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小反刍兽疫RT-PCR的鉴定及N基因序列分析 认领
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作者 李小鹏 陈华良 +5 位作者 翟俊琼 周霞 程松 张文娟 罗满林 翟少伦 《亚洲兽医病例研究》 2015年第4期31-38,共8页
根据小反刍兽疫病毒(PPRV) P、N基因保守序列设计了两对引物,分别扩增部分P基因及N基因的全长阅读编码框(ORF),对疑似小反刍兽疫病毒的样品抽取RNA并以其为模板,在RT-PCR的体系中能扩增出预期大小分别为766 bp、1578 bp的目的片段,同时... 根据小反刍兽疫病毒(PPRV) P、N基因保守序列设计了两对引物,分别扩增部分P基因及N基因的全长阅读编码框(ORF),对疑似小反刍兽疫病毒的样品抽取RNA并以其为模板,在RT-PCR的体系中能扩增出预期大小分别为766 bp、1578 bp的目的片段,同时对退火温度,敏感性及特异性等RT-PCR反应条件进行了优化。在最佳反应条件下,该RT-PCR能检出最低850拷贝的PPRV基因组。对N全基因进行RT-PCR扩增并对PCR产物克隆于pMD-19T载体,转化感受态细胞DH5α后,对重组质粒测序,结果表明N基因全长大小与预期完全一致。并且这两个基因与新疆伊犁、北京所发生的小反刍兽疫病毒同源性高达100%,说明该病毒在中国南北方都有存在,其亚型为基因4型。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 P、N基因 逆转录聚合酶反应 同源性 序列分析
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一步法RT-PCR检测大鼠死后脑HGPRT mRNA的降解 认领 被引量:1
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作者 朱方成 雷怀成 《陕西医学杂志》 CAS 2009年第1期 14-16,共3页
目的:探讨大鼠死后不同时间次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)mRNA的降解情况与死亡时间(PMI)的关系。方法:将36只大鼠断颈处死后置于20℃温度控制系统内,利用一步法荧光标记RT-PCR技术检测大鼠脑管家基因HGPRT mRNA在死后即刻... 目的:探讨大鼠死后不同时间次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)mRNA的降解情况与死亡时间(PMI)的关系。方法:将36只大鼠断颈处死后置于20℃温度控制系统内,利用一步法荧光标记RT-PCR技术检测大鼠脑管家基因HGPRT mRNA在死后即刻至8d的相对表达量的变化。结果:在死后即刻至7d大鼠脑组织均可检测到HGPRT mRNA,其扩增产物呈下降趋势。结论:一步法RT-PCR技术检测大鼠脑组织HGPRT mRNA,在死后的降解呈现出一定的规律性,可为PMI推断提供一种新的指标。 展开更多
关键词 死亡/诊断 次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移/代谢 逆转录-聚合酶反应 动物 实验 大鼠
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丙酮酸乙酯对急性坏死性胰腺炎大鼠肺损伤的保护作用 认领 被引量:2
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作者 朱峰 葛春林 郭仁宣 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第12期1364-1369,共6页
目的:观察丙酮酸乙酯(EP)对急性坏死性胰腺炎(ANP)肺损伤大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)mRNA表达的影响,探讨丙酮酸乙酯治疗急性坏死性胰腺炎肺损伤的机制. 方... 目的:观察丙酮酸乙酯(EP)对急性坏死性胰腺炎(ANP)肺损伤大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)mRNA表达的影响,探讨丙酮酸乙酯治疗急性坏死性胰腺炎肺损伤的机制. 方法:逆行性胰胆管注射50 g/L牛磺胆酸钠制作ANP模型.随机分成3组,对照组、ANP组和EP治疗组(40 mg/kg,每隔6 h静脉注射一次).ELISA法检测血清TNF-α和IL-1β水平;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肺组织HMGB1 mRNA表达,并观察血氧变化及肺组织的病理变化. 