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Annexin A2原核表达载体的构建及表达纯化 预览
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作者 王德利 杨华 +1 位作者 汤海峰 王宇石 《中国实验诊断学》 2019年第6期1067-1070,共4页
在真核生物中,存在一类由钙离子介导的的膜磷脂结合蛋白——膜联蛋白Annexin家族,酵母和原核生物中未发现存在。Annexin最早是在劳什肉瘤病毒转化的鸡胚细胞中发现的。已发现的Annexin家族成员归为五类:A类为脊椎动物膜联蛋白;无脊椎动... 在真核生物中,存在一类由钙离子介导的的膜磷脂结合蛋白——膜联蛋白Annexin家族,酵母和原核生物中未发现存在。Annexin最早是在劳什肉瘤病毒转化的鸡胚细胞中发现的。已发现的Annexin家族成员归为五类:A类为脊椎动物膜联蛋白;无脊椎动物膜联蛋白属于B类;真菌和部分单细胞真核生物被归为C类;D类为植物膜联蛋白;原核生物的膜联蛋白家族属于E类;另外还有40余种膜联蛋白仍待归类[1]。 展开更多
关键词 原核表达载体 目的基因 家族成员 ANNEXIN A2 质粒载体 大肠杆菌菌株 双酶切 膜联蛋白 重组子 GST 重组质粒
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pRP[Exp]-AATF重组质粒构建及其在系膜细胞中的表达 预览
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作者 顾欣雨 陈俊宇 +2 位作者 鱼敏逸 张爱青 甘卫华 《海南医学》 CAS 2019年第8期953-956,共4页
目的构建抗凋亡转录因子(AATF)真核表达质粒,检测其在系膜细胞中的表达,为进一步研究奠定实验基础。方法采用PCR技术,从大鼠的肾小球系膜细胞总RNA中扩增AATF基因编码序列片段,并克隆到pRP[Exp]质粒载体中,之后对重组质粒进行酶切和测序... 目的构建抗凋亡转录因子(AATF)真核表达质粒,检测其在系膜细胞中的表达,为进一步研究奠定实验基础。方法采用PCR技术,从大鼠的肾小球系膜细胞总RNA中扩增AATF基因编码序列片段,并克隆到pRP[Exp]质粒载体中,之后对重组质粒进行酶切和测序,通过脂质转染法将细胞转染到大鼠系膜细胞中,以未转染的系膜细胞为空白对照组,转染后的为实验组,Westernblot检测AATF所编码蛋白的表达水平。结果PCR扩增产物AATF片段约1600bp,与理论相符;构建所得pRP[Exp]-AATF重组质粒,经双酶切琼脂糖凝胶电泳后得到约1600bp的条带,与预期结果相符;测序结果与GenBank中的大鼠AATF基因序列比对,同源性相符。经RT-qPCR证明,以未转染的系膜细胞中AATF表达水平为标准(1.00±0.00),转染后的实验组中AATF的相对表达量达(12.03±1.87),显著提高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建pRP[Exp]-AATF重组质粒,并能在肾小球系膜细胞中正常表达,为后续研究AATF基因的生物学功能、疾病治疗和临床应用奠定了实验基础。 展开更多
关键词 大鼠 肾小球系膜细胞 抗凋亡转录因子 死亡相关蛋白样激酶 分子克隆技术 质粒载体 重组质粒
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肿瘤标记蛋白Prdx1-pMSCV质粒的构建和鉴定 预览
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作者 刘祎婷 张艳 +3 位作者 黄菊 于海静 刘明 万舰 《国际检验医学杂志》 CAS 2018年第15期1907-1910,共4页
