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猪圆环病毒2型衣壳蛋白优势B细胞表位重组蛋白免疫原性研究 预览 认领
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作者 高雪 张辛铭 +4 位作者 肖星星 杨顺利 尚佑军 尹双辉 蔡建平 《动物医学进展》 北大核心 2020年第3期1-7,共7页
猪圆环病毒2型(PCV-2)衣壳蛋白(Cap)是研制基因工程疫苗和血清抗体检测方法的主要候选抗原。为筛选免疫原性强的Cap抗原表位,将定位在Cap上的6个B细胞线性表位的编码基因序列重新组合,命名为R1234、R1235、R1236、R2345、R2346和R3456,... 猪圆环病毒2型(PCV-2)衣壳蛋白(Cap)是研制基因工程疫苗和血清抗体检测方法的主要候选抗原。为筛选免疫原性强的Cap抗原表位,将定位在Cap上的6个B细胞线性表位的编码基因序列重新组合,命名为R1234、R1235、R1236、R2345、R2346和R3456,然后克隆至pET32a原核表达载体,转化到大肠埃希菌中进行诱导表达。通过对表达和纯化条件的优化,最终获得6个多抗原表位串联体的重组蛋白。Western blot和间接ELISA结果显示,6组重组表位蛋白均能被PCV-2阳性血清特异性识别,具有良好的反应原性。将其与完整Cap分别免疫Balb/c小鼠,检测免疫后血清中特异性抗体和细胞因子水平以及脾脏淋巴细胞中CD4^+和CD8^+T淋巴细胞的比例。结果表明,R2346组合刺激机体产生的特异性抗体和细胞因子IFN-γ、IL-4的水平明显高于其他组,脾脏淋巴细胞中CD4^+和CD8^+T淋巴细胞含量与对照组相比显著增加(P<0.05),说明该重组蛋白能够刺激体液免疫和细胞免疫反应。因此,筛选获得的R2346重组表位蛋白可以作为研制PCV-2多表位基因工程疫苗和血清抗体诊断方法的候选抗原,用于PCV-2的预防和控制工作中。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 衣壳蛋白 抗原表位 免疫原性
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3株人鼻病毒地方株的分离鉴定与VP4基因序列分析 认领
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作者 夏志强 王文军 +4 位作者 宋娟 曹天宇 薛庆凯 王衍海 韩俊 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期14-19,共6页
人鼻病毒(Human rhinovirus,HRV)是小儿呼吸道感染的重要病原体,具有多种基因型,定期对HRV进行病毒分离与基因序列分型,对了解病毒的变异情况具有重要价值。为了探讨HRV在安徽省蚌埠市上呼吸道感染患者咽拭子样本中的分离情况,并进行分... 人鼻病毒(Human rhinovirus,HRV)是小儿呼吸道感染的重要病原体,具有多种基因型,定期对HRV进行病毒分离与基因序列分型,对了解病毒的变异情况具有重要价值。为了探讨HRV在安徽省蚌埠市上呼吸道感染患者咽拭子样本中的分离情况,并进行分离株HRV的衣壳蛋白(VP)4基因序列分析,本研究选择安徽省蚌埠医学院第一附属医院诊断为上呼吸道感染患者的64例咽拭子标本,采用定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测HRV感染情况。将检测阳性标本感染H1-HeLa细胞进行病毒分离,对成功分离的HRV地方株进行HRV VP4基因的逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增,并采用MEGA软件进行序列分析。结果显示:qPCR检出HRV阳性6例,从中分离到3株HRV地方株。基因序列分析显示3株HRV地方株分别为HRV A型、HRV B型、HRV C型病毒株(NCBI识别序列号分别为MK820682、MK848595、MN146019)。MK820682株与HRV A2型参考株X02316株(奥地利株)属于同一分支;MK848595株与HRV B型参考株KY093602株(马来西亚株)属于同一分支;MN146019株单独处于一个分支。本研究成功从安徽省蚌埠市分离出3株HRV地方株,分别为HRV A型、HRV B型、HRV C型地方株,说明当地HRV存在频繁变异情况,要加强对当地的HRV防控管理。 展开更多
关键词 人鼻病毒(HRV) 衣壳蛋白 病毒分离 病毒鉴定
猪瘟疫苗的“前世今生” 预览 认领
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作者 朱萌 《中国动物保健》 2019年第1期13-14,共2页
猪瘟病毒猪瘟病毒(CSFV)属于黄病毒科,是世界范围内最重要的猪病病毒。分子特性:单正股RNA,结构蛋白有衣壳蛋白(C)和3种囊膜糖蛋白(E0、E1、E2)。E0蛋白是唯一分泌到CSFV感染细胞血清中的糖蛋白,在机体内可诱导产生中和抗体;E2则是引起... 猪瘟病毒猪瘟病毒(CSFV)属于黄病毒科,是世界范围内最重要的猪病病毒。分子特性:单正股RNA,结构蛋白有衣壳蛋白(C)和3种囊膜糖蛋白(E0、E1、E2)。E0蛋白是唯一分泌到CSFV感染细胞血清中的糖蛋白,在机体内可诱导产生中和抗体;E2则是引起猪产生针对猪瘟保护性抗体的主要抗原,在猪瘟诊断和新型疫苗的研究上都起着重要的作用。 展开更多
