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非洲猪瘟病毒p72蛋白抗原表位预测分析及多表位疫苗的构建 认领
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作者 高瞻 邵军军 +4 位作者 常艳燕 张光磊 孔洁 葛苏丹 常惠芸 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第1期13-17,共5页
为了预测非洲猪瘟病毒2018/AnhuiXCGQ株p72蛋白的T、B淋巴细胞抗原表位,并完成多表位疫苗的构建。试验采用生物信息学技术ExPASy、SOMPA、PSIPRED Server、DNASTAR及Phyre对该蛋白的理化性质、二级结构、三级结构进行初步预测分析,运用A... 为了预测非洲猪瘟病毒2018/AnhuiXCGQ株p72蛋白的T、B淋巴细胞抗原表位,并完成多表位疫苗的构建。试验采用生物信息学技术ExPASy、SOMPA、PSIPRED Server、DNASTAR及Phyre对该蛋白的理化性质、二级结构、三级结构进行初步预测分析,运用ABCpred Prediction、Scratch、NetCTL及IEDB预测其T、B淋巴细胞表位,最终设计构建得到多表位疫苗。依据各生物学方法分析预测,得到B淋巴细胞优势表位:110~120、77~88、45~55、12~18、27~37位置;T淋巴细胞优势表位298~307、520~531、203~212位置,并设计得到T、B淋巴细胞表位表达盒,ExPASy预测表示该表位盒为亲水性蛋白。以此多表位表达盒为目的基因,以pET-28a构建设计多表位疫苗。表明该蛋白有多个潜在抗原表位,并可依据预测得到的蛋白二级结构、三级结构等参数信息及多个预测抗原位点构建ASFV多表位疫苗,表达纯化用于免疫试验。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 生物信息学 抗原表位 p72 表位疫苗 预测
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TgAMA1和TgRON2抗原表位合成肽鼻内免疫抗小鼠弓形虫病的作用 认领
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作者 钱学成 张铁娥 +1 位作者 孟晓丽 刘红丽 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2020年第2期189-194,206共7页
目的观察含弓形虫顶膜抗原1(TgAMA1)和棒状体颈部蛋白2(TgRON2)T、B细胞抗原表位的多肽鼻内免疫小鼠诱导的抗弓形虫病免疫保护作用。方法化学方法合成含有经生物信息学预测的TgAMA1和TgRON2T细胞和B细胞表位多肽。5周龄BALB/c小鼠48只... 目的观察含弓形虫顶膜抗原1(TgAMA1)和棒状体颈部蛋白2(TgRON2)T、B细胞抗原表位的多肽鼻内免疫小鼠诱导的抗弓形虫病免疫保护作用。方法化学方法合成含有经生物信息学预测的TgAMA1和TgRON2T细胞和B细胞表位多肽。5周龄BALB/c小鼠48只随机分为AMA1组、RON2组、A1+R2组和对照组(n=12),分别用AMA1 30μg、RON2 30μg或(A1+R2)各15μg鼻内免疫,对照组用20μl生理盐水滴鼻,共免疫3次,间隔2周。末次免疫后2周,采用ELISA法检测血清抗体水平;处死小鼠,取鼻、膀胱和肠道洗液,ELISA法检测SIgA水平;无菌取脾,制备脾细胞悬液,CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖反应,ELISA法检测淋巴细胞培养上清细胞因子水平;取肝、脑组织,计数速殖子虫荷,以评价免疫诱导的黏膜及系统免疫应答和抗弓形虫感染保护作用。结果用AMA1和RON2多肽免疫小鼠可诱导产生高水平的特异性抗体反应和淋巴增殖反应。肽免疫小鼠血清特异性IgA、总IgG、IgG1和IgG2a水平均高于对照组(P<0.05或P<0.01),其中A1+R2组最高。小鼠脾淋巴细胞刺激指数(SI)显示,AMA1组(1.171±0.116)、RON2组(1.362±0.110)和A1+R2组(1.941±0.162)高于PBS组(0.743±0.081)(P<0.05或P<0.01),A1+R2组亦高于单肽组(P<0.05)。