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环形泰勒虫喀什株感染牛淋巴细胞系的建立及其生物学特征的鉴定
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作者 马全英 李有全 +8 位作者 刘军龙 刘爱红 王锦明 赵帅阳 陈银银 徐建林 殷宏 关贵全 罗建勋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期144-151,共8页
建立1株环形泰勒虫(Theileria annulata)感染的牛淋巴细胞系,分析其生物学特征,为环形泰勒虫病疫苗研发提供新的细胞系。用环形泰勒虫喀什株感染的小亚璃眼蜱成蜱叮咬健康黄牛,当动物体温升高,体表淋巴结肿大时,用显微镜检查肩前和股前... 建立1株环形泰勒虫(Theileria annulata)感染的牛淋巴细胞系,分析其生物学特征,为环形泰勒虫病疫苗研发提供新的细胞系。用环形泰勒虫喀什株感染的小亚璃眼蜱成蜱叮咬健康黄牛,当动物体温升高,体表淋巴结肿大时,用显微镜检查肩前和股前淋巴结穿刺物涂片,出现裂殖体感染的淋巴细胞时,手术摘取淋巴结,无菌条件下进行淋巴细胞的分离培养;选择合适的培养条件对该细胞进行适应性传代培养,可稳定传代培养后,绘制细胞生长曲线,测定细胞倍增时间和细胞周期,测定细胞系环形泰勒虫18S rRNA基因序列,通过序列比对分析其亲缘关系。结果显示,建立了1株可传代培养的环形泰勒虫喀什株裂殖体感染的淋巴细胞系(TaKashi),接种5.0×10^5 mL^-1的细胞,经72 h培养周期,细胞浓度可达到(2.8~3.0)×10^6mL^-1,细胞存活率维持在90%以上;细胞群体倍增时间为33.4 h。细胞周期分析显示,G1期占46.2%,G2期占10.4%,S1期占43.4%,TaKashi传50代后仍然保持着淋巴细胞的形态学特征。18S rRNA基因序列比对及抗原基因Tams1同源性分析显示,该虫株与我国不同省份流行的环形泰勒虫虫株的相似性在91.9%以上,并处于同一个分支。 展开更多
关键词 环形泰勒虫 细胞培养 牛淋巴细胞 细胞系
吉西他滨对人舌鳞癌Tca8113细胞的放射增敏作用及其机制研究 预览
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作者 刘星验 张斌 +1 位作者 马竟 陈健 《中国现代医学杂志》 CAS 2019年第14期13-17,共5页
目的研究吉西他滨(GEM)对人舌鳞癌Tca8113细胞的放射增敏作用及其相关机制。方法用不同浓度GEM处理人舌鳞癌Tca8113细胞24 h,测定细胞存活率并确定后续实验浓度。对Tca8113细胞进行单独放疗或联合GEM处理,MTT法测定细胞存活率;平板克隆... 目的研究吉西他滨(GEM)对人舌鳞癌Tca8113细胞的放射增敏作用及其相关机制。方法用不同浓度GEM处理人舌鳞癌Tca8113细胞24 h,测定细胞存活率并确定后续实验浓度。对Tca8113细胞进行单独放疗或联合GEM处理,MTT法测定细胞存活率;平板克隆形成实验研究各组细胞集落形成的能力;流式细胞术验证Tca8113细胞对放射的敏感性变化。Western blotting检测Bcl-2、Bax、 Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9蛋白的表达。结果不同浓度GEM作用时的细胞存活率比较,经方差分析,差异有统计学意义(P<0.05)。与0.00μmol/L组比较,GEM浓度为0.01、0.02、0.03、0.10及1.00μmol/L时细胞存活率降低(P<0.05)。照射剂量为4 Gy时,与单纯放疗组比较,GEM联合放疗组细胞存活率降低(P<0.05)。克隆形成实验显示,GEM联合放疗组集落形成能力最弱(P<0.05);流式细胞术进一步证实,GEM联合放疗组较单纯放疗组凋亡率升高(P <0.05)。GEM联合放疗组Tca8113细胞凋亡高于其他各组,且Tca8113细胞中Bax、Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9蛋白表达水平高于其他组(P<0.05);而Bcl-2蛋白表达则低于其他各组(P<0.05)。结论 GEM对舌鳞癌Tca8113细胞的增殖有抑制作用,联合放射治疗能有效提高放射敏感性;两者可能具有协同抗肿瘤作用。 展开更多
关键词 舌肿瘤 细胞系 肿瘤 放射疗法
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兔脾脏成纤维型细胞RS-17系的建立及其生物学特性 预览
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作者 罗怡琳 蒙正群 +5 位作者 周丽军 王印 姚学萍 杨泽晓 罗燕 耿毅 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第1期130-135,共6页
