期刊文献+
共找到4,401篇文章
< 1 2 221 >
每页显示 20 50 100
绿色荧光蛋白结合蛋白的表达纯化与鉴定 预览
1
作者 胡业辉 李益鹏 +3 位作者 王紫英 陈勖 任真 丁澦 《复旦学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期183-190,共8页
绿色荧光蛋白(GFP)及其衍生物已经被广泛应用于生物化学和分子生物学研究,其纳米抗体(GBP)也已在近期被鉴定,但GBP大规模表达及纯化流程优化尚未见报道,并且GBP与不同荧光蛋白之间的亲和力尚未被测定.我们首先构建了GBP基因(GBP1)的原... 绿色荧光蛋白(GFP)及其衍生物已经被广泛应用于生物化学和分子生物学研究,其纳米抗体(GBP)也已在近期被鉴定,但GBP大规模表达及纯化流程优化尚未见报道,并且GBP与不同荧光蛋白之间的亲和力尚未被测定.我们首先构建了GBP基因(GBP1)的原核表达系统,然后通过Ni-NTA亲和层析和MonoQ阴离子交换层析纯化,每升菌液能够得到超过43mg、纯度超过95%的重组GBP1蛋白.我们通过MALDI-TOF/TOF质谱法测定纯化的GBP1的精确分子量,通过微量热泳动(MST)和等温滴定量热(ITC)实验检测GBP1与7种不同来源荧光蛋白的亲和力.结果显示GBP1特异性地与源自Aequoreavictoria的荧光蛋白及其衍生荧光蛋白相互作用,与RFP和ZoanthusGFP等无相互作用.GBP1与EGFP和sfGFP的亲和力最高,与YPet和T-Sapphire的亲和力稍弱,与CyPet的亲和力最低. 展开更多
关键词 荧光蛋白 绿色荧光蛋白结合蛋白 纳米抗体 蛋白表达 蛋白纯化 微量热泳动
在线阅读 免费下载
锌指蛋白545在结直肠癌中的表达及其临床意义 预览
2
作者 潘烽平 李彦 +1 位作者 张明明 陈一鹏 《浙江医学》 CAS 2019年第7期640-642,648,I0004共5页
目的 探讨锌指蛋白545(ZNF545)在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法 采用qRT-PCR法检测32对结直肠癌组织及癌旁正常组织中(来自本院行结直肠癌根治术的32例患者)ZNF545 mRNA相对表达量;进一步采用免疫组化法检测136对结直癌组织及... 目的 探讨锌指蛋白545(ZNF545)在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法 采用qRT-PCR法检测32对结直肠癌组织及癌旁正常组织中(来自本院行结直肠癌根治术的32例患者)ZNF545 mRNA相对表达量;进一步采用免疫组化法检测136对结直癌组织及配对癌旁正常组织(来自组织芯片)中ZNF545蛋白表达,并分析这一表达与患者临床特征及生存预后的关系。结果 结直肠癌组织中ZNF545 mRNA相对表达量明显低于配对癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结直肠癌组织中ZNF545蛋白低表达(免疫组化评分≤3分)率为65.4%,明显高于配对癌旁正常组织的25.7%(P<0.05);ZNF545蛋白低表达与患者肿瘤直径、浸润深度、TNM分期相关(均P<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤位置、分化程度、淋巴结转移无关(均P >0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,与ZNF545蛋白高表达的结直肠癌患者比较,ZNF545蛋白低表达患者的5年生存率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ZNF545在结直肠癌组织中呈低表达,与患者肿瘤直径、浸润深度、TNM分期及生存预后有关。 展开更多
关键词 结直肠癌 锌指蛋白545 基因表达 蛋白表达 预后
在线阅读 免费下载
蓝舌病I型病毒VP5蛋白的表达纯化及免疫原性分析 预览
3
作者 陈玉梅 党伟华 +5 位作者 刘燕凯 周景明 刘红亮 郭亚楠 张改平 王爱萍 《中国动物检疫》 CAS 2019年第3期69-74,83共7页
