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Beclin1过表达对黑素瘤SK-MEL-2细胞生物学行为的影响
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作者 徐艳艳 王久江 +9 位作者 张伶 韩昭 牛亮 张建忠 刘钊 李改静 李小兵 刘晴 刘志军 李小静 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期40-44,共5页
目的探讨自噬标志基因Beclin1过表达对黑素瘤SK-MEL-2细胞生物学行为的影响。方法Western印迹技术检测黑素瘤细胞A375、SK-MEL-2中Beclin1的蛋白表达水平,选取低表达Beclin1蛋白的SK-MEL-2细胞株作为研究对象,将细胞分为空白组、阴性对... 目的探讨自噬标志基因Beclin1过表达对黑素瘤SK-MEL-2细胞生物学行为的影响。方法Western印迹技术检测黑素瘤细胞A375、SK-MEL-2中Beclin1的蛋白表达水平,选取低表达Beclin1蛋白的SK-MEL-2细胞株作为研究对象,将细胞分为空白组、阴性对照组、实验组,空白组不作处理,阴性对照组转染pcDNA.3.1/myc-His(-)A,实验组转染pcDNA3.1-Beclin1质粒。培养一定时间后,采用CCK8法分析Beclin1对细胞增殖的影响;Transwell实验和细胞划痕实验观察Beclin1过表达对SK-MEL-2细胞侵袭和迁移能力的影响。采用重复测量方差分析和完全随机设计方差分析检验各组间的指标差异,组间比较采用LSD-t检验。结果SK-MEL-2细胞Beclin1蛋白相对表达水平(0.037±0.010)显著低于A375细胞(0.670±0.150),F=46.62,P<0.05。实验组Beclin1蛋白相对表达水平(0.32±0.04)显著高于阴性对照组(0.06±0.02)和空白组(0.07±0.02),均P<0.05。CCK8实验结果显示,不同组间、不同时间细胞增殖率差异均有统计学意义(F组间=1077.36,F时间=4903.04,均P<0.05),组别和时间之间有交互作用(F交互=205.20,P<0.05)。Transwell实验显示,24 h后实验组高倍(×200)视野下穿过小室的细胞数(18.67±1.19)明显低于阴性对照组(87.89±6.05)和空白组(86.78±5.93),均P<0.05;划痕实验中24、48 h时实验组细胞迁移距离均显著低于空白组和阴性对照组(P<0.05)。结论Beclin1过表达可显著抑制SK-MEL-2细胞的增殖、侵袭和迁移。 展开更多
关键词 自噬 黑色素瘤 实验性 细胞增殖 细胞迁移分析 BECLIN1
空气细颗粒物PM2.5水溶成分对人黑素细胞系PIG1增殖、迁移和黑素合成的影响
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作者 索丹凤 曾三武 +1 位作者 孟令贺 张峻岭 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期919-922,共4页
目的探讨空气细颗粒物PM2.5水溶成分对人黑素细胞系PIG1增殖、迁移、酪氨酸酶活性及黑素含量的影响。方法收集采暖季雾霾天气PM2.5,制备混悬液。建立人黑素细胞系PIG1培养体系,将PIG1细胞分为实验组和对照组,其中实验组分别用10、20、50... 目的探讨空气细颗粒物PM2.5水溶成分对人黑素细胞系PIG1增殖、迁移、酪氨酸酶活性及黑素含量的影响。方法收集采暖季雾霾天气PM2.5,制备混悬液。建立人黑素细胞系PIG1培养体系,将PIG1细胞分为实验组和对照组,其中实验组分别用10、20、50、100、200 mg/L(细胞迁移实验用10 mg/L)PM2.5混悬液处理48 h,对照组不用PM2.5处理,其他同实验组。处理完成后,采用MTT法、微孔膜法、多巴氧化法、NaOH裂解法分别检测黑素细胞的增殖、迁移、酪氨酸酶活性及黑素含量。两个样本均数间的比较采用t检验,多个样本均数间的比较采用方差分析,多个样本均数间每两个均数间的比较采用SNK法,相关性分析采用线性相关分析方法。结果与对照组[(100±1.41)%]相比,20、50、100、200 mg/L PM2.5组PIG1细胞的增殖率[分别为(93.41±2.13)%、(88.31±1.36)%、(79.75±1.89)%、(69.83±2.50)%]均受到明显抑制(均P<0.05),且随PM2.5浓度的上升,PIG1细胞的增殖率(r=-0.98,P<0.01)和酪氨酸酶活性(r=-0.93,P<0.01)均呈下降趋势。10 mg/L PM2.5处理后,黑素细胞迁移率为(66.23±1.11)%,显著低于对照组[(76.86±1.81)%,t=7.55,P<0.01]。随PM2.5浓度的升高(50~200 mg/L),PIG1细胞黑素含量逐渐减少(r=-0.97,P<0.01)。结论空气细颗粒物PM2.5可能通过抑制黑素细胞增殖、迁移和降低酪氨酸酶活性及黑素含量而影响黑素细胞的正常功能。 展开更多
关键词 黑素细胞 颗粒物 细胞增殖 黑素类 细胞迁移分析 PM2.5
沉默ACLY基因可抑制结肠癌HCT116细胞的迁移和侵袭
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作者 文君 闵雪洁 +4 位作者 赵丽 唐德伟 刘建军 黄钢 赵小平 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期460-468,共9页
目的:探讨沉默ATP柠檬酸裂解酶(ATP citrate lyase,ACLY)基因表达对结肠癌HCT116细胞增殖和迁移的抑制作用。方法:采用成簇规律间隔的短回文重复序列(clustered regulatory interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋... 目的:探讨沉默ATP柠檬酸裂解酶(ATP citrate lyase,ACLY)基因表达对结肠癌HCT116细胞增殖和迁移的抑制作用。方法:采用成簇规律间隔的短回文重复序列(clustered regulatory interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(CRISPR-associated protein 9,Cas9)技术特异性靶向ACLY基因,构建2株稳定沉默ACLY表达的结肠癌HCT116细胞(即ACLY-knockout-1和ACLY-knockout-2,简称KO-1和KO-2)。应用蛋白质印迹法检测KO-1和KO-2组及未敲除ACLY的对照组(Ctrl)HCT116细胞中ACLY蛋白的表达,应用CCK-8法和软琼脂克隆形成实验分别检测Ctrl、KO-1和KO-2组HCT116细胞的增殖能力,划痕愈合实验和Transwell小室法分别检测Ctrl、KO-1和KO-2组HCT116细胞的迁移和侵袭能力,应用实时荧光定量PCR法检测Ctrl、KO-1和KO-2组HCT116细胞中上皮-间质转化标志分子E-cadhrein、N-cadherin和波形蛋白(vimentin,VIM)以及相关转录因子Snail和锌指E盒增强子结合蛋白1(zinc-nger E-box binding homeobox 1,ZEB1)mRNA的表达水平。