关键词 猪瘟疫苗 囊膜糖蛋白 黄病毒科 CSFV 猪瘟病毒 保护性抗体 分子特性 衣壳蛋白
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凡纳滨对虾白斑综合征病毒防治研究进展(一) 预览 认领
4
作者 刘敏 李色东 +2 位作者 张海涛 王卓铎 孙广文 《当代水产》 2019年第1期85-87,共3页
凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)俗称南美白对虾,原产地南美洲,具有广盐性、生长快、适合高密度养殖等特点,是世界三大对虾养殖品种之一,其养殖产量已达到我国养殖对虾总产量的80%以上(中国渔业统计年鉴,2017)。然而对虾养殖业养殖强... 凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)俗称南美白对虾,原产地南美洲,具有广盐性、生长快、适合高密度养殖等特点,是世界三大对虾养殖品种之一,其养殖产量已达到我国养殖对虾总产量的80%以上(中国渔业统计年鉴,2017)。然而对虾养殖业养殖强度的扩大和养殖环境的恶化给凡纳滨对虾病害的控制带来了极大的挑战。 展开更多
关键词 衣壳蛋白 肌动蛋白 对虾养殖业 白斑综合征病毒 研究进展
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与脑心肌炎病毒衣壳蛋白相互作用宿主蛋白的筛选 预览 认领
5
作者 谢晶莹 邓盈盈 +4 位作者 韩玉梅 张海霞 李向茸 李琼毅 冯若飞 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期20-24,共5页
应用Dual hunter酵母双杂交系统,以脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)衣壳蛋白VP1、VP2和VP3为诱饵,通过对BHK-21细胞cDNA文库的筛选,共得到24个互作蛋白。经过生物信息学分析,发现其功能包括蛋白结合、催化活性、转运活... 应用Dual hunter酵母双杂交系统,以脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)衣壳蛋白VP1、VP2和VP3为诱饵,通过对BHK-21细胞cDNA文库的筛选,共得到24个互作蛋白。经过生物信息学分析,发现其功能包括蛋白结合、催化活性、转运活性和结构分子活性;参与生物调节、细胞形成、细胞代谢、发育过程、细胞定位和免疫反应等多个生理过程,并参考文献资料分析这些蛋白在病毒复制中可能起到的作用,为研究EMCV感染及其致病机理提供参考。 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒 衣壳蛋白 宿主蛋白 筛选
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基于Cap蛋白研制的猪圆环病毒2型疫苗研究进展 预览 认领
6
作者 刘畅 陈艳 +1 位作者 颜秋 吕其壮 《动物医学进展》 北大核心 2019年第6期83-87,共5页
猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)是危害世界养猪业的主要疫病之一,主要由猪圆环病毒2型(PCV-2)引起。该病毒可引起感染猪免疫系统的破坏,造成严重的免疫抑制,继而引发多种病毒/细菌的混合感染与继发感染,给世界养猪业造成了巨大经济损失。近... 猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)是危害世界养猪业的主要疫病之一,主要由猪圆环病毒2型(PCV-2)引起。该病毒可引起感染猪免疫系统的破坏,造成严重的免疫抑制,继而引发多种病毒/细菌的混合感染与继发感染,给世界养猪业造成了巨大经济损失。近年来疫苗免疫接种是防控PCVAD的有效手段,由于衣壳蛋白(capside,Cap)是PCV-2的主要免疫保护性抗原,因此常被用作研制PCV-2基因工程疫苗的理想靶抗原。论文就PCV-2Cap蛋白基因工程疫苗的研究进展进行综述,以期为今后PCV-2新型疫苗的研究提供参考。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 疫苗 衣壳蛋白 免疫增强剂
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人乳头瘤病毒中和表位及抗体中和作用机制的研究进展 认领
7
作者 杨与柔 柳欣林 +2 位作者 王大宁 夏宁邵 李少伟 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期168-174,共7页