为分析蓝舌病I型病毒(BTV-1)VP5蛋白的免疫原性,本研究构建了载体PET-28a-VP5并转化BL21(DE3),然后进行IPTG诱导表达,以及SDS-PAGE和Western-blot分析。结果显示,重组VP5蛋白相对分子质量约为62kDa,与预期结果一致。进一步优化条件,发现... 为分析蓝舌病I型病毒(BTV-1)VP5蛋白的免疫原性,本研究构建了载体PET-28a-VP5并转化BL21(DE3),然后进行IPTG诱导表达,以及SDS-PAGE和Western-blot分析。结果显示,重组VP5蛋白相对分子质量约为62kDa,与预期结果一致。进一步优化条件,发现IPTG为0.2mmol/L、温度为25℃、诱导6h时,重组蛋白在上清中表达量最高,通过Ni柱纯化获得的重组蛋白纯度约为75%。将纯化后的重组蛋白VP5分别以40μg/只和20μg/只免疫Balb/c小鼠,同时设置PBS为阴性对照,对三免后血清进行间接ELISA检测,发现高、低剂量免疫小鼠均能产生针对VP5蛋白的特异性抗体。用灭活BTV-1进行DOT-ELISA检测,发现其能与VP5蛋白免疫的小鼠血清发生特异性反应,说明利用大肠杆菌表达的重组蛋白VP5具有良好的免疫特性,这为进一步开展BTV相关研究奠定了基础。 展开更多
关键词 蓝舌病1型病毒 VP5蛋白 蛋白表达 蛋白纯化 条件优化 免疫分析
在线阅读 下载PDF
Rab27B和HPV16/18蛋白质在宫颈鳞癌表达的意义 预览
4
作者 辛慧珍 潘璐彤 +8 位作者 齐军 热衣汗古丽·吾不力 陈巧 石敏华 张静 靳馥源 张春贺 李洪涛 潘泽民 《石河子大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2019年第2期223-228,共6页
目的通过免疫组织化学实验探讨Rab27B和HPV16/18蛋白质在宫颈鳞癌组织中表达的意义。方法收集慢性宫颈炎组织和宫颈鳞癌组织连续石蜡切片,采用免疫组织化学实验检测慢性宫颈炎组织和宫颈鳞癌组织中HPV16/18和Rab27B蛋白质的表达水平。... 目的通过免疫组织化学实验探讨Rab27B和HPV16/18蛋白质在宫颈鳞癌组织中表达的意义。方法收集慢性宫颈炎组织和宫颈鳞癌组织连续石蜡切片,采用免疫组织化学实验检测慢性宫颈炎组织和宫颈鳞癌组织中HPV16/18和Rab27B蛋白质的表达水平。通过统计学分析分别研究HPV16/18和Rab27B蛋白质在宫颈鳞癌组织的表达意义。结果HPV16/18在慢性宫颈炎组织中感染率为13.5%,而在宫颈鳞癌组织中为46.2%,差异有统计学意义(P<0.05)。Rab27B蛋白质表达水平在慢性宫颈炎组织中,中、强阳性表达为32.4%。在宫颈鳞癌组织中,中、强阳性表达为63.3%。两者比较具有统计学意义(P<0.05)。宫颈鳞癌组织中Rab27B表达水平高,HPV16/18表达水平也高;慢性宫颈炎组织中Rab27B表达水平较低,HPV16/18表达水平也低(P<0.05)。结论宫颈鳞癌组织中Rab27B蛋白质的高表达结合HPV16/18蛋白质的表达,可能和宫颈鳞癌的发生和发展相关。 展开更多
关键词 Rab27B蛋白 HPV16/18蛋白 宫颈鳞癌 免疫组织化学 蛋白表达
在线阅读 免费下载
大鼠肝癌细胞Mael、Ddx4 mRNA及蛋白的表达及意义 预览
5
作者 古丽米热·依米提 王延蛟 斯坎德尔·白克力 《山东医药》 CAS 2019年第11期53-55,共3页
目的 检测大鼠肝癌细胞中蛋白质漩涡同系物基因(Mael)和生殖细胞特异性蛋白4(Ddx4)的表达变化,探讨Mael和Ddx4基因在肝癌发病中的意义。方法 将大鼠肝癌细胞CBRH-7919作为肝癌细胞组,正常肝细胞BRL作为正常肝细胞组,采用qRT-PCR法检测M... 目的 检测大鼠肝癌细胞中蛋白质漩涡同系物基因(Mael)和生殖细胞特异性蛋白4(Ddx4)的表达变化,探讨Mael和Ddx4基因在肝癌发病中的意义。方法 将大鼠肝癌细胞CBRH-7919作为肝癌细胞组,正常肝细胞BRL作为正常肝细胞组,采用qRT-PCR法检测Mael、Ddx4基因mRNA表达,采用Westernblotting法检测Mael、Ddx4蛋白表达。结果 肝癌细胞组Mael、Ddx4mRNA及蛋白表达均高于正常肝细胞组(P均<0.01)。结论 大鼠肝癌细胞中Mael、Ddx4基因和蛋白表达均明显增高。 展开更多
关键词 蛋白质漩涡同系物 生殖细胞特异性蛋白 肝癌 MRNA转录 蛋白表达 大鼠
在线阅读 下载PDF
淋巴细胞活化基因-3蛋白表达与生物信息学分析
6