采用胰酶消化法培养技术,对乳兔脾脏组织的细胞进行原代培养,从脾脏组织中分离出1株成纤维型细胞,命名为RS-17。通过对细胞传代培养条件优化,细胞标志性蛋白检测,细胞生长曲线分析,细胞核型以及细胞致瘤性等测定,结果显示,RS-17细胞具... 采用胰酶消化法培养技术,对乳兔脾脏组织的细胞进行原代培养,从脾脏组织中分离出1株成纤维型细胞,命名为RS-17。通过对细胞传代培养条件优化,细胞标志性蛋白检测,细胞生长曲线分析,细胞核型以及细胞致瘤性等测定,结果显示,RS-17细胞具有血清依懒性,成纤维细胞标志性蛋白检测阳性,具有正常的核型,无致瘤性,且目前细胞传至95代仍可稳定生长。这为RHDV(兔出血症病毒)感染机制等相关研究提供了细胞材料。 展开更多
关键词 乳兔 脾脏组织 细胞系 生物学特性
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脆性X综合征外周血淋巴细胞永生化细胞系的建立与验证 预览
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作者 高飞 胡泽斌 +5 位作者 孙楠 段然慧 游延军 左甜甜 夏昆 黄杰 《中国医药生物技术》 2019年第5期470-473,共4页
脆性 X 综合征(fragile X syndrome,FXS)是一种 X 连锁不完全外显性遗传病,是引起遗传性智力低下和孤独症谱系障碍最常见的单基因病[1],因细胞中 X 染色体末端在特殊培养基中经诱变剂作用后可显示如同断裂的脆性部位而得名。
关键词 脆性X综合征 细胞系 细胞永生化 外周血淋巴 孤独症谱障碍 显性遗传病 单基因病 智力低下
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急性白血病患者骨髓形态特征及K562细胞系Plk-1的表达水平分析
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作者 康晓军 李燕 《中国卫生检验杂志》 CAS 2019年第12期1478-1481,共4页
目的观察急性白血病( AL)患者骨髓形态特征,分析 AL 患者骨髓细胞与 K562 细胞系中 Plk-1 的表达特征。方法选取在本院接受治疗的急性髓细胞白血病患者( AML)和急性淋巴细胞白血病患者( ALL),通过穿刺法观察骨髓细胞学形态特征;K562 传... 目的观察急性白血病( AL)患者骨髓形态特征,分析 AL 患者骨髓细胞与 K562 细胞系中 Plk-1 的表达特征。方法选取在本院接受治疗的急性髓细胞白血病患者( AML)和急性淋巴细胞白血病患者( ALL),通过穿刺法观察骨髓细胞学形态特征;K562 传代细胞与 AL 骨髓细胞标本进行 PCR扩增及 Western Blot 表达鉴定。结果 ALL 与 AML 骨髓细胞均呈现类圆形或不规则形,细胞核呈圆形或类圆形;ALL 骨髓细胞相对 AML 较小,胞浆少,无明显颗粒及核仁, AML 胞浆丰富,有明显颗粒及核仁;AL 患者骨髓细胞组与 K562 细胞系的组间表达丰度值没有明显差异;有 AL 家族史、红细胞和血小板计数下降、血尿酸水平上升、没有 AL 用药史的患者 Plk-1 表达显著升高。结论 AL 骨髓细胞形态特征符合肿瘤恶转的特点,Plk-1 mRNA 在 AL 患者中发生了特异性表达。 展开更多
关键词 急性白血病 骨髓形态特征 K562 细胞系 PLK - 1
HCV对脂代谢相关指标表达的影响 预览
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作者 徐楚 张平安 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2019年第5期987-991,共5页
目的 研究HCV在体内外对脂代谢相关指标表达的影响。方法 选取武汉大学人民医院2017年10月-2018年10月HCV感染者的标本114例(试验组)和健康体检者标本96例(对照组),采用全自动生化分析仪检测血脂指标,包括甘油三酯、总胆固醇、高密度脂... 目的 研究HCV在体内外对脂代谢相关指标表达的影响。方法 选取武汉大学人民医院2017年10月-2018年10月HCV感染者的标本114例(试验组)和健康体检者标本96例(对照组),采用全自动生化分析仪检测血脂指标,包括甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、小而低密度脂蛋白、脂蛋白a、载脂蛋白A1和载脂蛋白B的血清水平;采用实时荧光定量PCR检测HCV感染的Huh7.5.1细胞(实验细胞)和未感染HCV的Huh7.5.1细胞(对照细胞)中脂肪酸合成酶、乙酰CoA羧化酶、羟甲基戊二酸单酰CoA还原酶、载脂蛋白A1、载脂蛋白B和低密度脂蛋白受体mRNA的表达量。正态分布的计量资料2组间比较采用 t 检验;非正态分布的计量资料2组间比较采用Mann-Whitney U 检验。结果 试验组患者血清总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、载脂蛋白A1和载脂蛋白B水平均低于对照组[分别为(2.98±0.51)mmol/L vs (4.24±0.43)mmol/L、(0.87±0.16)mmol/L vs (1.24±0.21)mmol/L、(1.75±0.24)mmol/L vs (2.64±0.37)mmol/L、(0.94±0.18)mmol/L vs (1.47±0.26)mmol/L、(0.67±0.31)mmol/L vs (0.98±0.14)mmol/L],差异均有统计学意义( t值分别为4.96、5.65、3.88、3.71、4.41,P 值均<0.05)。实验细胞中载脂蛋白A1 mRNA表达水平较对照细胞低,差异有统计学意义( t=-3.43,P< 0.05);脂肪酸合成酶、乙酰CoA羧化酶、羟甲基戊二酸单酰CoA还原酶、载脂蛋白B和低密度脂蛋白受体的mRNA表达水平均较对照细胞高,差异均有统计学意义( t值分别为5.40、4.93、3.34、6.88、3.84,P值均<0.05)。结论 HCV感染能够上调肝细胞内脂肪酸和胆固醇合成相关酶类基因mRNA水平,在体内和体外影响机体脂代谢。 展开更多
