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不同地区花生网斑病菌致病性鉴定及环境条件对致病力的影响 预览
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作者 许曼琳 吴菊香 +8 位作者 张霞 鄢洪海 吕宾 于建垒 刘同金 于静 郭志青 迟玉成 万书波 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期250-254,共5页
为了探明不同地区的花生网斑病菌致病力并筛选快速稳定的接种方法,以来自山东、云南和辽宁的6个不同地区的花生网斑病菌为材料,用孢子悬浮液对离体叶片和花生植株进行接种,结果表明致病力最强的菌株是WB-SY(分离自辽宁省沈阳市)。最佳... 为了探明不同地区的花生网斑病菌致病力并筛选快速稳定的接种方法,以来自山东、云南和辽宁的6个不同地区的花生网斑病菌为材料,用孢子悬浮液对离体叶片和花生植株进行接种,结果表明致病力最强的菌株是WB-SY(分离自辽宁省沈阳市)。最佳接种条件为:开花末期使用高浓度孢子悬浮液(10^6/mL),接种湿度保持在90%~100%之间,持续保湿36h以上,温度在25~28℃之间,接种前黑暗处理24h,接种后近紫光(波长340~380nm)处理。本文筛选出的菌株和快速稳定的接种方法,将为抗病品种的筛选奠定基础。 展开更多
关键词 花生(Arachis HYPOGAEA L.) 网斑病菌 致病性鉴定 接种方法
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草本药用植物猪殃殃白粉菌分子生物学鉴定
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作者 裴冬丽 朱晓琴 +2 位作者 王书楠 王玉景 李成伟 《北方园艺》 北大核心 2018年第9期149-152,共4页
以河南商丘地区草本药用植物猪殃殃白粉菌为试材,采用分子系统学方法研究了其形态学、致病性鉴定、分子生物学鉴定及其系统进化关系,以期为白粉病的防治提供理论依据。结果表明:猪殃殃白粉菌着生于叶的两面及茎上,随着病原菌的发展... 以河南商丘地区草本药用植物猪殃殃白粉菌为试材,采用分子系统学方法研究了其形态学、致病性鉴定、分子生物学鉴定及其系统进化关系,以期为白粉病的防治提供理论依据。结果表明:猪殃殃白粉菌着生于叶的两面及茎上,随着病原菌的发展,蔓延至覆盖整个叶子表面。显微分析结果表明,病原菌分生孢子梗直立,(100-260)μm×(10-12)μm,产生2-3个未成熟的分生孢子。足细胞(28-65)μm×(9-11)μm,紧邻着2-3个短细胞。分生孢子桶-柱形,(22-42)μm×(15-20)μm。对其核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列进行PCR扩增,测序获得632 bp序列,GenBank登陆号为KX396590。经MEGA 5.0软件分析,其与奥隆特高氏白粉菌Golovinomyces orontii ITS 序列AB430813序列聚为一枝,而来自其它属种白粉菌的5条ITS序列亲缘关系较远。河南商丘地区的猪殃殃白粉菌为奥隆特高氏白粉菌G.orontii。 展开更多
关键词 猪殃殃 白粉菌 ITS序列 形态学鉴定 致病性鉴定 分子系统学
Maroteaux-Lamy综合征的ARSB基因分析及新突变的致病性鉴定 预览
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作者 郭东炜 谢杰 +5 位作者 潘伟绵 唐佳 艾阳 李荣 杜敏联 郭奕斌 《中山大学学报(医学版)》 CSCD 北大核心 2018年第6期844-853,共10页
【目的】对7家拟诊为Maroteaux_Lamy综合征(MPSⅥ)的患儿及其父母进行ARSB基因的突变检测和新突变的致病性鉴定,以揭示其分子发病机制,为将来的产前/植入前基因诊断等创造前提条件。【方法】在临床初诊及GAG尿检和MPS酶检的基础上,抽取... 【目的】对7家拟诊为Maroteaux_Lamy综合征(MPSⅥ)的患儿及其父母进行ARSB基因的突变检测和新突变的致病性鉴定,以揭示其分子发病机制,为将来的产前/植入前基因诊断等创造前提条件。【方法】在临床初诊及GAG尿检和MPS酶检的基础上,抽取患儿及其父母EDTA抗凝血,进行ARSB基因的PCR扩增和Sanger测序。