结果:ANP组血清TNF-α和IL-1β水平在建模后6 h达高峰,12 h下降,在此两时点治疗组血清TNF-α和IL-1β水平明显低于ANP组(TNF-α:131.6±29.6ng/L vs 196.3±16.3 ng/L,65.0±16.6 ng/L vs 90.2±20.1 ng/L,P<0.05;IL-1β:194.9±26.8 ng/L vs 223.0±34.8 ng/L,105.2±24.0 ng/L vs 130.4±23.0 ng/L,P<0.05).ANP组大鼠肺组织HMGB1 mRNA表达水平在ANP后12 h明显升高,至24 h仍维持在高水平.治疗组肺组织HMGB1 mRNA表达水平在各时间点均明显低于ANP组(0.68±0.11 vs 0.88±0.11,0.81±0.11 vs 1.04±0.10,1.08±0.08 vs 1.33±0.15,P<0.05),且同期肺损伤比ANP组轻.治疗组PaO2均明显高于ANP组. 结论:丙酮酸乙酯能显著抑制TNF-α、IL-1β和HMGB1等早晚期炎症因子,改善低氧血症,对ANP肺损伤有明显保护作用. 展开更多
关键词 高迁移率族蛋白-1 急性坏死性胰腺炎 急性肺损伤 丙酮酸乙酯 免疫吸附试验 逆转录-聚合酶反应
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肝素酶和氯化锂对抗肝素的RT—PCR抑制作用的试验条件优化 认领 被引量:2
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作者 王萍 蒋立虹 +4 位作者 李亚雄 陈智豫 孟明耀 邹弘麟 侯宗柳 《临床和实验医学杂志》 2007年第4期 27-29,共3页
目的探讨肝素酶和氯化锂在对抗肝素抑制逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)作用的试验条件优化及它们各自的优缺点。方法从随机采集20份人临床肝素抗凝全血中提取总RNA并经电泳鉴定后,每份RNA分为未处理组、肝素酶I在0、4U、0.5U即时,30... 目的探讨肝素酶和氯化锂在对抗肝素抑制逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)作用的试验条件优化及它们各自的优缺点。方法从随机采集20份人临床肝素抗凝全血中提取总RNA并经电泳鉴定后,每份RNA分为未处理组、肝素酶I在0、4U、0.5U即时,30min,60min几种条件下的处理组和氯化锂在-20℃下10min、60min,过夜几种条件下的处理组,再逆转录合成cDNA,分别行看家基因β-actin的PCR反应,经1%琼脂糖凝胶电泳观察和比较获得的目的片段。结果从肝素抗凝全血分别抽提的总RNA,经电泳鉴定完整性好,可以进行逆转录一聚合酶联反应。未经处理的RNA经看家基因β-actin的RT—PCR反应后,未能扩增到目的片段;在肝素酶I处理组中,仅肝素酶10、5U,并作用60min条件下能扩增出β-actin片段;在氯化锂处理组中,三种时间段作用下,均能扩增出β-actin片段,并且过夜条件下扩增获得的目的片段的量最多;经优化的试验条件的肝素酶Ⅰ和氯化锂作用RNA后,扩增得到的β-actin片段的量基本一致。结论获得肝素酶Ⅰ和氯化锂处理肝素抑制RT—PCR的试验优化条件,并比较了各自的优缺点,为临床相关试验提供一定帮助。 展开更多
关键词 肝素 肝素 氯化锂 逆转录-聚合酶反应
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荧光标记RT-PCR技术在实验动物死亡时间推断中的应用 认领 被引量:5
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作者 朱方成 任亮 +3 位作者 刘良 王树法 朱传红 朱少华 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第18期 1857-1859,共3页
目的探讨荧光标记逆转录一聚合酶联反应(RT—PCR)在死亡时间(PMI)推断中的应用。方法44只大鼠断颈处死后置于20℃温度控制系统内,利用荧光标记RT—PCR技术检测大鼠脑及肝组织GAPDH mRNA在死后即刻至8d的相对表达量的变化。结果在... 目的探讨荧光标记逆转录一聚合酶联反应(RT—PCR)在死亡时间(PMI)推断中的应用。方法44只大鼠断颈处死后置于20℃温度控制系统内,利用荧光标记RT—PCR技术检测大鼠脑及肝组织GAPDH mRNA在死后即刻至8d的相对表达量的变化。结果在大鼠死后即刻至7d脑组织、2d肝组织内均可检测到GAPDH mRNA,其扩增产物的降解呈现出一定的规律性。结论荧光RT—PCR技术检测大鼠死后脑及肝GAPDH mRNA,可为PMI推断提供一种新的方法。 展开更多
关键词 法医病理学 逆转录-聚合酶反应 荧光 3-磷酸甘油醛脱氢 死亡时间
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2019新型冠状病毒的核酸检测 认领 被引量:1
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作者 张永卓 王晶 +4 位作者 傅博强 黄翔 董莲华 牛春艳 杨佳怡 《计量学报》 CSCD 北大核心 2020年第4期393-398,共6页