关键词 肝炎病毒属 细胞系 肿瘤 脂类代谢
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松江鲈肾组织细胞系生物学特性研究 预览
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作者 张晓雨 李霞 +5 位作者 秦艳杰 单莉娟 周诗嘉 王茂林 梁艳 王缙云 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期395-400,共6页
在25 ℃、5% CO 2 实验室条件下,于20% FBS-DMEM/F12培养基中培养松江鲈肾组织细胞系,以研究其生物学特性。第75代松江鲈肾组织细胞传代培养后,0~2 d处于潜伏期,2~4 d进入对数生长期,4~6 d进入稳定期,其群体倍增时间为55.2 h。经液氮冷... 在25 ℃、5% CO 2 实验室条件下,于20% FBS-DMEM/F12培养基中培养松江鲈肾组织细胞系,以研究其生物学特性。第75代松江鲈肾组织细胞传代培养后,0~2 d处于潜伏期,2~4 d进入对数生长期,4~6 d进入稳定期,其群体倍增时间为55.2 h。经液氮冷冻保藏1月后,复苏细胞的存活率为(90.8±1.37)%。35代松江鲈肾组织细胞的染色体数为2n=40,核型公式为K(2n)=16m+10sm+14t。病毒敏感性试验表明,松江鲈肾组织细胞对鱼类诺达病毒不敏感,对鲤春病毒血症病毒敏感,测定病毒滴度为10^6.53 /mL。镉离子敏感性试验显示,松江鲈肾细胞存活率随着氯化镉浓度的升高而降低,半致死浓度为(130±9.1)μmol/L,可用来作为镉离子检测的生物学指标。 展开更多
关键词 松江鲈 细胞系 生物学特性 病毒敏感性 镉污染检测
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化学致癌剂4-NQO饮水法诱导小鼠口腔鳞癌模型的建立
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作者 傅友 许可 +2 位作者 李江 孙树洋 张志愿 《中国口腔颌面外科杂志》 CAS 2019年第4期300-303,共4页
目的:使用化学致癌剂4-硝基喹啉-1-氧化物(4-nitro-quinoline 1-oxide,4-NQO)诱导并建立C57BL/6小鼠口腔鳞癌病变模型。方法:将4-NQO加入小鼠饮水,观察小鼠口腔黏膜的变化。于第12、16、20、24周处死,采集病变组织的样本,确定病变性质,... 目的:使用化学致癌剂4-硝基喹啉-1-氧化物(4-nitro-quinoline 1-oxide,4-NQO)诱导并建立C57BL/6小鼠口腔鳞癌病变模型。方法:将4-NQO加入小鼠饮水,观察小鼠口腔黏膜的变化。于第12、16、20、24周处死,采集病变组织的样本,确定病变性质,并分离、培养肿瘤细胞。结果:实验组小鼠在16周后口腔黏膜有明显的外生性肿物发生,直径约0.2 mm。小鼠口腔黏膜肿物H-E染色结果显示,肿物呈外生性或浸润性生长,可见角化珠和明显的核分裂象。细胞呈多边形,贴壁牢固,CK、Ki-67染色阳性,表明此细胞为鳞癌细胞。结论:该模型诱导过程与人口腔鳞癌发病过程相似,是理想的研究口腔鳞癌发生、发展机制的动物模型。 展开更多
关键词 口腔鳞癌 4-NQO 动物模型 细胞系
肿瘤抗原负载的DC-CIK细胞增殖能力及对肝癌细胞HepG2的杀伤活性研究
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作者 王福立 孙银萍 +4 位作者 魏本尊 秦杰 刘振国 李岩 邱菊 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2019年第1期1-5,共5页
目的观察肿瘤抗原负载的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养后的增殖能力及对肝癌细胞HepG2的杀伤活性。方法采用液氮反复冻融法制备肝癌细胞HepG2抗原。应用血细胞分离机采集健康供血者单个核细胞,诱导并分离出DC、CIK... 目的观察肿瘤抗原负载的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养后的增殖能力及对肝癌细胞HepG2的杀伤活性。方法采用液氮反复冻融法制备肝癌细胞HepG2抗原。应用血细胞分离机采集健康供血者单个核细胞,诱导并分离出DC、CIK,用肿瘤抗原冲击DC获得Ag-DC,将CIK分为3组,一组为单纯CIK,二组以DC∶CIK=1∶5比例混合,三组以Ag-DC∶CIK=1∶5比例混合。3组细胞分别记作:CIK组、DC-CIK组和Ag-DC-CIK组。