人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)是一类无包膜的小DNA病毒,其衣壳蛋白由主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2组成,持续感染HPV将引起宫颈癌和尖锐湿疣等多种疾病。HPV衣壳蛋白L1和L2中分布着大量中和表位,并具有较强的免疫原性,HPV... 人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)是一类无包膜的小DNA病毒,其衣壳蛋白由主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2组成,持续感染HPV将引起宫颈癌和尖锐湿疣等多种疾病。HPV衣壳蛋白L1和L2中分布着大量中和表位,并具有较强的免疫原性,HPV疫苗可诱导机体产生高滴度的中和抗体并阻碍病毒感染,进而预防宫颈癌等疾病的发生。分析阐述HPV衣壳蛋白中和表位及抗体的中和作用机理,有助于阐明HPV疫苗预防病毒感染的作用机制,为今后设计新一代保护范围更广的HPV疫苗奠定良好的基础。本文就HPV衣壳蛋白中和表位及抗体的中和作用机制进行综述。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒(HPV) 衣壳蛋白 中和表位 中和作用机制
A型塞内卡病毒VP2蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备 预览 认领 被引量:2
8
作者 张永宁 张舟 +4 位作者 诸明欣 梅琳 王彩霞 吴绍强 林祥梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第1期256-263,共8页
本研究旨在表达A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)的衣壳蛋白VP2,并制备其多克隆抗体。以SVA GD01/2017分离株RNA为模板,RT-PCR扩增VP2基因序列,并克隆至原核表达载体pET-30a(+)中构建重组质粒pET-30a-SVA-VP2。经测序鉴定后,将重组质... 本研究旨在表达A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)的衣壳蛋白VP2,并制备其多克隆抗体。以SVA GD01/2017分离株RNA为模板,RT-PCR扩增VP2基因序列,并克隆至原核表达载体pET-30a(+)中构建重组质粒pET-30a-SVA-VP2。经测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达。在非变性条件下,利用Ni-NTA琼脂糖树脂从菌体裂解液上清中纯化重组SVA VP2蛋白,并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用Protein A Sepharose CL-4B树脂从兔血清中亲和层析纯化多克隆抗体,并对其进行间接免疫荧光分析。结果显示,重组SVA VP2蛋白以可溶性和包涵体两种形式在大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞内进行表达,分子质量约为47ku;制备的兔抗VP2蛋白多克隆抗体效价高达1∶64 000,该多克隆抗体仅识别SVA,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、脑心肌炎病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病病毒等常见猪病原无交叉反应,表明制备的多克隆抗体具有良好的特异性。重组SVA VP2蛋白及其多克隆抗体的成功制备为猪塞内卡病毒病血清学检测方法的建立提供了良好的生物材料。 展开更多
关键词 A型塞内卡病毒 衣壳蛋白 原核表达 多克隆抗体
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硫酸乙酰肝素蛋白聚糖在人乳头瘤病毒感染中的作用 认领
9
作者 魏双萍 柳欣林 +2 位作者 王大宁 夏宁邵 李少伟 《中国病毒病杂志》 CAS 2018年第4期313-317,共5页
人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一类无包膜的小DNA双链病毒,其衣壳蛋白由主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2组成,高危型HPV的持续感染是诱发宫颈癌的主要原因。HPV吸附入胞伴随着由多种受体引起衣壳蛋白L1和L2的变构,其中衣... 人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一类无包膜的小DNA双链病毒,其衣壳蛋白由主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2组成,高危型HPV的持续感染是诱发宫颈癌的主要原因。HPV吸附入胞伴随着由多种受体引起衣壳蛋白L1和L2的变构,其中衣壳蛋白L1与细胞表面硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparan sulfate proteoglycans,HSPG)之间的多重相互作用是病毒入胞的关键。经与HSPG相互作用后,HPV衣壳蛋白L2暴露病毒与入胞受体结合位点,进而介导病毒内吞入胞。因此,阐述HPSG在HPV感染细胞中的作用有助于进一步阐明HPV感染机制及致病机制,为HPV治疗性疫苗的研究提供一定的理论基础。本文就HSPG在HPV感染细胞中的作用进行综述。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 衣壳蛋白 宫颈癌 硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG) 构象变化 受体
