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小鼠抗人LSECtin单克隆抗体的制备与鉴定
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作者 彭贵林 刘静 +1 位作者 柳迪 唐丽 《军事医学》 CAS 北大核心 2019年第6期431-435,共5页
目的制备并鉴定小鼠抗人LSECtin(肝、淋巴结窦内皮细胞凝集素)单克隆抗体,为深入研究其功能奠定基础。方法利用CHO细胞制备人LSECtin-His融合蛋白,将其作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过电融合获得能产生人LSECtin单克隆抗体的杂交瘤细胞。用... 目的制备并鉴定小鼠抗人LSECtin(肝、淋巴结窦内皮细胞凝集素)单克隆抗体,为深入研究其功能奠定基础。方法利用CHO细胞制备人LSECtin-His融合蛋白,将其作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过电融合获得能产生人LSECtin单克隆抗体的杂交瘤细胞。用LSECtin重组蛋白作为检测原,筛选分泌LSECtin单克隆抗体的杂交瘤细胞株。分别通过流式检测和Western印迹实验(WB),对LSECtin单克隆抗体进行鉴定。结果获得分泌LSECtin单克隆抗体的杂交瘤细胞系。流式细胞术结果显示,共有5株抗体可特异性识别细胞表面表达的LSECtin;有2株可用于WB实验。结论获得了能应用于流式细胞术和WB实验的LSECtin单克隆抗体,为LSECtin的功能性研究奠定了基础。 展开更多
关键词 LSECtin 杂交瘤细胞 单克隆抗体 CHO细胞 重组蛋白质类 流式细胞
建立雌酮硫酸钠胶体金免疫层析快速限量检测方法
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作者 巩月红 段新宇 +4 位作者 王建华 赵军 罗俊 温浩 高晓黎 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期352-360,共9页
目的:建立一种快速检测孕马尿中雌酮硫酸钠的胶体金免疫层析试纸方法。方法:采用化学合成法将雌酮制备为ESS-17-肟(半抗原),应用混合酸酐法将ESS-17-肟与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备为ESS-17-肟-BSA(免疫原),对所得偶联物溶液进行紫外扫... 目的:建立一种快速检测孕马尿中雌酮硫酸钠的胶体金免疫层析试纸方法。方法:采用化学合成法将雌酮制备为ESS-17-肟(半抗原),应用混合酸酐法将ESS-17-肟与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备为ESS-17-肟-BSA(免疫原),对所得偶联物溶液进行紫外扫描鉴定并计算偶联率。ESS-17-肟-BSA免疫BALB/C小鼠,取血清高滴度小鼠脾脏淋巴细胞与SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞,用ELISA法进行阳性筛选。获得阳性克隆细胞株后于BALB/C小鼠体内诱生腹水制备单克隆抗体,抗体纯化后用胶体金标记,通过正交设计确定最佳实验参数,研制出雌酮硫酸钠胶体金免疫层析试纸条。结果:获得经化学结构修饰后的目标抗原ESS-17-肟-BSA,融合克隆后得到4株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株2D1、7G4、5F3、2A7,其中2D1抗体纯化后特异强,效价达1.0×106。该抗体制备的胶体金层析试纸条的检测限为1μg·L-1,与结构类似物均无交叉反应,此法检测样品结果与高效液相色谱法测定结果比对阳性符合率为85.45%(45/52),阴性符合率为89.58%(43/48),总符合率为88.00%(88/100),结果一致性较好。结论:本研究制备了雌酮硫酸钠免疫原,融合制得抗雌酮硫酸钠特异性单克隆抗体,并研制出以雌酮硫酸钠单克隆抗体为基础的胶体金免疫层析试纸条,能够快速、灵敏地检测孕马尿中的雌酮硫酸钠。 展开更多
关键词 雌酮硫酸钠 半抗原 免疫原 偶联率 细胞融合 杂交瘤细胞 单克隆抗体 胶体金免疫层析法
小鼠抗人B7-2单克隆抗体的制备及对8266细胞表面Fas及FasL的诱导作用
