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6%多杀霉素·苏云金杆菌悬浮剂的研制 预览
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作者 彭静 黄雪萍 +3 位作者 蒋殿君 陈维洪 梁丽丽 邓晓珊 《材料研究与应用》 CAS 2020年第1期47-50,共4页
为研制稳定的6%多杀霉素·苏云金杆菌悬浮剂,采用流点法对悬浮剂的润湿分散剂进行了初筛,利用黏度法和粒径法确定了润湿分散剂的最佳用量.6%多杀霉素·苏云金杆菌悬浮剂的最佳配方:多杀霉素含量为1%,苏云金杆菌含量为5%,YC-90... 为研制稳定的6%多杀霉素·苏云金杆菌悬浮剂,采用流点法对悬浮剂的润湿分散剂进行了初筛,利用黏度法和粒径法确定了润湿分散剂的最佳用量.6%多杀霉素·苏云金杆菌悬浮剂的最佳配方:多杀霉素含量为1%,苏云金杆菌含量为5%,YC-90含量为4%,乙二醇含量为5%,黄原胶含量为0.1%,硅酸镁铝含量为1%,有机硅消泡剂含量为0.3%,防腐剂含量为0.2%,剩余用水补足达到100%.经检测,该悬浮剂的各项性能指标均符合悬浮剂的标准要求. 展开更多
关键词 多杀霉素 苏云金杆菌 悬浮剂 配方
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转cry2Ah-vp基因玉米的抗虫性鉴定
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作者 李梦桃 李圣彦 +3 位作者 汪海 张杰 苍晶 郎志宏 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期74-83,共10页
为获得新型抗虫转基因玉米,将通过群体筛选获得的具有抗虫性的转cry2Ah-vp基因玉米VP1-5采用PCR、Southern blot、实时荧光定量PCR(qPCR)、酶联免疫吸附测定(ELISA)等方法进行阳性植株鉴定、拷贝数分析、转录水平和翻译水平分析,同时通... 为获得新型抗虫转基因玉米,将通过群体筛选获得的具有抗虫性的转cry2Ah-vp基因玉米VP1-5采用PCR、Southern blot、实时荧光定量PCR(qPCR)、酶联免疫吸附测定(ELISA)等方法进行阳性植株鉴定、拷贝数分析、转录水平和翻译水平分析,同时通过室内和田间生物活性测定鉴定转基因玉米VP1-5对东方黏虫Mythimna separata和亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis的抗性。结果表明,在转基因玉米VP1-5中cry2Ah-vp基因已整合到玉米基因组,以单拷贝的形式插入;cry2Ah-vp基因在转基因玉米VP1-5不同部位组织中均可以正常转录,在灌浆期叶片中的mRNA表达量最高,相对表达量为32.67,在灌浆期穗轴中的mRNA表达量最低,相对表达量为3.74;Cry2Ah-vp蛋白在转基因玉米VP1-5的6叶期各组织中表达量均较高,其中在叶片中的表达量达到2 155.18 ng/g FW,在抽雄期花丝中的表达量最高,达到2 165.86 ng/g FW;且转基因玉米VP1-5对东方黏虫有很高的杀虫活性,接虫3 d后幼虫死亡率达到100.00%;对亚洲玉米螟幼虫也有明显的生长抑制作用。表明转基因玉米VP1-5可作为玉米抗虫育种和害虫防治的种质资源。 展开更多
关键词 害虫防治 苏云金芽胞杆菌 cry2Ah-vp基因 转基因玉米 东方黏虫 亚洲玉米螟
苏云金芽胞杆菌dxr1基因的转录受SigH控制
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作者 李娜 温继龙 +3 位作者 宋福平 张杰 段江燕 彭琦 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期200-210,共11页
【目的】萜类化合物广泛分布在生物界,是重要的生命物质。目前发现有两条萜类化合物的生物合成途径,即甲羟戊酸(MVA)途径和2-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸(MEP)途径。MEP代谢途径中的关键酶1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构化酶(DXR,EC1.1.1.2... 【目的】萜类化合物广泛分布在生物界,是重要的生命物质。目前发现有两条萜类化合物的生物合成途径,即甲羟戊酸(MVA)途径和2-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸(MEP)途径。