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白背飞虱酚氧化酶原PPO基因特性及其免疫应答 认领
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作者 张道伟 康奎 +4 位作者 余亚娅 匡富萍 潘碧莹 陈静 唐斌 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第15期3108-3119,共12页
【目的】酚氧化酶(phenoloxidase,PO)是昆虫体内的免疫蛋白,在昆虫体内起重要的调节作用,主要以无活性的酚氧化酶原(prophenoloxidase,PPO)形式存在。本研究在转录组测序获得白背飞虱(Sogatella furcifera)3条PPO序列的基础上,通过分析... 【目的】酚氧化酶(phenoloxidase,PO)是昆虫体内的免疫蛋白,在昆虫体内起重要的调节作用,主要以无活性的酚氧化酶原(prophenoloxidase,PPO)形式存在。本研究在转录组测序获得白背飞虱(Sogatella furcifera)3条PPO序列的基础上,通过分析白背飞虱体内不同SfPPO的发育和组织表达模式,并进一步抑制SfPPO的表达以及病原菌诱导,探讨SfPPO在白背飞虱体内的生物学功能。【方法】以白背飞虱3条SfPPO序列为研究对象,利用生物信息学方法分析其蛋白结构以及与其他昆虫之间的同源性。并以注射绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的dsRNA作为对照组,通过注射合成的dsSfPPO后采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测基因表达抑制效果;此外,为了探究SfPPO在白背飞虱生长发育和免疫应答方面的作用,利用qRT-PCR检测SfPPO在不同发育阶段及组织中的表达情况,以及注射大肠杆菌(Escherichia coli)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)后3个SfPPO的诱导表达情况。【结果】SfPPO1、SfPPO2-1、SfPPO2-2的开放阅读框长度分别为2079、999、2070 bp,分别编码692、332、689个氨基酸,预测蛋白分子量分别为79.84、37.67、79.53 kD,等电点分别为6.43、9.56、6.20。生物信息学分析表明,白背飞虱的3个PPO蛋白具有较高的同源性,且与褐飞虱(Nilaparvata lugens)的亲缘关系最近;SfPPO1、SfPPO2-1、SfPPO2-2均在成虫第3天表达量最高,其中SfPPO2-1和SfPPO2-2的发育表达模式相似;SfPPO1和SfPPO2-1在表皮和脂肪体内表达量较高,而SfPPO2-2在翅和脂肪体内表达量较高,在头、足、中肠、马氏管中表达量相对较低;与注射dsGFP组相比,注射靶标基因的dsRNA后都能够显著沉默目的基因的表达,而且当SfPPO2-1表达被沉默后,SfPPO1出现显著高表达,说明不同的PPO之间可能具有补偿功能;大肠杆菌诱导后12 h,SfPPO2-1和SfPPO2-2表达量显著升高,SfPPO1表达量则在诱导24 h后显著升高;枯草芽胞杆菌� 展开更多
关键词 白背飞虱 氧化酶 RNA干扰 实时荧光定量PCR 诱导表达 免疫应答
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家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂Bmserpin2对酚氧化酶原激活和抗菌肽基因表达的抑制作用 认领
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作者 李冰 孙帆 +2 位作者 陶姗姗 夏家凤 叶崇军 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期798-806,共9页
【目的】丝氨酸蛋白酶抑制剂家族蛋白是昆虫中调控自身免疫反应的重要蛋白酶抑制剂,本研究旨在研究家蚕Bombyx mori丝氨酸蛋白酶抑制剂2(Bmserpin2)在家蚕2个重要的自身免疫通路即酚氧化酶原(prophenol oxidase,PPO)激活通路和革兰氏阳... 【目的】丝氨酸蛋白酶抑制剂家族蛋白是昆虫中调控自身免疫反应的重要蛋白酶抑制剂,本研究旨在研究家蚕Bombyx mori丝氨酸蛋白酶抑制剂2(Bmserpin2)在家蚕2个重要的自身免疫通路即酚氧化酶原(prophenol oxidase,PPO)激活通路和革兰氏阳性菌诱导抗菌肽的TOLL通路中的调控作用。【方法】PCR扩增家蚕Bmserpin2基因片段后原核表达并通过镍柱纯化。利用纯化后的重组Bmserpin2蛋白分别与胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶和蛋白酶K反应,检测Bmserpin2对上述蛋白酶活性的影响。通过RT-qPCR检测Bmserpin2在家蚕5龄第3天幼虫头、中肠、脂肪体、血淋巴、丝腺和表皮组织中表达的模式。往家蚕5龄第3天幼虫注射Bmserpin2重组蛋白,检测Bmserpin2对其血淋巴中PPO活性的影响。