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作者 王玉玉 颜天铭 +2 位作者 王志遥 沈立军 邱玉华 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期50-56,共7页
目的制备鼠抗人B7-2单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),研究其对表达该分子的肿瘤细胞表面的死亡相关分子的诱导作用。方法以转基因细胞L929-B7-2为免疫原,免疫BALB/c小鼠。经细胞融合、免疫荧光标记法多次筛选及连续亚克隆,获得能... 目的制备鼠抗人B7-2单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),研究其对表达该分子的肿瘤细胞表面的死亡相关分子的诱导作用。方法以转基因细胞L929-B7-2为免疫原,免疫BALB/c小鼠。经细胞融合、免疫荧光标记法多次筛选及连续亚克隆,获得能分泌B7-2McAb的杂交瘤细胞株。采用Ig亚类鉴定试纸条、抗原位点竞争抑制试验、效价的测定及细胞膜型分子的识别作用对McAb进行生物学特性的分析。通过小鼠诱生腹水法制备McAb并经ProteinG亲和层析法进行纯化。以天然高表达B7-2分子的多发性骨髓瘤细胞8266为观察对象,加入McAb共同孵育,流式细胞仪(FCM)检测其对细胞表面死亡相关分子Fas及FasL的诱导作用。结果成功获得一株B7-2McAb,标记为12G4,其重链为IgG2b,轻链为κ。12G4McAb的效价为0.1μg/5×10^5个细胞,纯化后得到腹水型抗体的含量为1.61mg/ml。FCM结果显示,12G4McAb能很好地识别细胞膜型分子,其与8266细胞的阳性结合率为89.6%,当20μg/ml12G4McAb与细胞孵育12h,细胞表面Fas分子的平均值(mean)开始上调,48h达到最大值(62575.8),与IgG对照组(57135.4)比较差异有统计学意义(P<0.05)。20μg/ml12G4与细胞孵育12h,细胞表面FasL分子的表达也开始上调,48h达到最大值(7.98%),与IgG对照组(1.10%)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功制备了B7-2McAb,其能诱导表达该分子的肿瘤细胞表面的部分死亡相关分子的表达。 展开更多
关键词 B7-2分子 杂交瘤细胞 单克隆抗体 FASL FAS
肺炎链球菌免疫小鼠程序的优化及杂交瘤细胞株的建立
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作者 吴元元 沈荣 +4 位作者 李雄雄 应莲芳 周晖国 徐世友 张生琰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第8期915-918,922共5页
目的优化肺炎链球菌CSR SCS2 clone1小鼠的免疫程序,同时建立肺炎链球菌C多糖(C polysaccharides,CPs)杂交瘤细胞株。方法制备免疫抗原CSR SCS2 clonel,进行小鼠免疫程序优化:抗原量[(0. 5~2)×10~8个、(1~4)×108个、(2. 4~10)... 目的优化肺炎链球菌CSR SCS2 clone1小鼠的免疫程序,同时建立肺炎链球菌C多糖(C polysaccharides,CPs)杂交瘤细胞株。方法制备免疫抗原CSR SCS2 clonel,进行小鼠免疫程序优化:抗原量[(0. 5~2)×10~8个、(1~4)×108个、(2. 4~10)×10~8个)]、免疫间隔时间(3 d、1周、2周)、免疫途径(腹腔、腹股沟及尾静脉),同时确定抗原是否添加佐剂,间接ELISA法检测小鼠血清抗体水平。采用优化程序免疫小鼠,取血清效价最高的小鼠脾细胞,经传统单克隆抗体制备技术建立肺炎链球菌C-Ps杂交瘤细胞株,并检测细胞株的染色体数目及其分泌抗体的稳定性及特异性。结果确定小鼠最适免疫程序为:抗原量为(1~4)×108个,且需添加弗氏佐剂,免疫间隔时间为1周,免疫途径为腹股沟注射。最适程序免疫小鼠血清抗体效价达1∶12 000以上。建立了3株肺炎链球菌C-Ps杂交瘤细胞,命名为A4、G8、H10株,染色体数目分别为98、102和102,分泌的抗体具有良好的稳定性和特异性。结论成功优化了肺炎链球菌小鼠的免疫程序,并建立了肺炎链球菌C-Ps杂交瘤细胞株,为肺炎链球菌荚膜多糖中C-Ps含量检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 C多糖 免疫程序 杂交瘤细胞
猪流感病毒H1N1亚型HA蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