MEP代谢途径中的关键酶1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构化酶(DXR,EC1.1.1.267)催化1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸生成MEP。枯草芽胞杆菌中dxr基因编码DXR酶,而在苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)中有2个基因(dxr1和dxr2)编码DXR酶。通过分析BtHD73菌株的dxr1基因的转录活性和dxr1突变体表型,明确dxr1基因的转录调控机制和功能。【方法】通过5?RACE分析dxr1的转录起始位点;β-半乳糖苷酶活性测定分析dxr1基因启动子(Pdxr1)的转录活性;采用同源重组技术分别敲除BtHD73菌株的dxr1和dxr2基因;利用总蛋白定量确定Cry1Ac蛋白产量;利用DXR检测试剂盒检测Bt菌株的DXR活性。【结果】dxr1基因的转录起始位点位于起始密码子上游39 bp处的G碱基;与出发菌株HD73相比,Pdxr1在sig H突变体中的转录活性明显降低;dxr1或dxr2基因的缺失对菌体生长、芽胞形成率和Cry1Ac蛋白产量无显著影响,但使DXR活性下降。【结论】Bt中dxr1基因的转录受Sig H控制,dxr1基因的缺失影响DXR的活性。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 MEP代谢途径 DXR dxr基因 转录调控
聚乙烯醇生物降解菌群的结构分析及优势菌株降解特性
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作者 陈萍 王晨媛 +2 位作者 贾智锐 荆硕 张毅 《环境工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期560-568,共9页
对堆肥中降解聚乙烯醇材料的微生物菌群结构进行了分析。结果表明:降解聚乙烯醇材料的优势菌群属于芽胞杆菌科(Bacillaceae)。从降解了3年的材料表面筛选出了1株聚乙烯醇降解菌DG01,鉴定为苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis sp.)。分... 对堆肥中降解聚乙烯醇材料的微生物菌群结构进行了分析。结果表明:降解聚乙烯醇材料的优势菌群属于芽胞杆菌科(Bacillaceae)。从降解了3年的材料表面筛选出了1株聚乙烯醇降解菌DG01,鉴定为苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis sp.)。分别以聚乙烯醇(poly(vinyl alcohol), PVA)浓度和二氧化碳排放量为指标,对PVA的降解动力学进行了研究。结果表明:PVA生物降解过程符合一级动力学模型,R2分别为0.984 0和0.983 5。对摇瓶培养条件进行了单因素优化实验。最佳降解温度,初始pH和酵母粉浓度分别为41℃、7和1.40 g·L^-1。优化后,48 h内PVA初始浓度为3 g·L^-1的降解率达到了45.21%,提高了2.10倍。 展开更多
关键词 聚乙烯醇 菌群结构分析 苏云金杆菌 生物降解
苏云金芽孢杆菌筛选及其对蚊科幼虫的杀虫活性 预览
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作者 马琪琪 钟肖 +3 位作者 冯佩 胡宗伟 王香萍 张建民 《湖南农业科学》 2020年第2期49-52,共4页
从四川剑阁、湖北天门、湖南吉首等地采集了100份土样,通过高温法进行苏云金芽孢杆菌的分离纯化,采用PCR法对菌株的杀虫基因进行鉴定,以期筛选对蚊科幼虫有杀虫活力的苏云金芽孢杆菌菌株,并以蚊科幼虫孑孓为材料对筛选菌株的杀虫活性进... 从四川剑阁、湖北天门、湖南吉首等地采集了100份土样,通过高温法进行苏云金芽孢杆菌的分离纯化,采用PCR法对菌株的杀虫基因进行鉴定,以期筛选对蚊科幼虫有杀虫活力的苏云金芽孢杆菌菌株,并以蚊科幼虫孑孓为材料对筛选菌株的杀虫活性进行了鉴定。结果表明:100份土样中共筛选到20个苏云金芽孢杆菌菌株,其中7个菌株含有以蚊科幼虫为靶标的杀虫基因;其中S4-2菌株的杀虫活性最高,在伴孢晶体浓度为2.00 mg/mL时,校正死亡率为96.67%。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 蚊科幼虫 菌株鉴定 基因型 杀虫活性
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Bacillus thuringiensis P34与海泡石联合阻控蔬菜积累铅和改良土壤的作用 预览
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作者 贺卓 殷涂童 +2 位作者 葛占标 盛下放 何琳燕 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1240-1247,共8页