通过滕黄微球菌Micrococcus luteus诱导家蚕5龄第3天幼虫产生抗菌肽并注射Bmserpin2重组蛋白后,RT-qPCR检测其血淋巴中抗菌肽基因gloverin2和moricin表达量。【结果】成功构建重组质粒并表达纯化目的蛋白Bmserpin2。通过与不同蛋白酶反应得出Bmserpin2可极显著抑制消化酶胰蛋白酶和弹性蛋白酶活性,对胰凝乳蛋白酶和蛋白酶K活性影响不显著,提示Bmserpin2对不同蛋白酶具有生物学活性和催化特异性。基因表达模式显示Bmserpin2在家蚕5龄幼虫血淋巴和脂肪体中表达量最高。家蚕5龄幼虫注射重组Bmserpin2蛋白后发现目的蛋白能有效抑制血淋巴中PPO活性。利用滕黄微球菌诱导家蚕5龄幼虫产生抗菌肽后,滕黄微球菌和Bmserpin2混合注射组中血淋巴中抗菌肽基因gloverin2和moricin的转录表达与只注射滕黄微球菌的比较被显著下调。【结论】Bmserpin2可能参与家蚕酚氧化酶原激活和TOLL途径的胞外级联反应的免疫通路。 展开更多
关键词 家蚕 自身免疫 丝氨酸蛋白抑制剂 氧化酶 抗菌肽 TOLL通路
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长毛明对虾酚氧化酶原基因cDNA克隆及组织表达分析 认领
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作者 韦光本 伍元植 +4 位作者 张依琳 吴凡 黄郁葱 蔡双虎 汤菊芬 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期4910-4918,共9页
酚氧化酶(phenoloxidase,PO)属于对虾免疫系统的核心酶,在机体抵抗微生物感染过程中起到重要的作用。本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆长毛明对虾(Fenneropenaeus penicillatus)酚氧化酶原(prophenoloxidase,proPO)基因(F-proPO)。cDNA全... 酚氧化酶(phenoloxidase,PO)属于对虾免疫系统的核心酶,在机体抵抗微生物感染过程中起到重要的作用。本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆长毛明对虾(Fenneropenaeus penicillatus)酚氧化酶原(prophenoloxidase,proPO)基因(F-proPO)。cDNA全长3003 bp,包含63 bp的5′-UTR、879 bp的3′-UTR和编码686个氨基酸的2061 bp的开放阅读框(ORF),预测分子量为78.05 kD,理论等电点(pI)为5.79;含有3个串联式血蓝蛋白结构功能域、2个保守的Cu2+结合位点和6个组氨酸残基;多重比对结果表明,F-proPO与中国明对虾proPO相似度最高(98%),与其他甲壳类动物proPO相似度为51%~93%。实时荧光定量PCR检测结果表明,该基因的表达具有组织特异性,在血淋巴中表达量最高。人工感染溶藻弧菌后,该基因在鳃、血淋巴、肠和性腺中表达水平显著上调;人工感染白斑综合征病毒后,该基因在脑、鳃、心、血淋巴和肠中表达水平显著上调。可见,长毛明对虾PO是参与机体免疫防御反应的一种重要分子。 展开更多
关键词 长毛明对虾 氧化酶 氧化酶 基因克隆 组织表达
小金蝠蛾酚氧化酶原基因的克隆及表达分析 认领
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作者 龙成燕 仝超群 +5 位作者 陈若霓 陈仕江 卿玉玲 秦少容 周泽扬 李春峰 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期2060-2068,共9页
通过逆转录PCR技术克隆获得小金蝠蛾(Thitarodes xiaojinensis)幼虫酚氧化酶原(TxPPO)基因cDNA的部分序列,对其进行生物信息学分析及组织表达谱分析。克隆该基因cDNA所得的部分序列长度为2654 bp,其CDS全长为2 070 bp,编码的蛋白质由68... 通过逆转录PCR技术克隆获得小金蝠蛾(Thitarodes xiaojinensis)幼虫酚氧化酶原(TxPPO)基因cDNA的部分序列,对其进行生物信息学分析及组织表达谱分析。克隆该基因cDNA所得的部分序列长度为2654 bp,其CDS全长为2 070 bp,编码的蛋白质由689个氨基酸残基组成,预测分子质量为79.31 ku、等电点为5.91,无信号肽。进一步对TxPPO氨基酸序列分析及系统发育树构建,发现该基因与其他鳞翅目昆虫酚氧化酶原-2(PPO2)聚为一支,同源性较高,相似度为62.45%~63.61%。此外,TxPPO含有与其他鳞翅目昆虫PPO相似的丝氨酸蛋白酶酶切位点、thiolester-like位点、3个保守的血蓝蛋白结构域、2个高度保守的铜离子结合位点及位于铜离子结合位点内的6个保守的组氨酸残基。通过实时荧光定量PCR及Western blot方法对PPO基因在小金蝠蛾幼虫各组织中的表达情况进行检测,RT-qPCR结果显示,该基因在小金蝠蛾幼虫的血细胞中转录水平最高,其次为头部、脂肪体、表皮、中肠组织;Western blot检测结果表明,该蛋白分布于小金蝠蛾幼虫的血浆、头部、表皮组织及中肠组织中,而未在脂肪体检测到其分布。 展开更多
