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BARF1基因的启动子活性及其在鼻咽癌细胞中肿瘤特异性分析研究 预览 被引量:1
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作者 卿菁 赵素萍 +1 位作者 蒋卫红 章华 《现代实用医学》 2013年第5期492-494,F0003共4页
目的探讨BARF1基因的启动子活性及其在鼻咽癌细胞中是否具有肿瘤相对特异性。方法结合启动子预测软件结果(TRANSFAC和MATINSPECTOR)及引物设计软件(Primerpremier5.0),设计BARFl基因的启动子序列,验证其启动子活性,并比较该启... 目的探讨BARF1基因的启动子活性及其在鼻咽癌细胞中是否具有肿瘤相对特异性。方法结合启动子预测软件结果(TRANSFAC和MATINSPECTOR)及引物设计软件(Primerpremier5.0),设计BARFl基因的启动子序列,验证其启动子活性,并比较该启动子在NP69细胞和CNE-2细胞中的的启动子活性的差异,验证其肿瘤相对特异性。结果测序和酶切结果证明所设计的BARF1基因的启动子的序列完全正确,其在CNE.2细胞中具有启动子活性,而在NP69细胞中不具备启动子活性,且该启动子在CNE-2细胞中的启动子活性远高于NP69细胞,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论本研究设计的BARF1基因的启动子具有启动子活性,且该启动子具有肿瘤相对特异性。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 BARF1基因 启动子活性 肿瘤相对特异性 靶向性
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EB病毒BARF1基因真核表达载体的构建 预览 被引量:1
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作者 刘智群 王梅梅 +4 位作者 侯灵彤 张放 熊亚南 刘敏 李淑英 《河北联合大学学报:医学版》 2012年第1期 4-6,共3页
①目的构建携带EB病毒(Epstein—Barr virus,EBV)编码BARF1基因的真核表达载体。②方法根据GenBan提供的BARF1基因的cDNA序列,设计特异性引物,并在雨端添加酶切位点;常规培养B95—8细胞,提取细胞RNA,通过RT-PCR扩增BARFi基因,... ①目的构建携带EB病毒(Epstein—Barr virus,EBV)编码BARF1基因的真核表达载体。②方法根据GenBan提供的BARF1基因的cDNA序列,设计特异性引物,并在雨端添加酶切位点;常规培养B95—8细胞,提取细胞RNA,通过RT-PCR扩增BARFi基因,将其克隆到pUM—T载体,转化E.eoli DH5α,经氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,提取质粒并用EcoRI和XbaI双酶切与测序鉴定,证实BARF1基因已克隆到pUM—T载体。凝胶回收双酶切产物BARF1片段,再将其连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)-his,转化E.coli DH5α,通过氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,提取质粒并用EcoRI和XbaI双酶切分析,确认插入方向。⑧结果以B95—8细胞提取RNA进行RT-PCR扩增的cDNA为模板扩增BARF1,得到与预期片段大小相符的666bp的片段;对所提质粒进行鉴定后,证实目的基因BARF1片段已插入pUM—T载体,经双酶切和测序分析,确认BARF1基因已正确连接到pcDNA3.1(+)-his真核表达载体。④结论成功地构建真核表达载体。peDNA3.1(+)/BARF1-his。 展开更多
关键词 EB病毒 BARF1基因 真核表达载体
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EB病毒BARF1基因对人胃上皮细胞恶性转化的作用 被引量:1
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作者 李淑英 李劲涛 +4 位作者 杜海军 王湛 朱丽华 周玲 曾毅 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第19期 2025-2028,共4页