肽免疫小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ、IL-2和IL-4水平显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)。肽免疫诱导了小鼠高水平的黏膜免疫应答,肽免疫小鼠鼻腔、膀胱和小肠冲洗液SIgA水平均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)。肽免疫小鼠获得部分抗弓形虫感染保护作用,与对照组比较,肽免疫小鼠肝和脑中速殖子负荷显著降低,减虫率分别为A1+R2组55.79%和55.68%、AMA1组52.36%和46.46%、RON2组40.02%和47.33%(P<0.05或P<0.01)。结论含有T和B细胞表位的AMA1和RON2肽是一种有效的抗弓形虫病候选抗原,鼻内免疫小鼠可诱导强烈的黏膜和系统免疫应答,两种抗原表位肽联合使用的免疫效应比单用AMA1或RON2更强,抗弓� 展开更多
关键词 刚地弓形虫 抗原表位 顶膜抗原1 棒状体颈部蛋白2 肽疫苗 鼻内免疫
布鲁氏菌Omp25蛋白抗原表位的生物信息学分析 认领
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作者 陈志强 沙桐 +2 位作者 李智伟 丁剑冰 张峰波 《新疆医科大学学报》 CAS 2020年第4期414-418,共5页
目的利用生物信息学方法对羊布鲁氏菌Omp25蛋白进行分析,预测其T细胞以及B细胞的优势抗原表位。方法从NCBI数据库中获取羊布鲁氏菌的Omp25蛋白的氨基酸序列。应用ProtParam在线软件分析Omp25蛋白的理化性质,应用SOMPA在线软件分析Omp25... 目的利用生物信息学方法对羊布鲁氏菌Omp25蛋白进行分析,预测其T细胞以及B细胞的优势抗原表位。方法从NCBI数据库中获取羊布鲁氏菌的Omp25蛋白的氨基酸序列。应用ProtParam在线软件分析Omp25蛋白的理化性质,应用SOMPA在线软件分析Omp25蛋白二级结构,应用Phyre2及SWISS-MODEL在线软件构建并分析Omp25蛋白三级结构,应用ABCpred和BepiPred等在线软件预测Omp25蛋白的B细胞抗原表位,应用SYFPEITHI和IEDB在线软件预测Omp25蛋白的T细胞抗原表位。结果Omp25蛋白含有23个强碱性氨基酸,含有21个强酸性氨基酸,归类为亲水性稳定蛋白,Omp25蛋白的二级结构中α-螺旋占24.88%,β-折叠占25.35%,β-转角占2.82%,无规则卷曲占46.95%。联合不同软件的预测结果分析后,最终获得1段CD4^+T细胞优势抗原表位、3段CD8^+T细胞优势抗原表位以及3段B细胞优势抗原表位。结论通过生物学信息的方法较为全面地预测了羊布鲁氏菌Omp25蛋白的优势T细胞以及B细胞抗原表位,为进一步研制羊布鲁氏菌表位疫苗构建提供了理论基础。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 Omp25 生物信息学 抗原表位
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奶牛妊娠相关糖蛋白BoPAG7和BoPAG8的表达及其结构与功能预测 认领
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作者 杨亚军 何金科 +3 位作者 宋胜男 杨宁宁 陈创夫 王震 《畜牧与兽医》 北大核心 2020年第8期56-63,共8页
试验旨在获得高效表达并且抗原性较好的奶牛妊娠相关糖蛋白BoPAG7和BoPAG8,并对BoPAG7和BoPAG8结构和功能进行生物信息学预测分析。通过PCR扩增荷斯坦奶牛BoPAG7和BoPAG8基因,并将其分别连接在表达载体上,转化至大肠杆菌(BL21)中表达,通... 试验旨在获得高效表达并且抗原性较好的奶牛妊娠相关糖蛋白BoPAG7和BoPAG8,并对BoPAG7和BoPAG8结构和功能进行生物信息学预测分析。通过PCR扩增荷斯坦奶牛BoPAG7和BoPAG8基因,并将其分别连接在表达载体上,转化至大肠杆菌(BL21)中表达,通过SDS-PAGE和Western blot检测其免疫学特性,采用生物信息学方法对BoPAG7和BoPAG8蛋白修饰、蛋白结构、B细胞抗原表位、蛋白互作进行预测分析。结果显示,成功克隆出BoPAG7和BoPAG8基因,大小与预期结果相符,成功表达并纯化获得了BoPAG7和BoPAG8蛋白。BoPAG7有5个位点发生糖基化修饰,BoPAG8有1个糖基化修饰,2个蛋白均有15个氨基酸组成的信号肽,以及含有多个B细胞抗原表位和多个互作蛋白。本研究为BoPAG7和BoPAG8蛋白抗体的制备和功能的研究提供了基础。 展开更多