本研究为建立微生物-吸附剂联合钝化修复技术,以期为重金属污染农田的修复和蔬菜安全生产提供试验依据。在南京市栖霞区某矿区周边农田开展田间试验,探究了Bacillus thuringiensis P34及海泡石(S)对辣椒(苏椒五号)和茄子(苏琦一号)的生... 本研究为建立微生物-吸附剂联合钝化修复技术,以期为重金属污染农田的修复和蔬菜安全生产提供试验依据。在南京市栖霞区某矿区周边农田开展田间试验,探究了Bacillus thuringiensis P34及海泡石(S)对辣椒(苏椒五号)和茄子(苏琦一号)的生长、Pb积累和营养品质的影响,评估复配处理(P34+S)改良蔬菜根际土壤理化性质的作用。结果表明,与对照相比,海泡石可显著降低蔬菜果实Pb含量,菌株P34和海泡石复配可进一步显著降低辣椒和茄子果实Pb含量(58%和26%)。与对照相比,复配处理可显著使辣椒果实生物量增加1.5倍,改善蔬菜的营养品质,还能提高根际土壤pH、芽孢细菌数量、蔗糖酶和脲酶活性,显著降低根际土壤DTPA提取态Pb含量,并显著增加>1 mm团聚体的比例、显著减少<0.25 mm团聚体的比例。将B. thuringiensis P34与海泡石联合施用于Pb污染土壤,可显著阻控茄果类蔬菜积累Pb并提高其营养品质,显著改善根际土壤的理化性质,具有修复Pb污染土壤、保障蔬菜安全生产的潜力。 展开更多
关键词 芽孢杆菌 海泡石 复配菌剂 蔬菜 田间试验
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苏云金芽胞杆菌Vip3Aa11定点突变对棉铃虫杀虫活性的影响 预览
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作者 刘明 孙海燕 郑树生 《黑龙江八一农垦大学学报》 2019年第1期21-27,共7页
为了寻找苏云金芽胞杆菌Vip3Aa11中对杀虫活性有重要影响的氨基酸,为杀虫机理研究和改造杀虫蛋白提供理论依据,通过序列比对,利用PCR方法对Vip3Aa11中7个氨基酸位点进行定点突变,对各突变蛋白杀棉铃虫的生物活性进行测定。结果表明,获得... 为了寻找苏云金芽胞杆菌Vip3Aa11中对杀虫活性有重要影响的氨基酸,为杀虫机理研究和改造杀虫蛋白提供理论依据,通过序列比对,利用PCR方法对Vip3Aa11中7个氨基酸位点进行定点突变,对各突变蛋白杀棉铃虫的生物活性进行测定。结果表明,获得的Vip3Aa11突变体I358V、I362M、K553I、I663T对棉铃虫的杀虫活性明显降低,而突变体I706N对棉铃虫的杀虫活性有所提高,各突变体对胰蛋白酶敏感性基本一致。说明第358位、362位、663位异亮氨酸及553位赖氨酸对Vip3Aa11杀棉铃虫活性有重要影响。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 Vip3Aa 定点突变 棉铃虫
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一株拮抗魔芋软腐病的苏云金芽胞杆菌研究 预览
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作者 李辉 李雷林 +4 位作者 高媛 杨宇纯 刘欢 薛艳红 刘士平 《三峡大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2019年第3期108-112,共5页
魔芋软腐病严重影响着魔芋的生长,本实验室从魔芋软腐病出发,分离筛选出一株对其具有强拮抗作用的菌株16-4,并测定了其抑菌活性.经过形态观察、显微鉴定和分子鉴定确定该菌株是一株苏云金芽孢杆菌.拮抗实验结果表明16-4对魔芋软腐病具... 魔芋软腐病严重影响着魔芋的生长,本实验室从魔芋软腐病出发,分离筛选出一株对其具有强拮抗作用的菌株16-4,并测定了其抑菌活性.经过形态观察、显微鉴定和分子鉴定确定该菌株是一株苏云金芽孢杆菌.拮抗实验结果表明16-4对魔芋软腐病具有很强的拮抗能力,平板对峙法显示该菌株对魔芋软腐病的抑菌圈达到75.4mm,魔芋块的实验说明16-4菌悬液与病原液3∶1的比例加入能很好地控制魔芋软腐病的发作,模拟田间管理的植株实验,当16-4菌悬液是病原液的3倍时就可达到较理想的防治效果.所有实验结果为魔芋软腐病的生物防治奠定了良好的基础. 展开更多
关键词 魔芋软腐病 苏云金芽孢杆菌 内生细菌 生物防治
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苏云金芽孢杆菌毒性研究 预览