结果:KO-1和KO-2组HCT116细胞中ACLY蛋白不能正常表达,而Ctrl组HCT116细胞中可见ACLY蛋白表达。细胞培养72和96 h,KO-1和KO-2组HCT116细胞的增殖能力明显低于Ctrl组(P值均<0.01);KO-1组HCT116细胞形成的克隆数显著少于Ctrl组(P<0.01)。KO-1和KO-2组单克隆HCT116细胞的迁移(P值均<0.05)和侵袭(P值均<0.01)能力均低于Ctrl组。KO-1和KO-2组单克隆HCT116细胞中上皮-间质转化标志分子N-cadherin和VIM以及相关转录因子Snail和ZEB1 mRNA的表达水平均明显低于Ctrl组(P值均<0.01),E-cadherin mRNA的表达水平均明显高于Ctrl组(P值均<0.01)。结论:沉默ACLY基因可能逆转结肠癌HCT116细胞的上皮-间质转化,显著抑制结肠癌HCT116细胞的增殖和迁移。 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 细胞迁移分析 肿瘤侵润 上皮-间质转化 ACLY基因 成簇规律间隔的短回文重复序列/CRISPR相关蛋白9
Wnt抑制剂IWR-1抑制骨肉瘤MG-63细胞的增殖和迁移
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作者 丁界先 张津 +3 位作者 王拴科 王兴文 汪静 陈永刚 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期712-721,共10页
目的 :探讨Wnt抑制剂IWR-1-endo(简称:IWR-1)对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和迁移的影响,及可能的机制。方法 :用不同浓度的IWR-1(2、4、8和16μmol/L)处理MG-63细胞,CCK-8法检测IWR-1对MG-63细胞增殖的抑制率;FCM法检测MG-63细胞的周期及凋... 目的 :探讨Wnt抑制剂IWR-1-endo(简称:IWR-1)对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和迁移的影响,及可能的机制。方法 :用不同浓度的IWR-1(2、4、8和16μmol/L)处理MG-63细胞,CCK-8法检测IWR-1对MG-63细胞增殖的抑制率;FCM法检测MG-63细胞的周期及凋亡率;划痕愈合实验观察对MG-63细胞迁移能力的影响;实时荧光定量PCR法检测β连环蛋白(β-catenin)和cyclinD1mRNA的表达水平,蛋白质印迹法检测轴抑制蛋白1(axis inhibition protein 1,AXIN1)、β-catenin、磷酸化β-catenin和cyclin D1蛋白的表达水平。结果 :IWR-1对MG-63细胞的增殖抑制率随着药物浓度的提高和作用时间的延长而增强(P值均<0.01)。MG-63细胞周期呈现明显的G0/G1期阻滞(P值均<0.05),细胞凋亡率随着药物浓度的增加而显著升高(P值均<0.01)。IWR-1可明显降低划痕愈合率(P值均<0.01),可引起MG-63细胞内β-catenin和cyclinD1mRNA和蛋白表达水平下调(P值均<0.01),而使AXIN2和磷酸化β-catenin蛋白的表达水平上调(P值均<0.01)。结论 :IWR-1可以抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖及迁移,其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来实现的。 展开更多
关键词 骨肉瘤 WNT信号通路 细胞增殖 细胞迁移分析 Wnt抑制剂IWR-1-endo
维替泊芬影响骨肉瘤MG63细胞增殖和迁移侵袭的作用机制 预览
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作者 陈蔚 余铃 +2 位作者 陈敬腾 夏露 郭卫春 《安徽医药》 CAS 2019年第12期2337-2341,共5页
目的探讨维替泊芬影响骨肉瘤MG63细胞增殖及迁移侵袭的的作用机制。方法体外培养骨肉瘤MG63细胞,采用人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK⁃8)检测不同浓度(0、2、4、6、8、10μmol/L)维替泊芬对骨肉瘤MG63细胞增殖影响;流式细胞术分析(0、2、... 目的探讨维替泊芬影响骨肉瘤MG63细胞增殖及迁移侵袭的的作用机制。方法体外培养骨肉瘤MG63细胞,采用人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK⁃8)检测不同浓度(0、2、4、6、8、10μmol/L)维替泊芬对骨肉瘤MG63细胞增殖影响;流式细胞术分析(0、2、4、6、8μmol/L)维替泊芬对骨肉瘤MG63细胞周期分布及凋亡的影响;划痕实验和TranswellTM侵袭实验检测(0、2、4、6、8μmol/L)维替泊芬对骨肉瘤MG63细胞迁移及侵袭能力的影响;蛋白质印迹法(Western Blot)检测(0、2、4、6、8μmol/L)维替泊芬对Hippo信号通路中Yes⁃相关蛋白1(YAP1)、TEA转录因子1(TEAD1)、磷酸化Yes⁃相关蛋白1(pYAP1)的蛋白表达水平。结果CCK⁃8结果显示维替泊芬能够抑制骨肉瘤MG63细胞的增殖,24、48、72 h的半抑制浓度(IC50)分别为(6.592±0.121)μmol/L、(4.668±0.075)μmol/L、(2.953±0.078)μmol/L,并呈时间、浓度依赖性;流式细胞术结果表明维替泊芬以浓度依赖的方式诱导骨肉瘤MG63细胞凋亡,使骨肉瘤MG63细胞周期阻滞于G0/G1期;划痕实验和TranswellTM侵袭实验结果表明维替泊芬可抑制MG63细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法结果显示维替泊芬处理的MG63细胞中YAP1、TEAD1蛋白表达水平降低,而pYAP1蛋白表达水平保持不变。结论维替泊芬能抑制骨肉瘤MG63细胞增殖、促进细胞凋亡、导致细胞周期阻滞,以及抑制细胞迁移和侵袭,并且下调YAP1及TEAD1表达,维替泊芬阻碍YAP1和TEAD1相互作用可能是抗骨肉瘤的作用机制。 展开更多
关键词 骨肉瘤 维替泊芬 Hippo信号通路 增殖 迁移 侵袭 流式细胞 细胞迁移分析 印迹法 蛋白质 人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽
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LINC01296在肝癌组织中的表达及其对肝癌Hep3B细胞增殖、迁移和侵袭的作用
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作者 万亚锋 李墨林 +1 位作者 陈小龙 黄平 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期747-755,774共10页