关键词 蝙蝠蛾 氧化酶 基因克隆 表达谱
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褐飞虱两个酚氧化酶原基因的特性及细菌诱导后的表达分析 认领 被引量:2
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作者 陈静 张道伟 钱正敏 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期44-51,共8页
为探讨褐飞虱Nilaparvata lugens(St錶)酚氧化酶原基因的发育表达模式及生物学功能,利用转录组数据和RACE方法获得两条褐飞虱酚氧化酶原基因NlPPO1(GenBank No.:ALE32751)和NlPPO2(GenBank No.:ALE32752)全长序列,褐飞虱NlPPO1... 为探讨褐飞虱Nilaparvata lugens(St錶)酚氧化酶原基因的发育表达模式及生物学功能,利用转录组数据和RACE方法获得两条褐飞虱酚氧化酶原基因NlPPO1(GenBank No.:ALE32751)和NlPPO2(GenBank No.:ALE32752)全长序列,褐飞虱NlPPO1全长为2316 bp,CDS编码区为2073 bp,编码690氨基酸;NlPPO2全长为2738 bp,CDS编码区为2100 bp,编码699氨基酸。通过实时荧光定量PCR方法检测NlPPO的发育表达模式及注射细菌诱导后NlPPO的表达量变化。发育表达模式结果显示,NlPPO1和NlPPO2在肠中都有较高的表达水平,而NlPPO1在表皮细胞表达量最低,NlPPO2在脂肪体表达量最低;在5龄幼虫阶段NlPPO1随时间增加表达量增加,NlPPO2表达量则维持相对较高水平;在成虫阶段NlPPO1表达量维持在较低水平,NlPPO2随时间增加表达量降低。注射大肠杆菌诱导NlPPO结果表明,诱导24 h后,NlPPO1表达量显著升高,NlPPO2表达量变化差异不显著;注射枯草芽胞杆菌诱导NlPPO结果表明,诱导24 h后,NlPPO1和NlPPO2表达量都显著升高。研究结果显示褐飞虱NlPPO1和NlPPO2的发育表达模式存在差异,对不同菌诱导免疫应答也存在差异,暗示二者具有不同的生物学功能。该结果为进一步探索酚氧化酶原在褐飞虱对病原菌的免疫响应机制奠定基础。 展开更多
关键词 褐飞虱 氧化酶 特性 表达模式 诱导表达
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重要外文学术期刊发表蚕学论文简介 认领
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《蚕业科学》 CSCD 北大核心 2017年第2期351-352,共2页
1 WANG X,WANG K,HE Y,LU X,WEN D,WU C,ZHANG J,ZHANG R.The functions of serpin-3,a negativeregulator involved in prophenoloxidase activation and antimicrobial peptides expression of Chinese oak silkworm,Antheraea pernyi... 1 WANG X,WANG K,HE Y,LU X,WEN D,WU C,ZHANG J,ZHANG R.The functions of serpin-3,a negativeregulator involved in prophenoloxidase activation and antimicrobial peptides expression of Chinese oak silkworm,Antheraea pernyi.Dev Comp Immunol,2016,69:1-11题目柞蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin-3是酚氧化酶原激活和抗菌肽表达的负调节因子摘要丝氨酸蛋白酶抑制剂在生物体内参与许多生理过程。大量研究表明丝氨酸蛋白酶抑制剂通过调节蛋白质水解的级联反应,介导无脊椎动物的免疫过程。 展开更多
关键词 丝氨酸蛋白抑制剂 学术期刊 EXPRESSION SILKWORM 论文 蚕学 外文 氧化酶
致病性粪肠球菌对脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)免疫相关基因表达的影响 认领 被引量:3
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作者 段亚飞 李健 +2 位作者 李吉涛 张喆 刘萍 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2017年第5期148-155,共8页