关键词 妊娠相关糖蛋白 抗原表位 蛋白互作 糖基化
类弹性蛋白展示NT-proBNP双抗原表位重组蛋白的制备和纯化 认领
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作者 付鑫 龚福梅 +3 位作者 丁宁 朱静 杨春光 胡学军 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期458-463,共6页
目的:利用大肠杆菌(E.coli)高效制备类弹性蛋白(ELP)展示N端脑钠肽前体(NT-proBNP)双抗原表位的重组蛋白,为低成本、高效地制备NT-proBNP检测校准品提供依据。方法:分别设计NT-proBNP第13~20位和第63~71位氨基酸残基表位,通过柔链连接上... 目的:利用大肠杆菌(E.coli)高效制备类弹性蛋白(ELP)展示N端脑钠肽前体(NT-proBNP)双抗原表位的重组蛋白,为低成本、高效地制备NT-proBNP检测校准品提供依据。方法:分别设计NT-proBNP第13~20位和第63~71位氨基酸残基表位,通过柔链连接上述2个抗原表位与ELP融合,获得3种融合蛋白。利用基因工程技术合成编码以上3种融合蛋白的基因并克隆到pET-28a(+)载体上,转入E.coli BL21(DE3)自动诱导表达,利用多次可逆相变循环(ITC)纯化重组蛋白,并应用Western blotting和ELISA法检测其抗体特异结合表位的能力。结果:成功构建了3种ELP展示NT-proBNP抗原表位的载体,并在E.coli中表达获得相应重组蛋白。Western blotting和直接ELISA检测,ELP展示的特异抗原表位均具有良好的与相应抗体结合的能力。夹心ELISA法检测,ELP展示NT-proBNP双抗原表位重组蛋白的蛋白浓度与450 nm处吸光度(A)值呈双对数线性剂量依赖关系(r=0.9197,P<0.01)。结论:成功利用ELP展示NF-proBNP双抗原表位,为低成本、高效地制备出与NT-proBNP检测校准品奠定了基础。 展开更多
关键词 N-端脑钠肽前体 类弹性蛋白 抗原表位 大肠杆菌 心力衰竭
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黑龙江省2017年猪流行性腹泻病毒S1基因的遗传演化分析 认领
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作者 霍琳琳 李曦 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第1期77-83,86共8页
为了监测黑龙江省猪流行性腹泻病毒(PEDV)的流行及遗传进化情况,试验采用RT-PCR方法对2017年采集到的黑龙江地区猪场腹泻样品进行了PEDV检测,并对PEDV阳性样品进行S1基因测序及遗传演化分析。结果表明:试验成功获得6条PEDV S1基因序列,... 为了监测黑龙江省猪流行性腹泻病毒(PEDV)的流行及遗传进化情况,试验采用RT-PCR方法对2017年采集到的黑龙江地区猪场腹泻样品进行了PEDV检测,并对PEDV阳性样品进行S1基因测序及遗传演化分析。结果表明:试验成功获得6条PEDV S1基因序列,6株毒株S1基因之间核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为97.8%~100%和96.7%~100%,与国内外近5年分离毒株S1基因核苷酸序列的同源性分别为89.9%~100%和90.7%~100%,与国内外近5年分离毒株S1基因氨基酸序列的同源性分别为88.3%~98.8%和88.0%~97.8%,与传统疫苗株CV777 S1基因核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为90.4%~91.0%和89.3%~90.4%。6株毒株均属于GⅡ型,与近年来广泛流行于我国养猪场并造成严重经济损失的毒株属于同一基因型,与传统疫苗株CV777分属于不同亚群。6株毒株的氨基酸变化主要发生在第一个抗原表位,即499~638位氨基酸上。说明黑龙江地区养猪场猪群中仍然存在PEDV的传播和感染,且与商品化的疫苗毒株相比基因变异明显。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 黑龙江地区 S1基因 同源性 进化树 抗原表位
两种严重急性呼吸综合征冠状病毒S蛋白结构特征及抗原表位比较 认领