目的 :探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)LINC01296在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织和细胞中的表达,以及其对肝癌Hep3B细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 :利用GEPIA(Gene Expression Pro ling Interac... 目的 :探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)LINC01296在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织和细胞中的表达,以及其对肝癌Hep3B细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 :利用GEPIA(Gene Expression Pro ling Interactive Analysis)数据库及实时荧光定量PCR法检测和分析LINC01296在肝癌细胞、HCC组织及癌旁组织中的表达水平,同时检测其在肝癌细胞及正常肝细胞中的表达水平。将携带有LINC01296过表达载体和LINC01296沉默载体的慢病毒感染至Hep3B细胞中,分别采用CCK-8和Transwell小室法检测LINC01296对Hep3B细胞增殖、迁移和侵袭的影响;采用蛋白质印迹法检测LINC01296对Hep3B细胞中上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志蛋白表达的影响。结果 :LINC01296在HCC组织及肝癌细胞中的表达水平均显著上调(P值均<0.05)。在Hep3B细胞中,LINC01296过表达明显促进了细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进EMT的活性(P值均<0.01);而LINC01296沉默后的结果恰好相反(P值均<0.01)。结论:LINC01296在HCC组织及细胞中的表达水平上调,并且LINC01296可能通过促进EMT的活性而促进Hep3B细胞的增殖、迁移和侵袭。 展开更多
关键词 细胞 RNA 长链非编码 细胞增殖 细胞迁移分析
钙卫蛋白S100A8/A9对口腔鳞癌细胞增殖和迁移的影响 预览
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作者 鲍玲娜 马洪 李超 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第9期1034-1038,共5页
目的:研究钙卫蛋白S100A8/A9对口腔鳞癌(OSCC)细胞SCC-25增殖和迁移能力的影响。方法:选取人舌鳞状细胞癌细胞SCC-25作为模型细胞,将S100A8和S100A9人重组蛋白以质量比1∶1均匀混合形成钙卫蛋白S100A8/A9,分别以0mg/L(对照组)、5、10、2... 目的:研究钙卫蛋白S100A8/A9对口腔鳞癌(OSCC)细胞SCC-25增殖和迁移能力的影响。方法:选取人舌鳞状细胞癌细胞SCC-25作为模型细胞,将S100A8和S100A9人重组蛋白以质量比1∶1均匀混合形成钙卫蛋白S100A8/A9,分别以0mg/L(对照组)、5、10、20、30和40mg/L的浓度作用于SCC-25细胞24及48h,观察钙卫蛋白S100A8/A9对SCC-25细胞增殖能力的影响;选取5mg/L钙卫蛋白S100A8/A9处理SCC-25细胞,采用Transwell小室及细胞划痕实验观察S100A8/A9对SCC-25细胞的侵袭及迁移能力的影响。结果:5、10、20、30和40mg/L钙卫蛋白S100A8/A9作用下SCC-25细胞24h时的增殖能力较对照组增强(P<0.05),5、10、20和30mg/L钙卫蛋白S100A8/A9作用下SCC-25细胞48h时的增殖能力表现出相同趋势,但40mg/L钙卫蛋白S100A8/A9作用SCC-25细胞48h时的增殖能力较对照组减弱(P<0.05);Transwell小室实验显示,5mg/L钙卫蛋白S100A8/A9作用的实验组穿过聚碳酸酯膜的SCC-25细胞数目多于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);划痕实验结果显示,5mg/L钙卫蛋白S100A8/A9作用的实验组在24、48及72h后细胞划痕面积明显小于对照组。结论:5mg/L钙卫蛋白S100A8/A9促进SCC-25细胞的增殖和迁移。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞 细胞增殖 细胞迁移分析 细胞运动 钙卫蛋白
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苦瓜Ⅰ型核糖体失活蛋白对膀胱癌迁移能力的影响及机制研究
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作者 庞昆 陈波 +4 位作者 郝林 史振铎 周荣升 臧光辉 韩从辉 《中国医师杂志》 CAS 2019年第2期184-188,共5页
目的研究苦瓜Ⅰ型核糖体失活蛋白(MAP30)对膀胱癌迁移能力的影响及机制。方法采用MTT法计算MAP30对人膀胱癌5637和T24细胞的半数抑制浓度(IC50)后,采用此浓度的MAP30通过细胞划痕迁移实验和Transwell细胞迁移实验来评估两种细胞的迁移能... 目的研究苦瓜Ⅰ型核糖体失活蛋白(MAP30)对膀胱癌迁移能力的影响及机制。方法采用MTT法计算MAP30对人膀胱癌5637和T24细胞的半数抑制浓度(IC50)后,采用此浓度的MAP30通过细胞划痕迁移实验和Transwell细胞迁移实验来评估两种细胞的迁移能力,并用Western blot分别检测两种肿瘤细胞加入MAP30后基质金属蛋白酶(MMPs)和黏附分子N-cadherin等蛋白的表达。结果细胞划痕迁移实验:5637细胞加药组和对照组在8 h和22 h迁移率比较差异均有统计学意义(P<0.05),T24细胞加药组和对照组间8 h迁移率差异无统计学意义(P>0.05),在22 h迁移率差异有统计学意义(P<0.05)。MAP30干预后,人膀胱癌5637细胞和T24细胞中Vimentin、Fibronectin、MMP-2、MMP-9、N-Cadherin蛋白的表达明显降低。人膀胱癌5637细胞E-Cadherin表达降低,但人膀胱癌T24细胞未检测到目的条带。结论苦瓜Ⅰ型核糖体失活蛋白MAP30通过抑制上皮-间质细胞转化(EMT)途径和抑制MMPs表达,可以有效抑制人膀胱癌5637和T24细胞的迁移能力。 展开更多
关键词 核糖体失活蛋白质类 1型 膀胱肿瘤 细胞迁移分析 上皮细胞-间质转化 体外研究
MicroRNA-126在动脉粥样硬化性脑梗死患者血清中的表达变化及其机制研究 预览
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作者 张翠 司君增 郑立峰 《中国现代医学杂志》 CAS 2019年第12期36-42,共7页