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作者 李依韦 尹萌萌 +1 位作者 《安徽农业科学》 CAS 2019年第20期159-161,共3页
以菜青虫为试验材料,用苏云金芽孢杆菌浸泡过的小白菜饲喂菜青虫,提取菜青虫体内的伴孢晶体,通过生物测定法对苏云金芽孢杆菌的毒性进行研究,并对出发菌株进行紫外诱变筛选高毒性菌株。结果表明,苏云金芽孢杆菌毒性与伴孢晶体含量有关,... 以菜青虫为试验材料,用苏云金芽孢杆菌浸泡过的小白菜饲喂菜青虫,提取菜青虫体内的伴孢晶体,通过生物测定法对苏云金芽孢杆菌的毒性进行研究,并对出发菌株进行紫外诱变筛选高毒性菌株。结果表明,苏云金芽孢杆菌毒性与伴孢晶体含量有关,伴孢晶体含量越多,毒力越高;紫外诱变16min时得到菌株B16,伴孢晶体含量比出发菌株提高8.2%,杀虫效率比出发菌株提高77%。该研究为苏云金芽孢杆菌生产高效率生物农药提供菌种。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 伴孢晶体 毒力测定 紫外诱变
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Cry1Ia和Cry2Ab融合蛋白的表达 预览
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作者 郭小琴 钱红梅 +3 位作者 郭俊佩 史宗勇 高建华 王兴春 《山西农业大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2019年第3期101-105,共5页
[目的]苏云金芽孢杆菌表达的杀虫蛋白Cry1Ia和Cry2Ab对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性。为充分利用已有Cry蛋白,本文构建了两者的融合蛋白,并对融合蛋白的原核表达进行检测。[方法]本文将两个基因的编码基因,按照两种先后顺序拼... [目的]苏云金芽孢杆菌表达的杀虫蛋白Cry1Ia和Cry2Ab对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性。为充分利用已有Cry蛋白,本文构建了两者的融合蛋白,并对融合蛋白的原核表达进行检测。[方法]本文将两个基因的编码基因,按照两种先后顺序拼接起来,获得cry1Ia-cry2Ab融合基因和cry2Ab-cry1Ia融合基因。另外,将Cry1Ia蛋白N端第一个α-螺旋(73个氨基酸)的编码序列删除后,接入cry2Ab基因5'端,获得第三个融合基因cry1IaD73-cry2Ab。将3个基因分别插入pHT304载体,并由cry1Ac基因的启动子和终止子调控其在Bt细胞中表达。[结果]SDS-PAGE结果显示,Cry1Ia-Cry2Ab、Cry2Ab-Cry1Ia和Cry1IaD73-Cry2Ab三个融合蛋白均能够在Bt细胞中表达,其测定分子量与预期大小一致,分别约152kDa、152kDa和144kDa。蛋白印迹法分析发现,在表达过程中,三种融合蛋白均有一定比例的降解。另外,不同温度对融合蛋白的表达也有不同程度的影响。[结论]本研究构建了3种融合杀虫基因并在Bt细胞中成功表达,为进一步解析这类融合蛋白的杀虫活性和机理奠定了基础。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 cry1Ia CRY2AB 融合蛋白 蛋白表达
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苏云金杆菌G033A对萝卜黄曲条跳甲的室内活性及田间药效 预览
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作者 方国斌 王攀 +3 位作者 望勇 孙光忠 匡辉 司升云 《长江蔬菜》 2019年第20期73-75,共3页
针对萝卜黄曲条跳甲,采用浸叶法进行了32000IU/mg苏云金杆菌G033A可湿性粉剂的生物活性测定,并在湖北和云南两地开展了田间药效试验。试验结果表明,32000IU/mg苏云金杆菌G033A可湿性粉剂对黄曲条跳甲的LC50值为26.1451mg/L,LC90值为207.... 针对萝卜黄曲条跳甲,采用浸叶法进行了32000IU/mg苏云金杆菌G033A可湿性粉剂的生物活性测定,并在湖北和云南两地开展了田间药效试验。试验结果表明,32000IU/mg苏云金杆菌G033A可湿性粉剂对黄曲条跳甲的LC50值为26.1451mg/L,LC90值为207.2838mg/L,表现较好的田间防治效果;试验处理条件下,湖北与云南两地的最高防效分别为85.6%和89.2%,且对萝卜均表现安全。该农药田间推荐制剂用量为2250~3000g/hm^2,施药间隔期为7~10d。 展开更多
关键词 黄曲条跳甲 苏云金杆菌 生物活性 田间药效