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作者 朱和超 范桂芳 +3 位作者 朱莉莉 彭忠 华琳 吴斌 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第6期81-85,共5页
为获得H1N1亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)蛋白的单克隆抗体(McAb),选取A/swine/NanChang/H1N1/2009毒株,病毒经增殖、超速离心后,收集病毒粒子作为免疫原,将SIV粒子包被建立了间接ELISA方法。将免疫4次的BALB/c小鼠,经间接ELISA测定小... 为获得H1N1亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)蛋白的单克隆抗体(McAb),选取A/swine/NanChang/H1N1/2009毒株,病毒经增殖、超速离心后,收集病毒粒子作为免疫原,将SIV粒子包被建立了间接ELISA方法。将免疫4次的BALB/c小鼠,经间接ELISA测定小鼠血清效价,将效价高的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(sp2/0)进行融合。采用间接ELISA的方法筛选效价高的阳性细胞孔,采用有限稀释法进行3轮亚克隆,得到了5株杂交瘤细胞株,分别命名为2C6、5G5、1D5、3G3、4F11。随后对5株杂交瘤细胞的亚型进行鉴定,显示2C6、1D5、4F11为IgM亚型,5G5、3G3为IgG1亚型,5株杂交瘤的L链均为k链。间接免疫荧光(IFA)和Western blot检测表明,5G5能够与HA蛋白发生特异性的结合。本研究为进一步建立H1亚型SIV的相关检测方法及对HA蛋白的功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 猪流感病毒 流感病毒血凝素蛋白 杂交瘤细胞 单克隆抗体
山羊乳酪蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 预览
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作者 李言言 刘阿华 +3 位作者 王毅 宁梦夏 马文涛 陈德坤 《动物医学进展》 北大核心 2019年第11期24-27,共4页
制备山羊乳酪蛋白单克隆抗体可以为检测乳品中山羊乳成分提供免疫学检测手段。以山羊酪蛋白免疫Balb/c小鼠,应用细胞融合技术,制备特异性识别山羊乳酪蛋白的单克隆抗体,对获得的阳性杂交瘤细胞进行连续传代和反复冻存以测定其稳定性,并... 制备山羊乳酪蛋白单克隆抗体可以为检测乳品中山羊乳成分提供免疫学检测手段。以山羊酪蛋白免疫Balb/c小鼠,应用细胞融合技术,制备特异性识别山羊乳酪蛋白的单克隆抗体,对获得的阳性杂交瘤细胞进行连续传代和反复冻存以测定其稳定性,并对其分泌的单克隆抗体应用ELISA进行抗体特异性分析,对特异性识别山羊乳酪蛋白的单克隆抗体进行抗体亚型鉴定和染色体组型分析。最终,成功的筛选出可以分泌特异性识别山羊乳酪蛋白的单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,被命名为7H。经染色体组型分析,染色体数目为102条;单克隆抗体7H类别为IGg1,轻链为κ;经连续传代和反复冻存,ELISA检测细胞上清抗体发现其OD 450nm值无显著性差异。 展开更多
关键词 山羊 酪蛋白单克隆抗体 酶联免疫吸附试验 杂交瘤细胞
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牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及其应用
7
作者 赵洪哲 范峻豪 +3 位作者 李新培 王昊 关平原 温永俊 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期287-293,共7页
