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不同试剂盒提取质粒中内毒素水平的比较 预览
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作者 李卫玲 易初丽 《江汉大学学报:自然科学版》 2019年第1期36-40,共5页
目的比较几种不同质粒提取试剂盒提取质粒中内毒素水平。方法选用6种市售商业化试剂盒:QIAGEN质粒小提试剂盒Plasmid Mini Kit(12123),QIAGNE无内毒素质粒大提试剂盒EndoFree Plasmid Maxi Kit(12362),康为世纪高纯质粒中提试剂盒(CW050... 目的比较几种不同质粒提取试剂盒提取质粒中内毒素水平。方法选用6种市售商业化试剂盒:QIAGEN质粒小提试剂盒Plasmid Mini Kit(12123),QIAGNE无内毒素质粒大提试剂盒EndoFree Plasmid Maxi Kit(12362),康为世纪高纯质粒中提试剂盒(CW0502),A厂家无内毒素质粒中提试剂盒,B厂家无内毒素质粒小提试剂盒,C厂家无内毒素质粒小提试剂盒(BSC01S2D)。分别提取质粒DNA,应用鲎试剂显色基质法和凝胶法检测所提质粒中内毒素水平。结果6种试剂盒提取质粒得率、A260/A280及A260/A230值均较好,但内毒素水平各不相同,其中各厂家标明无内毒素试剂盒提取质粒中内毒素水平相对较低,QIAGEN无内毒素质料大提试剂盒提取的质粒中内毒素小于0.125EU/μg。结论6种质粒提取试剂盒使用时应根据实际情况进行选择。 展开更多
关键词 质粒 内毒素 鲎试剂 质粒提取试剂盒
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涂布介入器械的人血管内皮生长因子真核表达载体的构建 预览
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作者 张一林 贺迎坤 +3 位作者 李天晓 刘刚 胡延忠 崔秀坤 《中华介入放射学电子杂志》 2019年第1期40-43,共4页
目的:构建可涂布于介入器械的人血管内皮生长因子(VEGF)真核表达载体。方法:根据人VEGFA(NM_001025366)目的序列设计引物制备目的基因及载体,双酶切载体pIRES2-ZsGreen1和目的基因homo VEGFA进行连接后转化入大肠杆菌,构建质粒pIRES2-Zs... 目的:构建可涂布于介入器械的人血管内皮生长因子(VEGF)真核表达载体。方法:根据人VEGFA(NM_001025366)目的序列设计引物制备目的基因及载体,双酶切载体pIRES2-ZsGreen1和目的基因homo VEGFA进行连接后转化入大肠杆菌,构建质粒pIRES2-ZsGreen1-homo-VEGFA并测序鉴定。结果:目的基因VEGFA已连接到载体pIRES2-ZsGreen1,大小约1400 bp,与人VEGFA(NM_001025366)目的序列比对结果一致,未见变异。质粒pIRES2-ZsGreen1-homo-VEGFA构建成功。结论:成功构建重组人血管内皮生长因子真核表达载体,可用于涂布介入器械表面进行下一步实验。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 介入器械 质粒 基因
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Ndfip1质粒的构建及其在神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中的表达 预览
3
作者 田娟 毛建雯 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期825-829,I0005共6页
目的:观察Nedd4家族反应蛋白1(Ndfip1)过表达条件下神经细胞中二价金属离子转运蛋白1(DMT1)的表达,探讨Ndfip1对DMT1的调控作用。方法:构建Ndfip1真核表达质粒,应用Ndfip1质粒转染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,检测转染效率。Ndfip1质粒... 目的:观察Nedd4家族反应蛋白1(Ndfip1)过表达条件下神经细胞中二价金属离子转运蛋白1(DMT1)的表达,探讨Ndfip1对DMT1的调控作用。方法:构建Ndfip1真核表达质粒,应用Ndfip1质粒转染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,检测转染效率。