目的观察microRNA(miR-126)在动脉粥样硬化性脑梗死(ACI)患者血清中的表达变化及其对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响,并探讨其机制。方法选取2015年11月—2017年11月莱芜市人民医院发病7 d内就诊的150例急性脑梗死患者,分为ACI 组110 ... 目的观察microRNA(miR-126)在动脉粥样硬化性脑梗死(ACI)患者血清中的表达变化及其对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响,并探讨其机制。方法选取2015年11月—2017年11月莱芜市人民医院发病7 d内就诊的150例急性脑梗死患者,分为ACI 组110 例(稳定斑块患者74 例,不稳定斑块患者36 例)和非动脉粥样硬化性脑梗死(NACI)患者40例,同时选择同期40例年龄、性别相匹配的健康志愿者作为对照组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测3 组血清miR-126的表达,体外培养人血管平滑肌细胞系HA-VSMC,分别转染miR-126模拟物、模拟物阴性对照和miR-126抑制物、抑制物阴性对照。采用qRT-PCR 检测miR-126 的表达;CCK-8法检测细胞增殖活性;Transwell 迁移实验检测细胞迁移能力;Western blotting 检测基质金属蛋白酶13(MMP-13)蛋白的表达。结果 ACI 组患者血清miR-126 表达水平较NACI 组和对照组降低(P <0.05),且不稳定斑块患者血清miR-126 表达水平低于稳定斑块患者(P <0.05)。与模拟物阴性对照组比较,miR-126 模拟物组细胞miR-126 表达水平升高(P <0.05),细胞增殖活性和迁移能力下降(P <0.05),MMP-13 表达升高(P <0.05);与抑制物阴性对照组比较,miR-126 抑制物组细胞增殖活性和迁移能力提高(P <0.05),MMP-13 表达降低(P <0.05)。结论 ACI 患者血清miR-126 表达降低,并可通过抑制血管平滑肌细胞的增殖和迁移起到抗动脉粥样硬化作用,其机制可能与下调MMP-13 的表达有关。 展开更多
关键词 梗塞 大脑中动脉 动脉粥样硬化 细胞增殖 细胞迁移分析
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苦参碱抑制胃癌MGC-803细胞增殖和迁移的机制探讨
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作者 王莹 焦璐 +3 位作者 乔丹 林贞花 李柱虎 朴英实 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期534-541,共8页
目的:探讨苦参碱(matrine,MAT)抑制胃癌MGC-803细胞增殖和迁移的分子机制。方法:不同质量浓度的MAT处理MGC-803细胞后,应用MTT法检测MGC-803细胞的增殖活力,平板克隆形成实验检测MGC-803细胞的克隆形成能力,划痕愈合实验和Transwell小... 目的:探讨苦参碱(matrine,MAT)抑制胃癌MGC-803细胞增殖和迁移的分子机制。方法:不同质量浓度的MAT处理MGC-803细胞后,应用MTT法检测MGC-803细胞的增殖活力,平板克隆形成实验检测MGC-803细胞的克隆形成能力,划痕愈合实验和Transwell小室法检测MGC-803细胞的横向及纵向迁移能力,FCM法检测MGC-803细胞的细胞周期分布,蛋白质印迹法检测MGC-803细胞中上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)相关标志蛋白和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)家族成员MMP2和MMP9蛋白的表达水平。结果:MAT可显著抑制MGC-803细胞增殖(P<0.01)、克隆形成(P<0.05)以及横向和纵向迁移(P值均<0.01),诱导MGC-803细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.01)。MAT显著下调了MGC-803细胞中Vimentin(P<0.05)、Snail(P<0.01)蛋白以及MMP2(P<0.01)、MMP9(P<0.01)蛋白的表达水平,上调E-cadherin(P<0.05)蛋白表达水平。结论:MAT可有效抑制胃癌MGC-803细胞增殖和迁移,阻滞细胞周期于G0/G1期,其机制可能与MAT调控EMT相关蛋白表达有关。 展开更多
关键词 胃肿瘤 细胞增殖 细胞周期 细胞迁移分析 苦参碱
长链非编码RNA LINC01204上调GPC5基因表达对膀胱癌恶性生物学行为的影响
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作者 张建东 李建文 +1 位作者 赵志平 张雁钢 《中国医师杂志》 CAS 2019年第5期700-704,共5页
目的探讨长链非编码RNA LINC01204对膀胱癌细胞磷脂酰肌醇蛋白聚糖-5(GPC5)基因表达的上调作用及对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测12例膀胱癌组织及癌旁组织、膀胱癌细胞株BIU-87、T24、... 目的探讨长链非编码RNA LINC01204对膀胱癌细胞磷脂酰肌醇蛋白聚糖-5(GPC5)基因表达的上调作用及对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测12例膀胱癌组织及癌旁组织、膀胱癌细胞株BIU-87、T24、J82、5637和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中LINC01204的表达量。以表达量最低的膀胱癌细胞为转染对象,用携带LINC01204的慢病毒颗粒转染细胞(观察组)和阴性对照慢病毒颗粒转染细胞(对照组),qRT-PCR检测两组细胞中LINC01204和GPC5 mRNA表达量。Western blot检测两组细胞中GPC5蛋白的表达。细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell小室实验分别测定细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果膀胱癌组织中LINC01204表达量(0.773±0.063)明显低于癌旁组织(3.665±0.330),差异有统计学意义(t=8.612,P<0.001)。膀胱癌细胞株BIU-87(0.320±0.034)、T24(0.515±0.056)、J82(0.644±0.039)、5637(0.147±0.018)中LINC01204表达水平均低于正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1(1.009±0.077),差异均有统计学意义(t=8.160,P<0.001;t=5.179,P=0.002;t=4.221,P=0.006;t=10.890,P<0.001),5637细胞表达量最低。