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薄荷醇通过mTOR活化促进人支气管上皮细胞气道炎症相关因子的表达 预览
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作者 陈海博 李敏超 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1344-1349,共6页
目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活化对薄荷醇诱导的人支气管上皮细胞(BEAS-2B)气道炎症相关因子表达的影响及其机制。方法将细胞分为4组:正常对照组、薄荷醇组、雷帕霉素组、薄荷醇+雷帕霉素组。用CCK-8法检测细胞存活率,实时荧... 目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活化对薄荷醇诱导的人支气管上皮细胞(BEAS-2B)气道炎症相关因子表达的影响及其机制。方法将细胞分为4组:正常对照组、薄荷醇组、雷帕霉素组、薄荷醇+雷帕霉素组。用CCK-8法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR检测瞬时受体电位蛋白-8(TRPM8)、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1βmRNA的表达,Western blot检测BEAS-2B中磷酸化的mTOR(p-mTOR)、TRPM8、TNF-α和IL-1β的蛋白表达。用流式细胞术检测胞内Ca2+荧光强度。结果与正常对照组相比,薄荷醇组中细胞TNF-α和IL-1βmRNA及蛋白表达升高,p-mTOR蛋白表达升高,胞内Ca2+浓度升高(P<0.05)。与正常对照组相比,雷帕霉素组中细胞TNF-α和IL-1βmRNA及蛋白表达均无差异(P>0.05),p-mTOR蛋白表达降低(P<0.05),胞内Ca2+浓度无差异(P>0.05)。与薄荷醇组相比,薄荷醇+雷帕霉素组中细胞TNF-α和IL-1βmRNA及蛋白表达降低,p-mTOR蛋白表达降低,胞内Ca2+浓度降低(P<0.05)。结论薄荷醇可能通过活化mTOR诱导胞内Ca2+浓度升高,进而促进气道炎症相关因子IL-1β和TNF-α的表达。 展开更多
关键词 人支气管上皮细胞 薄荷醇 瞬时受体电位蛋白-8 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 气道炎症
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下调瞬时受体电位蛋白M8对HOS细胞增殖和迁移能力的影响
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作者 庞卓彦 沈俊 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期3097-3101,共5页
目的观察瞬时受体电位蛋白M8(TRPM8)在骨肉瘤组织及HOS细胞中的表达及干扰其表达后对细胞增殖及迁移能力的影响。方法分别选取未经治疗的8例骨软骨瘤标本及骨肉瘤标本,用免疫组织化学法检测TRPM8蛋白的表达;采用Westernblot方法检测... 目的观察瞬时受体电位蛋白M8(TRPM8)在骨肉瘤组织及HOS细胞中的表达及干扰其表达后对细胞增殖及迁移能力的影响。方法分别选取未经治疗的8例骨软骨瘤标本及骨肉瘤标本,用免疫组织化学法检测TRPM8蛋白的表达;采用Westernblot方法检测TRPM8蛋白在人骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞及骨肉瘤HOS细胞中的表达;小片段RNA干扰(siRNA)法干扰TRPM8蛋白的表达后,利用噻唑蓝(MTr)法及划痕实验检测细胞的增殖及迁移能力,并采用Westernblot检测相关蛋白的变化。结果免疫组织化学结果提示8例骨软骨瘤中1例TRPM8高表达,7例低表达,而在骨肉瘤中结果为6例高表达,2例低表达,差异有统计学意义(P〈0.05)。Westernblot结果提示与BMSCs比较HOS细胞中TRPM8的表达上调,约为BMSCs细胞中TRPM8表达量的3倍。下调TRPM8表达后,HOS细胞的增殖和迁移能力显著抑制,流式细胞仪检测发现下调TRPM8后HOS细胞周期出现G0/G1期阻滞且细胞迁移能力受到抑制,Westernblot检测发现细胞周期蛋白D1(CyclinD1)及细胞周期蛋白依赖性激酶4(Cdk4)表达受到抑制,同时局部黏着斑激酶(FAK)磷酸化水平及基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达水平受到抑制,TRPM8可能通过上述蛋白调控HOS细胞的增殖及迁移。结论TRPM8的表达在骨肉瘤组织及HOS细胞中显著升高,且通过siRNA抑制其表达后可显著抑制细胞增殖及迁移能力。TRPM8通道可能是骨肉瘤治疗的一个潜在靶点。 展开更多
关键词 瞬时受体电位蛋白M8 人骨肉瘤HOS细胞 增殖 迁移 骨肉瘤
人气道上皮细胞感知冷刺激的受体机制 被引量:2