观察3组细胞的增殖能力和细胞表型,并用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定3组细胞对肝癌细胞HepG2的杀伤活性。结果3组细胞随着培养时间的延长增殖速度逐渐增快,在共同培养的第9天、第12天和第15天时Ag-DC-CIK的增殖倍数(61.32±1.72、190.83±3.53、399.09±5.60)均明显高于同时间CIK的增殖倍数(22.47±2.07、55.91±1.81、83.20±2.34)和DC-CIK的增殖倍数(40.26±2.49、125.03±4.16、251.55±3.25),3组间差异有统计学意义(F=185.78,P=0.033;F=297.35,P=0.018;F=455.37,P<0.001),进一步两两比较发现,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。Ag-DC-CIK对HepG2细胞的杀伤活性在效靶比为5∶1、10∶1和20∶1时分别为31.71%±0.29%、42.43%±1.86%和57.69%±1.11%,均显著高于CIK组(12.11%±1.14%、21.30%±0.52%和30.71%±1.26%)和DC-CIK组(20.06%±0.67%、29.89%±1.37%和39.11%±0.92%),3组间差异有统计学意义(F=159.64,P=0.037;F=199.36,P=0.025;F=302.08,P<0.001),进一步两两比较发现,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。CIK、DC-CIK和Ag-DC-CIK 3组细胞培养至第15天,流式细胞仪分析表明3组细胞均表达CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+双阳性细胞,且Ag-DC-CIK组CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+双阳性细胞的含量(88.12%±1.24%、61.35%±2.63%)明显高于CIK组(54.37%±3.08%、18.22%±1.83%)和DC-CIK组(69.80%±1.46%、39.51%±2.17%),3组间差异有统计学意义(F=414.32,P<0.001;F=378.60,P<0.001),进一步两两比较发现,差异均具有统计学意义(均P<0.001)。结论肿瘤抗 展开更多
关键词 树突细胞 杀伤细胞 细胞系 肿瘤
氨基酸类阳离子脂质体在基因转染中的应用 预览
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作者 何芳丽 程健琳 +2 位作者 李俐娟 李亚林 苏泽红 《化工设计通讯》 CAS 2019年第5期160-161,共2页
通过化工程序合成阳离子脂质TMA-C2-Glu-C12,经双蒸水超声分散后制得相应的氨基酸类阳离子脂质体,实验共合成了八种氨基酸类阳离子脂质,经过二次整流后分散成对应的质体。实验结果表明,在HBL100、HT1080和GC-1细胞系中,TMA-C2-Glu-C12... 通过化工程序合成阳离子脂质TMA-C2-Glu-C12,经双蒸水超声分散后制得相应的氨基酸类阳离子脂质体,实验共合成了八种氨基酸类阳离子脂质,经过二次整流后分散成对应的质体。实验结果表明,在HBL100、HT1080和GC-1细胞系中,TMA-C2-Glu-C12的转染效率与Lipofectamine 2000相当,在HEK293、Ges-1、Huvce、HeLa和SW480细胞系中进行结果对比,实验表明TMA-C2-Glu-C12的细胞毒性不强,是一种高效的基因转载体。 展开更多
关键词 氨基酸类阳离子脂质体 细胞系 细胞转染
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硫酸右旋糖苷对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响 预览
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作者 王文莙 曹相玫 +3 位作者 马艳梅 杨媛媛 徐远义 黄允宁 《天津医药》 CAS 北大核心 2019年第6期605-608,I0002共5页
目的探讨硫酸右旋糖苷(DS)对人胃癌MGC-803细胞增殖、集落形成和凋亡的影响及可能的机制。方法培养人胃癌MGC-803细胞,分为对照组(PBS处理)和实验组(0.3%DS处理);应用EdU细胞增殖实验检测DS对胃癌MGC-803细胞增殖能力的影响;平板克隆形... 目的探讨硫酸右旋糖苷(DS)对人胃癌MGC-803细胞增殖、集落形成和凋亡的影响及可能的机制。方法培养人胃癌MGC-803细胞,分为对照组(PBS处理)和实验组(0.3%DS处理);应用EdU细胞增殖实验检测DS对胃癌MGC-803细胞增殖能力的影响;平板克隆形成实验检测DS对胃癌MGC-803细胞集落形成能力的影响;AnnexinⅤ-PI双染流式检测细胞凋亡的变化;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞不同时间点(2、 8、 12、 24 h)EZH2、 Cleaved-caspase3蛋白表达水平。结果 EdU实验结果显示,与对照组相比,DS明显抑制胃癌MGC-803细胞增殖(P<0.01)。平板克隆形成实验结果表明,DS组集落形成能力较对照组显著降低(P<0.01), AnnexinⅤ-PI双染流式结果显示,实验组细胞凋亡率明显高于对照组(P<0 .01);Westernblot结果表明,实验组EZH2的表达较对照组明显下调(P<0 .05), Cleaved-caspase3的表达较对照组明显上调(P<0 .05)。结论 DS能明显抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,诱导凋亡,其机制可能与抑制EZH2的表达有关。 展开更多