2019冠状病毒病(COVID-19)疫情已成为国际关注的突发公共卫生事件。为应对突发病毒疫情事件,加快病毒检测并提高检测准确性变得非常重要。中华人民共和国国家卫生健康委员会《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》规定了核酸检测和基因测序作为... 2019冠状病毒病(COVID-19)疫情已成为国际关注的突发公共卫生事件。为应对突发病毒疫情事件,加快病毒检测并提高检测准确性变得非常重要。中华人民共和国国家卫生健康委员会《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》规定了核酸检测和基因测序作为确诊病例的方法,检测结果是对潜伏期人群、疑似病例人群和隔离期人群的新型冠状病毒(2019-nCoV/SARS-CoV-2)进行确诊的重要依据。对实时荧光RT-PCR检测、数字PCR检测及基因测序方法进行了综述,并对后续监控和生物安全测量(生物计量)标准体系的建立进行了展望。 展开更多
关键词 计量学 新型冠状病毒 核酸检测 实时荧光逆转录-聚合酶反应 数字聚合酶反应 基因测序
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乳腺癌中Nupr1蛋白及mRNA表达及临床意义 认领
7
作者 王维娜 赵春兰 +2 位作者 梁月勉 王晔兴 张文清 《医学研究与教育》 CAS 2020年第1期14-19,共6页
目的检测Nupr1蛋白及mRNA在乳腺癌中的表达,探讨其与乳腺癌的关系。方法选取手术切除的228例乳腺癌组织,以60例乳腺良性病变为对照组,用免疫组化法检测癌组织Nupr1蛋白的表达情况,用实时荧光定量PCR法检测组织中Nupr1 mRNA的表达,分析Nu... 目的检测Nupr1蛋白及mRNA在乳腺癌中的表达,探讨其与乳腺癌的关系。方法选取手术切除的228例乳腺癌组织,以60例乳腺良性病变为对照组,用免疫组化法检测癌组织Nupr1蛋白的表达情况,用实时荧光定量PCR法检测组织中Nupr1 mRNA的表达,分析Nupr1的表达与乳腺癌临床病理特征的关系。结果乳腺癌组织Nupr1蛋白及mRNA水平均显示高表达,二者增高趋势趋于一致,乳腺癌组织Nupr1高表达率均高于对照组;Nupr1高表达率与乳腺癌分期、分子分型相关(P<0.05),与月经状态、组织学类型、组织学分级及肿瘤大小无关(P>0.05)。结论Nupr1 mRNA在乳腺良性病变-乳腺癌前病变-乳腺癌中表达逐渐增高,推测此基因可能在乳腺癌发生及进展过程中起了重要作用;在mRNA水平及蛋白水平表达的一致性进一步说明了此基因在乳腺癌发生发展中起了重要作用;Nupr1高表达与预后不良有关,检测Nupr1的表达情况可作为乳腺癌预后判断的有用指标,并可为肿瘤靶向治疗提供新思路。 展开更多
关键词 乳腺癌 Nupr1 免疫组织化学 逆转录-聚合酶反应 预后
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多重RT-PCR在初发急性淋巴细胞白血病患儿中检测不同融合基因的诊断价值 认领
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作者 梁晓萍 孙静 +4 位作者 邵明明 武永红 李妮 韩文霞 王海东 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期842-848,共7页
目的:分析多重逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对初发急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿检测不同融合基因的诊断价值。方法:回顾性分析西安医学院第二附属医院2012年9月至2017年9月收治的80例ALL患儿的临床资料,对患儿进行免疫表型、染色体核型... 目的:分析多重逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对初发急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿检测不同融合基因的诊断价值。方法:回顾性分析西安医学院第二附属医院2012年9月至2017年9月收治的80例ALL患儿的临床资料,对患儿进行免疫表型、染色体核型及融合基因分析。结果:免疫表型结果显示,髓系+B系混合表达2例,早期B表达2例,前B表达58例,CD13合并前B表达11例,CD5合并前B表达4例,CD2合并前B表达3例。染色体核型分析结果显示,72例行染色体核型分析的患者,其中无法分析5例,染色体核型正常27例,异常11例,无分裂相29例。80例ALL患儿中,共有30例(37.50%)存在6种融合基因表达,分别为MLL/AF9、CBF/MYH 11、BCR/ABL、TLS/ERG、MLL/ENL及TEL/AML1。3例MLL/AF9融合基因表达[t(9;11)]患儿中2例早期治疗反应不良而经过加强化疗后获得完全缓解,1例行骨髓移植;1例CBF/MYH 11融合基因表达患儿家属放弃治疗;4例BCR/ABL融合基因表达[t(9;22)(q34;q11)]患儿均为早期治疗反应不良,经加强化疗后获得完全缓解,缓解期间复查该融合基因均为阳性,其中行骨髓移植2例;1例TLS/ERG融合基因表达[t(16;21)]患儿为早期治疗反应不良,经加强化疗后获得完全缓解;2例MLL/ENL融合基因表达[t(11;19)]患儿化疗过程中均复发;19例TEL/AML1融合基因表达[t(12;21)]患儿中获得完全缓解15例,部分缓解4例。结论:基因分型可弥补白血病常规分型-MICM分型的不足,通过多重RT-PCR方法可迅速测定ALL患儿染色体畸变所引起的融合基因。 展开更多
