维化环境中可促进GFP-BMSC向肺泡上皮细胞分化,该作用可能是其改善肺纤维化的重要机制。 展开更多
关键词 麦门冬汤 骨髓间充质干细胞 肺纤维化 干细胞分化
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低氧诱导c-Kit^+骨髓间充质干细胞增殖及旁分泌中ROCK信号的作用 预览
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作者 邵钟铭 王可可 +4 位作者 廖晓敏 哈艳平 李汝佳 申志华 揭伟 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第21期3281-3288,共8页
背景:研究显示低氧能刺激骨髓间充质干细胞增殖,但具体机制尚不清楚。ROCK信号对细胞增殖、凋亡等具有重要影响,当前对ROCK信号与骨髓间充质干细胞的生物学功能研究较少。目的:分析ROCK信号在低氧诱导c-Kit^+骨髓间充质干细胞增殖及旁... 背景:研究显示低氧能刺激骨髓间充质干细胞增殖,但具体机制尚不清楚。ROCK信号对细胞增殖、凋亡等具有重要影响,当前对ROCK信号与骨髓间充质干细胞的生物学功能研究较少。目的:分析ROCK信号在低氧诱导c-Kit^+骨髓间充质干细胞增殖及旁分泌中的作用。方法:贴壁法获得大鼠股骨骨髓间充质干细胞,应用磁激活细胞分选法获得c-Kit^+亚群,细胞培养于常氧(体积分数21%O2)及低氧(体积分数2%O2)条件下,并用ROCK信号抑制剂Fasudil(10μmol/L)处理细胞。观察:①Western blot检测p-MLC2(T18/S12)和MLC2蛋白表达,以p-MLC2(T18/S12)/MLC2比值变化反映ROCK信号的活化情况;②细胞计数分析细胞增殖,Western blot检测细胞增殖标记物PCNA和细胞周期相关蛋白的表达;③流式细胞术检测细胞周期的变化;④ELISA检测细胞培养上清中血管内皮生长因子、转化生长因子β1和碱性成纤维细胞生长因子水平,了解细胞的旁分泌情况。结果与结论:成功分选出大鼠c-Kit^+骨髓间充质干细胞。①相对于常氧而言,低氧显著下调MLC表达和上调p-MLC(T18/S19)表达进而增加p-MLC(T18/S19)/MLC2比值;②低氧促进c-Kit^+骨髓间充质干细胞的增殖,表现为细胞数量增多和PCNA蛋白表达上调,Fasudil减弱了低氧诱导的c-Kit^+骨髓间充质干细胞增殖,使细胞周期阻滞于S期并抑制CDK2、CDK4和上调p16的表达;③低氧显著促进c-Kit^+骨髓间充质干细胞分泌上述3种细胞因子,Fasudil减弱低氧诱导的血管内皮生长因子和转化生长因子β1但上调碱性成纤维细胞生长因子的分泌。实验结果提示低氧刺激促进c-Kit^+骨髓间充质干细胞增殖和旁分泌并活化ROCK信号;Fasudil抑制低氧诱导的细胞增殖和旁分泌作用,提示ROCK信号对c-Kit^+骨髓间充质干细胞的增殖和旁分泌具有重要的正性调节作用。 展开更多
关键词 ROCK信号 FASUDIL 低氧 干细胞 骨髓间充质干细胞 C-KIT 细胞增殖 旁分泌 国家自然科学基金
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BMMSCs输注对MRL/lpr狼疮鼠血液系统的影响
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作者 史伟 史敦绘 +5 位作者 王丽霞 娄方明 锁星星 陆萍 李晶 汤郁 《南京医科大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期485-490,512共7页