作者 吴鹏 尹欣悦 陈创夫 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第17期16-19,182共5页
为了研究淋巴细胞活化基因-3蛋白的生物学特性,试验采用PCR方法扩增淋巴细胞活化基因-3胞外区序列,构建重组质粒,将重组质粒转染至HEK293感受态细胞中表达目的蛋白,并对目的蛋白进行SDS-PAGE及Western-blot检测,通过ProtParam软件分析... 为了研究淋巴细胞活化基因-3蛋白的生物学特性,试验采用PCR方法扩增淋巴细胞活化基因-3胞外区序列,构建重组质粒,将重组质粒转染至HEK293感受态细胞中表达目的蛋白,并对目的蛋白进行SDS-PAGE及Western-blot检测,通过ProtParam软件分析淋巴细胞活化基因-3蛋白性质,通过SWISS-MODEL软件预测蛋白质结构。结果表明:PCR法成功扩增出目的条带,大小约为1 430 bp,1. 0%琼脂糖凝胶电泳显示酶切成功;经10%SDS-PAGE凝胶电泳分析,在68 ku处出现目的条带,目的蛋白成功表达;纯化后的蛋白质经Western-blot检测证明具有特异性;目的蛋白具有22种可能的折叠形态,理论等电点pI值为9. 08,蛋白质结构不稳定,亲水性较差。说明试验成功表达了淋巴细胞活化基因-3蛋白。 展开更多
关键词 淋巴细胞活化基因-3蛋白 瞬时转染 HEK293细胞 蛋白表达 蛋白结构
疏肝健脾饮对乳腺癌癌前病变裸鼠淋巴管生成的影响研究 预览
7
作者 李斐斐 刘晓菲 +2 位作者 张洋 王圆圆 韩笑 《现代中西医结合杂志》 CAS 2019年第21期2292-2296,共5页
目的研究疏肝健脾饮对乳腺癌癌前病变裸鼠淋巴管生成途径COX-2/VEGF通路中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3)、环氧合酶-2(COX-2)蛋白及mRNA表达的影响,探讨疏肝健脾饮对乳腺癌癌前病变淋巴管生成的干预作用... 目的研究疏肝健脾饮对乳腺癌癌前病变裸鼠淋巴管生成途径COX-2/VEGF通路中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3)、环氧合酶-2(COX-2)蛋白及mRNA表达的影响,探讨疏肝健脾饮对乳腺癌癌前病变淋巴管生成的干预作用机制,寻找中药复方抑制淋巴管生成的作用靶点。方法取120只BALB/c-nudemice裸鼠,采用乳腺原位移植MCF-10AT细胞株方法建立癌前病变模型,建模成功后随机分成6组,每组20只。模型对照组裸鼠予以0.9%氯化钠溶液灌胃,疏肝健脾饮组、疏肝理气组、健脾化痰组、活血化瘀组分别予以相应中药制剂灌胃,均1次/d;他莫昔芬组给予他莫昔芬腹腔注射,每周2次。各组均连续干预9周。至第9周周末处死各组裸鼠,分别采用Western-blot、RT-PCR技术检测肿瘤组织中VEGF-C、VEGFR-3、COX-2蛋白及mRNA表达情况。结果疏肝健脾饮组、疏肝理气组、活血化瘀组、他莫昔芬组VEGF-C蛋白及mRNA相对表达量均明显低于模型对照组(P均<0.05),且疏肝健脾饮组均明显低于活血化瘀组(P均<0.05)。疏肝健脾饮组、健脾化痰组、他莫昔芬组VEGFR-3蛋白相对表达量均明显低于模型对照组(P均<0.05),且疏肝健脾饮组及他莫昔芬组均明显低于疏肝理气组(P均<0.05);疏肝健脾饮组、疏肝理气组、他莫昔芬组COX-2蛋白相对表达量均明显低于模型对照组(P均<0.05),且疏肝健脾饮组及他莫昔芬组均明显低于健脾化痰组及活血化瘀组(P均<0.05)。疏肝健脾饮组、疏肝理气组、他莫昔芬组VEGFR-3mRNA相对表达量均明显低于模型对照组(P均<0.05),且疏肝健脾饮组和他莫昔芬组明显低于活血化瘀组(P均<0.05);疏肝健脾饮组、他莫昔芬组COX-2mRNA相对表达量均明显低于模型对照组和疏肝理气组(P均<0.05)。疏肝健脾饮组与他莫昔芬组VEGF-C、VEGFR-3、COX-2蛋白及mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论疏肝健� 展开更多
关键词 疏肝健脾饮 乳腺癌癌前病变 淋巴管生成 蛋白表达 基因表达
在线阅读 下载PDF
METTL3在结直肠癌组织中的表达及其临床意义 预览
8
作者 黄忠炎 王剑飞 +1 位作者 孙金杰 田洋洋 《浙江医学》 CAS 2019年第12期1308-1311,共4页