为制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)单克隆抗体(MAb)及其直接荧光标记抗体,本试验用纯化的牛病毒性腹泻病毒Ht01株免疫雌性BALB/c小鼠。间接ELISA测其血清效价,取抗体效价达标小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合。用间... 为制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)单克隆抗体(MAb)及其直接荧光标记抗体,本试验用纯化的牛病毒性腹泻病毒Ht01株免疫雌性BALB/c小鼠。间接ELISA测其血清效价,取抗体效价达标小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合。用间接ELISA筛选阳性细胞株并进行2次亚克隆后注射入小鼠腹腔制备单抗腹水。利用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化腹水,用间接免疫荧光试验测定其活性,用SDS-PAGE试验测定其纯度。经活性、纯度检测合格后,采用搅拌法与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联;用葡聚糖G-25 Medium介质进行分离纯化。结果,本研究共获得2株能够稳定分泌IgG1类型的阳性杂交瘤细胞株和一种直接荧光抗体,分别被命名为BMAb11、BMAb20、DB11。稳定性试验表明,杂交瘤细胞分泌的抗体稳定性好。ELISA、间接免疫荧光试验和直接免疫荧光试验表明,单克隆抗体和直标荧光抗体均与BVDV发生特异性反应,说明它们的特异性较好。经ELISA鉴定,腹水抗体效价达到1∶12 800。直接荧光抗体荧光素与蛋白的摩尔比(F/P)为3.34,标准值在2.0~4.0之间,符合标准。上述研究结果表明,本研究制备的单克隆抗体和直标荧光抗体可用于BVDV的检测,为BVDV的临床诊断奠定了基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 杂交瘤细胞 单克隆抗体(MAb) 直标荧光抗体
栀子苷单克隆抗体的制备与鉴定 预览
8
作者 张海霞 尹湘君 +5 位作者 刘姝伶 程发峰 王庆国 于才 魏玮 王雪茜 《中医药信息》 2019年第1期1-4,共4页
目的:制备特异性的栀子苷(Geniposide,GEN)单克隆抗体。方法:采用高碘酸钠氧化法合成栀子苷免疫抗原,通过对BALB/c小鼠进行免疫;对血清进行检测阳性后,取上述免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0-Ag14按10∶1的比例融合;用间接竞争EL... 目的:制备特异性的栀子苷(Geniposide,GEN)单克隆抗体。方法:采用高碘酸钠氧化法合成栀子苷免疫抗原,通过对BALB/c小鼠进行免疫;对血清进行检测阳性后,取上述免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0-Ag14按10∶1的比例融合;用间接竞争ELISA法和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选;用阳性细胞株诱导制备腹水抗体;用辛酸硫酸铵法纯化抗体,并进行交叉反应检测。选择血清效价高且敏感性好的小鼠,采用杂交瘤细胞技术进行细胞融合,筛选分泌栀子苷单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用体内诱生腹水法制备栀子苷单克隆抗体,并通过正辛酸纯化的方法纯化腹水中抗体蛋白,采用SDS-PAGE法对抗体蛋白的纯化纯度进行检测。结果:获得了能分泌抗栀子苷单克隆抗体稳定的杂交瘤细胞株。SDS-PAGE结果说明经过纯化腹水中大量的杂蛋白能够被除去,获得的栀子单克隆抗体纯度较高,纯化后腹水中抗体效价与纯化前比均为60000∶1左右。结论:成功获得了能分泌栀子苷单克隆抗体稳定的杂交瘤细胞株,特异性、灵敏度都比较高,为样品中的栀子苷快速微量检测及免疫亲和色谱柱的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 栀子苷 单克隆抗体 制备 鉴定 杂交瘤细胞 酶联免疫吸附法
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猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 预览 被引量:1
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作者 张庆桥 王一鹏 +4 位作者 魏艳秋 米建华 赵雪 孙立旦 宋勤叶 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期31-35,I0002共6页