观察组5637细胞中LINC01204表达量(11.000±1.028)明显高于对照组(1.019±0.119),差异均有统计学意义(t=9.651,P<0.001)。观察组GPC5 mRNA表达量(4.476±0.347)明显高于对照组(1.046±0.163),差异均有统计学意义(t=8.962,P<0.001)。Western blot结果显示,观察组5637细胞中GPC5蛋白表达上调。与对照组相比,观察组转染LINC01204后的5637细胞从第3天(0.686±0.044 vs 0.536±0.026,t=2.943,P=0.026)开始增殖能力明显降低。观察组5637细胞迁移数[(118.300±16.260)个]明显低于对照组[(208.200±22.930)个],差异均有统计学意义(t=3.198,P=0.019)。观察组5637细胞侵袭数[(50.390±5.368)个]明显低于对照组[(97.480±15.350)个],差异均有统计学意义(t=2.896,P=0.028)。结论 LINC01204可上调GPC5基因的表达,抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移� 展开更多
关键词 RNA 长链非编码 磷脂酰肌醇蛋白聚糖类 膀胱肿瘤 细胞增殖 细胞迁移分析 体外研究
人脂肪来源干细胞胶治疗皮肤凹陷性瘢痕患者的作用及其机制
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作者 欧令东 张爱君 +4 位作者 李昂 陶胜军 徐曼曼 李强 金培生 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期859-865,共7页
目的观察人脂肪来源干细胞胶(SVF-GEL)中细胞因子含量及其体外对表皮、真皮细胞生物学行为的影响和临床疗效。方法(1)收集笔者单位行脂肪抽吸术获取的女性腹部脂肪抽吸液制备SVF-GEL。取1 mL SVF-GEL和1 mL DMEM高糖培养基,均用含体积分... 目的观察人脂肪来源干细胞胶(SVF-GEL)中细胞因子含量及其体外对表皮、真皮细胞生物学行为的影响和临床疗效。方法(1)收集笔者单位行脂肪抽吸术获取的女性腹部脂肪抽吸液制备SVF-GEL。取1 mL SVF-GEL和1 mL DMEM高糖培养基,均用含体积分数10%胎牛血清、10 g/L青霉素、10 g/L链霉素的DMEM高糖培养基培养24 h,分别设为SVF-GEL组和阴性对照组,样本数均为6,采用酶联免疫吸附测定法检测上清液中表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)含量。(2)选取处于对数生长期的5×105个人皮肤成纤维细胞(HSF)、HaCaT细胞分别接种于Transwell小室常规培养12 h,将所有培养细胞的Transwell小室分为2组,SVF-GEL处理组在Transwell小室中加入0.5 mL SVF-GEL与细胞共培养,对照组在Transwell小室中加入0.5 mL DMEM高糖培养基与细胞共培养,2种细胞各组样本数均为9。培养24 h后行划痕试验,观察划痕后0(即刻)、24、48 h划痕剩余宽度变化,测量划痕后24、48 h的细胞迁移距离;培养24、48、72 h采用细胞计数仪计数活细胞。(3)2018年6月—2019年6月,笔者单位应用SVF-GEL填充15例患者面部凹陷性瘢痕,其中男2例、女13例,年龄19~42岁。术后6个月,记录SVF-GEL存活情况、有无并发症。术前及术后6个月,对比患者瘢痕凹陷程度、色泽、柔软性,采用温哥华瘢痕量表进行色泽、血管、柔软性评分并计算总分。术后6个月记录十分满意、满意的患者数量。对数据行析因设计方差分析、配对样本t检验及Wilcoxon秩和检验。结果(1)SVF-GEL组、阴性对照组EGF含量分别为(316.6±12.8)、(3.4±0.6)pg/mL,VEGF含量分别为(568.67±12.19)、(4.93±0.16)pg/mL,组间比较,差异均有统计学意义(t=48.777、92.485,P<0.01)。(2)HSF、HaCaT各组细胞划痕剩余宽度随时间延长逐渐缩小,其中SVF-GEL处理组划痕后24、48 h的划痕剩余宽度均小于相应对照组。SVF-GEL处理组划痕后24、48 h HSF、HaCaT 展开更多
关键词 瘢痕 表皮生长因子 血管内皮生长因子类 细胞迁移分析 细胞增殖 脂肪来源干细胞
SNHG16通过Wnt/β-catenin信号通路促进肝细胞癌细胞增殖和迁移
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作者 陈航 黄平 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期259-269,共11页
目的 :检测长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因16(small nucleolar RNA host gene 16,SNHG16)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织及细胞中的表达情况,探讨SNHG16表达调控对HCC细胞增殖和迁移的影响及其分子机制。方法 :采用实... 目的 :检测长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因16(small nucleolar RNA host gene 16,SNHG16)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织及细胞中的表达情况,探讨SNHG16表达调控对HCC细胞增殖和迁移的影响及其分子机制。方法 :采用实时荧光定量PCR法检测38例HCC患者的肝癌及癌旁组织,以及4种肝癌细胞株和正常肝细胞株中SNHG16的表达水平。分析SNHG16表达与HCC患者临床病理特征的关系。将SNHG16过表达或SNHG16-shRNA重组慢病毒分别感染肝癌Hep-3B或SK-Hep-1细胞,采用实时荧光定量PCR法验证细胞中SNHG16表达被调控后,采用CCK-8和Transwell小室法分别检测肝癌细胞增殖和迁移能力的变化,并采用蛋白质印迹法检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白表达的变化。通过裸鼠成瘤实验检测SNHG16表达调控对裸鼠体内肝癌细胞成瘤能力的影响。结果 :HCC组织和细胞中SNHG16表达水平分别高于癌旁组织和正常肝细胞(P <0.001,P <0.05),而且HCC组织中SNHG16表达与肿瘤大小(P <0.01)、TNM分期(P <0.01)和谷丙转氨酶表达水平(P <0.05)密切相关。感染SNHG16过表达重组慢病毒后的Hep-3B细胞中SNHG16表达明显上调(P <0.001),细胞增殖和迁移能力明显增强(P值均<0.01),而且细胞中c-myc和β-catenin表达明显上调(P值均<0.01)。感染SNHG16-shRNA重组慢病毒后的SK-Hep-1细胞中SNHG16表达明显下调(P <0.001),细胞增殖和迁移能力明显减弱(P值均<0.001),而且细胞中c-myc和β-catenin表达明显下调(P <0.05,P <0.01)。另外,SNHG16过表达的Hep-3B细胞在裸鼠体内的成瘤能力明显增强(P <0.01),而SNHG16被敲低的SKHep-1细胞在裸鼠体内的成瘤能力明显减弱(P <0.05)。结论 :SNHG16在HCC组织和细胞系中表达水平升高,并可能通过Wnt/β-catenin信号通路促进肝癌细胞的增殖和迁移。 展开更多