目的构建含有过氧化物氧化还原酶1(Prdx1)基因的pMSCV重组质粒,转染至人气道上皮细胞内,并进行鉴定,为进一步研究Prdx1在细胞内的功能奠定基础。方法构建Prdx1-pMSCV质粒,将Prdx1mRNA编码区序列克隆至pMSCV载体上,测序验证后大量提取... 目的构建含有过氧化物氧化还原酶1(Prdx1)基因的pMSCV重组质粒,转染至人气道上皮细胞内,并进行鉴定,为进一步研究Prdx1在细胞内的功能奠定基础。方法构建Prdx1-pMSCV质粒,将Prdx1mRNA编码区序列克隆至pMSCV载体上,测序验证后大量提取,转染至BEAS-2B细胞内,细胞内可高表达Prdx1蛋白,收集总mRNA和蛋白裂解液分别进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Prdx1-mRNA和蛋白质印迹(Western blot)检测Prdx1蛋白变化。观察质粒转染后细胞内Prdx1高表达。结果重组质粒经限制性内切酶EcoRⅠ和BglⅡ双酶切及测序鉴定均证实Prdx1基因已正确克隆到pMSCV质粒载体中。Western blot结果进一步证实Prdx1-pMSCV重组质粒构建正确。结论本研究正确构建了Prdx1-pMSCV质粒。 展开更多
关键词 Prdx1 质粒载体 转染
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质粒载体介导的短发夹RNA对RPE细胞转染效率及毒性研究
4
作者 蔡春梅 范思均 +2 位作者 梁歌 姜严明 冯婧 《解剖科学进展》 2018年第6期614-617,共4页
目的连接针对人血管内皮生长因子(VEGF)设计的短发夹RNA与质粒载体,并转染视网膜色素上皮(RPE)细胞,观察其转染效率及对细胞的毒性。方法设计针对人VEGF的短发夹RNA(shRNAs,V1,V2),V3为阴性对照即不含特异性shRNA,其表达载体为pGCSilenc... 目的连接针对人血管内皮生长因子(VEGF)设计的短发夹RNA与质粒载体,并转染视网膜色素上皮(RPE)细胞,观察其转染效率及对细胞的毒性。方法设计针对人VEGF的短发夹RNA(shRNAs,V1,V2),V3为阴性对照即不含特异性shRNA,其表达载体为pGCSilencer^TM/U6/Neo/GFP/VEGF RNAi。用Lipofectamine^TM 2000转染RPE细胞,用倒置荧光显微镜及流式细胞仪观察其转染效率;用MTT法观察其对细胞的毒性。结果质粒载体介导的GFP在细胞中的表达呈黄绿色,弥漫于整个胞浆和胞核,转染后24h GFP开始表达,转染后48h表达明显增强。流式细胞仪检测质粒pGCSilencer^TM/U6/Neo/GFP/VEGF RNAi对体外培养的RPE细胞转染效率为43.9%,质粒转染后MTT法测定细胞活性的OD值与对照组相比明显降低(P=0.004)。结论质粒pGCSilencerTM/U6/Neo/GFP/VEGF RNAi可以有效地转染体外培养的RPE细胞,但质粒转染对细胞有明显的毒性。 展开更多
关键词 质粒载体 视网膜色素上皮细胞(RPE) 细胞毒性
衣原体主要实验技术研究进展 预览 被引量:1
5
作者 李育萌 吴移谋 《微生物学免疫学进展》 2017年第3期71-74,共4页
衣原体(chlamydia)是人类重要的致病菌之一,不同衣原体感染会引起多种人类疾病。因此,衣原体研究正逐步受到广泛的关注。依据近年来国内外衣原体的研究进展,概述了荧光下等位基因交换突变(fluorescence-reported allelic exchange mu... 衣原体(chlamydia)是人类重要的致病菌之一,不同衣原体感染会引起多种人类疾病。因此,衣原体研究正逐步受到广泛的关注。依据近年来国内外衣原体的研究进展,概述了荧光下等位基因交换突变(fluorescence-reported allelic exchange mutagenesis,FRAEM)技术、分离纯化衣原体的空斑技术、质粒载体的构建及转化技术、蛋白质谱技术在衣原体研究中的应用进展。 展开更多
关键词 衣原体 荧光下等位基因交换突变 空斑试验 质粒载体 蛋白质谱
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2016年高考生物试题评析及教学建议 预览
6
《新课程教学(电子版)》 2016年第8期11-14,共4页