目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法收集67例病理检查诊断为结直肠癌患者的结直肠癌组织、配对癌旁正常组织及肝脏、淋巴结转移组织,采用免疫组化技术,检测METTL3蛋白的表达情况,RT-PCR技术检测METTL... 目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法收集67例病理检查诊断为结直肠癌患者的结直肠癌组织、配对癌旁正常组织及肝脏、淋巴结转移组织,采用免疫组化技术,检测METTL3蛋白的表达情况,RT-PCR技术检测METTL3 mRNA相对表达量情况。通过ROC曲线分析确定METTL3 mRNA相对表达量的截断值,以此分析METTL3 mRNA的表达与各临床病理因素之间的关系,并分析METTL3 mRNA的表达水平与结直肠癌患者生存预后的关系。结果相比于正常组织,METTL3 mRNA在结直肠癌组织中表达明显升高(P<0.05),且METTL3 mRNA相对表达量的截断值为2.85。免疫组化结果显示,与正常结直肠组织相比,METTL3蛋白在结直肠癌组织中核染明显。METTL3 mRNA的高表达(相对表达量>2.85)与淋巴结转移密切相关(P<0.01),与性别、年龄、肿瘤大小、组织分化、远处转移、侵袭深度无相关(均P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,与METTL3 mRNA低表达的结直肠癌患者比较,METTL3 mRNA高表达患者在随访的4年间生存率明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论METTL3在结直肠癌组织中呈高表达,与患者淋巴结转移及生存预后有关。 展开更多
关键词 结直肠癌 甲基转移酶样3 基因表达 蛋白表达 预后
在线阅读 免费下载
灯盏乙素对Chang Liver细胞中CYP2C9的影响 预览
9
作者 丁未尧 陈丽平 赖泳 《大理大学学报》 CAS 2019年第2期5-9,共5页
目的:探讨灯盏乙素对Chang Liver细胞中CYP2C9表达的影响。方法:采用MTT(噻唑蓝)法检测灯盏乙素对Chang Liver细胞增殖活力的影响,采用RT-PCR和Western-blot法分别检测细胞中CYP2C9 mRNA和蛋白的相对表达量。结果:灯盏乙素对Chang Live... 目的:探讨灯盏乙素对Chang Liver细胞中CYP2C9表达的影响。方法:采用MTT(噻唑蓝)法检测灯盏乙素对Chang Liver细胞增殖活力的影响,采用RT-PCR和Western-blot法分别检测细胞中CYP2C9 mRNA和蛋白的相对表达量。结果:灯盏乙素对Chang Liver细胞增殖有抑制作用,呈浓度依赖性,半数抑制率(IC50)为1.87 mmol/L。RT-PCR结果表明,与DMSO(二甲基亚砜)组比,药物浓度为5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L时,细胞CYP2C9 mRNA表达量显著下降(P<0.05)。Western-blot结果表明,与DMSO组比较,药物浓度为20.0、40.0 μmol/L时细胞CYP2C9 蛋白表达显著减少(P<0.05)。结论:灯盏乙素对Chang Liver细胞中CYP2C9 mRNA和蛋白的表达有不同程度的抑制作用。 展开更多
关键词 灯盏乙素 CYP2C9 MRNA表达 蛋白表达 CHANG Liver细胞
在线阅读 免费下载
改善心肌肌质网钙泵防治慢性心力衰竭的中医药研究进展 预览
10
作者 李惠玲 贾美君 刘永明 《中国医药导报》 CAS 2019年第4期55-58,共4页
慢性心力衰竭(CHF)是多种心血管疾病发展的终末阶段,发病率及病死率高,治疗费用昂贵。心肌细胞肌质网钙泵(SERCA2a)表达及活性异常是CHF发生、发展的重要病理机制。AAV1/SERCA2a转基因治疗CHF临床试验结果不尽如人意,研究者重新提出“... 慢性心力衰竭(CHF)是多种心血管疾病发展的终末阶段,发病率及病死率高,治疗费用昂贵。心肌细胞肌质网钙泵(SERCA2a)表达及活性异常是CHF发生、发展的重要病理机制。AAV1/SERCA2a转基因治疗CHF临床试验结果不尽如人意,研究者重新提出“应充分重视提高内源性心肌SERCA2a水平及活性的药物筛选及研发”。中医药治疗CHF历史悠久,效果显著。CHF在中医学中可归属于“心悸”“喘证”“水肿”等范畴。大量研究表明中药复方、单味中药、中药单体能有效改善内源性心肌SERCA2a表达水平及活性从而起到防治CHF的作用。 展开更多