目的探讨EB病毒编码BARF1基因在人胃上皮细胞恶性转化中的作用。方法用携带BARF1基因的真核载体PIRES2-EGFP/BARF1,转染人胃上皮细胞系GES-1,通过G418筛选,获得稳定表达BARF1基因的人胃上皮细胞株。GES-1细胞被分为4组,包括1个转染BARF... 目的探讨EB病毒编码BARF1基因在人胃上皮细胞恶性转化中的作用。方法用携带BARF1基因的真核载体PIRES2-EGFP/BARF1,转染人胃上皮细胞系GES-1,通过G418筛选,获得稳定表达BARF1基因的人胃上皮细胞株。GES-1细胞被分为4组,包括1个转染BARF1基因的细胞组,1个转染BARF1基因并有TPA刺激细胞组,1个转染空载体细胞组和未转染的细胞组。观察软琼脂克隆形成能力和SCID鼠体内成瘤能力。SCID鼠被分成不同的组进行皮下接种,每一组接种3只。结果转染BARF1基因的细胞组及其TPA刺激组在软琼脂中能形成克隆,转染组克隆形成率为24.2%(58/240),TPA组克隆形成率为40.0%(96/240);而未转染组和转染空载体组细胞在软琼脂中没有克隆形成。转染BARF1基因的TPA刺激组细胞在SCID鼠体内能形成了肿瘤;未转染组、转染空载体组及转染BARF1基因的细胞组在SCID鼠体内没能形成肿瘤,但转染BARF1基因的细胞组在SCID鼠体内产生了结节。结论作为EBV的一个癌基因BARF1能够使细胞发生恶性转化,获得肿瘤细胞生长的特性,在人胃上皮细胞恶性转化过程中起重要作用。 展开更多
关键词 人胃上皮细胞 转染 BARF1基因
BARF1基因真核表达载体PIRES2-EGFP/BARF1的构建及鉴定 预览
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作者 李淑英 张科 +6 位作者 杜海军 王湛 李旭坤 慈雅丽 王新燕 张秀军 周玲 《辽宁师范大学学报:自然科学版》 CAS 2011年第1期 98-101,共4页
提取B95-8细胞RNA,进行逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增BARF1基因,将其克隆到pUM-T载体,转化E.coliDH5α,筛选阳性克隆,提取质粒并用EcoRI和BamHI双酶切,电泳回收BARF1片段.同时用Ec... 提取B95-8细胞RNA,进行逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增BARF1基因,将其克隆到pUM-T载体,转化E.coliDH5α,筛选阳性克隆,提取质粒并用EcoRI和BamHI双酶切,电泳回收BARF1片段.同时用EcoRI和BamHI双酶切真核载体PIRES2-EGFP,电泳后回收载体PIRES2-EGFP并与BARF1片段连接;转化E.coliDH5α,筛选阳性克隆.提取质粒并用EcoRI和BamHI双酶切鉴定插入方向,并进行测序分析.转染胃上皮细胞GES-1后,观察细胞形态与行为变化.得到666 bp的BARF1基因片段.经双酶切鉴定,BARF1基因已正确连接到PIRES2-EGFP真核表达载体;测序结果与B95-8细胞株序列完全一致.BARF1基因转染GES-1细胞后,细胞由梭形圆化,黏着力减弱,重叠生长.结果表明成功地构建了携带EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)编码BARF1基因的真核表达载体. 展开更多
关键词 EB病毒 BARF1基因 真核表达载体
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携带BARF1基因的人胃上皮细胞株的建立 预览
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作者 李淑英 张科 +5 位作者 杜海军 王湛 慈雅丽 王新燕 周玲 曾毅 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期 407-410,共4页
目的建立携带BARF1基因的人胃上皮细胞株,为探讨EB病毒编码BARF1基因对胃上皮细胞的影响而建立体外模型。方法构建携带BARF1基因的真核载体pcDNA3.1(+)-his/BARF1,转染人胃上皮细胞系GES-1,G418筛选单克隆。用CCK-8检测未转染的GES-... 目的建立携带BARF1基因的人胃上皮细胞株,为探讨EB病毒编码BARF1基因对胃上皮细胞的影响而建立体外模型。方法构建携带BARF1基因的真核载体pcDNA3.1(+)-his/BARF1,转染人胃上皮细胞系GES-1,G418筛选单克隆。用CCK-8检测未转染的GES-1、转染空载体GES-1及转染BARF1基因的GES-1增殖状况。结果双酶切鉴定,666bp的BARF1基因片段已连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)-his。转染细胞通过G418筛选,获得了稳定表达BARF1基因的人胃上皮细胞株,转染BARF1基因的GES-1细胞增殖速度显著高于未转染的GES-1和转染空载体GES-1细胞(P〈0.01)。结论建立了稳定表达BARF1基因的人胃上皮细胞株。 展开更多
关键词 人胃上皮细胞 转染 BARF1基因
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EB病毒基因BARF1在鼻咽癌细胞中的表达及意义 预览 被引量:1
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作者 张蕾 王晓华 +1 位作者 马秀兰 何安光 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2004年第1期 28-30,共3页