2016年生物高考已落下帷幕,全国及各省、市一共命制了10套生物试卷,虽然各地高考试卷结构有所差异,题型也不尽相同,但是也有一些共性特征.比如,符合课改精神,合乎新课程理念,紧扣《2016年高考考试大纲及考试说明》,具有较高的信度、效度... 2016年生物高考已落下帷幕,全国及各省、市一共命制了10套生物试卷,虽然各地高考试卷结构有所差异,题型也不尽相同,但是也有一些共性特征.比如,符合课改精神,合乎新课程理念,紧扣《2016年高考考试大纲及考试说明》,具有较高的信度、效度,有较高的区分度及适当的难度,守正出新、稳步求进.具体表现在:第一,创设必要的背景信息,重视获取新知识和处理信息能力的考查;第二,渗透科学探究的方法,重视思维能力的考查; 展开更多
关键词 教学建议 效度 考试大纲 课改精神 利马豆 命题者 求进 考试说明 判断推理 质粒载体
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pHBAd-MCMV-GFP-NCAM1真核表达质粒的构建和鉴定 被引量:1
7
作者 李永明 陈立强 +3 位作者 张东东 赵勇 李晓涛 李艳君 《解剖学研究》 CAS 2015年第1期22-25,共4页
目的将目的基因NCAM1与质粒载体p HBAd-MCMV-GFP进行连接,得到重组质粒p HBAd-MCMV-GFPNCAM1。方法对目的基因和质粒载体分别用内切酶Not I和Nsil进行双酶切,产物回收后进行连接、转化,得到重组质粒p HBAd-MCMV-GFP-NCAM1。转化后的菌... 目的将目的基因NCAM1与质粒载体p HBAd-MCMV-GFP进行连接,得到重组质粒p HBAd-MCMV-GFPNCAM1。方法对目的基因和质粒载体分别用内切酶Not I和Nsil进行双酶切,产物回收后进行连接、转化,得到重组质粒p HBAd-MCMV-GFP-NCAM1。转化后的菌液进行PCR阳性克隆鉴定,并对阳性样本进行测序。结果首先对NCAM1进行扩增,从实验结果看符合预期效果,在双酶切、连接和转化实验后,对构建完成的重组质粒进行鉴定,PCR阳性克隆鉴定结果显示重组质粒构建成功,NCAM1已连接进入重组质粒中,测序的结果进一步印证阳性鉴定结果。结论带有目的基因NCAM1的重组质粒构建成功。 展开更多
关键词 神经细胞黏附分子1 质粒载体 重组质粒
大鼠CB1基因真核表达载体的构建及初步鉴定 被引量:1
8
作者 刘佳 李晶 +4 位作者 严磊 赵婷婷 王慧娟 赖国旗 龙明 《中国药房》 CAS 北大核心 2015年第16期2184-2187,共4页
目的:构建大鼠I型大麻素受体(cm)真核基因表达载体,并检测其在细胞中的表达情况。方法:从大鼠海马组织中提取总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出CB1基因片段,产物连接到pMD18-T载体上。阳性实验筛选出阳性克隆,经EcoRI... 目的:构建大鼠I型大麻素受体(cm)真核基因表达载体,并检测其在细胞中的表达情况。方法:从大鼠海马组织中提取总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出CB1基因片段,产物连接到pMD18-T载体上。阳性实验筛选出阳性克隆,经EcoRI、BamH I双酶切及测序鉴定后,将其连接到载体pcDNA3.1(+)中,构建质粒载体pcDNA3.1(+)-CB1,脂质体转染原代人胚肾293细胞(HEK293细胞)。用Westernblot实验鉴定细胞中CBl蛋白的表达,用免疫荧光细胞染色联合激光扫描共聚焦法检测其在细胞中表达的部位。结果:采用RT-PCR成功获得大鼠CB1基因,PCR扩增得到l500bp左右的CB1基因片段.双酶切鉴定及DNA测序证实质粒载体pcDNA3.1(+)-CB1构建成功。Westernblot实验、免疫荧光细胞染色联合激光扫描共聚焦法证实载体pcDNA3.1(+)-CB1能在HEK293细胞中表达,且表达产物主要分布在细胞膜表面和细胞质中。结论:构建的pcDNA3.1(+)-CB1表达载体能成功转入真核HEK293细胞,并在细胞膜表面和细胞质中表达CB1蛋白。 展开更多
关键词 I型大麻素受体 逆转录.聚合酶链反应 质粒载体
枯草芽孢杆菌转基因研究进展 预览 被引量:1