Ndfip1质粒转染的SH-SY5Y细胞为实验组,空质粒转染的SH-SY5Y细胞为对照组,应用免疫荧光法观察2组细胞中DMT1蛋白表达强度,采用蛋白印迹法定量检测2组细胞DMT1蛋白表达水平。结果: Ndfip1质粒经扩增、电泳分离和测序比对,证明质粒构建成功。Ndfip1质粒转染48 h后,与转染前比较,SH-SY5Y细胞中Ndfip1蛋白表达水平明显增加(P<0.01),证明转染成功。免疫荧光法检测,与对照组比较,实验组细胞中DMT1的荧光强度明显减弱。蛋白印迹法检测,与对照组比较,实验组细胞中DMT1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论: Ndfip1过表达可下调神经细胞中DMT1蛋白的表达,Ndfip1对DMT1具有负性调控作用,通过减少神经细胞中铁离子的蓄积对神经细胞起到保护作用。 展开更多
关键词 Nedd4家族反应蛋白1 二价金属离子转运蛋白1 质粒 神经细胞
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敲除PaLoc毒力岛的无毒性艰难梭菌菌株的构建 预览
4
作者 饶凤琴 程玉梅 +4 位作者 吴昌学 王义 崔古贞 齐晓岚 洪伟 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第10期1128-1133,共6页
目的:使用CRISPR-Cfp1系统敲除艰难梭菌毒性(PaLoc)毒力基因岛,构建无毒性艰难梭菌菌株。方法:使用分子克隆方法,构建针对PaLoc毒力岛的基因打靶质粒pWH53;将pWH53质粒转化艰难梭菌630菌株后,诱导Cpf1蛋白表达,PCR筛选发生双交换的PaLo... 目的:使用CRISPR-Cfp1系统敲除艰难梭菌毒性(PaLoc)毒力基因岛,构建无毒性艰难梭菌菌株。方法:使用分子克隆方法,构建针对PaLoc毒力岛的基因打靶质粒pWH53;将pWH53质粒转化艰难梭菌630菌株后,诱导Cpf1蛋白表达,PCR筛选发生双交换的PaLoc敲除突变株,测序验证设计位点是否发生等位双交换。结果:PCR结果显示,获得的16株转化子中有8株为敲除PaLoc突变株,阳性率为50%;测序结果显示,获得的8株敲除PaLoc突变株均在设计位点发生了等位双交换。结论:成功构建艰难梭菌毒性毒力岛敲除PaLoc突变株。 展开更多
关键词 艰难梭菌 CRISPR-Cpf1系统 PaLoc毒力岛 基因敲除 活菌疫苗 毒性基因 梭菌感染 载体 质粒
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耐受碳青霉稀类Klebsiella oxytoca B1645-1携带Amp功能研究
5
作者 吴玲玲 王祖华 +4 位作者 刘纪 杨迪 冯梓龙 余春芳 金志雄 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第8期910-913,920共5页
目的研究Klebsiella oxytoca B1645-1细菌耐受碳青霉稀类抗生素的机制。方法采用常规方法提取、分离K. oxytoca B1645-1细菌小质粒(<15 kb)(PMDR),电转入Escherichia coli DH5α(BDH),MIC法检测其药物敏感性。PCR法扩增PMDR、BDH耐... 目的研究Klebsiella oxytoca B1645-1细菌耐受碳青霉稀类抗生素的机制。方法采用常规方法提取、分离K. oxytoca B1645-1细菌小质粒(<15 kb)(PMDR),电转入Escherichia coli DH5α(BDH),MIC法检测其药物敏感性。PCR法扩增PMDR、BDH耐氨苄西林基因,分析K. oxytoca B1645-1细菌的多重耐药机制。结果 K. oxytoca B1645-1细菌含有15 kb大小的质粒,E. coli DH5α电转入质粒后全部或部分耐受氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦、头孢吡肟及β-内酰胺酶抑制剂头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦,而对碳青霉烯类药物敏感。基因分析显示,K. oxytoca B1645-1菌株含有的15 kb质粒携带有blaAmp基因。结论 K. oxytoca B1645-1多耐药性是由多耐药质粒协同作用的结果,这为靶点控制耐药菌传播提供了理论依据。 展开更多