对所发现的新突变,在经HGMD、1000G和ExAC等数据库核实排查后,首先用SWISS-MODEL软件分析、比对突变蛋白和正常蛋白的空间构象,然后用ClustalX软件分析跨物种氨基酸的保守性,用PROVEAN、SIFT、PolyPhen-2软件预测新突变的致病性,最后用ACMG标准对新突变的致病性进行综合分析鉴定。【结果】1)7个家系先证者的基因检测结果分别为:No1:c.574T>C,p.C192R纯合错义突变;No2:c.160G>A/p.D54N(来自其母)和c.1197C>G/p.F399L(来自其父)的复合杂合子;No3:仅检出c.1072G>A/p.V358M和IVS5as(-27)A>C变异,但酶检和临床表型符合VI型;No4:为c.281C>T,p.S94L(新突变,来自其母)和IVS5as(-27)A>C(来自其父)的复合杂合子;No5:为c.1197C>G,p.F399L纯合错义突变;No6:为c.1197C>G,p.F399L(来自其母)和c.1379C>T,p.S460F(新突变,来自其父)的复合杂合子;No7:为c.499G>A,p.G167R(来自其父)和c.1325C>T,p.T442M(来自其母)的复合杂合子。2)新突变鉴定结果:对正常ARSB酶蛋白和p.S94L突变酶蛋白的空间构象的预测比对结果显示,两者有明显区别;跨物种保守性分析结果显示,p.94突变点所在氨基酸(S)在物种进化过程中具有高度保守性;PROVEAN、SIFT和PolyPhen-2软件对p.S94L预测结果分别为:Deleterious、Damaging和Probably damaging。用上述方法对p.S460F的预测结果及ACMG的综合分析结果也显示该突变可能是致病性的。【结论】1)家系4的p.S94L和家系6的p.S460F新突变可能都是新的致病性突变,有可能都是引起患儿发病的内在原因之一。2)家系1,2,5,6,7可以确诊为MPSVI型,其基因型和表现型具有显著� 展开更多
关键词 Maroteaux_Lamy综合征 ARSB基因 新突变 致病性鉴定
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水稻细菌性条斑病原菌室内快速分离与鉴定方法 被引量:4
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作者 谢仕猛 花龙 +3 位作者 韦永选 向贤 翟文学 夏志辉 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2017年第5期1927-1932,共6页
本研究以海南海口罗牛山基地、屯昌水稻品种区试基地采集的感染细菌性条斑病(细条病)的水稻叶片为研究对象,探索细条病菌室内分离、鉴定与致病性测定方法。结果表明,70%酒精消毒1 min,10^4-10^5稀释倍数,培养3 d是有效分离细条病菌的... 本研究以海南海口罗牛山基地、屯昌水稻品种区试基地采集的感染细菌性条斑病(细条病)的水稻叶片为研究对象,探索细条病菌室内分离、鉴定与致病性测定方法。结果表明,70%酒精消毒1 min,10^4-10^5稀释倍数,培养3 d是有效分离细条病菌的优化因素;随机挑取的12个单克隆菌株经分子鉴定及致病性鉴定均为细菌性条斑病菌,且16S rDNA PCR产物测序序列与细条病菌模式菌株RS105一致性为100%。在所有的接种方法中均显示,浸染后保湿培养是影响致病效果的关键因子,在发病率方面,菌液浸泡抽真空、针刺法是最有效的方法,致病率均为100%。本研究结果为细条病菌的室内分离鉴定提供标准方法,有助于抗细条病种质资源的大规模筛选。 展开更多
关键词 水稻 细菌条斑病 病原分离 致病性鉴定 接种方法
福建省青枯雷尔氏菌无毒基因组成及与致病力关系分析
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作者 郑雪芳 刘波 朱育菁 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期98-106,共9页
青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)致病力分化严重。为了解福建省青枯雷尔雷氏菌的致病力类型及与无毒基因组成关系,本研究以弱化指数为指标,对福建省内不同地区和寄主的63个青枯雷尔氏菌进行致病力测定,结果表明,供试的青枯雷尔... 青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)致病力分化严重。