关键词 急性淋巴细胞白血病 逆转录-聚合酶反应 融合基因 儿童
呼吸道标本热灭活处理对SARS-CoV-2核酸检测结果的影响 认领
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作者 魏喜生 周萍 +5 位作者 刘才周 周伟 何强 杨彦麟 李俊峰 肖萍 《兰州大学学报:医学版》 CAS 2020年第2期106-108,共3页
新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019,COVID-19)的诊断依赖于流行病学史、临床表现和实验室检查,其中呼吸道标本的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测在实验室诊断中起重要作用[1—2]。由于标本的强传染性,对实验人员的安全防护... 新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019,COVID-19)的诊断依赖于流行病学史、临床表现和实验室检查,其中呼吸道标本的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测在实验室诊断中起重要作用[1—2]。由于标本的强传染性,对实验人员的安全防护造成较大挑战,可靠且不影响检测结果的标本病毒灭活方法,减少实验室感染显得非常重要。相关研究提示中东呼吸综合征冠状病毒56℃灭活大约25 min能明显降低病毒载量[3],将血样热灭活后血清学检测是一种常用的实验室方法,有研究提示[4—5]将血浆经56℃热灭活30 min后进行不同感染性抗体检测,结果不尽相同。因此,传染性标本的灭活处理对于检测结果的影响可能与病原种类及检测项目有关,目前基于对其他冠状病毒理化特性的研究,56°C加热30 min可有效灭活SARS-CoV-2病毒[6],但是该灭活方案对病毒核酸检测结果的影响还不清楚。本研究利用COVID-19确诊患者的痰液和咽拭子呼吸道标本,采用热灭活处理方法,检测分析不同靶点的核酸水平变化,主要目的是了解灭活呼吸道标本病毒的方法对病毒核酸检测结果的影响,为实验室病毒灭活处理后SARS-CoV-2核酸结果的变化提供证据支持。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 核酸 逆转录聚合酶反应 灭活
糖皮质激素受体α、β mRNA在婴幼儿喘息患儿中的表达及临床意义 认领
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作者 姚欢银 马兰 +4 位作者 董虹 童海明 王小仙 陈啸洪 刘淑梅 《中华全科医学》 2020年第2期258-261,共4页
目的研究婴幼儿喘息患儿外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)αmRNA和GRβmRNA表达水平的变化,为选择性应用糖皮质激素(glucocorticoid,GC)和早期干预提供实验依... 目的研究婴幼儿喘息患儿外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)αmRNA和GRβmRNA表达水平的变化,为选择性应用糖皮质激素(glucocorticoid,GC)和早期干预提供实验依据。方法选取2015年9月-2018年1月绍兴市人民医院儿内科住院的50例婴幼儿喘息(重症19例)和25例对照组进行研究。研究对象入院后次日晨空腹抽取静脉血2 mL,采用Ficoll密度梯度离心法分离PBMC,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PBMC中GRαmRNA和GRβmRNA表达量。结果婴幼儿喘息重度组GRαmRNA表达量显著高于对照组(中位数2.870×10^-2 vs. 0.266×10^-2,U=2.204,P=0.028),与轻度组(中位数0.865×10^-2)比较差异无统计学意义(U=0.650,P=0.516);重度组GRβmRNA表达量(中位数0.057×10^-2)显著高于轻度组和对照组(中位数0.003×10^-2、0.001×10^-2),差异有统计学意义(U=3.388,P<0.001;U=3.969,P<0.001);重度组GRα/β比值(中位数25.900×10^-2)显著低于轻度组和对照组(中位数780.800×10^-2,U=2.708,P=0.007;98.000×10^-2,U=2.192,P=0.028),恢复期GRα/β比值(中位数253.500×10^-2)较急性期(中位数51.100×10^-2)显著升高(U=2.084,P=0.037)。临床症状严重度评分与GRβmRNA之间存在显著正相关(r=0.762,P=0.029),与GRα/β比值之间存在显著负相关(r=-0.760,P=0.037)。结论重度婴幼儿喘息主要表现为GRβmRNA表达量增加,GRα/β比值降低。随着临床症状评分的升高,GRβmRNA表达量增加,GRα/β比值下降。 展开更多