关键词 碳青霉烯类 KLEBSIELLA oxytoca 质粒 AMP
自噬检测的研究进展
6
作者 王阳 郝长来 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2019年第3期268-272,共5页
自噬是当前生物医学领域的研究热点之一,因为自噬过程与多种疾病的发病机制相关。自噬流是由隔离膜的形成至自噬溶酶体完成水解功能的过程,可反映多步骤且动态发生的完整自噬过程。因此,自噬流可以作为自噬水平的度量指标,并且通过动态... 自噬是当前生物医学领域的研究热点之一,因为自噬过程与多种疾病的发病机制相关。自噬流是由隔离膜的形成至自噬溶酶体完成水解功能的过程,可反映多步骤且动态发生的完整自噬过程。因此,自噬流可以作为自噬水平的度量指标,并且通过动态和静态相结合的实验检测手段,实现对自噬流的定性、定量检测,从而更加准确、客观地反映自噬水平。笔者拟就自噬检测的研究进展进行综述,并且着重对各种自噬流的检测方法进行介绍,以期为广大相关研究者提供技术支持。 展开更多
关键词 自噬 临床实验室技术 显微镜检查 电子 显微镜检查 荧光 生物学标记 质粒 自噬流
选择性上调pSmad 3C/3L基因对人肝星状细胞增殖及α平滑肌肌动蛋白、纤维酶原激活物抑制剂⁃1和Ⅰ型胶原蛋白表达的影响 预览
7
作者 徐媛媛 闻广华 +1 位作者 张冲 杨雁 《安徽医药》 CAS 2019年第12期2351-2355,共5页
目的观察选择性上调pSmad 3C/3L基因对人肝星状细胞(LX⁃2)增殖及α平滑肌肌动蛋白(α⁃SMA)、纤维酶原激活物抑制剂⁃1(PAI⁃1)和Ⅰ型胶原蛋白(Collagen⁃Ⅰ)表达的影响。以进一步探究pSmad 3C/3L在肝纤维化进展中的作用机制。方法采用脂质... 目的观察选择性上调pSmad 3C/3L基因对人肝星状细胞(LX⁃2)增殖及α平滑肌肌动蛋白(α⁃SMA)、纤维酶原激活物抑制剂⁃1(PAI⁃1)和Ⅰ型胶原蛋白(Collagen⁃Ⅰ)表达的影响。以进一步探究pSmad 3C/3L在肝纤维化进展中的作用机制。方法采用脂质体转染的技术(FuGENE®HD)向LX⁃2细胞转染野生型Smad3基因(Smad3 WT)、Smad3连接区磷酸化位点突变的基因(Smad3 EPSM)及Smad3 C末端磷酸化位点突变的基因(Smad33S⁃A)3种质粒,选择性上调LX⁃2细胞中pSmad 3C/3L的表达水平,以蛋白质印迹法(Western Blot)验证转染效率并检测LX⁃2细胞中α⁃SMA、PAI⁃1和Collagen⁃Ⅰ的蛋白表达水平。MTT法检测选择性上调pSmad 3C/3L对LX⁃2细胞增殖能力的影响。结果转化生长因子⁃β1(TGF⁃β1)刺激1 h后,与LX⁃2对照组相比,转染3种质粒组Smad3蛋白表达水平均升高[(0.48±0.02),(0.57±0.03),(0.60±0.02),(0.59±0.03);P<0.05];与Smad3 WT组相比,转染Smad3 EPSM质粒组pSmad3C蛋白表达水平明显升高[(0.33±0.02)比(0.44±0.01),P<0.05],转染Smad33S⁃A质粒组pSmad3L蛋白表达水平明显升高[(0.36±0.01)比(0.42±0.02),P<0.05]。MTT结果显示,转染Smad3 EPSM质粒可抑制LX⁃2细胞增殖,而转染Smad33S⁃A质粒可促进LX⁃2细胞的增殖[吸光度值(0.48±0.03)比(0.93±0.05),P<0.05]。TGF⁃β1刺激12 h后,α⁃SMA、PAI⁃1和Collagen⁃Ⅰ在3种质粒转染组中呈现出差异表达(P<0.05)。结论转染3种质粒成功地选择性上调了LX⁃2细胞中pSmad 3C/3L的表达,选择性高表达pSmad3L可进一步促进TGF⁃β1诱导的细胞增殖反应、促进α⁃SMA、PAI⁃1和Collagen⁃Ⅰ的表达,选择性高表达pSmad3C可抑制细胞增殖反应、降低α⁃SMA、PAI⁃1和Collagen⁃Ⅰ的表达;提示TGF⁃β1诱导的Smad3不同位点磷酸化在LX⁃2细胞增殖和α⁃SMA,PAI⁃1,Collagen⁃Ⅰ蛋白表达的调控中发挥重要作用,为肝纤维化的逆转提供了新思路。 展开更多
关键词 肝硬化 肝星状细胞 质粒 转染 Smad3蛋白质 转化生长因子Β 脂质体 细胞增殖 印迹法 蛋白质
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大肠埃希菌CRISPRs间隔序列的来源研究