O型口蹄疫病毒衣壳蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化及电镜检测 认领
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作者 郭玉堃 郭婉莹 +2 位作者 明胜利 杨国宇 郭豫杰 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第7期1265-1271,共7页
本试验旨在表达出高可溶性的O型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白,并通过电镜检测,以期望形成纳米样颗粒。根据O型FMDV核酸序列,得到FMDVO/GER/Wup/82株的衣壳蛋白基因,并进行截短和优化,共133个氨基酸;同时,从肠道沙门菌(Salmone... 本试验旨在表达出高可溶性的O型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白,并通过电镜检测,以期望形成纳米样颗粒。根据O型FMDV核酸序列,得到FMDVO/GER/Wup/82株的衣壳蛋白基因,并进行截短和优化,共133个氨基酸;同时,从肠道沙门菌(Salmonella enterica)中分离得到135个氨基酸铁蛋白(Ferritin)基因片段,将O型FMDV衣壳蛋白与铁蛋白串联,设计并合成了FMDV衣壳蛋白-铁蛋白基因片段,命名为SeFntl6599。构建了SeFnt16599融合Grifin、GST、MBP、Sumo、Thioredoxin、7-crystallin、ArsC、PpiB、CeHSP17等9种不同可溶性标签的表达重组载体。分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导,SDS-PAGE电泳对融合蛋白的可溶性表达进行检测,筛选出高可溶性表达的SeFnt16599融合蛋白。重组蛋白通过Ni—NTA Agarose亲和纯化,进行电镜检测。结果表明,成功构建9种SeFnt16599表达载体;9个标签中,MBP与SeFnt16599蛋白相融合的可溶性表达效果最好,并获得了高纯度的MBP—SeFnt16599重组蛋白质;电镜结果显示,MBP—SeFnt16599形成了纳米样颗粒。本试验建立了稳定获得SeFnt16599重组蛋白质的试验方法,为FMDV衣壳蛋白新型结构疫苗的开发及后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 O型口蹄疫病毒 衣壳蛋白 蛋白 融合标签 可溶性 纳米颗粒
猪圆环病毒2型衣壳蛋白的可溶性表达 预览 认领 被引量:1
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作者 熊文丽 巫水根 +3 位作者 蔡振 蒋烨 严芬 吴元子 《西南民族大学学报:自然科学版》 CAS 2018年第2期133-137,共5页
利用原核表达系统构建猪圆环病毒2型病毒(PCV2)衣壳蛋白.首先构建具有谷胱甘肽转移酶标签的重组质粒p GEX4T1-ORF2,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,表达并纯化得到可溶性的融合蛋白.进一步通过纳米粒度仪及免疫印迹等技术,分别研... 利用原核表达系统构建猪圆环病毒2型病毒(PCV2)衣壳蛋白.首先构建具有谷胱甘肽转移酶标签的重组质粒p GEX4T1-ORF2,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,表达并纯化得到可溶性的融合蛋白.进一步通过纳米粒度仪及免疫印迹等技术,分别研究了PCV2蛋白的粒径分布以及免疫原性.实验结果表明,BL21-p GEX4T1-ORF2菌株构建成功,能够可溶性地表达猪圆环病毒2型病毒衣壳蛋白,且蛋白具有免疫原性. 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 衣壳蛋白 融合蛋白 可溶性表达
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鲤疱疹病毒3型T分离株主要免疫原性蛋白的鉴定 预览 认领
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作者 郑树城 王庆 +4 位作者 李莹莹 王英英 曾伟伟 任燕 石存斌 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2018年第2期68-72,共5页