关键词 婴幼儿喘息 糖皮质激素受体 外周血单个核细胞 逆转录-聚合酶反应
黄芪多糖和低浓度嗜水气单胞菌对中华绒螯蟹免疫相关因子基因表达的影响 认领
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作者 赵紫越 高彤 +1 位作者 袁春营 崔青曼 《饲料研究》 CAS 北大核心 2020年第3期41-44,共4页
采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法研究黄芪多糖和低浓度嗜水气单胞菌对中华绒螯蟹免疫相关因子基因表达的影响。结果表明:注射低浓度嗜水气单胞菌后,河蟹血细胞抗脂多糖因子(ALF)、热休克蛋白(HSP)、抗菌肽(Crus1)、脂肪酸结合蛋白... 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法研究黄芪多糖和低浓度嗜水气单胞菌对中华绒螯蟹免疫相关因子基因表达的影响。结果表明:注射低浓度嗜水气单胞菌后,河蟹血细胞抗脂多糖因子(ALF)、热休克蛋白(HSP)、抗菌肽(Crus1)、脂肪酸结合蛋白酶(EsFABP3)、JAK通路细胞受体因子(EsDOME)、JAK通路信号转导与转录激活因子(EsSTAT)、河蟹肝胰腺HSP、EsFABP3和EsSTAT及河蟹鳃组织HSP的基因表达水平显著上调(P<0.05),黄芪多糖能够显著提高河蟹血细胞中ALF、酚氧化酶(PO)、HSP、Crus1、Toll样受体基因(TLR)、EsFABP3、EsJAK、EsDOME、EsSTAT、河蟹肝胰腺中ALF、PO、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、HSP、TLR、EsFABP3、EsJAK、EsSTAT及河蟹鳃组织中ALF、GPX、HSP、Crus1、masquerade样蛋白(MasL)、TLR、EsJAK、EsDOME和EsSTAT的基因表达水平(P<0.05)。除了HSP和MasL外,注射黄芪多糖的河蟹免疫相关因子的基因表达水平普遍高于嗜水气单胞菌组河蟹。 展开更多
关键词 黄芪多糖 嗜水气单胞菌 中华绒螯蟹 免疫相关因子 逆转录-聚合酶反应
荧光定量RT-PCR快速检测乙型流感病毒核酸的价值分析 认领
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作者 王瑾 《中国现代药物应用》 2020年第17期54-56,共3页
目的分析用荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)快速检测乙型流感病毒核酸的临床价值。方法 104例乙型流感样患者作为研究对象,所有病例均采集咽拭子,均符合乙型流感的诊断标准。根据对乙型流感病毒检测方式的不同分为对照组和观察组... 目的分析用荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)快速检测乙型流感病毒核酸的临床价值。方法 104例乙型流感样患者作为研究对象,所有病例均采集咽拭子,均符合乙型流感的诊断标准。根据对乙型流感病毒检测方式的不同分为对照组和观察组,每组52例。对照组采用免疫学检测,观察组采用荧光定量RT-PCR检测。对比两组的检测敏感性,检测时间。结果观察组的检测敏感性为98.08%,高于对照组的82.69%,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组的检测时间为(11.2±2.1)min,短于对照组的(17.5±2.4)min,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论荧光定量RT-PCR检测乙型流感病毒核酸可以明显提高对乙型流感病毒的检测敏感性,且检测时间短于免疫学检测,值得临床大力推广。 展开更多
关键词 荧光定量逆转录-聚合酶链式反应 快速检测 乙型流感病毒 价值分析
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脊髓灰质炎病毒型内鉴定的方法评价 认领
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作者 唐海淑 凯赛尔·吾斯曼 +5 位作者 彭力吉 王琪 宁静 关静 沙吾拉西·热加甫 严冬梅 《中国疫苗和免疫》 北大核心 2020年第2期182-185,共4页