目的:研究同种异体骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMMSCs)输注对MRL/lpr狼疮鼠造血的影响,为BMMSCs输注治疗系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的血液系统损伤提供依据。方法:分离培养C57BL/6小鼠... 目的:研究同种异体骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMMSCs)输注对MRL/lpr狼疮鼠造血的影响,为BMMSCs输注治疗系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的血液系统损伤提供依据。方法:分离培养C57BL/6小鼠的BMMSCs并对MRL/lpr狼疮鼠进行静脉输注,同时以PBS为对照。分为对照(C57BL/6)组、狼疮鼠(MRL/lpr)组、BMMSCs输注组1(MRL/lpr鼠12周注射BMMSCs)、PBS对照组1(MRL/lpr鼠12周注射PBS)、BMMSCs输注组2(MRL/lpr鼠12、16周两次注射BMMSCs)、PBS对照组2(MRL/lpr鼠12、16周两次注射PBS)。在20周末取小鼠的外周血进行血细胞计数,后4组取骨髓及脾脏进行流式细胞术和甲基纤维素半固体集落形成试验(CFU)检测分析输注组和对照组骨髓及脾脏各系细胞比例。结果:与C57BL/6小鼠相比,狼疮鼠外周血红细胞计数[(9.3±0.8)×10^12个/L vs.(10.5±0.8)×10^12个/L,n=5,P <0.001]、血红蛋白[(138.1±11.6)g/L vs.(156.4±11.0)g/L,n=5,P <0.001]和血小板计数[(695.3±136.2)×10^9个/L vs.(844.1±180.8)×10^9个/L,n=5,P<0.05]降低,与PBS对照组相比,BMMSCs输注组MRL/lpr狼疮鼠血小板数量改善[(795.0±75.7)×10^9个/L vs.(593.4±123.4)×10^9个/L,n=5,P <0.05],骨髓中干细胞(n=5,P <0.001)和成熟T细胞比例减少(n=5,P <0.05),髓系比例增加(n=5,P <0.01),pre-B数量有所改善(n=5,P <0.05),脾脏内干细胞比例上升(n=5,P <0.05),成熟T细胞比例下降(n=5,P <0.05)。结论:BMMSCs输注对狼疮鼠外周血、骨髓及脾脏不同系造血细胞有影响,其对狼疮鼠的血液系统损伤有治疗意义。 展开更多
关键词 系统性红斑狼疮 骨髓间充质干细胞 成熟T细胞 髓系细胞 pre-B
碱性成纤维细胞生长因子转染骨髓间充质干细胞移植治疗慢性阻塞性肺疾病的作用及机制 预览 被引量:1
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作者 吴华拉 周湘乡 +1 位作者 钟玉兰 淦鑫 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第21期3378-3385,共8页
背景:促炎与抗炎反应失衡在慢性阻塞性肺疾病发病过程中起到关键作用。课题组设想通过减轻肺内炎症反应、促进肺泡上皮或支气管上皮细胞再生修复,减轻或逆转慢性阻塞性肺疾病的病理过程,从而达到治愈疾病的目的。目的:观察碱性成纤维细... 背景:促炎与抗炎反应失衡在慢性阻塞性肺疾病发病过程中起到关键作用。课题组设想通过减轻肺内炎症反应、促进肺泡上皮或支气管上皮细胞再生修复,减轻或逆转慢性阻塞性肺疾病的病理过程,从而达到治愈疾病的目的。目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)转染骨髓间充质干细胞(bonemarrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植慢性阻塞性肺疾病大鼠白细胞介素10、白细胞介素4的表达及其在体内的分化。方法:采用全骨髓贴壁法提取、培养骨髓间充质干细胞,以脂质体转染法导入bFGF-pcDNA3.1质粒。选取健康SD大鼠150只,随机取30只大鼠为正常对照组,其余120只大鼠采用脂多糖联合熏烟的复合刺激法制备成慢性阻塞性肺疾病模型,然后随机分为慢性阻塞性肺疾病组、骨髓间充质干细胞组、pcDNA3.1-BMSCs组、bFGF-pcDNA3.1-BMSCs组,每组30只。