关键词 慢性心力衰竭 肌质网钙泵 蛋白表达 基因表达 活性
在线阅读 下载PDF
干眼患者炎症因子表达水平及干眼相关危险因素研究 预览
11
作者 王佳娣 《中国实验诊断学》 2019年第4期667-668,共2页
随着人们生活环境及方式的改变,用眼时间增加,干眼症发病率明显上升,并且趋于低龄化[1]。本文采用免疫组化检测干眼症患者血清及泪液中IL-6、IL-1β和TNF-α蛋白表达水平,以便指导临床诊断、预防、改善预后。1资料与方法1.1一般资料选... 随着人们生活环境及方式的改变,用眼时间增加,干眼症发病率明显上升,并且趋于低龄化[1]。本文采用免疫组化检测干眼症患者血清及泪液中IL-6、IL-1β和TNF-α蛋白表达水平,以便指导临床诊断、预防、改善预后。1资料与方法1.1一般资料选择我院2017年1-6月在眼科就诊治疗的52例(104眼)干眼患者,均诊断明确。 展开更多
关键词 干眼患者 危险因素 TNF IL 蛋白表达 干眼症 炎症因子 表达水平
在线阅读 下载PDF
重组SSB蛋白表达、鉴定及评价 预览
12
作者 杜琴 卢小岚 +7 位作者 王强 汪光蓉 罗文依 王舒琪 姚丽华 张国元 刘剑平 王东生 《重庆医学》 CAS 2019年第14期2438-2442,共5页
目的构建SSB蛋白原核表达质粒,在大肠埃希菌中诱导表达后进行纯化。方法以Hela细胞提取RNA后逆转录的cDNA为模板,利用聚合酶链反应(PCR)扩增出带酶切位点BamHⅠ和XhoⅠ的人SSB蛋白基因序列,经酶切后插入PET41a质粒中,构建成GST-SSB-6*Hi... 目的构建SSB蛋白原核表达质粒,在大肠埃希菌中诱导表达后进行纯化。方法以Hela细胞提取RNA后逆转录的cDNA为模板,利用聚合酶链反应(PCR)扩增出带酶切位点BamHⅠ和XhoⅠ的人SSB蛋白基因序列,经酶切后插入PET41a质粒中,构建成GST-SSB-6*His-pet41a重组表达质粒,转化入感受态大肠埃希菌OverExpress C41(DE3)中,经异丙基β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,利用C端的His标签(Histag)进行Ni-树脂柱亲和层析纯化,SDS-PAGE鉴定重组蛋白表达形式,蛋白印迹法(WB)鉴定重组蛋白的免疫原性,酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定其免疫反应性和特异性。结果 PCR扩增获得目的基因,菌落PCR示重组表达质粒构建成功,转化感受态OverExpress C41(DE3)后经诱导有高效表达,SDS-PAGE显示GST-SSB-6*His重组蛋白为上清可溶性表达,WB示重组蛋白有足够的免疫原性,能与外周血中的抗SSB抗体发生特异性反应,特异性达100%。结论成功构建了GST-SSB-6*His-PET41a重组表达质粒,经诱导表达后可纯化出目的蛋白,为进一步建立应用于国产仪器的全自动定量检测抗SSB自身抗体的磁微粒化学发光试剂,奠定了基础。 展开更多
关键词 SSB 重组质粒 蛋白表达 蛋白鉴定
在线阅读 下载PDF
重组RPLP0蛋白的表达、鉴定及评价 预览
13
作者 卢小岚 王强 +6 位作者 杜琴 梁骑 罗文依 王舒琪 张国元 刘剑平 王东生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第15期1857-1861,共5页