为了研究致病性粪肠球菌(Enterococcus faecalis)对脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)免疫相关基因表达的影响,分别对健康脊尾白虾注射生理盐水和粪肠球菌,测定了不同时间点血细胞和肝胰腺中酚氧化酶原(proPO)、C型凝集素(CT... 为了研究致病性粪肠球菌(Enterococcus faecalis)对脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)免疫相关基因表达的影响,分别对健康脊尾白虾注射生理盐水和粪肠球菌,测定了不同时间点血细胞和肝胰腺中酚氧化酶原(proPO)、C型凝集素(CTL)、超氧化物歧化酶(SOD)、组织蛋白酶D(CatD)和组织蛋白酶L(CatL)基因的相对表达量变化。结果显示,与对照组相比,感染粪肠球菌后,血细胞和肝胰腺中proPO基因表达量均于6h达到最大值(P〈0.05),随后逐渐降低至对照组水平;血细胞和肝胰腺中CTL基因表达量分别于12h和6h上升至最大值,随后逐渐降低;血细胞中CTL基因表达量于72h虽有降低,但仍显著高于对照组(P〈0.05);血细胞和肝胰腺中SOD基因表达量分别于6h和3h达到最大值,随后逐渐降低,并于72h达到正常水平;血细胞和肝胰腺中CatD基因表达量变化趋势基本一致,呈现先降低后升高、然后显著降低再升高的趋势;血细胞和肝胰腺中CatL基因表达量分别于6h和3h显著降低,随后逐渐升高至最大值,并于72h达到对照组水平。研究表明,长时间的粪肠球菌感染对脊尾白虾免疫相关基因表达影响显著,本研究所用免疫相关基因均可作为粪肠球菌感染疾病的监测指标。 展开更多
关键词 脊尾白虾 粪肠球菌 氧化酶 C型凝集素 氧化物歧化 组织蛋白
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家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂Bmserpin 6的原核表达及对酚氧化酶原活性和抗菌肽表达的调控作用 认领 被引量:3
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作者 李冰 叶崇军 +2 位作者 孟艳 范涛 陈复生 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期237-242,共6页
丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)对昆虫的免疫反应起重要调节作用。根据家蚕基因组数据库序列设计引物,从家蚕幼虫血细胞中克隆了Bmserpin6的编码基因,并构建重组表达载体,在大肠杆菌中成功表达了重组Bmserpin6蛋白。将纯化的重组Bmserpin... 丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)对昆虫的免疫反应起重要调节作用。根据家蚕基因组数据库序列设计引物,从家蚕幼虫血细胞中克隆了Bmserpin6的编码基因,并构建重组表达载体,在大肠杆菌中成功表达了重组Bmserpin6蛋白。将纯化的重组Bmserpin6注射家蚕5龄幼虫后6 h提取家蚕血液制备血清,检测血清样品中的酚氧化酶原活性显著下降(P〈0.05)。体腔注射重组Bmserpin6后的家蚕5龄幼虫再通过微球菌诱导蚕体内抗菌肽gloverin2基因的表达,结果显示幼虫脂肪体和血细胞中的gloverin2基因表达显著下调(P〈0.05)。依据上述结果推测:体外表达的重组Bmserpin6可以调节蚕体内2个重要的免疫途径,即抑制蚕体酚氧化酶原的激活和外源细菌诱导的蚕体抗菌肽的产生。 展开更多
关键词 家蚕 丝氨酸蛋白抑制剂 核表达 氧化酶 抗菌肽
昆虫酚氧化酶功能及研究进展 认领 被引量:1
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作者 王俊秀 李亚红 《山西大同大学学报:自然科学版》 2015年第3期34-36,92共4页
酚氧化酶是昆虫免疫系统一种重要的组成成分。本文就昆虫酚氧化酶的研究进行了总结与展望,供研究人员参考。
关键词 昆虫 氧化酶 氧化酶 激活
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红螯螯虾酚氧化酶原及其特性研究 认领 被引量:1
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作者 顾伟 陈静 +3 位作者 黄艳青 靳明建 孟庆国 王文 《水生生物学报》 CSCD 北大核心 2015年第1期117-125,共9页
采用同源克隆策略和RACE技术,从红螯螯虾Cherax quadricarinatus血细胞中克隆得到酚氧化酶原基因的全长c DNA序列,共2951 bp,开放读码框为1995 bp,编码665个氨基酸。预测的分子量和等电点分别为75.7 k D和6.23。酚氧化酶原含有两个推测... 采用同源克隆策略和RACE技术,从红螯螯虾Cherax quadricarinatus血细胞中克隆得到酚氧化酶原基因的全长c DNA序列,共2951 bp,开放读码框为1995 bp,编码665个氨基酸。预测的分子量和等电点分别为75.7 k D和6.23。酚氧化酶原含有两个推测的tyrosinase copper-binding motifs(带有六个组氨酸残基)和一个thiol-ester-like motif,这些特征和其他甲壳动物的酚氧化酶原特征相同。红螯螯虾酚氧化酶原氨基酸序列与通讯螯虾Pacifastacus leniusculus、欧洲龙虾Homarus gammarus、美洲龙虾Homarus americanus和克氏原螯虾Procambarus clarkii酚氧化酶原的相似率分别为68%、63%、63%和59%。酚氧化酶原基因双酶切后连接入p ET-28a原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21后重组表达酚氧化酶原蛋白。在重组蛋白纯化后,免疫新西兰大耳兔制备得到的酚氧化酶原多克隆抗体,其效价大于1︰12800。红螯螯虾血淋巴、肝和鳃组织中的酚氧化酶原m RNA表达和酚氧化酶活性较高,而神经、心、肠和肌肉中较低。中华绒螯蟹螺原体和嗜水气单胞菌免疫红螯螯虾后,血淋巴细胞、肝和鳃组织中的酚氧化酶原和酚氧化酶活性在免疫后的不同时间均出现了显著性的增加,此结果表明酚氧化酶原和酚氧化酶在红螯螯虾对抗细菌感染的过程中起到重要的免疫作用。此结果为进一步深入研究酚氧化酶原基因和酚氧化酶的功能及其调控机理奠定基础。 展开更多