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作者 梁文娟 崔聪聪 +5 位作者 段广才 刘慧莹 徐亚珂 郗园林 杨海燕 陈帅印 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第2期137-140,共4页
目的研究大肠埃希菌全基因组中规律成簇的间隔短回文重复序列(CRISPRs)的间隔序列分布及来源规律。方法通过BLAST、CRISPRs finder、ClustalX和CRISPRTarget分析CRISPR/Cas、间隔序列及其来源。结果 203株大肠埃希菌中74.4%含有I-E CRIS... 目的研究大肠埃希菌全基因组中规律成簇的间隔短回文重复序列(CRISPRs)的间隔序列分布及来源规律。方法通过BLAST、CRISPRs finder、ClustalX和CRISPRTarget分析CRISPR/Cas、间隔序列及其来源。结果 203株大肠埃希菌中74.4%含有I-E CRISPR/Cas,9.4%含有I-F CRISPR/Cas,17.2%存在CRISPR3-4;CRISPR1,CRISPR2,CRISPR3和CRISPR4的间隔序列数目范围分别为1-25、1-27、4-7和2-22;其独特间隔序列数目分别为339、346、57和66。CRISPRTarget分析I-E和I-F CRISPR/Cas的间隔序列分别匹配816条质粒和293条噬菌体,2 428条质粒和139条噬菌体,差异有统计学意义(χ~2=319.30,P<0.01)。结论大肠埃希菌中CRISPR/Cas分布广泛,I-E和I-F CRISPR/Cas可能发挥不同的免疫功能。 展开更多
关键词 规律成簇的间隔短回文重复序列 间隔序列 噬菌体 质粒 大肠埃希菌
拉萨市鸡沙门氏菌耐药质粒研究 预览 被引量:1
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作者 刘会杰 王燕 +2 位作者 马宏财 冯静 元振杰 《现代畜牧兽医》 2019年第2期5-8,共4页
由拉萨市养鸡场分离鉴定得到致病性沙门氏菌,采用K-B法,对其耐药性进行检测,并对耐药性较高的4株沙门氏菌进行质粒的提取与检测,采用变温SDS法进行质粒消除试验,分析其耐药菌谱和耐药质粒之间的关系,对耐药基因进行定位。结果表明,3株... 由拉萨市养鸡场分离鉴定得到致病性沙门氏菌,采用K-B法,对其耐药性进行检测,并对耐药性较高的4株沙门氏菌进行质粒的提取与检测,采用变温SDS法进行质粒消除试验,分析其耐药菌谱和耐药质粒之间的关系,对耐药基因进行定位。结果表明,3株沙门氏菌菌有耐药质粒的存在,质粒数目为1~4个,大小为1.8~36 kb之间,质粒携带率为75%。质粒消除试验结果表明所检测的3株菌对大部分药物恢复了敏感性。检测质粒介导的耐药基因有AMX、ERY、TET、CIP、NOR、CMP。 展开更多
关键词 沙门氏菌 耐药性 质粒 耐药基因
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肺炎克雷伯菌AmpC酶检测及抗生素选择 预览
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作者 刘永瑞 张妍 李秀英 《医学信息》 2019年第19期122-123,126共3页
目的调查济宁市第一人民医院肺炎克雷伯菌质粒介导AmpC酶表型及其对常用抗生素的耐药性,为临床用药提供依据。方法收集2017年1月~7月济宁市第一人民医院临床分离的非重复肺炎克雷伯菌97株,应用头孢西丁纸片扩散法进行肺炎克雷伯菌AmpC... 目的调查济宁市第一人民医院肺炎克雷伯菌质粒介导AmpC酶表型及其对常用抗生素的耐药性,为临床用药提供依据。方法收集2017年1月~7月济宁市第一人民医院临床分离的非重复肺炎克雷伯菌97株,应用头孢西丁纸片扩散法进行肺炎克雷伯菌AmpC酶表型初筛,对初筛阳性菌用多重PCR方法检测质粒介导AmpC酶基因,分析其耐药情况。结果97株肺炎克雷伯菌中共筛选出40株对头孢西丁不敏感菌株,经多重PCR扩增,有7株AmpC酶阳性,检出率为7.22%(7/97),均为DHA型。产质粒介导AmpC酶菌株仅对亚胺培南敏感(100.00%)。结论济宁市第一人民医院产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌发生率相对较低,以DHA型基因为主,治疗应首选碳青霉烯类抗菌药物。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 质粒 AMPC酶 药敏结果