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作者 武彩霞 王静 刘开扬 《河北北方学院学报:自然科学版》 2015年第5期105-111,共7页
随着基因工程和分子生物学的飞速发展,在转基因微生物领域里,枯草芽孢杆菌表达系统已经成为一种继大肠杆菌表达系统和酵母表达系统之后的新型表达系统,为外源基因提供了良好的宿主环境,使外源基因可以进行表达,目前已经取得了较显著的... 随着基因工程和分子生物学的飞速发展,在转基因微生物领域里,枯草芽孢杆菌表达系统已经成为一种继大肠杆菌表达系统和酵母表达系统之后的新型表达系统,为外源基因提供了良好的宿主环境,使外源基因可以进行表达,目前已经取得了较显著的成绩。该文阐述了枯草芽孢杆菌转基因研究中质粒载体的构建、转化方法、菌株全基因序列及外源基因在枯草芽孢杆菌中的表达等方面的进展。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 质粒载体 外源基因 表达
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基因疗法为患者改良病毒
10
作者 米文 《科学大观园》 2015年第2期44-45,共2页
<正>据国外媒体报道,所谓基因疗法,就是利用正常基因填补或替代基因疾病中某些病变或缺失的基因的治疗方法。近年来,英国牛津和美国费城的一些研究人员宣布,他们对因患有罕见基因疾病而影响视力的病人们进行了治疗,成功使他们的... <正>据国外媒体报道,所谓基因疗法,就是利用正常基因填补或替代基因疾病中某些病变或缺失的基因的治疗方法。近年来,英国牛津和美国费城的一些研究人员宣布,他们对因患有罕见基因疾病而影响视力的病人们进行了治疗,成功使他们的视力获得改善。意大利的科学家们也宣布,他们使患有另外两种基因疾病的病人病情得到了减轻。这些研究结果以及web of Science网站上记录的引文统计,都着眼于基因疗法中的一个类别——而它从诞生伊始,就可谓是备受阻挠。 展开更多
关键词 基因疗法 基因疾病 美国费城 先天性黑蒙 里奇 基因替换 脑白质病变 科学大观园 麦奎尔 质粒载体
RNA干扰端粒酶反转录酶基因慢病毒表达载体的构建及鉴定 预览 被引量:7
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作者 宋扬 徐韬 +3 位作者 杨明坤 王国旗 张恩丰 盛伟斌 《中国组织工程研究》 CSCD 2014年第11期1724-1729,共6页
背景:端粒酶反转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)对端粒酶活化起重要作用,但利用构建针对其基因的慢病毒抑制其在脊髓星形胶质细胞中的表达却少有报道。目的:构建用于RNA干扰的靶向大鼠脊髓源星形胶质细胞端粒酶反... 背景:端粒酶反转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)对端粒酶活化起重要作用,但利用构建针对其基因的慢病毒抑制其在脊髓星形胶质细胞中的表达却少有报道。目的:构建用于RNA干扰的靶向大鼠脊髓源星形胶质细胞端粒酶反转录酶基因的慢病毒载体,并观察其对端粒酶反转录酶表达的抑制作用。方法:通过设计合成出shRNA-TERT序列,经聚合酶链反应扩增后定向连接到pLentilox3.7U6载体上构建重组质粒,经转染DH5α细胞筛选阳性菌落后行测序鉴定。将pLentilox3.7U6-TERT重组质粒转染293T细胞,包装产生重组慢病毒Le-TERT并测定其滴度,再用Le-TERT感染大鼠脊髓星形胶质细胞,实时定量-聚合酶链反应检测各细胞株TERT基因表达水平,并利用Western blot和免疫荧光分别检测TERT蛋白的表达。结果与结论:基因测序鉴定证明,pLentilox3.7U6-TERT 重组质粒构建成功,并成功包装慢病毒。实时定量PCR、Western blot和免疫荧光检测结果表明,Le-TERT转染星形胶质细胞4 d后,对TERT mRNA的干扰效率可达(63.98±177;2.6)%,Le-TERT在转然后的星形胶质细胞中呈低表达。结果证实,实验构建的重组表达载体pLentilox3.7U6-TERT能够产生有效滴度的慢病毒,感染大鼠脊髓星形胶质细胞后,该载体可以有效抑制TERT的表达。 展开更多