为了解福建省青枯雷尔雷氏菌的致病力类型及与无毒基因组成关系,本研究以弱化指数为指标,对福建省内不同地区和寄主的63个青枯雷尔氏菌进行致病力测定,结果表明,供试的青枯雷尔氏菌可分为3种致病力类型:强致病力、过渡型和无致病力;进一步对供试菌株进行无毒基因avr A、pop P1和pop P2的检测,3个无毒基因分布频率不同,avr A基因分布频率最高,达79.37%,pop P1基因的分布频率最低为46.03%;不同寄主的菌株无毒基因组成不同,番茄(Lycopersicum esculentum)和辣椒(Capsicum annuum)寄主以分布3种和2种无毒基因为主,茄子(Solanum melongena)寄主主要分布2种无毒基因,花生(Arachis hypogaea)寄主的菌株无毒基因分布较少,只分布1种avr A基因或没有检测到无毒基因;不同地域的菌株无毒基因组成不同,以番茄寄主为例,建瓯玉山镇的菌株分布3种和2种无毒基因为主,分别占45.45%和31.82%,宁德屏南菌株中3个无毒基因均等分布,福州北峰菌株中只分布avr A和pop P2基因,二者均等分布,福州营口菌株中pop P2基因分布频率最高,达60.00%;不同致病力的菌株无毒基因组成不同,无致病力菌株分布3种和2种无毒基因为主,过渡型菌株分布2种无毒基因为主,而强致病力菌株分布1种无毒基因为主;青枯雷尔氏菌的无毒基因组成与致病力相关性分析表明,3个无毒基因分布均与致病力呈正相关,其中pop P1基因与菌株致病力相关性最高,达显著水平,其皮尔逊相关系数(Pearson correlation coefficient,PCC)值为0.31。本研究为植物青枯病预警和防控提供重要信息。 展开更多
关键词 青枯雷尔氏菌 致病性鉴定 无毒基因 popP1 popP2 avrA
大丽轮枝菌致病性相关突变体快速筛选体系的建立 预览 被引量:3
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作者 王新艳 张丹丹 +4 位作者 桂月晶 李楠洋 徐明 陈捷胤 戴小枫 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第14期2747-2756,共10页
【目的】建立适合于大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)致病性相关突变体的快速筛选体系,为突变库中与致病性相关突变体的系统筛选和鉴定提供技术支撑。【方法】棉花幼苗接种于5.0×104、5.0×105、5.0×106、5.0×107... 【目的】建立适合于大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)致病性相关突变体的快速筛选体系,为突变库中与致病性相关突变体的系统筛选和鉴定提供技术支撑。【方法】棉花幼苗接种于5.0×104、5.0×105、5.0×106、5.0×107和5.0×108孢子/m L的孢子悬浮液30 min,通过病情指数调查明确引起棉花黄萎病发生的病原菌浓度范围;对培养于培养瓶的大丽轮枝菌分别加入15、25、35和45 m L的灭菌水,利用血球计数板检测洗脱的孢子浓度,明确不同体积灭菌水对洗脱孢子悬浮液浓度的影响;以保存于96孔板的突变体为单位,在培养皿上进行单孢分离并挑取单个孢子于培养瓶中扩繁培养,培养后于培养瓶中直接加入适宜体积灭菌水洗脱孢子,并将棉花幼苗直接置于含有孢子悬浮液的培养瓶中处理30 min,接种后继续培养14 d并调查结果;致病性相关突变体的可靠性检验采用定量菌液蘸根接种法,每个突变体接种30株棉花幼苗,3个重复,孢子浓度为5.0×106孢子/m L,每株棉花幼苗按接种5 m L菌液计算,处理30 min,分别在第5、8、11和14天调查病情指数。【结果】明确了适合于大丽轮枝菌致病力快速鉴定的接种孢子浓度为〉5.0×105孢子/m L;建立了大丽轮枝菌培养方法,单孢纯化培养5 d,培养瓶中扩大培养9 d,确定了快速定量制备孢子悬浮液的洗脱体积为25 m L,测试的20个突变体的洗脱孢子浓度范围在(2.55±0.58)×106—(1.72±0.25)×107孢子/m L;优化了单孢分离、扩大培养、孢子悬浮液制备、接种、继续培养和结果统计等环节,建立了大丽轮枝菌致病性快速鉴定流程,进一步统筹设计构建了大丽轮枝菌致病性相关突变体快速筛选体系;测试表明该体系1人1个循环共7个流程可完成1 344个突变体筛选,周期54 d,工作量为21人日;采用定量菌液蘸根法重复验证结果,突变体致病力同样显著下降,与快速筛选体系的鉴定结果一� 展开更多
关键词 大丽轮枝菌 致病性相关突变体 致病性鉴定 快速筛选体系
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成骨不全Ⅰ型家系的基因检测和COL1A2基因新突变的致病性鉴定 预览 被引量:5