为了鉴定鲤疱疹病毒3型(Cyprinid Herpesvirus 3,CyHV-3)主要免疫原性蛋白,研究采用CyHV-3-T分离株感染CCB细胞系,运用蔗糖密度梯度超速离心方法对CyHV-3进行纯化,纯化的病毒颗粒经SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色后,用锦鲤(Cyprinus ... 为了鉴定鲤疱疹病毒3型(Cyprinid Herpesvirus 3,CyHV-3)主要免疫原性蛋白,研究采用CyHV-3-T分离株感染CCB细胞系,运用蔗糖密度梯度超速离心方法对CyHV-3进行纯化,纯化的病毒颗粒经SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色后,用锦鲤(Cyprinus carpio haematopterus)抗CyHV-3阳性血清进行Western blotting分析和液相色谱串联质谱鉴定。结果表明,透射电镜下可观察到大量完整囊膜包裹或只有裸露核衣壳的CyHV-3颗粒,Western blotting结果显示抗CyHV-3阳性血清与多种病毒蛋白具有明显特异性免疫反应,质谱鉴定表明其中4种免疫原性蛋白分别为ORF92、ORF66、ORF72和ORF81,其中ORF66和ORF72为首次鉴定的具有免疫原性衣壳蛋白。本研究将为CyHV-3血清学诊断方法的建立、亚单位疫苗或DNA疫苗的研制提供更多候选抗原。 展开更多
关键词 鲤疱疹病毒3型 锦鲤疱疹病毒 免疫原性 免疫蛋白质组学 衣壳蛋白
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登革热病毒(DENV)包膜蛋白特异性人源抗体筛选与鉴定 预览 认领
13
作者 高博 郑晖 +1 位作者 李枢 谢联辉 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期920-926,共7页
目的 建立自外周血快速筛选识别登革热病毒衣壳的人源抗体的方法,从病毒感染者外周血记忆B细胞中筛选出特异性抗体并进行性质分析。方法 通过流式细胞术分选得到外周血中登革热病毒包膜蛋白特异性的单个记忆B细胞,结合高效单细胞PCR技... 目的 建立自外周血快速筛选识别登革热病毒衣壳的人源抗体的方法,从病毒感染者外周血记忆B细胞中筛选出特异性抗体并进行性质分析。方法 通过流式细胞术分选得到外周血中登革热病毒包膜蛋白特异性的单个记忆B细胞,结合高效单细胞PCR技术获得抗体基因序列,对重组表达的单克隆抗体进行结合活性及中和活性检测。结果 成功筛选到识别DENV-1包膜蛋白的6株人源单克隆抗体,其中4株抗体均具有很强的结合活性以及中和活性。结论 成功的通过流式细胞术对DENV特异性记忆B细胞进行分选,并结合单细胞PCR技术,实现了对DENV特异性人源单克隆抗体的高效筛选。通过该平台有希望筛选得到DENV的广谱中和抗体,用于登革热的预防和治疗。 展开更多
关键词 登革热病毒 衣壳蛋白 人源抗体 流式细胞术 单细胞PCR
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O型口蹄疫病毒固相阻断ELISA抗体检测方法研究 预览 认领
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作者 张杰 苗银萍 +2 位作者 娄亚坤 任宝红 赵林萍 《养殖与饲料》 2018年第9期10-12,共3页
以VP1蛋白为包被抗原,采用方阵滴定法确定抗原最佳包被浓度,最终确定固相阻断ELISA最适反应条件以及判定阈值,建立O型口蹄疫病毒衣壳蛋白抗体的固相阻断ELISA检测方法,并对该检测方法进行考核。试验结果表明,最佳抗原包被浓度为0.062 5... 以VP1蛋白为包被抗原,采用方阵滴定法确定抗原最佳包被浓度,最终确定固相阻断ELISA最适反应条件以及判定阈值,建立O型口蹄疫病毒衣壳蛋白抗体的固相阻断ELISA检测方法,并对该检测方法进行考核。试验结果表明,最佳抗原包被浓度为0.062 5μg/m L;兔抗血清最佳工作浓度为16 000倍稀释,酶标二抗为8 000倍稀释;抑制率大于20%为阳性,抑制率小于20%为阴性;该方法与常见病原体无交叉反应,特异性和敏感性好,可以检测O型口蹄疫病毒VP1抗体,评价口蹄疫疫苗的免疫效果。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 衣壳蛋白 固相阻断 ELISA
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对虾病毒IHHNV衣壳蛋白的克隆表达及新型双抗夹心ELISA的高效检测 预览 认领
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作者 于衬 刘国胜 +2 位作者 杨茗涵 杨丽容 陈明谅 《应用海洋学学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期418-425,共8页
