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5-Fu作用于瘢痕疙瘩成纤维细胞后Caspase-3变化的研究 预览
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作者 王鹏 弓军胜 +2 位作者 李晋福 张宝林 郑若楠 《中国美容医学》 CAS 2016年第11期60-64,共5页
目的:从蛋白层面证明瘢痕疙瘩、正常皮肤成纤维细胞中Caspase-3蛋白表达水平存在差异。通过5-fu(5-氟尿嘧啶)浓度梯度作用瘢痕疙瘩成纤维细胞后,观察细胞中Caspase-3蛋白的表达,及细胞增殖、迁移和侵袭性变化。方法:临床手术获取瘢... 目的:从蛋白层面证明瘢痕疙瘩、正常皮肤成纤维细胞中Caspase-3蛋白表达水平存在差异。通过5-fu(5-氟尿嘧啶)浓度梯度作用瘢痕疙瘩成纤维细胞后,观察细胞中Caspase-3蛋白的表达,及细胞增殖、迁移和侵袭性变化。方法:临床手术获取瘢痕疙瘩、正常皮肤组织块,培养瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloidfibroblastKF)及正常皮肤成纤维细胞(normalskinfibroblastNSF),应用免疫组织化学及Westernblot检测组织块及细胞中Caspase-3蛋白的表达;将5-fu(5-氟尿嘧啶)浓度梯度作用瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)后,应用Westernblot检测Caspase-3蛋白的表达;CCK-8法检测KF细胞增殖情况;Trans-wells小室实验检测KF细胞的体外迁移和侵袭能力。结果:瘢痕疙瘩组织、正常皮肤组织、KF、NSF中均有Caspase-3蛋白的表达;KF中Caspase-3蛋白表达水平明显低于NSF,差异有统计学意义(P<0.05),瘢痕疙瘩组织块中Caspase-3蛋白表达水平明显低于正常皮肤组织,差异存在统计学意义(P<0.05);5-fu作用KF后,Westernblot显示随着5-fu浓度的降低,KF中caspase-3蛋白表达减少,差异存在统计学意义(P<0.05)。CCK-8结果显示,随着5-fu浓度的降低,对KF增值活性的抑制不断减弱,差异有统计学意义(P<0.05);Trans-well侵袭结果显示侵袭到下室的KF数目随5-fu浓度的不断降低,而增多。结论:Caspase-3在KF中的表达明显低于NS,同时是5-fu诱导KF凋亡的关键因子,5-fu以浓度依赖方式促进Caspase-3活性增高,同时抑制KF增值、侵袭、迁移等肿瘤特性。 展开更多
关键词 瘢痕疙瘩纤维细胞 正常皮肤纤维细胞 5-氟脲嘧定子 CASPASE-3蛋白 细胞凋亡
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神经生长因子p75受体与sortilin在皮肤及瘢痕成纤维细胞中的表达 预览 被引量:2
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作者 冯璋 张芮 +2 位作者 冯永强 周一冲 王一兵 《中国组织工程研究》 CSCD 2013年第28期5198-5203,共6页
背景:既往研究发现神经生长因子在创面愈合过程中发挥重要作用,但对于成纤维细胞中神经生长因子低亲和力受体p75及sortilin的研究较少,p75及sortilin在瘢痕组织成纤维细胞及正常皮肤组织成纤维细胞中的表达量是否有差异目前未见报道... 背景:既往研究发现神经生长因子在创面愈合过程中发挥重要作用,但对于成纤维细胞中神经生长因子低亲和力受体p75及sortilin的研究较少,p75及sortilin在瘢痕组织成纤维细胞及正常皮肤组织成纤维细胞中的表达量是否有差异目前未见报道。目的:比较神经生长因子低亲和力受体p75及soritilin在瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞的中表达的差异。方法:体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞,并以人永生化上皮细胞HaCaT为阳性对照。通过实时定量PCR在mRNA水平检测p75及sortilin在瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞的表达及差异,进一步通过Western-blot及细胞免疫化学方法观察p75神经营养因子受体及sortilin在蛋白水平的表达及差异。结果与结论:实时定量PCR及Westernblot结果可见,在mRNA及蛋白水平瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞中p75,sortilin均呈阳性表达,其中瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞中p75及sortilin在mRNA及蛋白水平表达量明显少于HaCaT,且p75在瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞中表达差异无显著性意义,sortilin表达量在瘢痕疙瘩成纤维细胞中明显低于正常皮肤成纤维细胞(P〈0.05)。免疫细胞化学结果显示p75及sortilin在瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞中的表达部位均位于胞膜及胞浆。由于神经生长因子前体与p75受体高亲和力结合并在sortilin协助下发挥促进细胞凋亡的作用,sortilin在瘢痕成纤维细胞的表达明显低于正常皮肤成纤维细胞,可能与其高增殖状态有关,该结果为病理性瘢痕的防治提供了新的靶点。 展开更多