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PCA3特异性启动TRAIL诱导前列腺癌PC3细胞凋亡效应研究 预览
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作者 刘雷 黄星华 +3 位作者 陈统权 李坚伟 周建华 李冠奕 《现代泌尿外科杂志》 CAS 2019年第7期572-577,共6页
目的研究PCA3启动子调控TRAIL/TNFSF10的真核表达载体在体外特异性诱导前列腺癌PC3细胞凋亡效应。方法已构建好pHBAd-PCA3-TRAIL重组质粒及对照组质粒转染前列腺癌PC3细胞及对照组细胞,MTT法及流式细胞术检测各组凋亡效应,RealTimePCR及... 目的研究PCA3启动子调控TRAIL/TNFSF10的真核表达载体在体外特异性诱导前列腺癌PC3细胞凋亡效应。方法已构建好pHBAd-PCA3-TRAIL重组质粒及对照组质粒转染前列腺癌PC3细胞及对照组细胞,MTT法及流式细胞术检测各组凋亡效应,RealTimePCR及Westernblot检测TRAIL表达情况及DR5、caspase-8水平。结果各组质粒成功转染靶细胞,体外实验可观察到实验组细胞活力明显低于各对照组,差距有统计学意义;进一步检测显示仅实验组导入的TRAIL基因可特异性表达且DR5、caspase-8水平明显升高。结论pHBAd-PCA3-TRAIL在前列腺癌PC3细胞中特异性表达TRAIL,并激活DR5、caspase-8相关通路在体外对前列腺癌PC3细胞表现出特异性诱导凋亡作用,为后续前列腺癌治疗研究中基于PCA3启动子相关探索打下基础。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 基因 转基因 质粒 TRAIL PCA3 凋亡
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质粒DNA转染人PBMC电穿孔条件的影响因素 预览
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作者 孔明圣 于洋 +3 位作者 张亚倩 李玲 张文峰 邵红伟 《广东药科大学学报》 CAS 2019年第2期289-295,共7页
目的分析影响质粒转染人PBMC电穿孔效率的不同因素。方法从人外周血中分离得到PBMC,利用携带荧光标记的质粒进行电穿孔转染。分别比较不同的电压、脉冲时间、电转缓冲液、细胞培养状态、质粒质量对转染效率和细胞活率的影响。结果在一... 目的分析影响质粒转染人PBMC电穿孔效率的不同因素。方法从人外周血中分离得到PBMC,利用携带荧光标记的质粒进行电穿孔转染。分别比较不同的电压、脉冲时间、电转缓冲液、细胞培养状态、质粒质量对转染效率和细胞活率的影响。结果在一定范围内适当增高电压会增加细胞转染效率,但会降低细胞活率;脉冲时间达到一定数值后,转染效率才会有明显的升高;电转缓冲液对于电转后细胞存活率至关重要;未活化的PBMC转染效率低于经刺激活化的PBMC,但细胞活率却高于后者;质粒纯度和质量显著影响电穿孔转染效果,利用全波长光谱扫描仪可对质粒的杂质进行有效的检测,质粒中内毒素的含量显著影响PBMC电转后的存活率。结论对质粒转染人PBMC的电穿孔条件进行了详细的分析与探索,阐明了影响原代淋巴细胞转染的多种因素,对于有效提高人原代淋巴细胞转染效率具有重要意义,为基于淋巴细胞的肿瘤免疫研究提供有益参考。 展开更多
关键词 电穿孔 转染 PBMC 质粒
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以质粒为基础的同源重组技术在葡萄球菌基因敲除中的应用 预览
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作者 武有聪 孟媛媛 +3 位作者 丁百兴 韩海燕 瞿涤 白丽 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期581-586,共6页
葡萄球菌是医院内感染的重要病原菌,通过同源重组敲除葡萄球菌的靶基因是研究其功能的重要方法。以质粒为基础的重组系统是外源基因序列传递,发生同源重组的重要载体。近年来,葡萄球菌基因敲除所用的重组质粒的特性取得不断改进。结合... 葡萄球菌是医院内感染的重要病原菌,通过同源重组敲除葡萄球菌的靶基因是研究其功能的重要方法。以质粒为基础的重组系统是外源基因序列传递,发生同源重组的重要载体。近年来,葡萄球菌基因敲除所用的重组质粒的特性取得不断改进。结合本课题组工作,简要综述以质粒为基础的同源重组技术在葡萄球菌基因敲除中的应用及技巧,重点比较不同质粒的特点及使用条件,对于葡萄球菌致病机制研究具有借鉴意义。 展开更多