关键词 氧化酶 中华绒螯蟹螺 嗜水气单胞菌 红螯螯虾
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细角滨对虾酚氧化酶原cDNA克隆及序列结构分析 认领
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作者 许尤厚 胡超群 《钦州学院学报》 2015年第5期1-6,共6页
采用RT—PCR原理和长片段扩增技术克隆细角滨对虾酚氧化酶原基因。结果表明,细角滨对虾血淋巴细胞内存在2个proPO基因。proPOgene 1的cDNA序列包含有372氨基酸,前190个氨基酸为一个M家族血蓝蛋白,是一个铜结合位点区域,191-372为一... 采用RT—PCR原理和长片段扩增技术克隆细角滨对虾酚氧化酶原基因。结果表明,细角滨对虾血淋巴细胞内存在2个proPO基因。proPOgene 1的cDNA序列包含有372氨基酸,前190个氨基酸为一个M家族血蓝蛋白,是一个铜结合位点区域,191-372为一个C家族的血蓝蛋白,是一个免疫球蛋白样的区域。proPO gene2的2个功能位点之间的序列有重叠,proPO gene2 cDNA序列的6—935bp包含了第一个功能位点,928-1464bp则包含了第二个功能位点。系统进化树比对分析发现2个基因之间的序列差异非常大。细角滨对虾和凡纳滨对虾的proPO gene2同处于一个密切相关的群,proPO gene1则和其他几种对虾的proPO gene处于一个群。proPO gene2与proPO gene1在对虾免疫活动中是否存在不同的功能还有待于进一步的研究。 展开更多
关键词 细角滨对虾 氧化酶 基因克隆 序列结构分析
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亚洲玉米螟酚氧化酶原的原核表达和性质分析 认领 被引量:2
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作者 赵同伟 张兵 +5 位作者 吕文静 翟会锋 吴桃燕 张石洋 汤小伟 冯从经 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期798-805,共8页
【目的】昆虫体内酚氧化酶原(PPO)是一种重要的天然免疫蛋白,参与昆虫的体液免疫和细胞免疫过程。本研究采用原核表达体系,大量表达可溶且具有活性的重组PPO蛋白,可用于各种酚氧化酶(PO)抑制剂的筛选,从而为创制抑制昆虫免疫系统的... 【目的】昆虫体内酚氧化酶原(PPO)是一种重要的天然免疫蛋白,参与昆虫的体液免疫和细胞免疫过程。本研究采用原核表达体系,大量表达可溶且具有活性的重组PPO蛋白,可用于各种酚氧化酶(PO)抑制剂的筛选,从而为创制抑制昆虫免疫系统的新型杀虫剂提供条件。【方法】利用从亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis 5龄幼虫体内克隆获得PPO基因,构建了pET-28b-PPO原核表达载体,在大肠杆菌Escherichia coli中重组表达了亚洲玉米螟PPO蛋白;采用Ni-NAT亲和层析柱快速纯化目的蛋白,进行了Western杂交鉴定;测定分析了重组PPO蛋白激活为PO后的酶学性质以及不同金属离子(Mg2+,Cu2+和Fe2+)对PPO二级结构的影响。【结果】融合蛋白PPO得到了表达和纯化。重组PPO蛋白激活为PO后最适反应温度为30℃,最适pH为7.2,以L-DOPA为底物时PO催化反应的Vmax为140.8 U/mg·min,Km为2.96 mmol/L。Fe2+存在的情况下重组PPO蛋白中β-折叠结构成分显著增加至53.7%±4.6%,α-螺旋结构成分则显著下降至2.6%±1.2%(P〈0.05);有Mg2+存在的情况下,重组PPO蛋白中β-折叠结构成分显著下降,α-螺旋结构成分稍有上升。有Cu2+存在的情况下,重组PPO蛋白中β-折叠结构成分显著下降为10.0%±1.6%,而α-螺旋结构成分则上升至35.3%±6.9%。【结论】结果说明不同金属离子对重组PPO蛋白的二级结构有显著影响。 展开更多
关键词 亚洲玉米螟 氧化酶 核表达 蛋白纯化 氧化酶 学性质
脊尾白虾酚氧化酶原基因克隆及表达分析 认领 被引量:6
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作者 李洋 刘萍 +4 位作者 李健 李吉涛 马朋 高保全 段亚飞 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期299-306,共8页