为了制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)的单克隆抗体,本实验以重组PEDV-N蛋白免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合技术,经过3~5次亚克隆与筛选,获得了4株分泌抗PEDV McAb的杂交瘤细胞,分别命名为4A7、6C1、5E10和6F7。4株杂交瘤细胞分泌的McAb均为IgM... 为了制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)的单克隆抗体,本实验以重组PEDV-N蛋白免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合技术,经过3~5次亚克隆与筛选,获得了4株分泌抗PEDV McAb的杂交瘤细胞,分别命名为4A7、6C1、5E10和6F7。4株杂交瘤细胞分泌的McAb均为IgM,其轻链均为κ链。ELISA、Western Blot和免疫荧光鉴定结果表明,4株单抗均与N蛋白及PEDV具有良好的结合活性。复苏冻存的4株杂交瘤细胞,连续传代培养30代,4株杂交瘤细胞能够持续稳定分泌抗体,细胞上清的ELISA抗体效价均在1∶800以上。4株细胞诱生的小鼠腹水抗体效价为1∶10~5~1∶10~6。将单克隆抗体(4A7)用于免疫组化试验和IPMA时,其能够特异地识别PEDV人工感染猪小肠组织和Vero细胞内的病毒。上述实验结果表明,制备的单克隆抗体可以用于PEDV抗原检测以及体内病毒的组织定位分析,并可为进一步研发PEDV抗原或抗体检测技术奠定基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 N蛋白 杂交瘤细胞 单克隆抗体
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伪狂犬病毒被膜蛋白VP22单克隆抗体的制备及免疫电镜方法的建立
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作者 刘慧敏 陈利红 +3 位作者 史智宾 刘春国 仇铮 王靖飞 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2018年第11期37-40,252共5页
为了制备伪狂犬病毒(PRV)被膜蛋白VP22的单克隆抗体并建立免疫电镜方法,试验首先构建真核重组质粒pCAGGS-UL49,酶切及间接免疫荧光验证该质粒是否构建成功,然后用真核重组质粒以100μg/只的剂量免疫6周龄Balb/c雌性小鼠,经过4次免疫... 为了制备伪狂犬病毒(PRV)被膜蛋白VP22的单克隆抗体并建立免疫电镜方法,试验首先构建真核重组质粒pCAGGS-UL49,酶切及间接免疫荧光验证该质粒是否构建成功,然后用真核重组质粒以100μg/只的剂量免疫6周龄Balb/c雌性小鼠,经过4次免疫后进行细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性克隆,抗体亚类试剂盒鉴别抗体亚类,收集第5,10,20代次的杂交瘤细胞上清液用ELISA法检测其效价,Western-blot法鉴定其特异性,将该抗体分别稀释50,100,200倍并作为一抗,免疫电镜检测VP22蛋白的表达效果。结果表明:获得1株稳定分泌VP22蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞(3D6),该单克隆抗体的亚类为IgM,能与VP22蛋白发生特异性反应,100倍稀释的单克隆抗体可达到利用免疫电镜技术检测细胞内该蛋白表达的最佳效果。说明筛选得到的PRV被膜蛋白VP22单克隆抗体和建立的免疫电镜方法可用于该病毒的致病性及装配机制研究。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 被膜蛋白 单克隆抗体 细胞融合 杂交瘤细胞 免疫电镜
漫话选择培养基的应用 预览
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作者 王守民 《中小学实验与装备》 2018年第4期12-13,共2页
选择培养基是根据某种或某一类微生物生长的特殊营养或条件需要,或对某种化合物的敏感性不同,而设计出来的一类培养基.是在培养基中加入或除去某种化学物质,改变生长条件,以抑制不需要的微生物生长,促进所需要的微生物生长.利用这种培养... 选择培养基是根据某种或某一类微生物生长的特殊营养或条件需要,或对某种化合物的敏感性不同,而设计出来的一类培养基.是在培养基中加入或除去某种化学物质,改变生长条件,以抑制不需要的微生物生长,促进所需要的微生物生长.利用这种培养基,可将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来. 展开更多