目的评价脊髓灰质炎病毒(Poliovirus,PV)型内鉴定(Intratypic differentiation,ITD)的实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Real-time reverse transcription-polymerase chain reaction,rRT-PCR)检测方法。方法对2013-2018年新疆环境污水... 目的评价脊髓灰质炎病毒(Poliovirus,PV)型内鉴定(Intratypic differentiation,ITD)的实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Real-time reverse transcription-polymerase chain reaction,rRT-PCR)检测方法。方法对2013-2018年新疆环境污水中PV分离株,采用rRT-PCR方法进行PV ITD检测,分析5种版本rRT-PCR的疫苗衍生脊灰病毒(Vaccine derived poliovirus,VDPV)筛查假阳性率。结果 2013-2018年共分离到PV 1 792株,经rRT-PCR进行PV ITD检测,其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型PV分别为490株、372株、930株。从3.0版到5.0版rRT-PCR,PV ITD检测时间从160min缩短至137min,Ⅰ型、Ⅲ型VDPV筛查假阳性率分别从55.9%、41.1%降低至0.0%、0.2%;各版本rRT-PCR的Ⅱ型VDPV筛查假阳性率在44.0%-62.1%之间。结论 rRT-PCR方法的不断优化提高了PV ITD的检测准确性和及时性。 展开更多
关键词 脊髓灰质炎病毒 型内鉴定 实时荧光定量逆转录-聚合酶反应
氧化石墨烯检测手足口病病原体的可行性探讨 认领
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作者 王晓琴 《检验医学与临床》 CAS 2019年第12期1726-1729,共4页
目的 通过氧化石墨烯(GO)检测体系和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对手足口病两种常见病毒CA16和EV71进行检测,探讨GO检测体系对病毒的快速检测在临床运用中的可行性。方法 采集确诊为手足口病患儿的粪便拭子、咽拭子和疱疹液标本共228... 目的 通过氧化石墨烯(GO)检测体系和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对手足口病两种常见病毒CA16和EV71进行检测,探讨GO检测体系对病毒的快速检测在临床运用中的可行性。方法 采集确诊为手足口病患儿的粪便拭子、咽拭子和疱疹液标本共228例,运用GO检测体系和RT-PCR法对标本中的CA16和EV71进行检测。结果 RT-PCR检测结果显示,3种标本病原体阳性检出率比较,差异无统计学意义(χ^2=4.56, P >0.05)。GO检测结果显示,3种标本病原体阳性检出率比较,差异无统计学意义(χ^2=3.08, P >0.05)。对于两种检测方法检测结果不同的标本,经基因测序后,排除了假阳性和假阴性,证明了GO检测体系的可行性。结论 GO检测法具有高灵敏度和DNA特异性结合的特点,有望成为实现简便、快速、准确、经济的病毒检测法且可以运用到临床中对CA16和EV71两种病毒进行检测。 展开更多
关键词 氧化石墨烯 逆转录-聚合酶反应 手足口病
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WT1基因在骨髓增生异常综合征患者外同血中的表达及临床意义 认领
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作者 聂泽强 李晓云 +2 位作者 马爻芳 方敏 鲍杰 《陕西医学杂志》 CAS 2019年第8期977-980,共4页
目的:探讨WT1基因在骨髓增生异常综合征(MDS)患者中的表达情况及WT1基因与MDS发病及病情进展的关系。方法:采用逆转录-聚合酶链反应检测48例MDS患者,4例MDS-AL患者和10例正常人外周血中WT1基因的表达,并进行分析。结果:①4例MDS-AL患者... 目的:探讨WT1基因在骨髓增生异常综合征(MDS)患者中的表达情况及WT1基因与MDS发病及病情进展的关系。方法:采用逆转录-聚合酶链反应检测48例MDS患者,4例MDS-AL患者和10例正常人外周血中WT1基因的表达,并进行分析。结果:①4例MDS-AL患者的WT1阳性率100%,10例正常人的WT1阳性率0%,48例MDS患者WT1阳性率为27.1%。MDS组、MDS-AL组、对照组两两相比有统计学差异(P<0.05)。②将MDS按IPSS分组,WT1mRNA的表达水平在高危与中危及低危组之间差异均有统计学意义(P<0.05),中危与低危组、中危Ⅰ组与中危Ⅱ组之间无统计学差异(P>0.05)。WT1基因表达水平与IPSS评分值有相关性(r=0.74,P<0.05)。③WT1基因表达水平与原始细胞百分数密切相关(r=0.66,P<0.05)。④动态随访2例MDS患者,随着疾病进展,WT1的表达水平逐渐升高。结论:WT1基因在各类型MDS均高表达。WT1基因的表达与疾病的进展呈正相关,WT1基因表达情况与原始细胞百分比及IPSS评分均有明显相关性。其可作为临床上对MDS病情的高危评估,预测病情变化和动态监测治疗效果及判断预后的重要指标之一。 展开更多