目的:构建重组RPLP0蛋白的原核表达载体并诱导表达,对表达产物进行纯化鉴定及评价。方法:设计重组RPLP0蛋白基因,经PCR扩增获得目的基因;在其5′和3′端引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点,构建pET41a-GST-RPLP0-6*His融合基因表达载体;对该质... 目的:构建重组RPLP0蛋白的原核表达载体并诱导表达,对表达产物进行纯化鉴定及评价。方法:设计重组RPLP0蛋白基因,经PCR扩增获得目的基因;在其5′和3′端引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点,构建pET41a-GST-RPLP0-6*His融合基因表达载体;对该质粒载体进行酶切鉴定和测序验证,将鉴定正确的重组质粒载体转化至大肠杆菌并以IPTG诱导表达;经过尿素溶液纯化及复性以后得到复性的重组RPLP0蛋白;采用Western blot分析重组RPLP0蛋白的免疫原性;采用ELISA法对其抗体结合性、特异性进行分析。结果:酶切及测序结果显示,本实验成功克隆出重组RPLP0蛋白基因,将获得的目的基因构建至原核表达载体pET41a,经IPTG诱导后成功表达目的蛋白。SDS-PAGE电泳结果显示重组RPLP0蛋白为包涵体表达蛋白,分子量约为61 kD。Western blot检测显示重组RPLP0蛋白具有完全的免疫原性;ELISA检测显示重组RPLP0蛋白具有良好的抗体结合性和特异性。结论:表达、鉴定并分析了重组RPLP0蛋白,为深入研究RPLP0蛋白的功能及应用奠定基础。 展开更多
关键词 RPLP0 重组质粒 重组蛋白 蛋白表达
在线阅读 下载PDF
Cry1Ia和Cry2Ab融合蛋白的表达 预览
14
作者 郭小琴 钱红梅 +3 位作者 郭俊佩 史宗勇 高建华 王兴春 《山西农业大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2019年第3期101-105,共5页
[目的]苏云金芽孢杆菌表达的杀虫蛋白Cry1Ia和Cry2Ab对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性。为充分利用已有Cry蛋白,本文构建了两者的融合蛋白,并对融合蛋白的原核表达进行检测。[方法]本文将两个基因的编码基因,按照两种先后顺序拼... [目的]苏云金芽孢杆菌表达的杀虫蛋白Cry1Ia和Cry2Ab对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性。为充分利用已有Cry蛋白,本文构建了两者的融合蛋白,并对融合蛋白的原核表达进行检测。[方法]本文将两个基因的编码基因,按照两种先后顺序拼接起来,获得cry1Ia-cry2Ab融合基因和cry2Ab-cry1Ia融合基因。另外,将Cry1Ia蛋白N端第一个α-螺旋(73个氨基酸)的编码序列删除后,接入cry2Ab基因5'端,获得第三个融合基因cry1IaD73-cry2Ab。将3个基因分别插入pHT304载体,并由cry1Ac基因的启动子和终止子调控其在Bt细胞中表达。[结果]SDS-PAGE结果显示,Cry1Ia-Cry2Ab、Cry2Ab-Cry1Ia和Cry1IaD73-Cry2Ab三个融合蛋白均能够在Bt细胞中表达,其测定分子量与预期大小一致,分别约152kDa、152kDa和144kDa。蛋白印迹法分析发现,在表达过程中,三种融合蛋白均有一定比例的降解。另外,不同温度对融合蛋白的表达也有不同程度的影响。[结论]本研究构建了3种融合杀虫基因并在Bt细胞中成功表达,为进一步解析这类融合蛋白的杀虫活性和机理奠定了基础。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 cry1Ia CRY2AB 融合蛋白 蛋白表达
在线阅读 免费下载
卵巢癌手术切除组织中SOCS-3表达情况及其与病理特征的关系 预览
15
作者 岳晚侠 蒙树勇 康博 《临床医学研究与实践》 2019年第31期69-70,共2页
目的分析细胞因子信号传导抑制蛋白-3(SOCS-3)在卵巢癌手术切除组织中的表达及其与病理特征的关系。方法选取我院2018年1月至2019年1月收治的68例卵巢癌患者作为研究对象,检测卵巢癌手术切除组织及癌旁组织中SOCS-3的表达情况,并探讨SOC... 目的分析细胞因子信号传导抑制蛋白-3(SOCS-3)在卵巢癌手术切除组织中的表达及其与病理特征的关系。方法选取我院2018年1月至2019年1月收治的68例卵巢癌患者作为研究对象,检测卵巢癌手术切除组织及癌旁组织中SOCS-3的表达情况,并探讨SOCS-3的表达与病理特征的关系。结果卵巢癌组织中的SOCS-3表达量明显低于癌旁组织(P<0.05)。卵巢癌Ⅰ~Ⅱ期、中~高分化、无淋巴结转移的卵巢癌组织中SOCS-3的表达量分别高于卵巢癌Ⅲ~Ⅳ期、低分化、有发生淋巴结转移的卵巢癌组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论SOCS-3的表达减少与卵巢癌的发生、发展有关,可作为评估卵巢癌预后的生物学标志。 展开更多