关键词 组织构建 组织工程 组织构建基础实验 RNA干扰 端粒酶 端粒酶反转录酶 质粒载体 慢病毒 星形胶质细胞 短发夹RNA 脊髓损伤 胶质瘢痕 国家自然科学基金
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靶向端粒酶反转录酶基因短发夹RNA载体的构建 预览 被引量:2
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作者 宋扬 徐韬 +1 位作者 杨明坤 盛伟斌 《中国组织工程研究》 CSCD 2014年第7期1057-1062,共6页
背景:端粒酶反转录酶对端粒酶活化起重要作用。 目的:利用pLentilox3.7.U6载体构建靶向大鼠脊髓星形胶质细胞端粒酶反转录酶基因的短发夹RNA干扰分子表达载体并鉴定其作用。 方法:选择端粒酶反转录酶基因上两段序列体外合成RNA干... 背景:端粒酶反转录酶对端粒酶活化起重要作用。 目的:利用pLentilox3.7.U6载体构建靶向大鼠脊髓星形胶质细胞端粒酶反转录酶基因的短发夹RNA干扰分子表达载体并鉴定其作用。 方法:选择端粒酶反转录酶基因上两段序列体外合成RNA干扰分子的正义链和反义链模板序列,经退火成互补双链,与线性化pLentilox3.7.U6载体连接、转化大肠杆菌和序列测定,应用蛋白质印迹和免疫荧光技术,在体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞模型上验证构建的干扰载体抑制端粒酶反转录酶基因表达的效果。 结果与结论:蛋白质印迹和免疫荧光检测结果表明,重组质粒干扰组中星形胶质细胞端粒酶反转录酶均呈低表达。结果证实,实验成功构建了针对大鼠脊髓星形胶质细胞端粒酶反转录酶基因的短发夹RNA质粒表达载体,此载体能有效抑制体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞端粒酶反转录酶的表达。 展开更多
关键词 组织构建 组织工程 RNA干扰 端粒酶 端粒酶反转录酶 质粒载体 星形胶质细胞 短发夹RNA 脊髓损伤 胶质瘢痕 国家自然科学基金
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PRRSV的分子结构及其感染性克隆的构建 预览
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作者 袁东波 尹念春 《中国畜禽种业》 2014年第10期115-116,共2页
猪繁殖与呼吸综合症(PRRS)俗称"猪蓝耳病",是由猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)引起的一种以成年母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为主要特征的高度接触性传染病。临床主要表现为怀孕母猪流产、早产、死胎和木乃伊胎等严重的繁殖障碍... 猪繁殖与呼吸综合症(PRRS)俗称"猪蓝耳病",是由猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)引起的一种以成年母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为主要特征的高度接触性传染病。临床主要表现为怀孕母猪流产、早产、死胎和木乃伊胎等严重的繁殖障碍以及仔猪的呼吸系统症状和断奶前死亡率增高,育成猪呼吸困难,发育迟缓等。 展开更多
关键词 感染性克隆 繁殖障碍 成年母猪 接触性传染病 育成猪 蓝耳病 病毒基因组 呼吸道疾病 质粒载体 分子特征
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携带白细胞介素2和NK4双基因真核共表达质粒的构建及活性观察
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作者 哈小琴 张尚弟 +6 位作者 邓芝云 董菊子 赵勇 彭俊华 张媛媛 林静 王鲲 《中国医药》 2014年第2期230-235,共6页