关键词 微生物生长 细菌分离 杂交瘤细胞 异养型 合成有机物 选择培养基 自生固氮菌 自养型生物 金黄色葡萄球菌 生物素
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杂交瘤细胞体外大规模培养研究进展 被引量:1
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作者 孙静静 周伟伟 +2 位作者 周雷鸣 赵巧辉 李桂林 《中国生物工程杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期82-89,共8页
单克隆抗体在生物学和医学研究领域中显示了极大的应用价值,是免疫检验中的新型试剂,是生物治疗的导向武器。作为医学检验试剂,单克隆抗体可以充分发挥其优势,如特异性好,灵敏度高,更便于质量控制,利于标准化和规范化。传统的方法是利... 单克隆抗体在生物学和医学研究领域中显示了极大的应用价值,是免疫检验中的新型试剂,是生物治疗的导向武器。作为医学检验试剂,单克隆抗体可以充分发挥其优势,如特异性好,灵敏度高,更便于质量控制,利于标准化和规范化。传统的方法是利用小鼠腹水制备单克隆抗体,但是近几十年杂交瘤细胞体外大规模培养制备单克隆抗体技术也在不断发展。特别是单克隆抗体在疾病诊断和治疗方面的需求,更进一步促进了杂交瘤细胞体外培养生产技术的发展,体外培养杂交瘤细胞生产的单克隆抗体已应用到许多方面。由于杂交瘤细胞的半贴壁性质,无论是悬浮培养还是贴壁培养,均可进行杂交瘤细胞的体外大规模培养。针对应用于体外诊断试剂的杂交瘤细胞体外培养制备单克隆抗体进行综述,主要包括中空纤维细胞培养和生物反应器细胞培养方法,以及不同培养方法优化的进展。 展开更多
关键词 杂交瘤细胞 单克隆抗体 生物反应器 中空纤维
动物细胞融合和单克隆抗体的教学设计
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作者 许海云 侍东升 《实验教学与仪器》 2017年第10期23-26,共4页
动物细胞融合和单克隆抗体是人教版和苏教版高中生物应用中的知识点。为促进学生迅速掌握该知识点,提高教学质量,采用"课前导学、课堂教学、课后悟学"生长型课堂模式进行教学,具有课堂结构清晰、知识链接严谨的特点。
关键词 动物细胞 效应B细胞 骨髓细胞 融合 杂交瘤细胞 单克隆抗体 教学设计
苦马豆素单克隆抗体的制备与鉴定 预览
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作者 贾琦珍 陈根元 +2 位作者 王连群 亚森·麦麦提 王帅 《中国畜牧兽医》 北大核心 2017年第7期2155-2159,共5页
本试验采用苦马豆素(swainsonine,SW)人工抗原SW-OVA免疫接种BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术建立了1株能稳定分泌SW单克隆抗体的杂交瘤细胞1F10,杂交瘤细胞染色体数目为45~50对。经间接ELISA检测,该株细胞培养上清中抗体效价为1∶25 600,... 本试验采用苦马豆素(swainsonine,SW)人工抗原SW-OVA免疫接种BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术建立了1株能稳定分泌SW单克隆抗体的杂交瘤细胞1F10,杂交瘤细胞染色体数目为45~50对。经间接ELISA检测,该株细胞培养上清中抗体效价为1∶25 600,诱生腹水效价为1∶80 000。单克隆抗体的亚型为IgG1,亲和力解离常数为1.14×1010,腹水抗体纯化后纯度可达98%,回收率80%,SDS-PAGE凝胶电泳可见单克隆抗体的轻链、重链分子质量分别为25和50ku,Western blotting检测抗体能特异性的识别SW。其线性检测范围为4~128μg/mL(R2=0.9969),与BSA、明胶、多聚赖氨酸、α-甘露糖苷等无交叉反应。本试验制备的SW单克隆抗体为免疫学检测SW和免疫学防制家畜疯草中毒奠定基础。 展开更多
关键词 苦马豆素 单克隆抗体 杂交瘤细胞 间接ELISA
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中华蜜蜂囊状幼虫病病毒单克隆抗体的制备与鉴定
15
作者 张鹤 李明 +4 位作者 孙莉 费东亮 岳金金 金宏凯 马鸣潇 《病毒学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期914-919,共6页