关键词 细胞 RNA 长链非编码 细胞增殖 细胞迁移分析 WNT/Β-CATENIN信号通路 SNHG16
RGD多肽修饰的芬维A钱脂质体对恶性黑素瘤细胞增殖、凋亡及迁移的影响
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作者 王梦蛟 崔艾丽 +2 位作者 金承龙 方宇辉 金哲虎 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期182-188,共7页
目的探讨芬维A铵(4-HPR)对B16F10和A375黑素瘤细胞增殖、凋亡及迁移的影响,并观察脂质体及以RGD多肽修饰的脂质体对药物摄取及作用的影响。方法采用薄膜-水化法制备4-HPR脂质体(4-HPRL),并以RGD多肽对4-HPRL进行修饰,制备RGD-4-HPRL,对... 目的探讨芬维A铵(4-HPR)对B16F10和A375黑素瘤细胞增殖、凋亡及迁移的影响,并观察脂质体及以RGD多肽修饰的脂质体对药物摄取及作用的影响。方法采用薄膜-水化法制备4-HPR脂质体(4-HPRL),并以RGD多肽对4-HPRL进行修饰,制备RGD-4-HPRL,对其浓度、粒径、电位、载药量及包封率进行检测:体外培养B16F10和A375细胞,分为对照组、4-HPR组、4-HPRL组和RGD-4-HPRL组,给4-HPR组分别加入含相同浓度4-HPR的4-HPR原料药、4-HPRL及RGD-4-HPRL,对照组加入等量培养液。作用不同时间后.通过CCK8细胞计数试剂盒检测细胞活性.膜联蛋白V/碘化丙锭染色检测细胞凋亡,细胞划痕实验检测药物对细胞迁移的影响:以香豆素6(C6)代替4-HPR制备C6脂质体(C6L)和RGD-C6L,流式细胞仪检测细胞对药物的摄取情况:采用SPSS22.0软件进行统计学分析.多组间数据比较采用单因素方差分析.两两组间显著性差异比较采用/检验=结果制备的4-HPRL和RGD-4-HPRL溶液可明显提高4-HPR的水溶性,并具有较高的载药量和包封率。粒径分布均匀,平均在100 nm以下。CCK8实验表明,4-HPR可明显抑制B16F10和A375细胞增殖,且相同浓度下4-HPRL对细胞增殖的抑制率高于4-HPR(P < 0.01), RGD-4-HPRL又高于4-HPRL(P < 0.01或P < 0.05)和4-HPR(P < 0.01);细胞凋亡实验表明4-HPR浓度分别为10 mg/L或20 mg/L时可明显诱导B16F10和A375细胞凋亡:4-HPRL组两种细胞凋亡率高于4-HPR组(均P<0.01),RGD-4-HPRL组高于4-HPRL组(均P<0.01)和4-HPR组(均P<0.01).细胞划痕实验显示,4-HPR可抑制两种细胞划痕愈合和细胞迁移,4-HPRL和RGD-4-HPRL抑制能力明显优于4-HPR原料药。摄取实验显示.B16F10细胞C6荧光强度在对照组为2.15 ± 0.28, C6组为&56 ± 0.36, C6L组为20.48 ± 0.13,RGD-C6L组为22.55 ± 0.07,各组间差异有统计学意义(F = 67 194.186,P< 0.01),其中,C6L组与RGD-C6L组荧光强度明显高于C6组(均P<0.01),且RGD-C6L组髙于C6L组(P<0.01)。结论4-HPR可抑制黑素瘤 展开更多
关键词 黑色素瘤 细胞 肿瘤 芬维A铵 脂质体 整合素ΑVΒ3 细胞增殖 细胞凋亡 细胞迁移分析
半枝莲总黄酮对非小细胞肺癌细胞增殖及迁移的影响 预览
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作者 任守雷 郭晓晓 +2 位作者 陈翠翠 赵海燕 李来庆 《安徽医药》 CAS 2019年第10期1939-1942,I0002共5页
目的观察半枝莲总黄酮对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响并对其机制进行初步探索。方法体外培养非小细胞肺癌A549细胞,分为阴性对照组、实验组、阳性对照组。阴性对照组用1640培养液200μL处理细胞,实验组分别用1,5,10,20,40μg... 目的观察半枝莲总黄酮对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响并对其机制进行初步探索。方法体外培养非小细胞肺癌A549细胞,分为阴性对照组、实验组、阳性对照组。阴性对照组用1640培养液200μL处理细胞,实验组分别用1,5,10,20,40μg/mL半枝莲总黄酮处理细胞24 h,阳性对照组用200μL 40μg/mL芦丁溶液处理细胞。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)观察细胞增殖情况;通过流式细胞术检测细胞凋亡情况;蛋白质印迹法(Western Blot)检测凋亡抑制蛋白Survivin和促凋亡蛋白酶Caspase?3蛋白的表达;迁移划痕实验检测迁移的情况。结果MTT检测结果显示,阳性对照组的增殖抑制率为(57.234±0.533)%,实验组的增殖抑制率分别为(14.852±1.059)%、(23.486±1.366)%、(36.396±0.321)%、(46.179±1.334)%和(51.530±1.054)%,随浓度增加抑制率显著升高,呈浓度依赖(F=1 408.303,P<0.001);流式细胞术检测细胞凋亡率,阴性对照组(9.09±0.50)%、阳性对照组(67.27±1.48)%、实验组分别为(24.62±0.70)%、(34.67±0.46)%、(46.92±0.29)%、(55.67±0.57)%和(59.29±0.73)%,实验组的细胞凋亡率均高于阴性对照组(F=1 467.681,P<0.001);Western Blot结果显示,实验组Survivin蛋白表达均低于阴性对照组,Caspase?3蛋白表达均高于对照组(F=34.176,P<0.001;F=57.730,P<0.001);迁移划痕实验结果显示,半枝莲总黄酮抑制肺腺癌A549细胞迁移并呈现剂量依赖性。结论半枝莲总黄酮可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,可能与Survivin蛋白降低和Caspase?3蛋白表达量升高有关;另外,半枝莲总黄酮可抑制人肺腺癌A549细胞的迁移。 展开更多
关键词 半枝莲 非小细胞 凋亡抑制蛋白质类 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 细胞迁移分析 细胞运动 总黄酮
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长链非编码RNA KCNQ1OT1在鼻咽癌中的表达及对鼻咽癌细胞增殖和迁移的影响
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作者 李斐 常昆鹏 +1 位作者 张炜 王红洛 《中国耳鼻咽喉头颈外科》 CSCD 2019年第10期522-525,共4页