关键词 胃肿瘤 细胞系 肿瘤 细胞增殖 细胞凋亡 Zeste同源蛋白2增强子 硫酸右旋糖苷
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罗非鱼肾脏细胞系的建立及其生物学特性 预览
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作者 赵建青 贾鹏 +5 位作者 刘文枝 周勇 江南 范玉顶 易梅生 曾令兵 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期382-390,共9页
采用组织块移植法,对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)的肾脏组织细胞进行原代培养,建立了罗非鱼肾脏细胞系,已稳定传代培养50代以上,命名为TiK。罗非鱼肾脏细胞系为纤维样细胞,其最佳培养基为DMEM,最适培养温度为28℃,最适血清浓度为... 采用组织块移植法,对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)的肾脏组织细胞进行原代培养,建立了罗非鱼肾脏细胞系,已稳定传代培养50代以上,命名为TiK。罗非鱼肾脏细胞系为纤维样细胞,其最佳培养基为DMEM,最适培养温度为28℃,最适血清浓度为15%。在最适培养条件下,罗非鱼肾脏细胞系的群体倍增时间为45.8 h。细胞经液氮冷冻保存6个月后进行复苏,经台盼蓝染色,约(89.84±3.48)%的细胞具有活性,复苏后细胞生长旺盛。染色体分析显示,第32代罗非鱼肾脏细胞系染色体数目分布在20~66之间,众数为48。使用本实验室分离鉴定的罗非鱼病毒感染罗非鱼肾脏细胞,可产生典型的细胞病变效应,表明罗非鱼肾脏细胞对该病毒敏感。该细胞系的建立为罗非鱼病毒病防控技术研究提供了重要的实验材料。 展开更多
关键词 罗非鱼 肾脏 细胞系 生物学特性 病毒敏感性
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ARID2基因敲除对肝癌细胞系Hep3B增殖及基因表达的影响 预览
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作者 周彦池 赵宏 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期451-458,共8页
目的 探讨ARID2敲除对细胞增殖的影响,以及敲除细胞与野生型Hep3B细胞间基因表达的差异。方法 构建ARID2敲除的lentiCRISPRv2质粒,转染Hep3B细胞,嘌呤霉素筛选后通过流式细胞仪分选单细胞,并培养获得单克隆细胞株;通过Western blotting... 目的 探讨ARID2敲除对细胞增殖的影响,以及敲除细胞与野生型Hep3B细胞间基因表达的差异。方法 构建ARID2敲除的lentiCRISPRv2质粒,转染Hep3B细胞,嘌呤霉素筛选后通过流式细胞仪分选单细胞,并培养获得单克隆细胞株;通过Western blotting和Sanger测序鉴定ARID2敲除细胞株;通过CCK-8实验检测ARID2敲除对Hep3B细胞增殖的影响;通过RNA-seq分析差异表达基因,并通过实时定量PCR(RT-qPCR)技术进行验证。通过京都基因与基因组百科全书数据库通路注释(KEGG Pathway)、基因本体生物学过程(GO Biological Processes)富集分析以及基因集富集分析(GSEA)ARID2可能参与的生物学功能。结果 成功构建两株ARID2敲除的Hep3B人肝癌细胞系。与野生型Hep3B细胞相比,ARID2敲除细胞增殖明显加快(P<0.05)。RNA-seq分析共检测到85个差异表达基因,其中17个基因上调,68个基因下调。通过RT-qPCR对其中10个差异表达基因进行验证,验证结果与RNA-seq结果一致。KEGG Pathway,GOBiological Processes富集分析以及GSEA结果表明,ARID2基因与蛋白质的加工及转运、趋化因子信号通路、Wnt信号通路、补体与凝血级联反应、上皮间质转化(EMT)、糖酵解、TGF-β信号通路、TNF-α/NF-κB信号通路等生物学过程相关。结论 ARID2敲除可以促进Hep3B细胞系的增殖;ARID2可能通过多种生物学过程,对肿瘤细胞增殖、侵袭、迁移,以及肿瘤微环境产生影响。 展开更多
关键词 肝肿瘤 基因 ARID2 细胞系 Hep3B CRISPR/Cas9技术 生物信息学分析