利用RACE方法获得了脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)酚氧化酶原(Prophenoloxidase,proPO)基因。该基因cDNA全长3092bp,开放阅读框2013bp,编码671个氨基酸,其预测分子量为74.82kDa。脊尾白虾酚氧化酶原基因推导的氨基酸序列与其他虾... 利用RACE方法获得了脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)酚氧化酶原(Prophenoloxidase,proPO)基因。该基因cDNA全长3092bp,开放阅读框2013bp,编码671个氨基酸,其预测分子量为74.82kDa。脊尾白虾酚氧化酶原基因推导的氨基酸序列与其他虾类酚氧化酶原氨基酸序列同源性较高(65%—78%),该氨基酸序列具有铜离子结合位点等酚氧化酶原基因所具有的典型特征位点。组织表达分析结果表明,proPO基因在脊尾白虾血细胞中表达量最高,其次是鳃和肝胰腺组织,在肌肉中几乎不表达。利用荧光定量PCR分析了不同盐度胁迫下脊尾白虾血细胞和鳃组织中的表达变化规律,结果发现在不同盐度胁迫后血淋巴proPO表达量显著高于对照组,盐度胁迫初期鳃组织proPO表达量显著高于对照组。本研究结果表明脊尾白虾酚氧化酶原基因参与了盐度胁迫引起的机体应激反应。 展开更多
关键词 脊尾白虾 氧化酶 基因克隆 表达 盐度胁迫
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仿刺参体腔液中酚氧化酶活性的分析 认领 被引量:8
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作者 王轶南 穆晓虎 +2 位作者 封妮莎 宋坚 常亚青 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期319-322,共4页
在(22+1)℃下抽取体质量为95.0—105.0g的仿刺参Apostichopus japonicas体腔液,制备体腔液及体腔细胞溶解上清液(CLS),分别测定其酚氧化酶(PO)活性,检测分析不同刺激物(CaCl2、MgCl2、LPS、SDS、Trypsin和甲醇)对酚氧化... 在(22+1)℃下抽取体质量为95.0—105.0g的仿刺参Apostichopus japonicas体腔液,制备体腔液及体腔细胞溶解上清液(CLS),分别测定其酚氧化酶(PO)活性,检测分析不同刺激物(CaCl2、MgCl2、LPS、SDS、Trypsin和甲醇)对酚氧化酶原(proPO)系统的激活效果,并比较了不同规格仿刺参体腔液的酚氧化酶活性。结果表明:仿刺参体腔液中的PO活性个体差异较大,平均为(146.90±55.60)u,体腔液与不同激活剂作用后PO活性均无明显变化;CLS中的PO活性为31.82U,其在100mmol/LMgcl2作用后PO活性大幅度提高,proPO比活为43.9U,CLS与LPS、CaCh和甲醇作用后PO活性无明显增加,与SDS和Trypsin作用后P0活性表现出一定的抑制。研究表明,仿刺参体腔液中的P0主要存在于体腔液中,CLS中的PO活性较低,proPO主要存在于体腔细胞中,可被Mg2+大幅度激活。52.4—68.5、20.7—24.4、4.9—5.6g3种规格的仿刺参体腔液中的PO活性分别为(42.18±7.62)、(34.10±9.28)、(33.29±7.42)U,表明不同规格仿刺参体腔液中的PO活性存在一定差异,总体呈现随规格的增大PO活性增强的趋势,其中100g左右的仿刺参与3个较小规格的仿刺参体腔液中的PO活性存在显著性差异(P〈0.05)。 展开更多
关键词 仿刺参 体腔液 氧化酶 氧化酶
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昆虫酚氧化酶的研究进展 认领 被引量:9
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作者 刘丽萍 奚耕思 +1 位作者 王芳 刘晓明 《生命科学》 CSCD 2013年第4期383-387,共5页
酚氧化酶(phenoloxidase,PO)又名酪氨酸酶,是一种普遍存在于动物和植物体内的铜离子酶,具有多种生物学功能。酚氧化酶可把单酚羟化成二酚(如多巴),接着二酚被氧化成醌,在非酶促反应条件下,醌形成的最终产物是黑色素。生成的... 酚氧化酶(phenoloxidase,PO)又名酪氨酸酶,是一种普遍存在于动物和植物体内的铜离子酶,具有多种生物学功能。酚氧化酶可把单酚羟化成二酚(如多巴),接着二酚被氧化成醌,在非酶促反应条件下,醌形成的最终产物是黑色素。生成的黑色素对昆虫的正常生长发育具有重要作用。酚氧化酶一般以无活性的酚氧化酶原(prophenoloxidase,proPO)形式存在于昆虫的血淋巴中。从昆虫酚氧化酶的结构、分布、活化的分子机制和功能及研究进展等方面进行综述。 展开更多
关键词 氧化酶 氧化酶 黑色素
口虾蛄proPO基因全长cDNA的克隆与组织表达 认领 被引量:5
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作者 刘海映 刘连为 +2 位作者 姜玉声 隋宥珍 陈雷 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1713-1720,共8页