关键词 骨髓增生异常综合征 急性白血病 国际预后评分系统 WT1基因 逆转录-聚合酶反应 相关性
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SOX12、CDK4在肝细胞中的表达及意义 认领
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作者 周鹏 孙玉岭 《河南医学研究》 CAS 2019年第11期1921-1923,共3页
目的观察SOX12、CDK4在肝癌细胞(HepG2)与正常肝细胞(HB611)中的表达情况,分析SOX12与肝细胞癌的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HepG2、HB611细胞中SOX12 mRNA、CDK4 mRNA的表达水平,采用Western blot法检测HepG2、HB... 目的观察SOX12、CDK4在肝癌细胞(HepG2)与正常肝细胞(HB611)中的表达情况,分析SOX12与肝细胞癌的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HepG2、HB611细胞中SOX12 mRNA、CDK4 mRNA的表达水平,采用Western blot法检测HepG2、HB611细胞中SOX12蛋白、CDK4蛋白的表达水平,采用基因抑制剂shRNA抑制两种细胞中的SOX12基因,采用RT-PCR法检测两种细胞中SOX12 mRNA与CDK4 mRNA的表达情况,分析SOX12与肝细胞癌的关系。结果 SOX12 mRNA在HepG2细胞中表达水平高于HB611细胞,CDK4 mRNA在HepG2细胞中表达水平低于HB611细胞,差异有统计学意义(均P<0.05)。两种细胞中SOX12蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),CDK4蛋白在HB611细胞中的表达水平高于HepG2细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。抑制SOX12基因后,两种细胞SOX12 mRNA的表达水平较抑制前降低,CDK4 mRNA表达水平也较抑制前降低,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论 SOX12与CDK4在HepG2、HB611细胞中均有表达,在两种细胞中SOX12 mRNA、CDK4 mRNA的表达水平存在差异,SOX12蛋白表达水平相近,CDK4蛋白表达水平存在差异。SOX12可能通过影响CDK4的表达参与肝细胞癌的发展进程,可能成为治疗与预测肝细胞癌预后新的标志物。 展开更多
关键词 SOX12 CDK4 肝细胞癌 逆转录-聚合酶反应
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结核感染患者外周血中性粒细胞自噬水平的研究 认领
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作者 杜金艳 王燕 +4 位作者 张燕 陈敏 邓少丽 陈鸣 唱凯 《国际检验医学杂志》 CAS 2019年第3期334-337,共4页
目的 探讨结核感染患者外周血中性粒细胞自噬水平。方法 根据结核病诊断标准,将患者分为健康对照组(16例)和活动性结核组(24例),收集患者外周血,采用流式细胞技术分别检测健康对照组和活动性结核组中性粒细胞和单个核细胞的自噬状态。... 目的 探讨结核感染患者外周血中性粒细胞自噬水平。方法 根据结核病诊断标准,将患者分为健康对照组(16例)和活动性结核组(24例),收集患者外周血,采用流式细胞技术分别检测健康对照组和活动性结核组中性粒细胞和单个核细胞的自噬状态。分离外周血中性粒细胞,采用Trizol法提取总RNA,经逆转录实时荧光定量PCR,利用2^-△△Ct计算Beclin1表达的相对定量。结果 活动性结核组与健康对照组年龄差异无统计学意义(P=0.165 5,P>0.05);活动性结核组男性比例(79.2%)明显高于健康对照组(37.5%)。活动性结核组中性粒细胞自噬水平显著低于健康对照组(P=0.013 8,P<0.05),而单个核细胞两组差异无统计学意义(P=0.784 2,P>0.05);活动性结核组中性粒细胞Beclin1△Ct=-1.254±0.40明显低于健康对照组△Ct=-0.105±0.48,差异有统计学意义(P<0.001)。结论 结核感染患者外周血中性粒细胞的自噬水平降低,且自噬相关基因Beclin1 mRNA的表达下调,中性粒细胞的自噬水平可能与结核病的发生、发展密切相关。 展开更多
关键词 结核病 中性粒细胞 自噬水平 BECLIN1 逆转录-聚合酶反应
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WT1基因在真性红细胞增多症中的表达及临床意义 认领