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人口腔鳞状细胞癌细胞系TSCC2016的建立及生物学特性分析
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作者 朱东旺 孙文文 +3 位作者 赵铜超 钟来平 张陈平 张志愿 《中国口腔颌面外科杂志》 CAS 2019年第3期204-209,共6页
目的:建立一株口腔鳞状细胞癌细胞系TSCC2016,明确其生物学特性,为研究口腔鳞状细胞癌的发病机制和临床治疗提供工具。方法:选取新鲜的口腔鳞状细胞癌患者手术标本,采用组织块培养法,建立口腔鳞状细胞癌细胞系TSCC2016,观察其细胞形态... 目的:建立一株口腔鳞状细胞癌细胞系TSCC2016,明确其生物学特性,为研究口腔鳞状细胞癌的发病机制和临床治疗提供工具。方法:选取新鲜的口腔鳞状细胞癌患者手术标本,采用组织块培养法,建立口腔鳞状细胞癌细胞系TSCC2016,观察其细胞形态和生长特性,对其表面标记、细胞核型和裸鼠成瘤等进行检测。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:TSCC2016的传代已经超过100代。细胞生长稳定,形态为均一的多角形上皮细胞,具有典型的口腔鳞状细胞癌细胞特点。细胞STR分型结果表明,TSCC2016细胞为原代培养出的口腔鳞状细胞癌细胞,无其他肿瘤细胞系污染。TSCC2016细胞的成瘤性较好,成瘤率为100%,瘤体生长较快。结论:成功建立了一株口腔鳞状细胞癌细胞系TSCC2016,为口腔鳞状细胞癌的基础研究提供了一个稳定的细胞株。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞 细胞系 原代培养 细胞培养
胃肠道间质瘤细胞系建立及其对C-KIT下游抑制剂敏感性研究
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作者 周芳颖 冯海凉 +5 位作者 卞晓翠 康维明 于健春 宗静 张丹 刘玉琴 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2019年第11期764-770,777共8页
目的随着胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors, GIST)诊出率不断升高,靶向抑制剂相关研究亟待开展,但国内可利用的GIST模型十分有限。本研究旨在建立人GIST细胞模型,探讨靶向抑制剂作用。方法利用手术切除的人GIST腹膜转移灶... 目的随着胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors, GIST)诊出率不断升高,靶向抑制剂相关研究亟待开展,但国内可利用的GIST模型十分有限。本研究旨在建立人GIST细胞模型,探讨靶向抑制剂作用。方法利用手术切除的人GIST腹膜转移灶组织1例进行体外原代培养,连续传代培养>20代进行鉴定,绘制增殖周期生长曲线。免疫细胞化学检测CD117和DOG-1表达,进行染色体核型分析,PCR法检测C-KIT基因与PDGFRA基因突变,CCK8法观察C-KIT 2种通路抑制剂效果,皮下接种BABL/c-nu裸鼠检测致瘤性,PCR法进行种属鉴定及支原体检测,短串联重复序列(short tandem repeats, STR)检测鉴定细胞身份。结果可在体外连续传代的人胃肠道间质瘤细胞命名为PUMC-GIST-1,连续传代后细胞可见分枝,呈神经细胞样生长,传代后于第5天到达平台期;CD117和DOG-1表达均阳性;不同代数细胞染色体核型有变化,在38~48条;细胞C-KIT基因11号外显子5'端突变热点区有突变V559D,PDGFRA基因12号外显子CCG-CCA突变。单独用药结果显示,不同浓度GDC-0941处理48 h后,PUMC-GIST-1 (F=8.96,P<0.001)和GIST-430细胞(F=3.19,P=0.03)增殖能力均下降,差异有统计学意义;不同浓度AZD-6244处理48h后,PUMC-GIST-1细胞增殖能力整体呈现上升趋势,差异有统计学意义,F=9.78,P<0.001;GIST-430细胞增殖能力整体呈现下降趋势,差异有统计学意义,F=6.61,P<0.001。联合用药结果显示,PUMC-GIST-1增殖能力减弱,阴性对照组和5μmol/L AZD+5μmol/L GDC组吸光度(A)值分别为0.41±0.01和0.37±0.03,差异有统计学意义,F=3.30,P=0.007;GIST-430增殖能力减弱,阴性对照组和5μmol/L AZD+5μmol/L GDC组吸光度(A)值分别为2.12±0.11和0.13±0.01,差异有统计学意义,F=158.61,P<0. 001。PUMC-GIST-1较GIST-430对联合用药低敏感。当AZD与GDC浓度分别为5μmol/L时二者具有协同抑制作用,金正均Q值检验PUMC-GIST-1与GIST-430的q值分别为3.08与3.91,均>1.15。裸鼠体内接� 展开更多
关键词 胃肠道间质瘤 C-KIT 药物低敏感 细胞系 PDGFRA
膀胱癌组织中高表达的MTA2促进膀胱癌细胞T24的恶性生物学行为