为了制备中华蜜蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)单克隆抗体,本实验利用纯化的中华蜜蜂囊状幼虫病毒(CSBV)免疫Balb/c小鼠,经过3次免疫后,小鼠断尾采血测其血清效价,选择效价高于1∶80 000的小鼠,在细胞融合前3~4d再加强免疫一次。取免疫小... 为了制备中华蜜蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)单克隆抗体,本实验利用纯化的中华蜜蜂囊状幼虫病毒(CSBV)免疫Balb/c小鼠,经过3次免疫后,小鼠断尾采血测其血清效价,选择效价高于1∶80 000的小鼠,在细胞融合前3~4d再加强免疫一次。取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,用间接ELISA筛选阳性细胞株并进行3次亚克隆后注射入Balb/c小鼠(Mus musculus)腹腔制备单抗腹水。共获得9株稳定分泌抗CSBV的单克隆抗体,命名为10A1、5B10、5A5、5H2、11D7、9A5、1D3、3C10、10C4,效价都在1∶16 000以上,经间接ELISA实验检测表明,具有较好的特异性。在此基础上,将9株腹水单抗分别与CSBV互作后,接种于2~3日龄中华蜜蜂幼虫,观察幼虫死亡率,研究单克隆抗体中和CSBV病毒能力,结果表明筛选到三株单克隆抗体(10A1、5A5、9A5)对CSBV有中和作用,为CSBV的防治研究奠定了基础。 展开更多
关键词 中华蜜蜂囊状幼虫病毒(CSBV) 杂交瘤细胞 单克隆抗体(McAb)
分泌抗山羊γ干扰素单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备与鉴定 预览 被引量:1
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作者 张洪杰 桑锋锋 +3 位作者 刘阿华 李言言 王毅 陈德坤 《动物医学进展》 北大核心 2017年第12期14-17,共4页
为筛选分泌山羊γ干扰素(IFN-γ)单克隆抗体的杂交瘤细胞,以原核表达的山羊rIFN-γ蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾脏细胞与SP2/0瘤细胞进行细胞融合,以间接ELISA方法筛选分泌山羊IFN-γ单克隆抗体杂交瘤细胞,采用山羊外周血淋巴细胞产生的... 为筛选分泌山羊γ干扰素(IFN-γ)单克隆抗体的杂交瘤细胞,以原核表达的山羊rIFN-γ蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾脏细胞与SP2/0瘤细胞进行细胞融合,以间接ELISA方法筛选分泌山羊IFN-γ单克隆抗体杂交瘤细胞,采用山羊外周血淋巴细胞产生的IFN-γ包被酶标板对IFN-γ的特异性进行鉴定,用试纸条对IFN-γ单克隆抗体类别和亚型进行鉴定。结果获得了1株能特异性识别山羊IFN-γ的杂交瘤细胞3C,3C分泌的单克隆抗体能够特异性识别天然结构的山羊IFN-γ,单克隆抗体类别为IgG,轻链为κ型。 展开更多
关键词 山羊 Γ干扰素 杂交瘤细胞
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IL-17单克隆抗体的制备与鉴定 预览 被引量:1
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作者 桑锋锋 高洋 +3 位作者 张洪杰 朱伟英 王毅 陈德坤 《动物医学进展》 北大核心 2017年第11期52-55,共4页
为制备山羊IL-17单克隆抗体,诱导重组菌rIL-17-pET32a-TransB(DE3)表达山羊IL-17重组蛋白(rIL-17),纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫合格的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性克隆细胞株。对获得的杂... 为制备山羊IL-17单克隆抗体,诱导重组菌rIL-17-pET32a-TransB(DE3)表达山羊IL-17重组蛋白(rIL-17),纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫合格的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性克隆细胞株。对获得的杂交瘤细胞进行染色体组型分析,并对其分泌的IL-17单克隆抗体进行抗体特异性、抗体类别等分析。结果显示,成功获得了纯化的山羊IL-17原核表达产物;筛选到1株能特异性分泌山羊IL-17单克隆抗体的杂交瘤细胞株-B6,其分泌的单克隆抗体亚型为IgG1,抗体轻链为κ。 展开更多