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Cry1Ah蛋白标准物质候选物的制备与纯化
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作者 郭林 耿丽丽 +3 位作者 孙晓晓 王美玲 束长龙 张杰 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1511-1519,共9页
随着转基因技术的迅猛发展,转基因产品的安全性受到了广泛关注。转基因检测用有证标准物质在确保转基因产品定性、定量检测结果的可比性和可追溯性方面发挥着重要作用。但转基因蛋白质标准物质的开发相对缓慢,其中一个难点是制备高纯度... 随着转基因技术的迅猛发展,转基因产品的安全性受到了广泛关注。转基因检测用有证标准物质在确保转基因产品定性、定量检测结果的可比性和可追溯性方面发挥着重要作用。但转基因蛋白质标准物质的开发相对缓慢,其中一个难点是制备高纯度的转基因蛋白质候选物。苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis cry1Ah1基因因其对亚洲玉米螟等鳞翅目害虫有很好的杀虫活性,已用于转基因抗虫作物的研制,并获得具有较好抗虫性状的转基因株系。为了研发Cry1Ah蛋白有证标准物质,亟需建立其制备及纯化体系。文中优化了利用Bt表达系统制备Cry1Ah蛋白的体系,利用离子交换色谱法和排阻色谱法逐级纯化的方法,获得了高纯度的Cry1Ah蛋白(排阻色谱纯度:99.6%)。生物活性测定结果表明,纯化的Cry1Ah蛋白与原毒素对小菜蛾Plutella xylostella的杀虫活性没有显著差异。最后使用Edman降解法和质谱法确定了Cry1Ah蛋白活化后的氨基酸序列。综上所述,获得的Cry1Ah纯蛋白可用于蛋白质标准物质的研制。 展开更多
关键词 转基因生物 有证标准物质 苏云金芽胞杆菌 Cry1Ah 蛋白
Cry1Ia蛋白的表达与纯化 预览
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作者 郭小琴 钱红梅 +4 位作者 郭星 高佳丽 张义茹 高建华 王兴春 《山西农业科学》 2019年第5期748-750,769共4页
苏云金芽孢杆菌表达的Cry1Ia蛋白对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性。为便于后期评价不同的Cry1Ia蛋白,建立了Cry1Ia蛋白的表达与纯化体系。将一个cry1Ia基因的编码基因接入pET28aDel表达载体,并将其转化大肠杆菌BL21(DE3)star菌... 苏云金芽孢杆菌表达的Cry1Ia蛋白对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性。为便于后期评价不同的Cry1Ia蛋白,建立了Cry1Ia蛋白的表达与纯化体系。将一个cry1Ia基因的编码基因接入pET28aDel表达载体,并将其转化大肠杆菌BL21(DE3)star菌株。在大肠杆菌中诱导Cry1Ia蛋白的表达,并与Bt中的表达产物进行比较。最后,利用Cry1Ia蛋白C端包含的组氨酸标签,对大肠杆菌表达的Cry1Ia蛋白进行纯化。结果显示,大肠杆菌中Cry1Ia蛋白随着表达时间的延长,产物积累显著,并且其表达量高于Bt菌株,因此,其更适宜生产完整的Cry1Ia蛋白。对大肠杆菌表达的Cry1Ia进行纯化,获得了理想的结果。研究构建了Cry1Ia蛋白的大肠杆菌表达体系,并成功对其进行纯化,可为进一步研究此类蛋白的杀虫活性和机制奠定基础。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 大肠杆菌 cry1Ia 蛋白表达 蛋白纯化
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美国白蛾高毒Bt菌株复配增效试验
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作者 刘云鹏 张啸天 +1 位作者 解春霞 朱虹 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2019年第5期870-875,共6页