关键词 细胞因子信号传导抑制蛋白-3 卵巢癌 蛋白表达
在线阅读 下载PDF
SOX17和β-catenin在胃癌中的表达及意义 预览
16
作者 冀建波 《山西医药杂志》 CAS 2019年第12期1411-1413,共3页
胃癌(gastriccarcinoma,GC)是常见的恶性肿瘤之一,据全国登记中心发布的2015年中国癌症统计结果显示,我国GC发病例数约为67.9万,仅次于肺癌,位居肿瘤死亡率的第二位[1]。GC的发生、发展机制是多因素、多基因作用的结果,其中Wnt/β-cate... 胃癌(gastriccarcinoma,GC)是常见的恶性肿瘤之一,据全国登记中心发布的2015年中国癌症统计结果显示,我国GC发病例数约为67.9万,仅次于肺癌,位居肿瘤死亡率的第二位[1]。GC的发生、发展机制是多因素、多基因作用的结果,其中Wnt/β-catenin通路各蛋白表达水平的改变及相关基因的突变在胃癌进展中发挥着重要的作用。Sry-likehigh-mobilitygroupbox(SOX17)是SOX基因家族中的一员,在胚胎发育中发挥重要的作用。有研究表明,Wnt/β-catenin通路可以抑制SOX17蛋白的表达,促进GCMKN45细胞的增殖,抑制细胞的凋亡[2]。目前国内对于二者在GC患者中的表达及其意义报道还比较少。因此,本研究通过免疫组织化学的方法检测126例GC患者及癌旁组织中SOX17和β-catenin蛋白的表达,并分析二者的表达与GC临床病理特征的关系,以期为GC发病机制提供实验依据。 展开更多
关键词 WNT/Β-CATENIN 胃癌 Β-CATENIN蛋白 CARCINOMA 免疫组织化学 临床病理特征 蛋白表达
在线阅读 下载PDF
广藿香FPPS重组蛋白表达及互作蛋白筛选分析 预览
17
作者 钟李婷 陈秀珍 +6 位作者 唐云 李俊仁 王小兵 刘彦婷 周璇璇 詹若挺 陈立凯 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期10-15,共6页
对广藿香的法尼基焦磷酸酶(PatFPPS)进行重组蛋白的原核表达,并筛选与之互相作用的蛋白。利用PCR扩增PatFPPS编码区并连接到pGEX-6P-1表达载体,测序验证后将质粒转化BL21(DE3)表达菌株,并用IPTG诱导表达蛋白,最终得到带有GST标签的PatF... 对广藿香的法尼基焦磷酸酶(PatFPPS)进行重组蛋白的原核表达,并筛选与之互相作用的蛋白。利用PCR扩增PatFPPS编码区并连接到pGEX-6P-1表达载体,测序验证后将质粒转化BL21(DE3)表达菌株,并用IPTG诱导表达蛋白,最终得到带有GST标签的PatFPPS融合蛋白。利用GST Pull-Down技术,将GST-PatFPPS融合蛋白分别与广藿香叶片总蛋白进行体外孵育,洗脱得到蛋白复合物,经SDS-PAGE及LC-MS/MS鉴定。结果表明,PatFPPS原核表达体系成功建立,获得纯化重组蛋白,并且筛选得到一些候选PatFPPS互作蛋白。利用优化的原核表达体系,可获得可溶性的PatFPPS蛋白,并鉴定得到与之互作的候选蛋白。 展开更多
关键词 广藿香 蛋白表达 广藿香醇 互作蛋白 茉莉酸甲酯
在线阅读 免费下载
乳腺肿瘤微环境中益母草碱调控caveolin-1 蛋白对表皮生长因子的影响 预览
18
作者 黎秋如 肖亮 +1 位作者 李仲民 肖春海 《当代医学》 2019年第20期123-125,共3页
目的研究乳腺癌肿瘤环境中益母草碱调控caveolin-1 蛋白对表皮生长因子乳腺肿瘤微环境中益母草碱调控乳腺成纤维细胞caveolin-1 蛋白对表皮生长因子(EGF)蛋白表达的影响。方法建立50 例乳腺癌细胞及乳腺成纤维细胞共培养模型,抽取25 例... 目的研究乳腺癌肿瘤环境中益母草碱调控caveolin-1 蛋白对表皮生长因子乳腺肿瘤微环境中益母草碱调控乳腺成纤维细胞caveolin-1 蛋白对表皮生长因子(EGF)蛋白表达的影响。方法建立50 例乳腺癌细胞及乳腺成纤维细胞共培养模型,抽取25 例作为对照组,另根据配对原则抽取25 例作为观察组。对照组不采取任何干预,观察组则采用益母草碱干预,分别检测乳腺成纤维细胞增殖、caveolin-1 蛋白、EGF 因子表达,并对比其结果。结果观察组纤维细胞增殖快于对照组,caveolin-1 蛋白、EGF 因子表达高于对照组,对比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论益母草碱能影响乳腺成纤维细胞的增殖、caveolin-1 蛋白和EGF 因子表达,可为乳腺癌研究提供新的思路。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤微环境 益母草碱 乳腺成纤维细胞caveolin-1 蛋白 EGF 蛋白表达