关键词 组织构建 组织构建与生物活性因子 神经生长因子低亲和力受体 SORTILIN 瘢痕疙瘩纤维细胞 正常皮肤纤维细胞 HACAT 实时定量PCR Western blot 国家自然科学基金
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芝麻酚对人正常皮肤成纤维细胞的细胞毒性
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作者 邬志薇 徐加英 +2 位作者 焦旸 樊赛军 秦立强 《毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期 75-77,共3页
芝麻是一种古老的油料作物。传统中医认为芝麻具有补气、抗衰老等功效,古代养生学家陶弘景对它的评价是"八谷之中,唯此为良"。芝麻油是人们日常重要的膳食用油,芝麻油在烘焙炼制的过程中产生芝麻酚(3,4-亚甲二氧基苯酚,sesamol,
关键词 芝麻酚 正常皮肤纤维细胞 克隆形 细胞周期
磷酸化Smad2和Smad7在增生性瘢痕成纤维细胞中的表达
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作者 潘姝 利天增 +2 位作者 李叶扬 张涛 梁岷 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期 133-134,共2页
Smads蛋白家族是近年来发现的转化生长因子(TGF)-β1受体下游信号蛋白,也是目前公认的介导TGF-β1胞内反应的主要通路。笔者通过检测体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞(HSF)和正常皮肤成纤维细胞(NSF)中磷酸化Smad2和抑制性信号介... Smads蛋白家族是近年来发现的转化生长因子(TGF)-β1受体下游信号蛋白,也是目前公认的介导TGF-β1胞内反应的主要通路。笔者通过检测体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞(HSF)和正常皮肤成纤维细胞(NSF)中磷酸化Smad2和抑制性信号介导子Smad7的表达差异,拟探讨二者在增生性瘢痕发病机制中的作用。 展开更多
关键词 增生性瘢痕纤维细胞 SMAD7 SMAD2 磷酸化 正常皮肤纤维细胞 SMADS蛋白 转化生长因子 TGF-β1 信号介导 信号蛋白
体内外不同环境下成纤维细胞丝裂素原激活蛋白激酶的变化 预览 被引量:1
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作者 毕洪森 陈东明 +2 位作者 李健宁 赵霞 李生 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2005年第26期 121-123,i0005,共4页
目的:观察脱离体内环境因素时成纤维细胞中信号蛋白表达及细胞生物学特性的变化.方法:瘢痕疙瘩和正常皮肤(作为阴性对照)均来自北京大学第三医院成形科手术患者各6例.取小块瘢痕疙瘩和正常皮肤组织,用组织块接种法进行成纤维细胞原代培... 目的:观察脱离体内环境因素时成纤维细胞中信号蛋白表达及细胞生物学特性的变化.方法:瘢痕疙瘩和正常皮肤(作为阴性对照)均来自北京大学第三医院成形科手术患者各6例.取小块瘢痕疙瘩和正常皮肤组织,用组织块接种法进行成纤维细胞原代培养后,进行细胞传代.试验所用为第5~8代细胞.①评价信号蛋白的含量,用体外培养的瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞中p44/42丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶的积分吸光度值.②评价信号蛋白的活化强度,用体外培养的瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞中p44/42丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶的平均积分吸光度值.③评价信号蛋白的活化程度用活化率值(磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶积分吸光度值÷p44/42丝裂原活化蛋白激酶积分吸光度值).结果:①p44/42丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶平均积分吸光度值比较:瘢痕疙瘩成纤维细胞均低于正常皮肤成纤维细胞(0.023±0.005和0.025±0.005,0.030±0.000和0.042±0.004,P<0.05).②p44/42丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶积分吸光度值比较:瘢痕疙瘩成纤维细胞p44/42丝裂原活化蛋白激酶高于正常皮肤成纤维细胞(6 048.7±1 576.2,3 006.3±174.4,P<0.05),瘢痕疙瘩成纤维细胞磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶与正常皮肤成纤维细胞无差异(4 876.0±895.8,3 966.5±533.1,P>0.05).③p44/42丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶活化率比较:瘢痕疙瘩成纤维细胞低于正常皮肤成纤维细胞(0.830±0.134,1.319±0.156,P<0.05).结论:成纤维细胞在脱离生物体内环境后,其生物学特性发生改变.体外细胞培养中,磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶的表达水平在瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞间无明显差别,而p44/42丝裂� 展开更多