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作者 伦永志 刘奔 +2 位作者 董雯 孙杰 潘凌鸿 《浙江大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期315-323,共9页
目的:通过严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)-2与SARS-CoV S蛋白结构特征及抗原表位的比较分析,从分子水平为SARS-CoV-2致病机制研究提供数据支持,并为疫苗、抗体及药物研发寻找合适的候选靶点。方法:利用生物信息学方法和工具,基于... 目的:通过严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)-2与SARS-CoV S蛋白结构特征及抗原表位的比较分析,从分子水平为SARS-CoV-2致病机制研究提供数据支持,并为疫苗、抗体及药物研发寻找合适的候选靶点。方法:利用生物信息学方法和工具,基于S蛋白参考序列进行理化性质、疏水性、信号肽、跨膜区、结构域、二级结构、三级结构分析及抗原表位预测,同时对受体血管紧张素转换酶2(ACE2)、C型凝集素(CLEC4M)的组织表达及关联通路、途径进行分析。结果:SARS-CoV-2、SARS-CoV S蛋白氨基酸序列一致性为75.80%,两者结构特征具有较高一致性,但SARS-CoV-2高级结构特征不如SARS-CoV明显。受体ACE2、CLEC4M在消化系统及心脏、肾脏、肺、胎盘中均有表达,主要关联的肾素-血管紧张素系统、蛋白质消化吸收通路及血管紧张素前体转化、G蛋白偶联受体(GPCR)配体结合途径与2019冠状病毒病典型症状相关。分析获得S蛋白三对高度或完全同源的抗原表位,即SARS-CoV-2 S蛋白第600~605位氨基酸残基与SARS-CoV第586~591位高度一致,SARS-CoV-2 S蛋白第695~703位、第888~896位氨基酸残基分别与SARS-CoV第677~685位、第870~878位高度或完全一致。结论:SARS-CoV-2与SARS-CoV S蛋白结构上的相似性决定了两者具有相近的感染模式和临床表现。筛选获得的高可信度的SARS-CoV-2候选抗原表位可为病毒诊断和疫苗研制提供参考。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2 S蛋白 结构特征 抗原表位
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BVDV新疆分离株非结构蛋白NS3生物信息学分析 认领
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作者 张倩 何延华 +5 位作者 韩猛立 黄新 张星星 吴桐忠 钟发刚 王震 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第14期73-76,152,153,共6页
为了了解牛病毒性腹泻病毒(BVDV)非结构蛋白NS3的基本结构与生物学功能,试验利用Protparam,ProtScale,TMHMM,SignalP,Virus-mPLoc,SOPMA,Phyre 2,NetOGlyc 4.0 Server,NetPhos 3.1 Server,NetAcet 1.0 Server,Predicting Anti-genic Pep... 为了了解牛病毒性腹泻病毒(BVDV)非结构蛋白NS3的基本结构与生物学功能,试验利用Protparam,ProtScale,TMHMM,SignalP,Virus-mPLoc,SOPMA,Phyre 2,NetOGlyc 4.0 Server,NetPhos 3.1 Server,NetAcet 1.0 Server,Predicting Anti-genic Peptides,ABCpred,NetMHCIIpan 3.1 Server等软件,对BVDV新疆分离株非结构蛋白NS3进行生物信息学分析,包括NS3蛋白的理化性质、亲水性、跨膜区、信号肽和亚细胞定位,预测二级结构和三级结构、抗原决定簇、潜在的B细胞抗原表位和T细胞抗原表位,评估糖基化、磷酸化和乙酰化修饰位点。结果表明:BVDV新疆分离株(GenBank登录号为JN704144.1)的非结构蛋白NS3共有683个氨基酸,包含20种氨基酸,分子式为C3338H5328 N914 O1009 S27,相对分子质量为75274.16,理论等电点为8.15。