目的 构建同时携带白细胞介素2(IL-2)和NK4基因的真核表达载体(pIRES-IL-2-IRES-NK4),观察其在防治肿瘤中的潜在应用前景.方法 根据Pubmed上公布的IL-2及NK4 mRNA序列,设计扩增IL-2及NK4 cDNA的特异性引物,以PBV220-IL-2质粒和PCAGG... 目的 构建同时携带白细胞介素2(IL-2)和NK4基因的真核表达载体(pIRES-IL-2-IRES-NK4),观察其在防治肿瘤中的潜在应用前景.方法 根据Pubmed上公布的IL-2及NK4 mRNA序列,设计扩增IL-2及NK4 cDNA的特异性引物,以PBV220-IL-2质粒和PCAGGS/hNK4质粒为模板,分别扩增IL-2及NK4基因,并将IL-2及NK4基因分别克隆在真核表达载体pIRES-SEQ的XhoI、MLuI位点和SalI、NotⅠ位点.获得同时携带IL-2和NK4基因的重组真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4.该重组质粒转染肝癌细胞HepG2后,检测目的基因的转染表达及表达产物对HepG2细胞增殖的影响.结果 通过对构建质粒克隆进行测序及酶切,证实携带IL-2和NK4双基因的真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4构建成功.用pIRES-IL-2-IRES-NK4转染HepG2细胞后24 h后在荧光显微镜下可观察到细胞有较强的绿色荧光表达,48 h时荧光更强;逆转录聚合酶链反应结果表明转染pIRES-IL-2-IRES-NK4质粒细胞的IL-2及NK4基因表达明显增强.酶联免疫吸附测定检测结果表明,转染组细胞较对照组细胞培养上清中IL-2及NK4蛋白表达水平明显增强.转染组48 h后的IL-2、NK4蛋白表达水平为2.139、1.956 mg/L,明显高于未转染组的0.492、0.620 mg/L.四甲基偶氮唑盐法结果表明转染真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4的细胞表达上清,有明显抑制肝癌细胞HepG2增殖的活性,且有剂量效应关系.结论 本研究成功构建了同时携带IL-2和NK4基因的重组真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4,该质粒可有效转染肝癌细胞,且转染细胞表达上清有明显抑制肝癌细胞HepG2增殖的活性,提示该重组质粒有潜在防治肿瘤的应用前景. 展开更多
关键词 白细胞介素2 NK4基因 质粒载体 构建 活性 INTERLEUKIN-2
Construction of plasmid vector pAFP-HSVtk-IRES2-EGFP and its effect on the cytotoxicity of ganciclovir to hepatocellular carcinoma
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作者 Lai Zhiyong Qin Qin +6 位作者 Yu Baofeng Xie Jun Gao Ranpeng Zhang Tiantian Li Chunfeng Niu Kai Xu Jun 《中华医学杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2014年第12期2337-2341,共5页
关键词 肝癌细胞 细胞毒性 质粒载体 HepG2细胞 WESTERN印迹法 单纯疱疹病毒 自杀基因 DNA复制
shRNA表达载体对HSV-2ICP4基因的干扰效应 预览 被引量:3
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作者 袁俊杰 吕延成 《遵义医学院学报》 2013年第1期21-24,共4页