关键词 瘢痕疙瘩 蛋白激酶类 纤维细胞 正常皮肤纤维细胞 丝裂素原激活蛋白激酶 丝裂原活化蛋白激酶 瘢痕疙瘩纤维细胞 不同环境 P44/42 细胞生物学特性
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瘢痕疙瘩成纤维细胞的基因组学研究 被引量:26
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作者 王春梅 百束比古 +2 位作者 张启旭 严笠 中泽南堂 《中华整形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期 299-301,共3页
目的寻找瘢痕疙瘩致病相关基因,探讨瘢痕疙瘩的发生机理.方法利用含1 100个人类肿瘤相关基因的cDNA芯片(cDNA-microarray)对耳垂和胸部瘢痕疙瘩及正常皮肤成纤维细胞进行检测,初步分析瘢痕疙瘩成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞基因总体... 目的寻找瘢痕疙瘩致病相关基因,探讨瘢痕疙瘩的发生机理.方法利用含1 100个人类肿瘤相关基因的cDNA芯片(cDNA-microarray)对耳垂和胸部瘢痕疙瘩及正常皮肤成纤维细胞进行检测,初步分析瘢痕疙瘩成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞基因总体表达的差异,并筛选出差异基因.结果在耳垂及胸部瘢痕疙瘩成纤维细胞中,分别有8种和17种特异性表达基因被检出.在正常皮肤中特异性表达的细胞增殖抑制基因Mda-7,在耳垂及胸部瘢痕疙瘩成纤维细胞中均未被表达.结论多种基因参与了瘢痕疙瘩的形成过程,瘢痕疙瘩成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞之间存在基因表达的差异,增殖因子受体PAR-1和增殖抑制基因Mda-7可能参与瘢痕疙瘩的形成. 展开更多
关键词 瘢痕疙瘩纤维细胞 基因组学研究 正常皮肤纤维细胞 特异性表达基因 MDA-7 致病相关基因 cDNA芯片 肿瘤相关基因 抑制基因 PAR-1 发生机理 细胞基因 差异基因 细胞增殖 过程 基因表达 增殖因子 胸部 耳垂
增生性瘢痕成纤维细胞生长特性的研究 预览 被引量:1
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作者 李卫华 李德水 刘洪琪 《武警医学院学报》 CAS 2003年第5期 342-343,356,F004,共4页
目的:研究增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞生长特性的差异.方法:应用消化法建立成纤维细胞系,在倒置相差显微镜下观察细胞形态,应用细胞计数方法绘制细胞生长曲线,测定细胞生长速度.结果:增生性瘢痕成纤维细胞比正常皮肤成纤... 目的:研究增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞生长特性的差异.方法:应用消化法建立成纤维细胞系,在倒置相差显微镜下观察细胞形态,应用细胞计数方法绘制细胞生长曲线,测定细胞生长速度.结果:增生性瘢痕成纤维细胞比正常皮肤成纤维细胞胞体大,形态不规则.前者细胞倍增时间约为6d,后者细胞倍增时间为3d.细胞融合后前者细胞数为后者的56%.结论:增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞是两种不同基因表现型的细胞. 展开更多
关键词 增生性瘢痕纤维细胞 正常皮肤纤维细胞 形态学 生长特性
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单壁碳纳米管对瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞增殖和凋亡相关基因表达的影响 预览
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作者 张善雳 陈俊 +2 位作者 黄剑清 察鹏飞 陈阳 《福建医药杂志》 CAS 2017年第1期50-54,共5页
目的探讨体外不同剂量单壁碳纳米管(SWCNTs)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF)和正常皮肤成纤维细胞(HSF)增殖、凋亡相关基因表达和凋亡率的影响。方法设置7个剂量组(0.8、1.6、3.2、6.3、12.5、25.0、50.0μg/mL),将SWCNTs颗粒悬液... 目的探讨体外不同剂量单壁碳纳米管(SWCNTs)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF)和正常皮肤成纤维细胞(HSF)增殖、凋亡相关基因表达和凋亡率的影响。方法设置7个剂量组(0.8、1.6、3.2、6.3、12.5、25.0、50.0μg/mL),将SWCNTs颗粒悬液分别加入HKF和HSF孵育。对照组经24h孵育后,利用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测SWCNTs对HKF和HSF细胞增殖的影响,利用流式细胞仪观察细胞凋亡并用Western Blot法测定P53、Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果不同浓度SWCNTs对HKF和HSF细胞增殖均具有抑制作用。