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作者 彭克楠 李晓亚 +8 位作者 白函瑜 王刚 戴素丽 杨涛 刘玉静 谭鹤 赵明 赵连梅 单保恩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期669-675,共7页
目的:分析肿瘤转移相关蛋白(MTA2)在人膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞系T24 恶性生物学行为的影响,探讨MTA2 对膀胱癌进展中的作用。方法:收集河北省人民医院2012 年12 月至2014 年12 月收治的62 例膀胱癌患者癌组织和28 例正常膀... 目的:分析肿瘤转移相关蛋白(MTA2)在人膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞系T24 恶性生物学行为的影响,探讨MTA2 对膀胱癌进展中的作用。方法:收集河北省人民医院2012 年12 月至2014 年12 月收治的62 例膀胱癌患者癌组织和28 例正常膀胱组织(取自膀胱炎患者,病理学诊断为正常组织)标本,通过免疫组织化学染色检测膀胱癌和正常膀胱组织中MTA2 的表达水平;分析MTA2 表达水平与患者临床病理特征的相关性。构建稳定高表达MTA2 的膀胱癌T24 细胞系,通过MTS、克隆形成、划痕愈合和Transwell 实验检测MTA2 对膀胱癌T24 细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力的影响。结果:与正常膀胱组织相比,膀胱癌组织中MTA2 呈明显高表达(P<0.01);MTA2 的高表达状态与膀胱癌患者的性别、年龄、肿瘤体积无关(P>0.05),而与患者更高的TNM分期、肿瘤的组织学分级、淋巴浸润和转移有关(均P<0.05)。在膀胱癌T24 细胞系中过表达MTA2 后,细胞的增殖活性明显升高(P<0.05),克隆形成、划痕愈合、迁移和侵袭能力均明显增强(均P<0.01)。结论:MTA2 在人膀胱癌组织中表达上调,能够促进T24 细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭等恶性生物学行为。 展开更多
关键词 肿瘤转移相关蛋白2 膀胱癌 T24 细胞系 癌基因 生物标志物
CDK9与肾透明细胞癌临床病理特征及肿瘤侵袭的关系 预览
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作者 张惟 程涛 《河南医学研究》 CAS 2019年第5期769-773,共5页
目的探讨肾透明细胞癌组织CDK9的表达水平,分析其与肾透明细胞癌临床特征的关系,研究CDK9对肾细胞癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法选取2013年1月至2016年12月在河南科技大学第一附属医院接受手术切除治疗的肾透明细胞癌患者组织标本10... 目的探讨肾透明细胞癌组织CDK9的表达水平,分析其与肾透明细胞癌临床特征的关系,研究CDK9对肾细胞癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法选取2013年1月至2016年12月在河南科技大学第一附属医院接受手术切除治疗的肾透明细胞癌患者组织标本102例和癌旁组织标本30例作为研究对象,应用实时荧光定量PCR和Westernblot分别检测CDK9的表达水平,收集102例患者性别、年龄、病理分级等临床病理资料,并分析其与CDK9表达的关系。体外应用肾细胞癌细胞(ACHN、786-O和OSRC-2)研究CDK9对肾细胞癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果与癌旁组织比较,CDK9mRNA和蛋白在肾透明细胞癌组织中表达显著上调(P<0.01)。CDK9mRNA表达水平以中位数为界分为低表达组和高表达组,两组患者的病理T分期、TNM分期和远隔转移比较,差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤细胞系中CDK9表达显著高于人正常肾小管上皮细胞HK-2,其中786-O及ACHN细胞中CDK9表达显著升高(P均<0.01)。体外沉默CDK9显著抑制786-O及ACHN的细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.01)。结论CDK9表达与肾透明细胞癌的恶性特征、癌细胞增殖、迁移和侵袭能力密切相关,有望成为肾透明细胞癌的潜在治疗靶点。 展开更多
关键词 肾透明细胞 细胞周期蛋白依赖性激酶9 细胞系 肿瘤转移 细胞侵袭
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不同细胞浓度下两种舌癌细胞系诱导口腔癌原位异种移植瘤模型的比较 预览
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作者 范婉 于涛 +1 位作者 陈雪茹 梁飞新 《全科口腔医学杂志(电子版)》 2019年第9期15-16,共2页