目的构建针对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)ICP4基因的短发夹RNA(shRNA)重组表达载体,探究该载体表达的shRNA对HSV-2的抑制作用。方法重组表达载体通过脂质体转染法转染HEK293细胞,并接种HSV-2,48h后,实时荧光定量RT-PCR检测mRNA转... 目的构建针对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)ICP4基因的短发夹RNA(shRNA)重组表达载体,探究该载体表达的shRNA对HSV-2的抑制作用。方法重组表达载体通过脂质体转染法转染HEK293细胞,并接种HSV-2,48h后,实时荧光定量RT-PCR检测mRNA转录情况,Westernblot检测ICP4蛋白的表达情况,终点滴定法测定病毒的滴度。结果与对照组相比,干扰组对mRNA抑制率为71%,使蛋白表达减少71.81%,并且病毒滴度也明显降低(P〈0.05)。结论构建的pGPU6/Neo-shRNA ICP4重组质粒表达载体能在体外细胞水平上干扰HSV.2ICP4的基因表达,抑制HSV-2在细胞中复制。 展开更多
关键词 RNA干扰 短发夹RNA 质粒载体 Ⅱ型单纯疱疹病毒 ICP4基因
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雨生红球藻基因组文库的构建及鉴定 预览 被引量:1
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作者 王潮岗 张雪芹 胡章立 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期190-195,共6页
本研究以雨生红球藻34—1n为材料,提取其基因组DNA,利用限制性内切酶Sau3AI对基因组DNA进行酶解,回收6~8kb的基因组DNA片段,并浓缩至200ng/i,zL。该片段与经BamHI酶切和去磷酸化处理后的pUC18载体连接,然后电击转化到受体菌Esche... 本研究以雨生红球藻34—1n为材料,提取其基因组DNA,利用限制性内切酶Sau3AI对基因组DNA进行酶解,回收6~8kb的基因组DNA片段,并浓缩至200ng/i,zL。该片段与经BamHI酶切和去磷酸化处理后的pUC18载体连接,然后电击转化到受体菌Escherichia.coliDH5仅中,获得雨生红球藻34-1n的基因组文库。该文库的平均插入片段长度约为6.5kb,获得6x10s个克隆数。通过PCR筛选,由雨生红球藻基因组文库中获得含bktl序列的单克隆菌,与β-胡萝卜素氧化酶序列(GenBank:DQ086233.1)进行比对,结果表明bktl基因组序列含有6个外显子。本研究为进一步鉴定雨生红球藻相关基因提供了一个文库平台。 展开更多
关键词 雨生红球藻 基因组文库 质粒载体 β-胡萝卜素酮化酶基因
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饲用枯草芽孢杆菌表达系统研究进展 预览 被引量:1
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作者 杨明明 陈玉林 《家畜生态学报》 北大核心 2013年第12期1-7,共7页
枯草芽孢杆菌是一种广泛应用于畜牧业生产的革兰氏阳性菌。随着现代生物技术的发展,利用重组枯草芽孢杆菌生产饲用酶、饲用活性代谢产物以及作为肠道益生茵成为热点研究领域。枯草芽孢杆菌表达系统是重组枯草芽孢杆菌的核心,论文对枯... 枯草芽孢杆菌是一种广泛应用于畜牧业生产的革兰氏阳性菌。随着现代生物技术的发展,利用重组枯草芽孢杆菌生产饲用酶、饲用活性代谢产物以及作为肠道益生茵成为热点研究领域。枯草芽孢杆菌表达系统是重组枯草芽孢杆菌的核心,论文对枯草芽孢杆菌表达系统的研究进展与存在问题进行了简要综述。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 表达系统 质粒载体 启动子
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HGF基因对大鼠血管内皮细胞增殖的作用 被引量:1
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作者 孙晋津 陈博 陈剑秋 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期 644-647,共4页