通过利用分子生物学手段克隆IHHNV衣壳蛋白基因并构建原核表达载体,筛选抗原特性好的多肽免疫兔以制备高效的特异性IHHNV多克隆抗体,最终建立高效的检测对虾IHHNV的新型双抗夹心ELISA方法.实验结果表明该方法成功表达了对虾病毒IHHNV衣... 通过利用分子生物学手段克隆IHHNV衣壳蛋白基因并构建原核表达载体,筛选抗原特性好的多肽免疫兔以制备高效的特异性IHHNV多克隆抗体,最终建立高效的检测对虾IHHNV的新型双抗夹心ELISA方法.实验结果表明该方法成功表达了对虾病毒IHHNV衣壳蛋白基因的抗原多肽,并制备出了高灵敏性的多克隆抗体.将抗原多肽及多克隆抗体用于ELISA的检测,抗体的效价在1∶12 800以上,最低可检测到1 pg的抗原蛋白,表明已成功建立高效的双抗夹心ELISA方法,对于对虾的海水养殖及IHHNV病毒性疾病的防控具有重要的参考价值. 展开更多
关键词 海洋生物学 传染性皮下及造血组织坏死病毒 原核表达 衣壳蛋白 多克隆抗体 ELISA
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甘蔗花叶病毒衣壳蛋白的原核表达及抗血清制备 预览 认领
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作者 许小洁 张继武 +3 位作者 徐德坤 殷复伟 田延平 李向东 《山东农业科学》 2018年第8期106-109,共4页
将甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)第Ⅰ组分离物DWK1和第Ⅳ组分离物DWK2的衣壳蛋白(coat protein,CP)基因分别克隆到原核表达载体pEHISTEV,得到重组质粒pEHISTEV-SCMV-Ⅰ-CP和pEHISTEV-SCMV-Ⅳ-CP。将两个重组质粒转化... 将甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)第Ⅰ组分离物DWK1和第Ⅳ组分离物DWK2的衣壳蛋白(coat protein,CP)基因分别克隆到原核表达载体pEHISTEV,得到重组质粒pEHISTEV-SCMV-Ⅰ-CP和pEHISTEV-SCMV-Ⅳ-CP。将两个重组质粒转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导,均表达出分子量为38 kD的融合蛋白。切胶回收融合蛋白,免疫新西兰长耳兔5次,获得了SCMV-ⅠCP和SCMV-ⅣCP的多克隆抗体。间接ELISA结果表明,两种血清的效价均达到1∶8192。Western Blot结果表明,利用SCMV-ⅠCP制备的抗血清与DWK1反应更强,而利用SCMV-ⅣCP制备的抗血清与DWK2反应更强。本研究为SCMV检测及CP功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 甘蔗花叶病毒 衣壳蛋白 原核表达 抗血清 检测
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马铃薯Y病毒衣壳蛋白的原核表达及抗血清制备 预览 认领 被引量:1
17
作者 王玉 黄显德 +4 位作者 魏代福 温亮 杨举田 陈秀斋 田延平 《山东农业科学》 2018年第1期111-114,共4页
采用RT-PCR方法扩增马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)衣壳蛋白(coat protein,CP)基因,将其连接到原核表达载体pEHISTEV上,获得重组质粒pEHISTEV-PVY-CP,转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导后,可以表达出分子量为35 k D的融合蛋白。切... 采用RT-PCR方法扩增马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)衣壳蛋白(coat protein,CP)基因,将其连接到原核表达载体pEHISTEV上,获得重组质粒pEHISTEV-PVY-CP,转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导后,可以表达出分子量为35 k D的融合蛋白。切胶回收融合蛋白,免疫新西兰大耳兔制备PVY CP抗血清。间接ELISA结果表明,该抗血清的效价为1∶16384,Western blot分析表明该抗血清只与感染PVY的普通烟植株有特异性反应,而与健康普通烟和感染PVX的普通烟植株无反应。本研究为PVY的血清学检测以及早期预警奠定了基础。 展开更多
关键词 马铃薯Y病毒 衣壳蛋白 原核表达 抗血清制备
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猪圆环病毒2型重组衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及免疫原性分析 预览 认领
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作者 徐铮 马晓莉 +5 位作者 林彦星 董建国 王磊 刘燕玲 刘清神 宋长绪 《华南农业大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期1-5,共5页