目的分析长链非编码RNA KCNQ1OT1在鼻咽癌组织和细胞中的表达,观察其对鼻咽癌细胞增殖和迁移的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测KCNQ1OT1在鼻咽癌组织和细胞株中的表达。选取表达量最低的鼻咽癌细胞株转染过表达KCNQ1OT1... 目的分析长链非编码RNA KCNQ1OT1在鼻咽癌组织和细胞中的表达,观察其对鼻咽癌细胞增殖和迁移的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测KCNQ1OT1在鼻咽癌组织和细胞株中的表达。选取表达量最低的鼻咽癌细胞株转染过表达KCNQ1OT1的质粒及空载质粒。qRT-PCR检测KCNQ1OT1和SEMA3B mRNA的表达,Westernblot检测SEMA3B蛋白的表达,采用细胞计数试剂盒(cellcountingkit-8,CCK-8)和Transwell迁移实验检测KCNQ1OT1对鼻咽癌细胞增殖能力和迁移能力的影响。结果 KCNQ1OT1在鼻咽癌组织的表达量(1.78±0.10)明显低于癌旁组织(3.24±0.29)(t=4.65,P<0.01),在鼻咽癌细胞株的表达量明显低于鼻咽上皮细胞NP69(P<0.05),其中CNE-2Z细胞表达量最低(t=12.61,P<0.01)。转染KCNQ1OT1质粒后可显著促进KCNQ1OT1的表达(P <0.01),SEMA3B在mRNA和蛋白水平上的表达量明显升高(P<0.01)。KCNQ1OT1过表达后,鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖能力和迁移能力明显被抑制(P<0.01)。结论 KCNQ1OT1在鼻咽癌组织和细胞中呈低表达,过表达KCNQ1OT1可通过增加SEMA3B基因的表达,抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖能力和迁移能力,有望成为鼻咽癌治疗的新靶点。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 细胞增殖 细胞迁移分析 长链非编码RNA
ERH基因对人膀胱癌T24和5637细胞迁移、侵袭的影响
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作者 庞昆 李美丽 +5 位作者 陈波 郝林 史振铎 周荣升 臧光辉 韩从辉 《中国医师杂志》 CAS 2019年第6期856-861,共6页
目的研究基本同源物增强子(ERH)对人膀胱癌T24和5637细胞迁移和侵袭作用的影响。方法将人膀胱癌T24和5637细胞的ERH敲除后,采用细胞划痕实验、Transwell细胞迁移实验、Transwell细胞侵袭实验验证其迁移和侵袭功能变化,Western blot检测... 目的研究基本同源物增强子(ERH)对人膀胱癌T24和5637细胞迁移和侵袭作用的影响。方法将人膀胱癌T24和5637细胞的ERH敲除后,采用细胞划痕实验、Transwell细胞迁移实验、Transwell细胞侵袭实验验证其迁移和侵袭功能变化,Western blot检测细胞迁移与侵袭相关蛋白的表达,并通过裸鼠尾静脉转移实验验证敲除ERH基因后在体内对膀胱癌细胞转移能力的影响。结果 (1)细胞划痕实验结果显示,敲除ERH基因后的人膀胱癌5637和T24细胞迁移率均明显降低(P <0. 05);(2)Transwell细胞迁移实验、Transwell细胞侵袭实验结果显示,敲除ERH基因后的人膀胱癌5637和T24细胞迁移细胞计数和侵袭细胞计数均明显减少(P <0. 05)。(3)Western blot实验结果显示,敲除ERH基因后的人膀胱癌5637细胞和T24细胞中E-Cadherin表达明显升高(P <0. 05),而Fibronectin、Twist、Vimentin、Snail2蛋白的表达明显降低(P <0. 05)。(4)裸鼠尾静脉转移实验显示,与ERH正常组相比,ERH敲除组小鼠肺转移灶明显减少。结论体外和体内实验均提示,ERH基因敲除影响人膀胱癌T24和5637细胞的迁移与侵袭。 展开更多
关键词 转录因子 细胞周期蛋白质类 膀胱肿瘤 细胞迁移分析 体外研究
石蒜碱对骨肉瘤的抑制作用及机制探讨
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作者 袁晓慧 张平 +7 位作者 喻婷婷 谭涛 杨升东 黄华坤 张露露 杨春梅 罗小辑 罗进勇 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期691-700,共10页
目的 :分析石蒜碱对人骨肉瘤143B细胞的抑制作用及其潜在分子机制。方法 :分别用0~8μmol/L的石蒜碱处理人骨肉瘤143B细胞,然后采用结晶紫法、MTT法和克隆形成实验检测石蒜碱对143B细胞增殖的影响,细胞划痕愈合实验检测细胞迁移能力,Tra... 目的 :分析石蒜碱对人骨肉瘤143B细胞的抑制作用及其潜在分子机制。方法 :分别用0~8μmol/L的石蒜碱处理人骨肉瘤143B细胞,然后采用结晶紫法、MTT法和克隆形成实验检测石蒜碱对143B细胞增殖的影响,细胞划痕愈合实验检测细胞迁移能力,Transwell小室法检测细胞侵袭能力,Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测细胞迁移和侵袭相关标志基质金属蛋白酶7(matrix metalloproteinase-7,MMP-7)和MMP-9,以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase 3和剪切型Caspase 3(cleaved Caspase 3,c-Caspase 3)的表达情况。然后,采用荧光素酶报告基因系统检测细胞中T细胞因子(T-cell factor,TCF)/淋巴样增强因子(lymphoid enhancer factor,LEF)的转录活性,再用蛋白质印迹法检测Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin及下游靶分子Cyclin D1和c-Myc的表达。结果 :石蒜碱明显抑制骨肉瘤143B细胞的增殖、迁移和侵袭,同时促进细胞凋亡(P值均<0.01)。石蒜碱处理后,143B细胞中迁移和侵袭相关蛋白MMP-7和MMP-9的表达量明显下调(P值均<0.05);凋亡相关蛋白Bcl-2表达量下调(P <0.01),而Caspase3和c-Caspase3的表达量明显上调(P值均<0.05);同时,TCF/LEF转录活性明显下降(P <0.01),Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、c-Myc和CyclinD1蛋白水平均明显降低(P值均<0.05)。结论 :石蒜碱可能通过阻断Wnt/β-catenin信号通路来抑制人骨肉瘤143B细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 骨肉瘤 石蒜碱 细胞增殖 细胞迁移分析 WNT/Β-CATENIN信号通路
稳定干扰癌相关成纤维细胞中YAP1表达可抑制乳腺癌MDAMB-231细胞迁移和侵袭