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作者 李敏超 何叶 +2 位作者 Juliy M.Perelman Victor P.Kolosov 周向东 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第20期2071-2076,共6页
目的探讨温度感受器瞬时受体电位蛋白-8(transient receptor potential melastatin 8,TRPM8)在人气道上皮细胞感受冷刺激过程中发挥的作用及其机制。方法用薄荷醇及冷空气(18℃)刺激人气道上皮16HBE细胞:1以TRPM8通道特异性拮抗剂B... 目的探讨温度感受器瞬时受体电位蛋白-8(transient receptor potential melastatin 8,TRPM8)在人气道上皮细胞感受冷刺激过程中发挥的作用及其机制。方法用薄荷醇及冷空气(18℃)刺激人气道上皮16HBE细胞:1以TRPM8通道特异性拮抗剂BCTC、TRPM8 shRNA为干预手段,动态观察在薄荷醇、冷刺激作用下细胞内Ca^2+荧光强度变化来监测气道上皮细胞上TRPM8的功能;2以磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate,PIP2)荧光分子探针PLCδ1-PH-GFP转染细胞,通过动态观察各组细胞内PLCδ1-PH-GFP从细胞膜至细胞质的荧光转位变化来检测PIP2的动态变化来研究冷刺激作用下TRPM8的信号通路。结果 1细胞内相对钙离子浓度变化:薄荷醇组处理4 min后、冷刺激组处理6 min后分别为(5.80±0.34)、(5.02±0.36),明显高于对照组(1.04±0.12)、(1.03±0.08)(P〈0.05),1 mmol/L薄荷醇组+BCTC组、1 mmol/L薄荷醇组+转染TRPM8 shRNA组最高值分别为(2.68±0.19)、(1.08±0.16),明显低于1 mmol/L薄荷醇组,18℃+BCTC组、18℃+转染TRPM8 shRNA组最高值分别为(1.77±0.22)、(1.02±0.18),明显低于18℃组(均P〈0.05);2PLCδ1-PH-GFP从细胞膜至细胞质的转位变化(Fm/Fc值):1 mmol/L薄荷醇组、冷刺激组最高值分别为(0.90±0.01)、(0.90±0.01),明显高于对照组最高值(1.01±0.02)(P〈0.05),细胞处理200 s时1 mmol/L薄荷醇+BCTC15μmol/L组、1 mmol/L薄荷醇组+转染TRPM8 shRNA组分别为(0.86±0.03)、(0.89±0.02),明显低于1 mmol/L薄荷醇组(0.36±0.06)(P〈0.05),细胞处理220 s时18℃+BCTC15μmol/L组、18℃+转染TRPM8 shRNA组分别为(0.82±0.02)、(0.93±0.01),明显低于18℃组(0.40±0.06)(P〈0.05)。结论TRPM8受体是人气道上皮细胞感受冷刺激的主要受体,并通过TRPM8→Ca^2+→PLC→PIP2信号通路引起气道黏液高分泌等反应。 展开更多
关键词 气道上皮细胞 冷刺激 瞬时受体电位蛋白-8 CA^2+ PIP2
肉桂醛对0℃冷应激大鼠背根神经节神经细胞胞浆内Ca^2+变化及TRPA1和TRPM8 mRNA表达的影响 被引量:2
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作者 康欣欣 唐志鹏 +2 位作者 王立娟 吴中华 刘琳琳 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期127-133,共7页
目的:观察肉桂醛对0℃冷应激大鼠背根神经节神经细胞胞浆内Ca^2+浓度变化,并探讨其对瞬时受体电位通道蛋白A1(TRPA1)和M8(TRPM8)mRNA表达的影响。方法:取大鼠原代背根节神经细胞置于0℃冷应激状态,噻唑蓝(MTT)法检测不同时长... 目的:观察肉桂醛对0℃冷应激大鼠背根神经节神经细胞胞浆内Ca^2+浓度变化,并探讨其对瞬时受体电位通道蛋白A1(TRPA1)和M8(TRPM8)mRNA表达的影响。方法:取大鼠原代背根节神经细胞置于0℃冷应激状态,噻唑蓝(MTT)法检测不同时长冷应激状态下细胞的活性;加入肉桂醛,采用激光共聚焦显微镜观察细胞内外Ca^2+分布的变化;另以实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测其TRPA1,TRPM8 mRNA的表达。结果:不同时长的冷应激状态下,细胞存活度无明显差异;冷应激可降低背根神经节(DRG)神经细胞胞浆内Ca^2+浓度(P〈0.05),一定量的肉桂醛则能使Ca^2+浓度显著升高(P〈0.01)。Real-time PCR检测显示,长时间冷应激TRPA1 mRNA表达上调(P〈0.05);长时间冷应激TRPM8 mRNA表达明显要高于短时冷应激(P〈0.05);适当浓度的肉桂醛使冷应激大鼠DRG神经细胞TRPA1 mRNA表达升高(P〈0.05,P〈0.01),对TRPM8 mRNA的影响尚不明显。结论:冷应激能影响TRPA1,TRPM8 mRNA的表达,降低胞浆内Ca^2+浓度,作用机制可能为肉桂醛通过活化TRPA1通道,升高细胞浆内Ca^2+浓度。 展开更多
关键词 冷应激 肉桂醛 背根神经节 Ca^2+ 瞬时受体电位通道蛋白A1 瞬时受体电位通道蛋白M8
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