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作者 李荣 郭源平 +1 位作者 潘敬新 郭奕斌 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期41-47,共7页
为了揭示成骨不全(Osteogenesis imperfecta, OI)Ⅰ型家系的分子遗传学发生机制,文章采用PCR-DNA直接测序法,对患儿 COL1A1和 COL1A2基因共103个外显子(E)进行突变检测。结果显示:患儿 COL1A1基因未发现任何病理性突变,而在 COL... 为了揭示成骨不全(Osteogenesis imperfecta, OI)Ⅰ型家系的分子遗传学发生机制,文章采用PCR-DNA直接测序法,对患儿 COL1A1和 COL1A2基因共103个外显子(E)进行突变检测。结果显示:患儿 COL1A1基因未发现任何病理性突变,而在 COL1A2基因 E19内发现一新的杂合错义突变(p.G316C),该突变来自其父,而其母正常,其他表型正常的6位亲属也均未发现该突变;通过 DHPLC(Denaturing high performance uid chromatography)筛检,发现患儿与其父均有异常双峰,而其母和所有正常对照均为正常单峰;通过ASA(Allele specific amplification)筛检,患儿与其父均有391 bp的特异扩增带,而其母和所有正常对照均未见特异扩增带;保守性分析结果显示,该突变位点所在甘氨酸在进化上具有高度保守性;SIFT和 PolyPhen-2软件预测结果显示,新突变造成的结果是“有害的”和“很可能有害”。上述结果均说明 COL1A2基因c.946G〉T/p.G316C新突变是导致OI-Ⅰ型的致病性突变,是引起患儿发病的真正内因。患儿父母若再次孕育,可在孕早期进行产前基因诊断或孕前期进行PGD(Preimplantation genetic diagnosis)予以防患。 展开更多
关键词 成骨不全Ⅰ型 C0L1A2基因 新突变 致病性鉴定
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续断菊白粉病的病原菌鉴定 预览 被引量:3
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作者 张庆琛 裴冬丽 +2 位作者 冯翊阳 李成伟 洪权春 《河南大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2013年第1期53-56,共4页
采用形态学鉴定、致病性鉴定和分子系统学鉴定方法对中国商丘地区首次检出的续断菊白粉菌的系统进化关系进行了研究.结果表明,该病原菌分生孢子梗直立,圆柱形,简单无分枝,大小为108~220μm×10~12μm,包含1个足细胞,2~3个短细胞... 采用形态学鉴定、致病性鉴定和分子系统学鉴定方法对中国商丘地区首次检出的续断菊白粉菌的系统进化关系进行了研究.结果表明,该病原菌分生孢子梗直立,圆柱形,简单无分枝,大小为108~220μm×10~12μm,包含1个足细胞,2~3个短细胞;分生孢子串生,圆柱形,无明显纤维体,大小为29~42μm×19~24μm;附着胞呈乳头形;病原菌接种叶片病症与自然状态一致,形成薄而边缘不明显的白色斑片;对其核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列进行PCR扩增、测序获得595bp序列(GenBank登录号:JQ010848),经MEGA 3.1软件分析,其与来自二孢白粉菌(Golovinomyces cichoracearum)的AY739111,HM449077,AB453762,AB077673序列聚为1枝,而与来自同属另3个种的ITS序列亲缘关系较远.研究表明,商丘地区的续断菊白粉菌为二孢白粉菌(G.cichora-cearum). 展开更多
关键词 续断菊 续断菊白粉菌 形态学鉴定 致病性鉴定 分子系统学鉴定 ITS序列
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马铃薯黑胫病菌分离纯化体系的建立 预览 被引量:1
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作者 董学志 胡林双 +4 位作者 魏琪 邱彩玲 闵凡祥 杨松 李永刚 《黑龙江农业科学》 2013年第7期45-48,共4页