在线阅读 下载PDF
虹鳟IPNV分离株VP2蛋白的表达及免疫原性检测 预览
19
作者 赵景壮 贺文斌 +4 位作者 徐黎明 纪锋 曹永生 胡朝 卢彤岩 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期179-185,共7页
为充分了解中国鱼类传染性胰腺坏死病病毒的系统进化,对流行病学调查分离出的虹鳟Oncorhynchus mykiss传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)分离株进行了系统进化分析,利用软件综合分析了IPNV病毒表面蛋白VP2的跨膜区、亲水性、抗原性和表面可能... 为充分了解中国鱼类传染性胰腺坏死病病毒的系统进化,对流行病学调查分离出的虹鳟Oncorhynchus mykiss传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)分离株进行了系统进化分析,利用软件综合分析了IPNV病毒表面蛋白VP2的跨膜区、亲水性、抗原性和表面可能性,对其特定区段进行了原核表达,并利用表达蛋白制备鼠抗血清及免疫学鉴定。结果表明:本实验室得到的分离株与中国已报道的毒株具有不同的来源;SDS-PAGE分析显示,表达纯化的VP2蛋白为单一条带,相对分子质量约为45000;ELISA分析显示,利用表达蛋白制备的鼠抗血清与IPNV分离株细胞培养物的效价为1∶20000,与VP2蛋白的效价为1∶40000;间接免疫荧光分析显示,细胞感染IPNV病毒24、48h后,该鼠抗血清均能与IPNV毒株发生特异性反应,并呈现出特异性绿色荧光。研究表明,本研究中表达的VP2蛋白与IPNV病毒的VP2蛋白具有相近的免疫原性,这一结果为IPNV检测方法的建立及疫苗的构建提供了重要的试验依据。 展开更多
关键词 传染性胰腺坏死病病毒 蛋白表达 VP2蛋白 免疫原性
在线阅读 下载PDF
Cry1Ia蛋白的表达与纯化 预览
20
作者 郭小琴 钱红梅 +4 位作者 郭星 高佳丽 张义茹 高建华 王兴春 《山西农业科学》 2019年第5期748-750,769共4页
苏云金芽孢杆菌表达的Cry1Ia蛋白对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性。为便于后期评价不同的Cry1Ia蛋白,建立了Cry1Ia蛋白的表达与纯化体系。将一个cry1Ia基因的编码基因接入pET28aDel表达载体,并将其转化大肠杆菌BL21(DE3)star菌... 苏云金芽孢杆菌表达的Cry1Ia蛋白对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性。为便于后期评价不同的Cry1Ia蛋白,建立了Cry1Ia蛋白的表达与纯化体系。将一个cry1Ia基因的编码基因接入pET28aDel表达载体,并将其转化大肠杆菌BL21(DE3)star菌株。在大肠杆菌中诱导Cry1Ia蛋白的表达,并与Bt中的表达产物进行比较。最后,利用Cry1Ia蛋白C端包含的组氨酸标签,对大肠杆菌表达的Cry1Ia蛋白进行纯化。结果显示,大肠杆菌中Cry1Ia蛋白随着表达时间的延长,产物积累显著,并且其表达量高于Bt菌株,因此,其更适宜生产完整的Cry1Ia蛋白。对大肠杆菌表达的Cry1Ia进行纯化,获得了理想的结果。研究构建了Cry1Ia蛋白的大肠杆菌表达体系,并成功对其进行纯化,可为进一步研究此类蛋白的杀虫活性和机制奠定基础。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 大肠杆菌 cry1Ia 蛋白表达 蛋白纯化
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 221 下一页 到第
使用帮助 返回顶部 意见反馈