口虾蛄是海湾底拖网渔业中具有重要经济价值的种类,分布广泛。其自然资源日渐衰退,人工育苗技术获得成功后,口虾蛄养殖过程中病害问题及其防治应引起足够的重视。为此,拟通过分子生物学手段研究口虾蛄免疫系统的核心酶--酚氧化酶(PO)... 口虾蛄是海湾底拖网渔业中具有重要经济价值的种类,分布广泛。其自然资源日渐衰退,人工育苗技术获得成功后,口虾蛄养殖过程中病害问题及其防治应引起足够的重视。为此,拟通过分子生物学手段研究口虾蛄免疫系统的核心酶--酚氧化酶(PO)的分子结构及该基因的组织表达,从而在分子水平上深入探究其免疫机理。采用反转录PCR(RT-PCR)与cDNA末端快速克隆(RACE)技术从口虾蛄血细胞中克隆了酚氧化酶原(O-proPO)基因,cDNA全长为2436bp,其中开放阅读框为2142bp,编码713个氨基酸。预测分子量为82446Da,等电点(pI)为8.78。该基因与Genbank上登录的斑节对虾、凡纳滨对虾、罗氏沼虾、短沟对虾、日本对虾proPO基因序列具有较高的同源性,分别为82%、76%、76%、72%、70%。序列分析表明O-proPO为proPO家族中的一个成员,其氨基酸序列中含有多个免疫调节作用位点。系统进化分析显示O-proPO与十足目种类的proPO为同一分支的2个亚群,而后于丰年虫的proPO形成一分支。O-proPO基因表达具有组织特异性,在血淋巴和肠中表达,但在血淋巴中表达量明显高于肠。 展开更多
关键词 口虾蛄 氧化酶 分子克隆 表达分析
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两种色型黄粉虫酚氧化酶原的cDNA克隆、生物信息学分析及表达水平检测 认领 被引量:2
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作者 黄琼 胡杰 王勤 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期594-604,共11页
酚氧化酶是黑色素合成和昆虫免疫的关键酶, 通常以无活性的酚氧化酶原形式存在。为给黄粉虫Tenebrio molitor遗传分化和免疫防御研究提供参考, 本研究采用PCR和RACE技术克隆了黄、 黑两种色型黄粉虫幼虫的酚氧化酶原基因Tm-ppo, 对其... 酚氧化酶是黑色素合成和昆虫免疫的关键酶, 通常以无活性的酚氧化酶原形式存在。为给黄粉虫Tenebrio molitor遗传分化和免疫防御研究提供参考, 本研究采用PCR和RACE技术克隆了黄、 黑两种色型黄粉虫幼虫的酚氧化酶原基因Tm-ppo, 对其cDNA序列及其推导的氨基酸序列进行生物信息学分析, 采用实时荧光定量PCR检测其在两种色型黄粉虫不同发育阶段mRNA表达水平上的动态变化。结果表明: 从黄、 黑两种色型黄粉虫幼虫中克隆出的两个Tm-ppo cDNA序列全长均为2 199 bp, 碱基序列一致性为99%, 包含一个2 055 bp的开放阅读框, 编码684个氨基酸, 它们的编码蛋白有3个氨基酸差异: 第176位(P→A)、 256位(V→A)和648位(I→M)。这两个基因分别被命名为Tm-ppo-1和Tm-ppo-2 (GenBank登录号分别为JX987235和JX987234)。 Tm-ppo-1和Tm-ppo-2编码的酚氧化酶原异构体蛋白(分别为Tm-PPO-1和Tm-PPO-2)存在一个可能的酚氧化酶原水解活化位点(R50~F51残基之间)和一个双铜结合中心(第196~239位残基和第344~411位残基); 同时含有一个类似巯基酯区域的序列(第579~588位残基)及一个C末端保守基序(第634~645位残基); 但它们无氨基端疏水信号肽序列, 也不存在跨膜区域。Tm-PPO-1和Tm-PPO-2的二级结构由大量的α螺旋、 β-折叠和无规则卷曲组成; 三级结构分为前导域(第16~66位残基)、 不相邻的功能域Ⅰ(第3~15位残基和第67~181位残基)、 功能域Ⅱ(第182~419位残基)和功能域Ⅲ(第420~679位残基)4部分。此外, Tm-ppo-1和Tm-ppo-2在黄、 黑两种色型黄粉虫的各发育期均有表达, 并且不同发育阶段的mRNA表达水平呈现明显的变化规律: 幼虫期﹥成虫期﹥蛹期。同时, 环境温度对Tm-ppo-1和Tm-ppo-2的mRNA表达具有显著影响: 与常温对照组(25~30℃)相比, 42℃暴露24 h和48 h的两种 展开更多
关键词 黄粉虫 色型 氧化酶 基因异构体 生物信息学 MRNA表达
拟穴青蟹酚氧化酶原基因的抗菌免疫反应研究 认领 被引量:1
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作者 杜志强 林涛 李新苍 《广东农业科学》 CSCD 北大核心 2013年第19期138-139,155共3页
以拟穴青蟹酚氧化酶原(SP-proPO)基因作为研究对象,通过金黄色葡萄球菌和哈维氏弧菌免疫刺激后表达模式的分析,来探索SP-proPO基因在防御细菌入侵过程中的先天免疫作用.结果表明,SP-proPO基因在正常拟穴青蟹的血细胞中存在较高的表达... 以拟穴青蟹酚氧化酶原(SP-proPO)基因作为研究对象,通过金黄色葡萄球菌和哈维氏弧菌免疫刺激后表达模式的分析,来探索SP-proPO基因在防御细菌入侵过程中的先天免疫作用.结果表明,SP-proPO基因在正常拟穴青蟹的血细胞中存在较高的表达量;而且在细菌刺激的情况下,SP-proPO基因的表达量存在较为明显的上升,哈维氏弧菌刺激12h后,血细胞中SP-proPO基因的表达量提高了近4倍;金黄色葡萄球菌刺激2h后,血细胞中SP-proPO基因的表达量提高了近2.5倍. 展开更多