目的比较SCC9和CAL27细胞构建口腔癌原位异种移植瘤模型所需细胞浓度的差异。方法将30只裸鼠随机分为10组,每组3只,调节SCC9和CAL27细胞至1×10^6个/mL、2×10^6个/mL、5×10^6个/mL、1×10^7个/mL和2×10^7个/mL5... 目的比较SCC9和CAL27细胞构建口腔癌原位异种移植瘤模型所需细胞浓度的差异。方法将30只裸鼠随机分为10组,每组3只,调节SCC9和CAL27细胞至1×10^6个/mL、2×10^6个/mL、5×10^6个/mL、1×10^7个/mL和2×10^7个/mL5个不同浓度,分别于每组裸鼠舌部注入0.05mL细胞悬液,观测裸鼠舌部成瘤情况。结果 SCC9细胞诱导裸鼠舌部成瘤最低细胞浓度为2×10^7个/mL,CAL27细胞诱导裸鼠舌部成瘤最低细胞浓度为1×10^6个/mL。结论与SCC9细胞相比,CAL27细胞诱导裸鼠舌部成瘤所需细胞浓度低,更适用于构建舌肿瘤模型。 展开更多
关键词 口腔癌 原位异种移植 裸鼠 细胞系
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ShRNA-survivin基因对肝癌Huh7细胞增殖、迁移和凋亡的影响 预览
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作者 林海华 余玉红 +3 位作者 张绍敏 陈出新 刘国军 张丽 《精准医学杂志》 2019年第2期122-125,共4页
目的 探讨生存素(survivin)基因对肝癌Huh7细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法 将肝癌细胞分为空白对照组(A组)、空白载体病毒组(B组)和ShRNA-survivin慢病毒组(C组),构建ShRNA-survivin慢病毒载体,通过RT-qPCR检测凋亡因子半胱氨酸天冬... 目的 探讨生存素(survivin)基因对肝癌Huh7细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法 将肝癌细胞分为空白对照组(A组)、空白载体病毒组(B组)和ShRNA-survivin慢病毒组(C组),构建ShRNA-survivin慢病毒载体,通过RT-qPCR检测凋亡因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)以及Caspase-3mRNA的表达量;通过CCK-8实验检测肝癌Huh7细胞增殖能力;通过Transwell小室实验检测肝癌Huh7细胞迁移能力;通过AV-PI凋亡试剂盒检测肝癌Huh7细胞的凋亡情况。结果 A、B、C组survivinmRNA的相对表达量分别为1.000±0.000、1.079±0.011、0.421±0.097,A、B组与C组比较差异具有显著统计学意义(F=15.984,q=8.141、3.257,P<0.05),Caspase-3和Caspase-9的mRNA表达量与survivin的mRNA表达量趋势相同;A、B、C组中透过分子筛的细胞数比较差异有显著性(F=31.982,P<0.05);A、B组与C组比较差异均有显著意义(q=7.153、9.074,P<0.05);A、B、C组细胞的增殖率比较差异有显著意义(F=23.983,P<0.05);A、B组与C组比较差异均有显著意义(q=10.322、9.886,P<0.05);A、B、C组细胞的凋亡率比较差异有显著意义(F=30.009,P<0.05);A、B组与C组比较差异均有显著意义(q=9.531、8.001,P<0.05)。结论 ShRNA-survivin对肝癌Huh7细胞的增殖、迁移有抑制作用,对细胞凋亡具有促进作用,可以作为肝癌的潜在治疗靶点。 展开更多
关键词 SURVIVIN 凋亡抑制蛋白质类 肝肿瘤 细胞增殖 细胞运动 细胞凋亡 细胞系 肿瘤
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一种可高效转染的青鳉肌肉细胞系的建立与应用 预览
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作者 邓羽 王乾 +3 位作者 王艺舟 薛亭 罗君志 陈天圣 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期322-329,共8页
在哺乳动物细胞系中转基因的效率相对较高而在鱼类细胞系中相对较低,为了获得鱼类高效转基因细胞系,我们从模式鱼类青鳉(Oryzias latipes)中分离和构建了肌肉细胞系OLM。该细胞系类似于纤维细胞,在28℃DMEM和10%的胚胎牛血清中培养了超... 在哺乳动物细胞系中转基因的效率相对较高而在鱼类细胞系中相对较低,为了获得鱼类高效转基因细胞系,我们从模式鱼类青鳉(Oryzias latipes)中分离和构建了肌肉细胞系OLM。该细胞系类似于纤维细胞,在28℃DMEM和10%的胚胎牛血清中培养了超过88代。通过染色体分析,它属于两倍体并含有48条染色体。在脂质体介导下,报告基因的转染效率可以达到40%,在测试的其他鱼类细胞中转染效率最高。此外还构建了稳定转染转基因或者非编码RNA的细胞系。OLM细胞对常见的病毒SVCV、GCRV、SGIV等不敏感。综上所述,研究在青鳉中建立了一种能高效转染的肌肉细胞系,它适用于鱼类瞬时和稳定的转基因研究。 展开更多
关键词 青鳉 肌肉 细胞系 转染 转基因
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