苏云金芽孢杆菌是一种重要的生物杀虫剂,有着低毒、无公害、环境友好等优点,在防治美国白蛾中取得了较好成效。但单一使用时也存在着对美国白蛾幼虫致死效率不高及致死速率较慢的问题。首先利用前期筛选的美国白蛾高毒苏云金芽孢杆菌CF1... 苏云金芽孢杆菌是一种重要的生物杀虫剂,有着低毒、无公害、环境友好等优点,在防治美国白蛾中取得了较好成效。但单一使用时也存在着对美国白蛾幼虫致死效率不高及致死速率较慢的问题。首先利用前期筛选的美国白蛾高毒苏云金芽孢杆菌CF1262菌株与常用生物制剂(灭幼脲Ⅲ号、阿维菌素、苦参碱)进行相容性测定试验,筛选出与苏云金芽孢杆菌相容性好的生物杀虫剂灭幼脲Ⅲ号和阿维菌素;再用筛选出的生物杀虫剂进行不同浓度的复配增效试验,测试室内联合毒力,并通过共毒系数的计算优选出表现增效作用的组合。综合复配剂对美国白蛾4龄幼虫的联合毒力及共毒系数的整体情况来看,1.8%阿维菌素乳油、25%灭幼脲Ⅲ号悬浮剂与苏云金芽孢杆菌CF1262复配剂均对美国白蛾的生物防治显示出了很好的增效作用。其中,苏云金芽孢杆菌CF1262与1.8%阿维菌素乳油体积比1∶1混合后增效作用尤为明显,共毒系数达到179.88。试验结果为美国白蛾的生物防治提供更多值得参考的方法和选择。 展开更多
关键词 美国白蛾 苏云金杆菌 复配增效 毒力
晶胞粘连苏云金芽胞杆菌C15杀线虫毒力因子发掘与功能鉴定 预览
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作者 许园园 余芸 +3 位作者 范雅静 刘华林 孙明 王月莹 《生物资源》 CAS 2019年第4期314-323,共10页
苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)制剂作为一种高效的微生物杀虫剂,在植物病虫害防控领域有着广泛的应用。Bt制剂的主效成分为杀虫晶体和芽胞,其中,杀虫晶体的环境低持久性是Bt农药应用的重要限制因素之一。自然界中存在着一... 苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)制剂作为一种高效的微生物杀虫剂,在植物病虫害防控领域有着广泛的应用。Bt制剂的主效成分为杀虫晶体和芽胞,其中,杀虫晶体的环境低持久性是Bt农药应用的重要限制因素之一。自然界中存在着一些Bt菌株,其产生的杀虫晶体位于芽胞外壁和芽胞衣之间,这种特殊的表型被称为晶胞粘连(spore-crystal association,SCA)表型。由于芽胞外壁对晶体的保护作用,SCA表型可以提升晶体抵抗不良环境因素的能力,是开发新型Bt生物囊杀虫剂的有效育种策略。本文选取对线虫具有强毒杀能力的SCA菌株C15作为研究对象。获得了C15菌株的完整基因组序列,包括一个5 637 049 bp的环状染色体和8个不同大小的环形质粒(240 314 bp到3 188 bp)。C15基因编码了5个杀虫蛋白(Cry蛋白)基因:cry21-99、cry21-67、cry21-66、cry21-46和cry-N。在Bt无晶体突变株BMB171中异源表达cry21-99基因,发现其表达产物形成菱形晶体,且对秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)和南方根结线虫(Meloidogyne incognita)均有毒杀活性。同时,还在全基因组范围内预测了Cry毒素以外的杀线虫毒力因子和次生代谢产物。此外,在C15基因组中预测了本团队已报道的苏云金芽胞杆菌幕虫亚种(B. thuringiensis serovar finitimus)菌株YBT-020 SCA表型决定因子的同源基因,缺失后突变体仍然保留稳定的SCA表型,说明C15菌株的SCA表型形成机制与YBT-020不同,该菌株代表了一种新的SCA表型形成机制。本研究为转基因作物防控线虫提供了新的遗传资源,也为研究SCA表型形成机制,开发新型高效Bt制剂提供了新线索。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 晶胞粘连 杀虫晶体 线虫防控
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苏云金芽孢杆菌对PAHs的降解研究 预览
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作者 雒晓芳 陈丽华 +2 位作者 夏苗苗 许淑娟 熊梅 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期125-133,共9页
为研究苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)在不同温度、pH、多环芳烃(PAHs)质量下对蒽芘芴的降解性能,采用单因素实验和响应面分析结合的方法,以 PAHs 为唯一碳源,活性炭为吸附载体,利用索氏提取法测定降解吸光度值。根据 Design E... 为研究苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)在不同温度、pH、多环芳烃(PAHs)质量下对蒽芘芴的降解性能,采用单因素实验和响应面分析结合的方法,以 PAHs 为唯一碳源,活性炭为吸附载体,利用索氏提取法测定降解吸光度值。根据 Design Expert 8.0.6.1 软件中 Box-Behnken design 对实验结果进行分析。结果表明,温度与 pH 交互项对蒽、芘的降解影响显著,温度与 PAHs 质量交互对芴的降解影响显著。在优化实验中,蒽芘芴 3 物质在各自的优化条件下的降解率预期值分别为 92.13%、87.08%、83.56%,与实际试验值 91.60%、86.62%、82.95%相比,相对误差为±0.58%、±0.53%、±0.73%之间。3 个优化模型相对误差均在 2%以内,表明 3 个实验模型均可用于分析及预测苏云金芽孢杆菌对蒽芘芴的降解效果。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 降解性能 响应面分析