关键词 拟穴青蟹 氧化酶 免疫刺激 先天免疫反应
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红螯光壳螯虾酚氧化酶原基因的克隆与表达 认领 被引量:1
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作者 王丹丽 左迪 +2 位作者 王兰梅 李嘉尧 赵云龙 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期43-54,共12页
为深入了解红螯光壳螯虾酚氧化酶原(proPO)基因的非特异性免疫机制,利用RACE技术从红螯光壳螯虾血细胞中克隆到酚氧化酶原基因cqproPO,cqproPO基因cDNA全长为2 962 bp,开放阅读框为1 998 bp,编码665个氨基酸,其结构中含有两个铜离子... 为深入了解红螯光壳螯虾酚氧化酶原(proPO)基因的非特异性免疫机制,利用RACE技术从红螯光壳螯虾血细胞中克隆到酚氧化酶原基因cqproPO,cqproPO基因cDNA全长为2 962 bp,开放阅读框为1 998 bp,编码665个氨基酸,其结构中含有两个铜离子结合位点,预测分子量为75.86 ku;同源性比对结果显示,红螯光壳螯虾CqproPO与克氏原螯虾酚氧化酶原的同源性最高为79%,其次是淡水螯虾74%、挪威龙虾69%、美国龙虾67%等;进化分析发现CqproPO与克氏原鳌虾、淡水螯虾、挪威龙虾、美国龙虾等的酚氧化酶原亲缘关系最近;Realtime-PCR实验结果表明,CqproPO在血细胞中表达水平最高,其次是肠、触角腺、鳃等;在肝胰腺中有适量表达;WSSV感染后红螯光壳螯虾CqproPO mRNA在血细胞、肝胰腺和鳃组织中具有不同的时空表达趋势,但感染组和免疫后感染组mRNA表达量分别在感染后12 h和24 h达到最大值,且在3种组织中2个感染组的CqproPO表达量为对照组的1.3~2.55倍,显著高于对照组(P〈0.05),之后cqproPO基因的转录水平明显下降。免疫后再受病毒感染的虾,CqproPO mRNA的表达量在3种组织中总体高于感染组,感染7 d后的免疫保护率达到51.86%,表明免疫增强剂可使机体的抗病毒能力增强,对防御WSSV感染具有一定的免疫保护作用。 展开更多
关键词 红螯光壳螯虾 氧化酶 白斑综合征病毒 克隆 表达
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日本沼虾酚氧化酶原基因cDNA的全长克隆及表达分析 认领 被引量:3
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作者 王文锋 马建敏 +3 位作者 杨洪 刘方 陈香丽 宁黔冀 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期744-750,共7页
[摘要]目的克隆日本沼虾酚氧化酶原(proPO)基因,进行生物信息学及时空表达分析。方法利用RT-PCR和快速扩增eDNA末端(RACE)技术从血细胞中克隆proPO基因eDNA全长序列,用生物软件对其序列进行生物信息学分析;proPO基因时空表达分... [摘要]目的克隆日本沼虾酚氧化酶原(proPO)基因,进行生物信息学及时空表达分析。方法利用RT-PCR和快速扩增eDNA末端(RACE)技术从血细胞中克隆proPO基因eDNA全长序列,用生物软件对其序列进行生物信息学分析;proPO基因时空表达分析采用RT—PCR和Real-timePCR方法;腹部肌肉注射嗜水气单胞菌(5.0×10^9/L)诱导酚氧化酶(PO),20μl/只,注射后3、6、12、24h取其血淋巴,分别测定血细胞proPOmRNA水平及血清酚氧化酶(PO)活力。结果日本沼虾proPO基因eDNA全长2428bp,包含71bp的5’UTR、344bp的3’UTR和2013bp的开放阅读框(ORF)。ORF编码671个氨基酸,预测蛋白分子量为76.5kD,理论等电点(pI)约为7.31;含有2个保守的铜离子结合位点和6个组氨酸残基、1个蛋白酶水解位点和硫酯样的基序(GCGWPRHM);含有3个血蓝蛋白结构域;与罗氏沼虾proPO的相似性最高,为93%,与其他甲壳动物proPO相似性为50%-53%。该基因表达具有组织特异性,血细胞最高,肝胰腺有较弱表达,肌肉、鳃、肠、大颚器官和卵巢不表达;血细胞proPO基因的表达量在蜕皮前期(D0/1)最高;嗜水气单胞菌刺激后6h血细胞proPOmRNA水平及血清中PO活力均显著增加。结论与其他甲壳动物相似,日本沼虾proPO基因具有2个保守的铜离子结合位点;其表达呈组织特异性,最高出现在血细胞;在蜕皮周期的前期(D0/1)血细胞表达量最高;嗜水气单胞菌可诱导proPO基因的表达以及PO活力,提示该基因是参与机体免疫防御反应的一种重要分子。 展开更多
关键词 氧化酶 时空表达 快速扩增cDNA末端技术 实时荧光定量聚合链反应 日本沼虾
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