关键词 质粒 同源重组 基因敲除 葡萄球菌
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运用无标记定量蛋白质组学技术分析AURKB介导骨肉瘤恶性表型的分子机制 预览
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作者 皮闻森 刘家明 黄山虎 《重庆医学》 CAS 2019年第8期1381-1385,共5页
目的通过无标记定量蛋白质组学技术检测沉默Aurora-B(AURKB)的骨肉瘤(OS)细胞蛋白表达水平的变化,找出关键的差异蛋白,并对AURKB促进OS恶性表型的潜在分子机制进行分析预测。方法根据编码AURKB基因的人mRNA序列(NM004217),在线设计针对A... 目的通过无标记定量蛋白质组学技术检测沉默Aurora-B(AURKB)的骨肉瘤(OS)细胞蛋白表达水平的变化,找出关键的差异蛋白,并对AURKB促进OS恶性表型的潜在分子机制进行分析预测。方法根据编码AURKB基因的人mRNA序列(NM004217),在线设计针对AURKBmRNA的shRNA(invitrogen.com/rnai),构建重组慢病毒载体,获得Lv-shAURKB和阴性对照慢病毒(Lv-negative)。分别转染143BOS细胞,筛选稳定细胞株。运用无标记定量蛋白组学技术分析差异表达的蛋白,使用pheatmap软件包构建聚类分析热图,使用ggplot2软件构建火山图,运用Blast2GOv.4和KOBAS分别进行GO功能分析和KEGG通路富集分析,并使用STRING分析构建PPI网络。结果筛选的差异蛋白有105个。GO功能分析结果显示:差异蛋白主要参与单生物体细胞器组织和细胞骨架组织的生物学过程(BP);发挥RNA结合和肌动蛋白依赖性ATP酶活性的分子功能;主要定位于细胞质和膜界限的细胞器。KEGG通路富集分析显示:差异蛋白富集的主要信号通路为肌动蛋白细胞骨架的调节。PPI网络图中枢纽蛋白包括ACTN4、TPR和ACLY。结论Rho/ROCH-ACTN4信号通路、TRP/ERK/NF-κβ信号通路和PI3K/Akt-(SREBP-1)-ACLY/FASN信号通路可能在AURKB介导的OS恶性表型中发挥重要作用。 展开更多
关键词 骨肉瘤 质粒 AURKB 蛋白质组 计算生物学
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苏州市患病水生动物体内细菌的分离鉴定及药敏试验 预览
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作者 冯永杰 孙振丽 +8 位作者 宣引明 蒋明 潘云生 张益明 龚叶平 薛仁宇 胡小龙 曹广力 贡成良 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2019年第1期75-80,共6页
为了解苏州市不同地区患病水生动物组织中感染细菌的种类及其耐药性,于2014年6~10月从不同地区采集的患病鱼、虾、蟹和中华鳖组织中共分离到14株细菌,通过16SrRNA基因分析对细菌进行了鉴定,并调查了他们对链霉素、恩诺沙星、强力霉素、... 为了解苏州市不同地区患病水生动物组织中感染细菌的种类及其耐药性,于2014年6~10月从不同地区采集的患病鱼、虾、蟹和中华鳖组织中共分离到14株细菌,通过16SrRNA基因分析对细菌进行了鉴定,并调查了他们对链霉素、恩诺沙星、强力霉素、庆大霉素硫酸盐和甲砜霉素等5种抗生素的抗性及最低抑菌浓度。结果显示:从不同地区水生动物分离到的同种细菌对同种抗生素的抗性有明显差异,其中,分离到的嗜水气单胞菌及摩根氏菌有多重耐药性;对14株细菌进行质粒抽提和琼脂糖凝胶电泳分析,发现8株细菌中存在分子量不同的质粒,且不同地区来源的同种细菌所含有的质粒的分子量不同,耐药性较强的嗜水气单胞菌和摩根氏菌均含有质粒;嗜水气单胞菌质粒的序列测定结果显示,该质粒与其抗药性无关;转化实验结果显示,从摩根氏菌分离的1.8kb质粒与氨苄青霉素抗药性有关。 展开更多
关键词 患病水生动物 细菌 分离鉴定 药敏试验 质粒
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超声破坏载pcDNA3-bFGF-NGF基因纳泡治疗糖尿病大鼠烫伤创面的实验研究 预览