目的构建肝细胞生长因子(HGF)真核细胞表达质粒pEGFP-HGF-C1,探讨HGF对大鼠血管内皮细胞(VECs)的作用。方法通过亚克隆技术,构建含有人HGF cDNA全长的真核细胞表达质粒pEGFP-HGF-C1并测序;向大鼠原代骨骼肌细胞转染质粒pEGFP-HGF-C1... 目的构建肝细胞生长因子(HGF)真核细胞表达质粒pEGFP-HGF-C1,探讨HGF对大鼠血管内皮细胞(VECs)的作用。方法通过亚克隆技术,构建含有人HGF cDNA全长的真核细胞表达质粒pEGFP-HGF-C1并测序;向大鼠原代骨骼肌细胞转染质粒pEGFP-HGF-C1,测定转染效率;ELISA法测定细胞上清液中HGF蛋白表达浓度;MTT法测定HGF表达产物对大鼠VECs促增殖作用。结果成功构建正向表达HGF的真核细胞表达质粒pEGFP-HGF-C1,该质粒可有效转染原代培养的骨骼肌细胞并表达HGF,且其表达产物HGF对大鼠VECs的促增殖作用具有量效和时效关系(P〈0.05或P〈0.01)。结论成功构建的真核表达质粒pEGFP-HGF-C1能有效转染大鼠骨骼肌细胞,分泌的HGF对大鼠VECs有促增殖作用。 展开更多
关键词 肝细胞生长因子 质粒载体 血管内皮细胞
肝纤维化相关细胞因子双重RNA干扰质粒的构建及转染肝星状细胞研究 预览 被引量:1
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作者 蒋玉凤 周德江 +2 位作者 张建军 黄飞 史小玲 《实用肝脏病杂志》 2012年第6期516-519,共4页
目的构建以大鼠CTGF和TIMP-1基因为靶点的双重RNA干扰表达载体质粒,以检测其转染肝星状细胞的效率.方法筛选出对CTGF和TIMP-1基因最有效的RNA干扰靶位,各设计1对含有短发夹结构的RNA 干扰靶点序列,分别克隆到质粒载体psiRNA-DUO-GFPzeo... 目的构建以大鼠CTGF和TIMP-1基因为靶点的双重RNA干扰表达载体质粒,以检测其转染肝星状细胞的效率.方法筛选出对CTGF和TIMP-1基因最有效的RNA干扰靶位,各设计1对含有短发夹结构的RNA 干扰靶点序列,分别克隆到质粒载体psiRNA-DUO-GFPzeo,构建含目的靶基因片段的重组质粒载体psiRNA-GFP-CT-GF、psiRNA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com(含有CTGF和TIMP-1),进行酶切和测序鉴定.将构建成功的重组质粒psiRNA-GFP-CTGF、psiRNA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com转染大鼠肝星状细胞,在荧光显微镜下观察质粒转染情况,用流式细胞仪检测转染效率.结果酶切与测序结果提示重组质粒 psiRNA-GFP-CTGF、psiR-NA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com成功构建;成功将重组质粒psiRNA-GFP-CTGF、psiRNA-GFP-TIMP-1和psiRNA-GFP-Com转染肝星状细胞,在24小时,空质粒组、CTGF组、TIMP-1组和CTGF +TIMP-1组转染效率分别为15±2%、13±1%、15±1%和14±2%,均低于质粒psiRNA-GFP-Com转染组(Com组,20±2%,P〈0.05);在48小时,空质粒组、CTGF组、TIMP-1组和CTGF+TIMP-1组转染效率分别为10±2%、9±1%、8±2%和10±1%,均低于Com组的15±2%(P〈0.05).结论成功构建靶向大鼠CTGF和TIMP-1最有效的RNA干扰靶位的双重RNA干扰表达质粒,能转染至肝星状细胞,并且psiRNA-GFP-Com转染效率最高. 展开更多
关键词 肝纤维化 RNA干扰 质粒载体 结缔组织生长因子 金属蛋白酶组织抑制因子-1 肝星状细胞
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