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作者 陈汉宸 李晓云 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 2019年第1期84-86,共3页
目的探讨WT1基因在真性红细胞增多症中的表达及临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应方法检测30例真性红细胞增多症患者,10例正常人外周血的WT1基因表达,并同时记录这30例真性红细胞增多症患者的JAK2基因情况。结果10例正常人未检测到... 目的探讨WT1基因在真性红细胞增多症中的表达及临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应方法检测30例真性红细胞增多症患者,10例正常人外周血的WT1基因表达,并同时记录这30例真性红细胞增多症患者的JAK2基因情况。结果10例正常人未检测到WT1基因的表达,30例真性红细胞增多症患者中有11例阳性(36.67%)。根据血红蛋白值分期,Ⅰ期未测到WT1mRNA的表达,Ⅱ期阳性率36.36%,Ⅲ期阳性率63.64%,对WT1基因的相对量分析发现:从Ⅰ~Ⅲ期WT1mRNA的表达水平逐渐增加,经统计学分析各期间均有差异,JAK2基因阳性率在3个分期中逐渐增加,经t检验每两组间比较均有统计学意义。结论WT1基因相对表达量与JAK2基因阳性率与分期进展有关。RT-PCR检测WT1基因的表达可作为真性红细胞增多症的一个风险评估指标。 展开更多
关键词 真性红细胞增多症 WT1基因 逆转录-聚合酶反应 JAK2基因
乙型流感病毒疫苗株全基因组序列测定及其在疫苗质量控制中的应用 认领 被引量:1
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作者 刘书珍 权娅茹 +2 位作者 邵铭 李长贵 袁力勇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第4期369-374,385共7页
目的建立乙型流感疫苗生产用毒株全基因组序列测定方法,将其应用于2013~2017年流感季节乙型流感疫苗生产用毒株的质量控制,为全面监测流感疫苗质量提供依据。方法利用通用引物对不同企业的乙型流感疫苗工作种子批进行一步法RT-PCR,以获... 目的建立乙型流感疫苗生产用毒株全基因组序列测定方法,将其应用于2013~2017年流感季节乙型流感疫苗生产用毒株的质量控制,为全面监测流感疫苗质量提供依据。方法利用通用引物对不同企业的乙型流感疫苗工作种子批进行一步法RT-PCR,以获得乙型流感病毒全基因组,DNA序列测定后,采用Clustal软件进行比对,在GISAID数据库中进行同源序列分析。结果不同企业间的Yamagata谱系工作种子批毒株序列一致,其中HA和NA基因均来源于B/Massachusetts/02/2012,PB2等其他内部基因来源不同;Victoria谱系工作种子批毒株的HA和NA基因与B/Brisbane/60/2008一致,但PB2等基因不同企业间存在差异。结论建立的一步法RT-PCR可用于乙型流感疫苗生产用毒株全基因组序列分析,可从源头保证流感疫苗的安全性、有效性以及疫苗质量的一致性。 展开更多
关键词 乙型流感疫苗 逆转录-聚合酶反应 全基因组序列 质量控制
1例临床非典型狂犬病患儿的发现和病原特征分析 认领
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作者 李幸乐 朱春华 +3 位作者 李东晓 刘灵芝 贺志权 黄学勇 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2019年第2期148-151,共4页
目的调查分析1例狂犬病患儿的临床特征、疫情资料和病原学特征,为狂犬病防控提供数据支持。方法收集患儿临床资料,开展流行病学调查;采用逆转录-聚合酶链反应和荧光定量逆转录-聚合酶链反应检测狂犬病病毒核酸。结果患儿发病全程无典型... 目的调查分析1例狂犬病患儿的临床特征、疫情资料和病原学特征,为狂犬病防控提供数据支持。方法收集患儿临床资料,开展流行病学调查;采用逆转录-聚合酶链反应和荧光定量逆转录-聚合酶链反应检测狂犬病病毒核酸。结果患儿发病全程无典型狂犬病临床表现,家属否认患儿近期有动物致伤史。患儿临床以发热、呕吐、腹泻为早期症状,后期陷入昏迷直至死亡。患儿发病前1个月有鼻部外伤史,同期家中有1只犬病死。患儿唾液样本经荧光定量逆转录-聚合酶链反应检测狂犬病病毒核酸结果为阳性,经逆转录-聚合酶链反应检测获得狂犬病病毒糖蛋白、核蛋白基因预期扩增片段,糖蛋白基因序列比对分析显示致病病毒株与河南省狂犬病病毒流行株核苷酸同源性为96.5%~98.8%,氨基酸同源性为96.5%~99.2%。结论患儿经实验室诊断确诊为狂犬病病例,致病狂犬病病毒为河南省固有流行株。鼻部外伤史、病死犬可能与患儿感染存在某种关联。 展开更多
关键词 狂犬病 狂犬病病毒 逆转录-聚合酶反应 系统进化分析
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