与HKF对照组相比,HKF各加药组在3.2μg/mL WCNTs处理时P53蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著下降(P〈0.01),Bax在1.6μg/mL SWCNTs处理时蛋白表达显著升高(P〈0.01);与HSF对照组相比,HSF各加药组P53、Bax和Bcl-2在1.6μg/mL SWCNTs处理时蛋白表达显著升高(P〈0.01);HKF对照组凋亡率为4.13%,3.2μg/mL的SWCNTs处理时凋亡率升高到12.16%,12.5μg/mL的SWCNTs处理时凋亡率为16.3%,凋亡率均较对照组显著升高(P〈0.01);HSF对照组凋亡率为8.04%,3.2μg/mL SWCNTs处理时凋亡率升高到12.84%,12.5μg/mL SWCNTs处理时凋亡率为16.15%,凋亡率均较对照组显著升高(P〈0.01)。结论一定剂量的SWCNTs颗粒悬液对体外培养的HKF和HSF均可产生抑制增殖和促进细胞凋亡的作用。 展开更多
关键词 单壁碳纳米管 人瘢痕疙瘩纤维细胞 正常皮肤纤维细胞 细胞凋亡 BCL-2 p53 BAX
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H2O2诱导对正常人皮肤成纤维细胞β-catenin、SMP30基因表达的影响 预览
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作者 张杰 《南昌大学学报:医学版》 CAS 2018年第3期16-19,共4页
目的观察过氧化氢(H2O2)对正常人皮肤成纤维细胞(NHSF)β-链蛋白(β-catenin)和衰老标记蛋白30(SMP30)基因表达的影响,探讨H2O2可能诱导NHSF衰老的机制. 方法 将传至2-4代的NHSF细胞随机分为2组:对照组和实验组.对照组NHSF细... 目的观察过氧化氢(H2O2)对正常人皮肤成纤维细胞(NHSF)β-链蛋白(β-catenin)和衰老标记蛋白30(SMP30)基因表达的影响,探讨H2O2可能诱导NHSF衰老的机制. 方法 将传至2-4代的NHSF细胞随机分为2组:对照组和实验组.对照组NHSF细胞未作任何处理.实验组将NHSF细胞培养24 h后,分别给予50(实验1组)、100(实验2组)、150(实验3组)μmol·L^-1 的H2O2.在1、2、3 h后,采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测各组β-catenin、SMP30基因表达的水平,并计算β-catenin mRNA、SMP30 mRNA值. 结果 与对照组比较,实验组β-catenin、SMP30基因表达水平和实验1、2、3组1、2、3 h时β-catenin mRNA、SMP30 mRNA水平均明显降低(均 P 〈 0.05 );与实验2组比较,实验1组1、2、 3 h 时β-catenin mRNA、SMP30 mRNA水平均明显升高,实验3组1、2、3 h时β-catenin mRNA、SMP30 mRNA水平均明显降低(均 P 〈 0.05).β-catenin、SMP30基因的表达对H2O2诱导有较为明显的时间依赖性和浓度剂量依赖性. 结论 H2O2处理后NHSF细胞中β-catenin、SMP30基因表达水平明显降低,H2O2可能在诱导NHSF衰老中起重要作用. 展开更多
关键词 正常皮肤纤维细胞 过氧化氢 Β-链蛋白 衰老标记蛋白30 荧光定量PCR
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铁皮石斛对人正常皮肤成纤维细胞GM0639辐照后微核的影响研究 被引量:1
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作者 张沛 张国庆 +3 位作者 曹建平 顾柏林 周湘明 王勇飞 《中国血液流变学杂志》 CAS 2011年第2期227-230,共4页
目的分析铁皮石斛煎剂作用后人正常皮肤成纤维细胞GM0639微核的变化。方法通过MTT法测定不同药物浓度及不同药物作用时间对GM0639细胞存活率的影响,MTT法测定相同剂量^60Coγ射线辐照后培养24h未加药组和加不同浓度药物组细胞的存活率... 目的分析铁皮石斛煎剂作用后人正常皮肤成纤维细胞GM0639微核的变化。方法通过MTT法测定不同药物浓度及不同药物作用时间对GM0639细胞存活率的影响,MTT法测定相同剂量^60Coγ射线辐照后培养24h未加药组和加不同浓度药物组细胞的存活率,通过胞质分裂阻滞法(CB法)计数铁皮石斛煎剂作用联合不同剂量^60Coγ射线照射后的微核率(Micronucleus frequency,MNF)和微核细胞率(Micronucleus cell frequency,MNCF),将铁皮石斛煎剂作用的GM0639细胞与单纯照射细胞的微核率和微核细胞率的统计分析结果进行比较。结果铁皮石斛煎剂在给药浓度0-100mg/mL范围内,铁皮石斛对GM0639细胞没有细胞毒性。4Gy照射后培养24h,随着药物浓度的增加,细胞的存活率均显著增加,加药60mg/mL就可明显提高细胞的存活率。4Gy照射后培养24h,在试验药物浓度为60mg/mL,作用时间为24h时,将CB微核法得到的数据进行回归拟合可以得到药物作用及未经药物作用的剂量效应曲线,比较两组曲线,铁皮石斛作用组的微核率及微核细胞率明显低于单纯照射组(P〈0.05)。结论铁皮石斛可以降低辐照后GM063细胞微核率及微核细胞率,铁皮石斛具有较好的抗辐射作用。 展开更多
关键词 铁皮石斛 正常皮肤纤维细胞 辐射防护 微核
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