目的:探讨EB(Epstein-Barr)病毒新基因BARF1(BamHI A rightward open readingframe 1)在人鼻咽癌组织中的表达及意义,为深入阐明EB病毒致癌机制提供实验依据.方法:提取RNA后,采用RT-PCR方法扩增标本中的EBNA1(EB virus associated nucle... 目的:探讨EB(Epstein-Barr)病毒新基因BARF1(BamHI A rightward open readingframe 1)在人鼻咽癌组织中的表达及意义,为深入阐明EB病毒致癌机制提供实验依据.方法:提取RNA后,采用RT-PCR方法扩增标本中的EBNA1(EB virus associated nuclear antigen 1)和BARF1 mRNA,PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳观察并照相.结果:11例RNA合格的标本均表达EBNA1,提示病例均为EB病毒阳性病例;其中9例表达BARF1,占82%;而且9例中的7例为强阳性.结论:EB病毒新基因BARF1 mRNA在鼻咽癌细胞中高表达,这提示除了已经明确的潜伏性膜蛋白1(LMP1)以外,BARF1可能在鼻咽癌细胞恶性增殖中发挥重要作用,具体机制有待深入研究. 展开更多
关键词 鼻咽癌 Epstein—Barr病毒 BARF1基因
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EB病毒基因BARF1在鼻咽癌中的表达及其意义 预览 被引量:3
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作者 蒋卫红 肖健云 赵素萍 《中国耳鼻咽喉颅底外科杂志》 CAS 2004年第6期 333-335,共3页
目的 EB病毒与鼻咽癌(特别是低分化鳞癌)密切相关.BARF1基因是EBV裂解期中的早期基因,本研究通过检测BARF1基因在鼻咽癌组织中的表达,希望能进一步揭示EB病毒与鼻咽癌的关系及致癌的可能机制.方法对经病理确诊的47例鼻咽低分化鳞癌病人... 目的 EB病毒与鼻咽癌(特别是低分化鳞癌)密切相关.BARF1基因是EBV裂解期中的早期基因,本研究通过检测BARF1基因在鼻咽癌组织中的表达,希望能进一步揭示EB病毒与鼻咽癌的关系及致癌的可能机制.方法对经病理确诊的47例鼻咽低分化鳞癌病人分别取癌组织、癌旁组织及相对正常鼻咽黏膜和 13例其他头颈部恶性肿瘤癌组织及8例正常人鼻咽黏膜组织(均证实有EB病毒潜伏感染),采用巢式-PCR技术检测BARF1在这些组织中的表达情况.结果鼻咽癌组织BARF1基因表达率为 91.5%(43/47),其中39例相对强表达,4例弱表达;癌旁组织BARF1基因表达率为 46.8%(22/47),其中11例相对强表达,11例弱表达;相对正常黏膜BARF1基因表达率为 6.4%(3/47),3例均为弱表达;携带EB病毒的其他头颈部恶性肿瘤组织、正常人鼻咽黏膜组织均未检测到BARF1基因表达.结论从相对正常鼻咽黏膜到癌旁组织再到鼻咽癌组织BARF1基因的表达趋势为从不表达到表达,从弱表达到强表达.说明EB病毒与鼻咽癌的发生确实存在密切相关性;提示启动BARF1基因的表达有可能是EB病毒致鼻咽癌的重要条件之一. 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤/病理学 鳞状细胞/病理学 爱波斯坦-巴尔病毒 巢式-PCR BARF1基因
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EB病毒中早期表达的癌基因—BARF1 预览
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作者 杜海军 周玲 曾毅 《国外医学:病毒学分册》 2003年第6期 172-174,共3页
BARF1是近期发现EB病毒编码的早期癌基因.对其认识还处于起步阶段,本文从BARF1的基因结构、体外对细胞的转化、肿瘤细胞中的表达及可能的作用机制方面的研究做一介绍.
关键词 EB病毒 基因 BARF1基因 作用机制 肿瘤细胞
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BARF1基因转染对人胃上皮细胞Bcl-2表达的影响 预览
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作者 张科 张垅 +5 位作者 李淑英 杜海军 赵莹 张云茹 周玲 曾毅 《河北联合大学学报:医学版》 2013年第2期144-145,共2页
①目的探讨EB病毒编码BARFl基因对人胃上皮细胞Bcl-2表达的影响。②方法用携带BARFl基因的真核载体PIRES2-EGFP/BARFI,转染人胃上皮细胞系GES-l,G418筛选单克隆。用免疫组化法检测转染细咆及采转染细胞Bcl-2的表达状况。⑧结果... ①目的探讨EB病毒编码BARFl基因对人胃上皮细胞Bcl-2表达的影响。②方法用携带BARFl基因的真核载体PIRES2-EGFP/BARFI,转染人胃上皮细胞系GES-l,G418筛选单克隆。用免疫组化法检测转染细咆及采转染细胞Bcl-2的表达状况。⑧结果获得稳定表达BAR.F1基因的人胃上皮细胞株,转染BARFl基因的细胞Bcl-2表达显著高于未转染和转染空载体GES-1细胞(P〈0.01)。④结论BARFl基因可能上调了人胃上皮细胞Bcl-2表达。 展开更多
关键词 人胃上皮细胞 BARF1基因转染 BCL-2
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