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作者 王丽华 宗建春 +3 位作者 刘之川 简华刚 余萍萍 梅英 《临床超声医学杂志》 CSCD 2019年第8期602-606,共5页
目的探讨超声破坏载pcDNA3-bFGF-NGF基因纳泡对糖尿病大鼠烫伤创面的治疗作用。方法制备载pcDNA3-bFGF-NGF基因纳泡,检测其基本特性;MTT法检测其对大鼠真皮成纤维细胞活性的影响;Western-blot检测其在大鼠真皮成纤维细胞中的基因表达水... 目的探讨超声破坏载pcDNA3-bFGF-NGF基因纳泡对糖尿病大鼠烫伤创面的治疗作用。方法制备载pcDNA3-bFGF-NGF基因纳泡,检测其基本特性;MTT法检测其对大鼠真皮成纤维细胞活性的影响;Western-blot检测其在大鼠真皮成纤维细胞中的基因表达水平及转染效率。选取糖尿病大鼠27只,分为空白对照组、载基因纳泡组及超声破坏载基因纳泡组,超声破坏载基因纳泡组又分别于1 d、2 d、3 d、4 d、7 d、14 d及21 d观察创面愈合情况,以及bFGF及NGF蛋白表达水平及转染效率,并与空白对照组、载基因纳泡组21 d时的结果进行对照。结果所制备的阳离子纳泡形态规则,稳定性好,平均表面电位为12.7 mV;与基因结合量高达3.8mg/108个纳泡;基因结合率高达39.5%;MTT显示对细胞无明显毒性。Western-blot半定量结果显示,空白对照组和载基因纳泡组bFGF及NGF蛋白水平低;bFGF蛋白及NGF蛋白在载基因纳泡组48 h时转染效率及表达水平最高。超声破坏载基因纳泡48 h组bFGF水平在治疗第7天表达及转染率达到峰值,NGF水平在治疗第4天表达及转染率最高。结论载pcDNA3-bFGF-NGF基因纳泡能显著增强超声显影;经超声基因转染仪破坏后可定位释放基因,且基因转染效率明显提高,对糖尿病大鼠烫伤创面有较好的治疗效果。 展开更多
关键词 纳泡 质粒 基因转染 蛋白生成 超声成像
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耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌中OXA-48家族碳青霉烯酶分子流行病学研究进展 预览
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作者 韩仁如 胡付品 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期687-690,共4页
1引言碳青霉烯类抗生素对超广谱β内酰胺酶(ESBL)和头孢菌素酶具有高度的稳定性,但可被碳青霉烯酶水解、灭活,随着临床治疗药物的广泛应用,产生了耐碳青霉烯类的菌株,这给临床抗感染治疗带来了严峻的挑战[1]。近年来,耐碳青霉烯类肠杆... 1引言碳青霉烯类抗生素对超广谱β内酰胺酶(ESBL)和头孢菌素酶具有高度的稳定性,但可被碳青霉烯酶水解、灭活,随着临床治疗药物的广泛应用,产生了耐碳青霉烯类的菌株,这给临床抗感染治疗带来了严峻的挑战[1]。近年来,耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的比率增加,特别是耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)比率增加。 展开更多
关键词 耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌 OXA-48 碳青霉烯酶 耐药 质粒
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肠杆菌科细菌质粒介导氨基糖苷类耐药基因研究进展 预览
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作者 施清喻 胡付品 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期691-696,共6页
氨基糖苷类抗菌药物(aminoglycosides)通过结合原核生物30S核糖体亚基16S rRNA的高保守A位点,干扰细菌蛋白质的合成导致细菌的死亡[1],现用于临床革兰阴性菌所致严重感染的治疗及畜牧业中。按其作用部位可分为:(1)与A位点结合,4,6-二取... 氨基糖苷类抗菌药物(aminoglycosides)通过结合原核生物30S核糖体亚基16S rRNA的高保守A位点,干扰细菌蛋白质的合成导致细菌的死亡[1],现用于临床革兰阴性菌所致严重感染的治疗及畜牧业中。按其作用部位可分为:(1)与A位点结合,4,6-二取代脱氧链霉胺类(如卡那霉素和庆大霉素);4,5-二取代脱氧链霉胺类(如新霉素)。 展开更多