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作者 杜燕娥 李跟友 +5 位作者 段亮 丁小娟 王玎 文思阳 赵茂嘉 侯懿烜 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期863-873,896,共12页
目的 :探讨稳定干扰癌相关成纤维细胞(cancer-associatedbroblast,CAF)中Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)表达对乳腺癌MDAMB-231细胞迁移和侵袭的影响。方法 :用生物信息学方法分析乳腺原代CAF与对应正常成纤维细胞(normal... 目的 :探讨稳定干扰癌相关成纤维细胞(cancer-associatedbroblast,CAF)中Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)表达对乳腺癌MDAMB-231细胞迁移和侵袭的影响。方法 :用生物信息学方法分析乳腺原代CAF与对应正常成纤维细胞(normal broblast,NF)的m RNA芯片数据中YAP1的表达,并采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测乳腺原代及永生化CAF与NF细胞中YAP1m RNA和蛋白的表达水平,以验证芯片结果的真实性和准确性。用NF与CAF条件培养液分别培养乳腺癌MDA-MB-231细胞,然后采用Transwell小室法比较NF与CAF对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响。构建靶向YAP1基因的sh RNA重组质粒并转染入CAF,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测CAF细胞中YAP1 m RNA和蛋白的表达水平,然后采用划痕愈合实验和Transwell小室法分别检测干扰YAP1表达后的CAF条件培养液对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的影响。用Hippo通路抑制剂XMU-MP-1处理CAF,采用蛋白质印迹法检测CAF细胞中YAP1总蛋白和磷酸化蛋白水平,Transwell小室法检测XMU-MP-1处理后的CAF条件培养液对MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响。采用实时荧光定量PCR法检测干扰YAP1表达后的CAF细胞中YAP1下游与迁移和侵袭密切相关的转化因子β1(transforminggrowthfactor-beta1,TGF-β1)和白细胞介素6(interleukin 6,IL6)的表达,并采用CollagenⅠ胶原凝胶收缩实验检测干扰YAP1表达对细胞外基质重塑的影响。结果 :m RNA芯片检测发现,与正常对照NF相比,乳腺原代CAF中YAP1高表达(P <0.05)。实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测证实原代及永生化CAF中YAP1 m RNA(P <0.05)和蛋白(P <0.01)水平均明显高于NF。与NF相比较,CAF条件培养液可明显促进乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭(P <0.01)。成功构建YAP1sh RNA稳定转染的CAF细胞株,其中YAP1 m RNA和蛋白表达水平均明显下调(P值均<0.01)。与未干扰YAP1表达的CAF对照组相比,经稳定干扰YAP1的 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 癌相关成纤维细胞 RNA 小分子干扰 细胞外基质 肿瘤侵润 细胞迁移分析 Yes相关蛋白1
Circ-ZEB1对胶质瘤细胞生物学特性的影响
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作者 谢琳 黄佐於 +3 位作者 何明亮 李凯舒 欧阳乐平 刘安民 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2019年第7期722-728,共7页
目的探讨circ-ZEB1对胶质瘤细胞增殖、侵袭以及迁移的影响。方法分别在30例胶质瘤组织和8例正常脑组织(均来源于中山大学孙逸仙纪念医院神经外科)、胶质瘤细胞株(A172和U251)以及正常胶质细胞株(HA1800)中采用实时荧光定量PCR法检测circ... 目的探讨circ-ZEB1对胶质瘤细胞增殖、侵袭以及迁移的影响。方法分别在30例胶质瘤组织和8例正常脑组织(均来源于中山大学孙逸仙纪念医院神经外科)、胶质瘤细胞株(A172和U251)以及正常胶质细胞株(HA1800)中采用实时荧光定量PCR法检测circ-ZEB1的表达。采用si-circ-ZEB1转染A172和U251细胞以敲低circ-ZEB1。按照si-circ-ZEB1的种类分为si-1组和si-2组(分别转染si-circ-ZEB1-1、si-circ-ZEB1-2),并设立对照组(siRNA-NC阴性组,转染siRNA-NC)。以CCK-8法检测circ-ZEB1对胶质瘤细胞增殖的影响。分别采用划痕实验和Transwell实验观察circ-ZEB1对胶质瘤细胞迁移和侵袭的影响。应用CircNet数据库分析评价circ-ZEB1的circRNA-miRNA的基因调控网络,以双荧光素酶报告基因实验验证circRNA-miRNA的基因调控网络中circ-ZEB1/miR-140-3p的互作关系。结果Circ-ZEB1在胶质瘤组织中的表达高于正常脑组织(12.16±1.31对比6.84±0.56,P=0.001);相对于低级别胶质瘤[世界卫生组织(WHO)分级为Ⅰ~Ⅱ级],高级别胶质瘤(WHO分级为Ⅲ~Ⅳ级)组织中的circ-ZEB1表达更高(13.77±3.27对比7.50±1.82,P=0.001);且A172和U251的circ-ZEB1相对于HA1800的表达水平分别为2.91±0.30和3.32±0.20(均P<0.01)。CCK-8实验结果表明,与对照组相比,si-1组和si-2组的生长均明显受到抑制,A172细胞的增殖能力分别降低了40.0%和57.1%(均P<0.01),U251细胞的增殖能力分别降低了35.3%和48.5%(均P<0.01)。划痕实验中,si-1组和si-2组的迁移能力较对照组均明显受到抑制(均P<0.05);Transwell实验结果显示,si-1组和si-2组细胞的侵袭能力均低于对照组(均P<0.01)。CircRNA-miRNA的基因调控网络检测结果显示,circ-ZEB1可与多种miRNA相互作用,调节其表达并影响其下游蛋白的功能。双荧光素酶报告基因实验结果提示,circRNA-miRNA的基因调控网络中circ-ZEB1/miR-140-3p存在互作关系。结论Circ-ZEB1在胶质瘤组织和细胞株中呈高表达,下调circ-ZEB1� 展开更多
关键词 神经胶质瘤 环状RNA ZEB1 细胞迁移分析 侵袭
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