关键词 山羊 IL-17单克隆抗体 杂交瘤细胞 酶联免疫吸附试验
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抗主要组织相容性相关蛋白MICA/B的单克隆抗体制备及应用 预览 被引量:2
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作者 田芳 罗伟光 +4 位作者 郭旭丽 郭靖 罗奇志 王慧鹏 邹义洲 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第10期1514-1519,共6页
目的:制备抗主要组织相容性相关蛋白A/B(MICA/B)的单克隆抗体并对其特异性进行验证。方法:以重组MICA*012蛋白免疫小鼠后将其脾细胞与SP2/0细胞进行融合和筛选得杂交瘤细胞株,并用ELISA对其中9B10细胞株产生的单克隆抗体进行效价... 目的:制备抗主要组织相容性相关蛋白A/B(MICA/B)的单克隆抗体并对其特异性进行验证。方法:以重组MICA*012蛋白免疫小鼠后将其脾细胞与SP2/0细胞进行融合和筛选得杂交瘤细胞株,并用ELISA对其中9B10细胞株产生的单克隆抗体进行效价检测以及通过Western blot、Luminex、免疫荧光对其特异性进行检测。结果:获得6株杂交瘤细胞株,其中9B10细胞株产生单克隆抗体(m Ab)9B10的最低反应浓度为0.02 ng/μl,且m Ab 9B10可应用于Western blot、Luminex和免疫组化荧光试验对MICA和MICB分子的检测。结论:成功获得可同时检测MICA和MICB表达的单克隆抗体9B10。 展开更多
关键词 MICA MICB 单克隆抗体 杂交瘤细胞
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六种致病性大肠杆菌单克隆抗体的制备 预览
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作者 邓炜 欧阳芬 +1 位作者 申虹 董伟 《畜牧兽医科技信息》 2017年第8期24-25,共2页
目的:构建能够分泌针对六种致病性大肠杆菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法:用常规的杂交瘤制备技术。结果:获得了2株能稳定分泌针对5种致病性大肠杆菌单克隆抗体的杂交瘤细胞,腹水抗体效价都在105以上。意义:为后续抗体靶向药物... 目的:构建能够分泌针对六种致病性大肠杆菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法:用常规的杂交瘤制备技术。结果:获得了2株能稳定分泌针对5种致病性大肠杆菌单克隆抗体的杂交瘤细胞,腹水抗体效价都在105以上。意义:为后续抗体靶向药物的研究提供了材料。 展开更多
关键词 致病性大肠杆菌 单克隆抗体 杂交瘤细胞 制备
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问题教学法在《动物细胞融合与单克隆抗体》一文教学中的应用 预览
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作者 杨学芬 《考试周刊》 2016年第71期154-154,143共2页
问题教学法就是教材的知识点以问题的形式呈现在学生的面前,让学生在寻求、探索解决问题的思维活动中,掌握知识、发展智力、培养技能,进而培养学生发现问题、解决问题的能力。在这种课上,教师有意地创设问题情境,组织学生的探索活动,让... 问题教学法就是教材的知识点以问题的形式呈现在学生的面前,让学生在寻求、探索解决问题的思维活动中,掌握知识、发展智力、培养技能,进而培养学生发现问题、解决问题的能力。在这种课上,教师有意地创设问题情境,组织学生的探索活动,让学生提出学习问题和解决这些问题,或由教师自己提出这些问题并解决它们,同时向学生说明在该探索情境下的思维逻辑(引用)。本文以《动物细胞融合与单克隆抗体》为例,阐述问题教学法的应用。 展开更多
关键词 单克隆抗体 细胞融合 问题教学法 杂交瘤细胞 有限稀释 克隆化培养 无限增殖 抗体检测 小鼠脾脏 探索活动
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