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2种苏云金杆菌剂型防治美国白蛾效果分析 预览
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作者 闵水发 朱艾红 +3 位作者 曾文豪 闵浩 赵飞 陈肆 《湖北林业科技》 2019年第6期27-30,共4页
为了摸索苏云金杆菌对美国白蛾的防效,选用Bt8000 IU/ul悬浮剂和0.25%阿维菌素+Bt32000 IU/mg可湿性粉剂,在湖北大悟县娘娘顶林场开展美国白蛾喷雾防治试验,结果表明:Bt8000IU/ul悬浮剂稀释2000~3000倍,5~7 d后防效较好,校正死亡率为83.... 为了摸索苏云金杆菌对美国白蛾的防效,选用Bt8000 IU/ul悬浮剂和0.25%阿维菌素+Bt32000 IU/mg可湿性粉剂,在湖北大悟县娘娘顶林场开展美国白蛾喷雾防治试验,结果表明:Bt8000IU/ul悬浮剂稀释2000~3000倍,5~7 d后防效较好,校正死亡率为83.13%~87.95%,其中Bt8000 IU/ul悬浮剂稀释2500倍,5 d后防效最佳,平均校正死亡率为83.13%;0.25%阿维菌素+Bt32000 IU/mg悬浮剂稀释2000~3000倍,5~7 d后防效较好,校正死亡率为92.77%~96.39%,其中0.25%阿维菌素+Bt32000 IU/mg可湿性粉剂稀释3000倍,5 d后防效最佳,平均校正死亡率为92.77%。 展开更多
关键词 苏云金杆菌 美国白蛾 防治效果
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棉铃虫中肠特异性结合蛋白ABCC1对Cry1Ac毒力的影响 预览
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作者 陈琳 魏纪珍 +3 位作者 刘臣 牛琳琳 张彩虹 梁革梅 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第19期3337-3345,共9页
【目的】研究棉铃虫(Helicoverpa armigera)中肠蛋白ABCC1(HaABCC1)与Cry1Ac的结合特性及对Cry1Ac毒力的影响,明确HaABCC1在Cry1Ac杀虫机制中的作用。【方法】分析HaABCC1基因序列,设计引物,通过原核表达得到HaABCC1两个跨膜区片段的蛋... 【目的】研究棉铃虫(Helicoverpa armigera)中肠蛋白ABCC1(HaABCC1)与Cry1Ac的结合特性及对Cry1Ac毒力的影响,明确HaABCC1在Cry1Ac杀虫机制中的作用。【方法】分析HaABCC1基因序列,设计引物,通过原核表达得到HaABCC1两个跨膜区片段的蛋白,与Cry1Ac进行Ligand blot试验,验证其与Cry1Ac的体外结合特性;利用RNAi技术干扰棉铃虫幼虫的HaABCC1,在3龄幼虫腹部注射siABCC1,比较HaABCC1的表达量及Cry1Ac处理后棉铃虫死亡率的变化;通过细胞转染将ABCC1导入Sf9细胞系中,确定pAc-ABCC1重组质粒转入Sf9细胞后,用细胞生物测定的方法比较Cry1Ac处理后细胞死亡率的变化;比较敏感品系(96S)和Cry1Ac抗性品系(BtR)棉铃虫的HaABCC1基因全长序列,并通过荧光定量RT-PCR检测HaABCC1在抗、感棉铃虫中的表达量。【结果】HaABCC1跨膜区TMD1和TMD2在Escherichia coli BL21(DE3)感受态细胞中成功表达,两个HaABCC1跨膜区片段蛋白均能与活化的Cry1Ac在体外结合;棉铃虫注射siABCC1后,HaABCC1的表达量显著下降,与未注射的棉铃虫、注射DEPC水和siEGFP的棉铃虫相比,用活化的Cry1Ac蛋白处理HaABCC1被干扰的棉铃虫,其幼虫死亡率显著降低,表明棉铃虫幼虫的HaABCC1被干扰后,能显著降低Cry1Ac对棉铃虫的毒力;用活化的Cry1Ac蛋白处理成功转入HaABCC1的Sf9细胞,与对照Sf9细胞相比,细胞的死亡率明显上升,表明将HaABCC1导入Sf9后能显著提高Cry1Ac处理后的细胞死亡率;抗性品系(BtR)与敏感品系(96S)棉铃虫的HaABCC1氨基酸序列没有差别,但抗性品系BtR棉铃虫HaABCC1的表达量显著降低。【结论】HaABCC1是Cry1Ac的特异性结合蛋白,可能是Cry1Ac的功能受体蛋白,并可能参与对Cry1Ac的抗性机制。 展开更多