关键词 16S rRNA甲基酶 质粒 氨基糖苷类 耐药 基因
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重组人白介素35质粒的构建及鉴定 预览
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作者 顾香 陈吉泉 李兵 《中外医学研究》 2019年第17期171-173,共3页
目的:通过分子生物学技术构建重组人白介素35(IL-35)质粒,为进一步研究人IL-35的生物学功能奠定基础。方法:用KG-1细胞(人白血病细胞)扩增p35和EBI3的cDNA,将两者先后连接至pSectag2A质粒中,最后把Linker连接至pSectag2A-p35-EBI3中,构... 目的:通过分子生物学技术构建重组人白介素35(IL-35)质粒,为进一步研究人IL-35的生物学功能奠定基础。方法:用KG-1细胞(人白血病细胞)扩增p35和EBI3的cDNA,将两者先后连接至pSectag2A质粒中,最后把Linker连接至pSectag2A-p35-EBI3中,构建成pSectag2A-IL-35质粒。结果:经测序等方法鉴定重组质粒中p35和EBI3序列与Genbank中(p35NM-000882和EBI3NM-005725)公布的序列一致。结论:成功构建pSectag2A-IL-35真核表达载体。 展开更多
关键词 重组 PCR IL-35 质粒
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单纯性圆锥动脉干畸形患儿GATA-6基因突变筛查及突变体蛋白功能研究
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作者 汪希珂 田颖 +3 位作者 韦海涛 张阳 吴悦 王予川 《中华实用儿科临床杂志》 CSCD 北大核心 2019年第19期1480-1484,共5页
目的探讨转录因子GATA-6在单纯性圆锥动脉干畸形中的分子遗传机制,旨在为单纯性圆锥动脉干畸形的早期预防及遗传咨询提供支持。方法选取32例散发单纯性圆锥动脉干畸形患儿及100例健康者,应用聚合酶链反应(PCR)方法扩增转录因子GATA-6基... 目的探讨转录因子GATA-6在单纯性圆锥动脉干畸形中的分子遗传机制,旨在为单纯性圆锥动脉干畸形的早期预防及遗传咨询提供支持。方法选取32例散发单纯性圆锥动脉干畸形患儿及100例健康者,应用聚合酶链反应(PCR)方法扩增转录因子GATA-6基因的7个外显子编码区及两侧部分内含子区,PCR产物纯化后ABI Genetic Analyzer 3100型DNA测序仪自动测序,所得结果与美国国立生物技术信息中心(NCBI)数据库中GATA-6基因序列进行比对,并且与健康对照组比较,观察转录因子GATA-6基因突变情况;以野生型pcDNA3.1-GATA-6为模板,用基因定点突变方法构建突变基因型真核表达载体GATA-6-G245R;野生型GATA-6、GATA-6-G245R和心房利钠因子荧光素酶(ANF luciferase)报告质粒共转染HEK 293T细胞,并以共转染的CMV-LacZ为内参,荧光素酶和半乳糖苷酶活性在转染24 h后用发光计测定并检测下游ANF-Luciferase报告基因的活性。结果在1例右心室双出口患儿中发现了转录因子GATA-6的错义突变,突变位于GATA-6基因第2外显子区c.733G>C,突变使第245位的甘氨酸(Gly)被精氨酸(Arg)取代(p.Gly245Arg,G245R)。pcDNA3.1(+)-GATA-6突变体真核表达质粒经酶切及正反2个方向测序验证构建成功;通过对luciferase荧光素酶报告基因活性的检测发现相比较野生型GATA-6和GATA-6-G245R突变基因转录活性下降。GATA-6-G245R与野生型GATA-6比较下降41.3%,二者比较差异有统计学意义(P<0.001)。结论转录因子GATA-6突变与单纯性圆锥动脉干畸形发生相关,转录因子GATA-6基因可能是单纯性心脏圆锥动脉干畸形患者的易感基因。 展开更多
关键词 单纯性圆锥动脉干畸形 转录因子GATA-6 基因突变 质粒 报告基因
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