为了指导马铃薯黑胫病相关试验,利用CVP培养基,对疑似感染了黑胫病的马铃薯植株进行病原菌的分离、鉴定和纯化,并对菌株的3种保存方法进行比较和探讨,同时采用病原菌回接的方法对菌株致病性进行鉴定,最终成功建立了马铃薯黑胫病菌分离... 为了指导马铃薯黑胫病相关试验,利用CVP培养基,对疑似感染了黑胫病的马铃薯植株进行病原菌的分离、鉴定和纯化,并对菌株的3种保存方法进行比较和探讨,同时采用病原菌回接的方法对菌株致病性进行鉴定,最终成功建立了马铃薯黑胫病菌分离纯化体系。 展开更多
关键词 马铃薯黑胫病 分离 纯化 菌株保存 致病性鉴定
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贵州油菜菌核病菌的分离纯化与致病性鉴定 预览 被引量:3
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作者 王璐璐 唐容 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2013年第10期93-95,共3页
为了探明贵州不同地理来源油菜菌核病菌的致病性,以10个不同地理来源的贵州油菜菌核病菌为材料,采用油菜苗期叶片离体接种方法对油菜菌核病菌株的致病性进行鉴定.结果表明:1)经分离纯化,从接种的58个贵州油菜菌核病菌中筛选出10个不... 为了探明贵州不同地理来源油菜菌核病菌的致病性,以10个不同地理来源的贵州油菜菌核病菌为材料,采用油菜苗期叶片离体接种方法对油菜菌核病菌株的致病性进行鉴定.结果表明:1)经分离纯化,从接种的58个贵州油菜菌核病菌中筛选出10个不同地理来源的菌株;其致病性以采集于思南县的7-3号菌株最强,绥阳县的1-3号菌株其次,该两菌株与其他菌株的致病性差异达显著水平;来源于息烽县的10-3号菌株的致病性最弱.因此,来源于贵州境内不同地域的油菜菌核病存在明显的致病性差异,致病性较强的2个菌株可作为油菜菌核病抗(耐)性鉴定的菌株. 展开更多
关键词 油菜菌核病 分离纯化 致病性鉴定 贵州
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糖原贮积症Ⅲa型一家系的AGL基因分析及新突变的致病性鉴定
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作者 吴晓昀 潘敬新 郭奕斌 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期915-919,共5页
目的 揭示一疑似糖原贮积症(GSD)Ⅲ型家系发病的分子遗传学机制,并对其致病的AGL基因的新突变做致病性鉴定.方法 先证者于2012年初在福建医科大学附属二院诊断为疑似GSD患者,并转诊至中山大学中山医学院医学遗传学教研室.首先对先证者... 目的 揭示一疑似糖原贮积症(GSD)Ⅲ型家系发病的分子遗传学机制,并对其致病的AGL基因的新突变做致病性鉴定.方法 先证者于2012年初在福建医科大学附属二院诊断为疑似GSD患者,并转诊至中山大学中山医学院医学遗传学教研室.首先对先证者的AGL基因的所有编码区及各编码区与内含子交界部位的序列进行直接测序.在检出突变后,再对其父母的相应位点进行检测并确认患儿突变的来源.对所发现的杂合新突变再通过克隆测序予以确证,并对新突变的致病性进行一系列鉴定,包括对100名健康对照(近2年来人群中随机取样获得)进行变性高效液相色谱(DHPLC)筛检以统计突变的频率;在11个跨物种间对突变所在氨基酸序列的保守性进行分析;比对并分析突变蛋白和正常蛋白的高级结构的差异程度.结果 先证者为“c.100C> T(p.R34X)”无义突变和“c.1176_1178 del TCA(p.392delHis)”缺失突变的复合杂合子.其中,p.R34X国外已报道为致病性突变,而c.1176_1178 del TCA为新发现的缺失突变.其父为p.R34X无义突变的携带者;其母为c.1176_1178 del TCA缺失突变的携带者.dbSNP数据库、HGMD数据库及近几年最新文献的检索确认c.1176_1178 delTCA为一新突变,并排除多态性变异的可能.11个跨物种的保守性分析结果表明:该突变位点所在氨基酸在进化上具有高度保守性.突变蛋白和正常蛋白预测的高级结构的比对结果显示:此缺失突变造成了AGL蛋白空间立体构象的显著改变.结论 所发现的c.1176_1178 del TCA(p.392delHis)缺失突变是一新的致病性突变,它和“c.100C> T(p.R34X)”无义突变是先证者患GSDⅢa病的根本原因,这两种突变分别是由母亲和父亲各遗传一个而来. 展开更多
关键词 糖原贮积症Ⅲa型(GSDⅢa) AGL基因 新突变 致病性鉴定
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