关键词 棉铃虫 ABCC1 苏云金芽孢杆菌 CRY1AC 结合蛋白 毒力
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对草地贪夜蛾高毒力的苏云金杆菌菌株筛选 预览
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作者 刘华梅 胡虓 +7 位作者 王应龙 杨普云 束长龙 朱晓明 张杰 孙刚忠 张晓明 李青 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2019年第5期721-728,共8页
筛选对草地贪夜蛾高毒力Bt菌株,对于开发绿色高效防治草地贪夜蛾新产品具有重要意义。本研究从自行筛选的对夜蛾科害虫高毒力的Bt菌株资源中,选取9株菌株进行草地贪夜蛾室内毒力测定,并对高毒力菌株进行杀虫基因分析;选取室内毒力测定... 筛选对草地贪夜蛾高毒力Bt菌株,对于开发绿色高效防治草地贪夜蛾新产品具有重要意义。本研究从自行筛选的对夜蛾科害虫高毒力的Bt菌株资源中,选取9株菌株进行草地贪夜蛾室内毒力测定,并对高毒力菌株进行杀虫基因分析;选取室内毒力测定活性最高的3株菌株进行田间小区药效试验。结果表明,9株Bt菌株在药后7 d对草地贪夜蛾初孵幼虫均表现出显著的毒杀效果,LC50范围在0.07~3.38μg/g,其中毒力最高的3个菌株分别是KN50、KN11和KNR8,LC50分别为0.07、0.23和0.43μg/g,表现非常显著的致死效果;对KN50、KN11和KNR8等6种高毒力的Bt菌株的杀虫基因分析发现,他们都含有vip3Aa、cry2Ab、cry1Ac、cry1Ia杀虫基因。KN50、KN11和KNR8菌株的32000IU/mg制剂在田间对草地贪夜蛾表现出不同程度防效,其防效高低与室内毒力结果一致,其中KN50药后7 d防效最高,在200和400 g/667 m2下对1~3龄幼虫防效分别可达86.09%和95.22%,对不同龄期幼虫混发的防效为72.61%和86.59%。因此KN50、KN11和KNR8这3个菌株能作为备选高效菌株用于防治草地贪夜蛾新产品开发,为实现草地贪夜蛾的绿色防控、化学农药合理减替提供重要保障。 展开更多
关键词 草地贪夜蛾 苏云金杆菌 毒力测定 杀虫基因 田间防效
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苏云金芽孢杆菌几丁质酶Chi73的特性及生物活性研究 预览
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作者 刘佳 宋萍 +2 位作者 张杰 南宫自艳 王勤英 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期74-81,共8页
为了明确苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt)几丁质酶Chi73的特性和功能,本研究从Bt kurstaki HD-73菌株中克隆了几丁质酶基因chi73,并对其进行了原核表达;随后对表达的重组几丁质酶Chi73的酶学特性、杀虫活性和抑菌活性开展... 为了明确苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt)几丁质酶Chi73的特性和功能,本研究从Bt kurstaki HD-73菌株中克隆了几丁质酶基因chi73,并对其进行了原核表达;随后对表达的重组几丁质酶Chi73的酶学特性、杀虫活性和抑菌活性开展了研究。结果表明,在大肠杆菌中正确表达了大小为77 kDa的重组几丁质酶Chi73。以胶体几丁质为底物时,该酶的最适反应温度为60℃,最适pH为7.0,Zn2+和SDS对酶活力有明显的抑制作用。Chi73能显著抑制棉铃虫2龄幼虫的生长,其抑制率为94.37%。同时,对Bt Cry1Ac毒素有明显的增效作用,使Bt Cry1Ac毒素对棉铃虫2龄幼虫的LC50由27.39μg/mL降低至14.49μg/mL。此外,Chi73对白菜黑斑病菌、葡萄白腐病菌和棉花枯萎病菌均表现出明显的抑制作用。可见,Bt几丁质酶在杀虫增效和抑制真菌方面具有一定的应用潜力。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 几丁质酶 酶活性 杀虫活性 抑菌活性
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