【目的】在昆虫细胞表达猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白(Cap),并对表达的重组蛋白*Cap进行免疫原性分析。【方法】将含有PCV2-ORF2基因的重组杆状病毒质粒Bacmid-ORF2转染昆虫细胞进行蛋白表达试验,再用纯化的*Cap和质粒pcDNA3.1-O... 【目的】在昆虫细胞表达猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白(Cap),并对表达的重组蛋白*Cap进行免疫原性分析。【方法】将含有PCV2-ORF2基因的重组杆状病毒质粒Bacmid-ORF2转染昆虫细胞进行蛋白表达试验,再用纯化的*Cap和质粒pcDNA3.1-ORF2分别免疫小鼠,比较二者的免疫效果。【结果】由PCV2-ORF2基因编码的Cap结构蛋白在昆虫细胞中正确表达,相对分子质量约为32 000。*Cap能够被PCV2阳性血清所识别,具有良好的抗原性。*Cap免疫组在细胞免疫水平及体液免疫水平的免疫效果均优于pcDNA3.1-ORF2免疫组。【结论】重组蛋白*Cap可替代全病毒,具有PCV2疫苗潜在的应用价值。研究结果为后续的PCV2病毒分子诊断、亚单位疫苗以及分子生物学等研究奠定试验基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 衣壳蛋白 重组杆状病毒质粒 表达 免疫
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OYDV衣壳蛋白表达及其单克隆抗体分析 认领 被引量:1
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作者 王永志 万千 +5 位作者 李小宇 张春雨 刘宝泉 李忠鹏 苏颖 周雪平 《东北农业科学》 北大核心 2018年第2期26-29,共4页
洋葱黄矮病毒(Onion yellow dwarf virus,OYDV)是危害洋葱质量和产量的主要病毒之一。本研究从吉林省农安县的分蘖洋葱种植区分离到一株OYDV,通过RT-PCR克隆OYDV衣壳蛋白(coat protein,cp)基因,构建重组质粒pET28-OYDVcp,转化大肠杆... 洋葱黄矮病毒(Onion yellow dwarf virus,OYDV)是危害洋葱质量和产量的主要病毒之一。本研究从吉林省农安县的分蘖洋葱种植区分离到一株OYDV,通过RT-PCR克隆OYDV衣壳蛋白(coat protein,cp)基因,构建重组质粒pET28-OYDVcp,转化大肠杆菌Rosetta,经诱导后表达并纯化,Western-blot鉴定为OYDV cp蛋白。与实验室制备的9株大豆花叶病毒单克隆抗体进行反应,得出其中3株单克隆抗体(2D3、4F9、4G12)能够识别OYDV。综上,本研究首次从分蘖洋葱上分离并鉴定OYDV,对OYDV cp基因进行原核表达,获得重组蛋白,并且鉴定到能够识别OYDV的单克隆抗体3株,为分蘖洋葱病毒检测提供了抗体材料。 展开更多
关键词 洋葱黄矮病毒 衣壳蛋白 单克隆抗体
表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白的重组猪痘病毒的构建及鉴定 预览 认领 被引量:2
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作者 钟罗华 邓舜洲 +4 位作者 胡杨 徐昌满 罗锋 张文波 陈松昌 《中国畜牧兽医》 北大核心 2018年第2期279-290,共12页
为探索猪痘病毒(swinepox virus,SWPV)作为猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)疫苗载体的可行性,本试验以痘苗病毒启动子P11启动绿色荧光蛋白筛选标记,猪痘病毒TK基因为外源基因的插入位点,P28、P7.5启动子启动PCV2 ORF... 为探索猪痘病毒(swinepox virus,SWPV)作为猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)疫苗载体的可行性,本试验以痘苗病毒启动子P11启动绿色荧光蛋白筛选标记,猪痘病毒TK基因为外源基因的插入位点,P28、P7.5启动子启动PCV2 ORF2基因,以猪痘病毒JX20G株为亲本病毒,采用同源重组技术分别构建了两株表达PCV2衣壳蛋白的重组猪痘病毒rSWPV11-28C和rSWPV11-7.5C。结果显示,重组猪痘病毒rSWPV11-28C和rSWPV11-7.5C均成功表达了PCV2衣壳蛋白,表达的蛋白能与PCV2单克隆抗体6E12发生特异性反应;痘苗病毒启动子P28的启动效果明显优于P7.5,P28适合用于启动目的基因;利用重组猪痘病毒制备的PCV2灭活疫苗免疫小鼠后,rSWPV11-28C疫苗组的PCV2抗体水平与某PCV2商品疫苗相当,该重组病毒的成功构建为PCV2相关疾病及其他疫病在猪群中的防控提供了新的方向。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型(PCV2) 衣壳蛋白 重组猪痘病毒
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