各组大鼠分别在第7,14,28天处死,苏木精-伊红染色观察肺组织病理学改变,ELISA检测外周血白细胞介素10、白细胞介素4水平,qRT-PCR法检测肺组织中白细胞介素10、白细胞介素4 mRNA的表达;冰冻切片免疫荧光染色法检测骨髓间充质干细胞在肺组织中的分化情况。结果与结论:①第28天,3个骨髓间充质干细胞治疗组均较慢性阻塞性肺疾病组病理改变明显改善;②在相同时间节点,3个骨髓间充质干细胞治疗组外周血及肺组织中的白细胞介素10、白细胞介素4表达高于慢性阻塞性肺疾病组(P<0.05),骨髓间充质干细胞组、pcDNA3.1-BMSCs组差别不大,但bFGF-pcDNA3.1-BMSCs组较之二者相对较高,差异有显著性意义(P<0.05);③第28天,在3个骨髓间充质干细胞治疗组的肺组织切片中观察到有部分CM-Dil阳性细胞,同时SPC或CC16表达阳性,bFGF-pcDNA3.1-BMSCs组阳性细胞相对较多;④结果表明,携带碱性成纤维细胞生长因子基因的骨髓间充质干细胞移植入慢性阻塞性� 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 骨髓间充质干细胞 碱性成纤维细胞生长因子 基因转染 抗炎细胞因子 肺泡上皮细胞 支气管上皮细胞 国家自然科学基金
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不同方式移植骨髓间充质干细胞治疗急性重症胰腺炎大鼠的疗效对比 预览
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作者 傅明杰 赵赫 +3 位作者 李志涛 卢安卫 蔡洪流 董汉光 《基础医学与临床》 CSCD 2019年第10期1474-1482,共9页
目的探索骨髓间充质干细胞(bMSCs)治疗大鼠急性重症胰腺炎(SAP)模型的高效移植方式。方法将大鼠随机分为对照组(control)、急性重症胰腺炎组(SAP)(胰胆管内逆行注射5%硫磺胆酸钠)。SAP模型制作成功6 h后,分为尾静脉骨髓间充质干细胞移植... 目的探索骨髓间充质干细胞(bMSCs)治疗大鼠急性重症胰腺炎(SAP)模型的高效移植方式。方法将大鼠随机分为对照组(control)、急性重症胰腺炎组(SAP)(胰胆管内逆行注射5%硫磺胆酸钠)。SAP模型制作成功6 h后,分为尾静脉骨髓间充质干细胞移植组(tail vein)、腹腔注射移植组(intraperitoneal)和尾静脉-腹腔注射联合移植组(tail vein+intraperitoneal),每组18只。在移植后第24、48和72 h分别安乐死6只大鼠,收集胰腺组织及血清,使用ELISA试剂盒测定血清中抗炎因子IL-10及炎性因子IL-1β、TNF-α和IL-6的水平;HE染色后光学显微镜下观察胰腺组织病理和第72 h后各组大鼠小肠黏膜及肺泡组织病理改变;冰冻切片在荧光显微镜下观察DAPI标记的bMSCs在胰腺组织的分布。结果SAP组胰腺组织有大量出血、水肿、炎性反应及坏死;与对照组相比,3种不同方式bMSCs移植组胰腺组织的出血、水肿、炎性反应及坏死明显减少(P<0.05),IL-1β、TNF-α和IL-6水平显著降低,IL-10水平显著升高(P<0.05);尾静脉+腹腔联合移植组较单纯尾静脉或腹腔移植组胰腺组织的出血、水肿、炎性反应及坏死进一步减少(P<0.05),IL-1β、TNF-α和IL-6水平进一步降低(P<0.05),IL-10的水平进一步升高(P<0.05);DAPI标记的bMSCs在移植组的胰腺组织内均有分布,且在尾静脉+腹腔联合移植组观察到更多的荧光分布;72 h后可见移植组小肠黏膜及肺泡组织完整性较SAP组明显好转,中性粒细胞浸润及出血情况较SAP组明显减轻,相比于腹腔和单纯尾静脉移植,联合移植组情况进一步改善。结论在大鼠SAP模型中,bMSCs通过尾静脉+腹腔联合移植能显著抑制炎性反应,减少SAP相关性胰腺、小肠黏膜及肺损伤,其效果显著优于单纯尾静脉移植和腹腔注射移植。 展开更多
关键词 急性重症胰腺炎 骨髓间充质干细胞 干细胞移植
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