266个氨基酸参与无规律卷曲的形成,213个氨基酸参与α-螺旋的形成,147个氨基酸参与延伸链的形成,57个氨基酸参与β-转角的形成;构建的三级结构模型可信度为100%,蛋白覆盖率为91%;该蛋白质含有20个潜在的糖基化修饰位点,74个磷酸化修饰位点。该蛋白含有26个潜在抗原决定簇,其中B细胞抗原表位7个。对非结构蛋白NS3的CD4+抗原表位进行预测,得到78个肽段,其中有15个强结合肽段和63个弱结合肽段。说明该蛋白具有较好的免疫原性,为亲水性蛋白,无跨膜区和信号肽,定位于宿主的细胞质中。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 非结构蛋白NS3 抗原表位 跨膜区 信号肽 修饰化位点
貉源阿留申病毒VP2和NS1蛋白的抗原性预测 认领
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作者 吴艳虹 赵永强 +5 位作者 韦韬 章秀婷 丛丽 岳志刚 肖家美 邵西群 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1399-1407,共9页
旨在预测和分析貉源阿留申病毒(RFAV)VP2和NS1蛋白的抗原表位特征,筛选阿留申病毒属较保守的B、T细胞抗原表位。本研究对RFAV的近全长基因组进行克隆及测序,对其VP2和NS1基因编码蛋白的理化性质、二级结构、翻译后修饰位点和抗原表位进... 旨在预测和分析貉源阿留申病毒(RFAV)VP2和NS1蛋白的抗原表位特征,筛选阿留申病毒属较保守的B、T细胞抗原表位。本研究对RFAV的近全长基因组进行克隆及测序,对其VP2和NS1基因编码蛋白的理化性质、二级结构、翻译后修饰位点和抗原表位进行预测,并将预测的修饰位点、抗原表位与其他阿留申病毒种的序列进行比较分析,筛选相对保守的修饰位点和抗原表位。结果显示,获得的RFAV基因组长4327 bp,编码VP2蛋白的636个氨基酸,编码NS1蛋白的641个氨基酸。VP2和NS1蛋白均为亲水性蛋白,二级结构以无规则卷曲为主。在阿留申病毒属内,VP2蛋白有3个保守的B细胞抗原表位,3个保守的T细胞表位,8个保守的翻译后修饰位点;NS1蛋白有1个保守的B细胞抗原表位,2个保守的T细胞抗原表位和7个保守的翻译后修饰位点。本研究成功克隆了RFAV近全长基因组序列,全面对RFAV的VP2、NS1蛋白抗原表位、翻译后修饰位点进行预测,并分析其在阿留申病毒属内的保守和变异特征,为阿留申病毒免疫研究提供参考。 展开更多
关键词 阿留申病毒 VP2蛋白 NS1蛋白 抗原表位 翻译后修饰位点
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梅迪-维斯纳病毒gag蛋白的原核表达及其交叉反应原性 认领
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作者 古努尔·吐尔逊 王登峰 +5 位作者 杨学云 魏玉荣 李建军 孟肖潇 洪都孜·波拉提 吴建勇 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第4期978-983,共6页
为鉴定适用于中国小反刍动物慢病毒(Small ruminants lentivirus viruses,SRLVs)血清学诊断的通用蛋白标记物,本研究以梅迪-维斯纳病毒(Maedi-Visna virus,MVV)四川株为模板扩增获得gag基因序列,使用生物信息学方法分析其与中国山羊关节... 为鉴定适用于中国小反刍动物慢病毒(Small ruminants lentivirus viruses,SRLVs)血清学诊断的通用蛋白标记物,本研究以梅迪-维斯纳病毒(Maedi-Visna virus,MVV)四川株为模板扩增获得gag基因序列,使用生物信息学方法分析其与中国山羊关节炎-脑炎病毒(Caprine arthritis encephalitis virus,CAEV)分离株gag蛋白氨基酸序列和抗原表位相似性,构建gag基因重组表达载体并转入BL21(DE3)宿主菌进行诱导表达,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting确定其大小、分布和反应原性。结果显示,MVV gag蛋白氨基酸序列与中国CAEV分离株的相似性为74.7%~74.9%,它的11个抗原表位与CAEV gag蛋白的12个抗原表位存在较高的序列相似性,推测其可作为中国SRLVs血清学诊断的通用蛋白质标记物;SDS-PAGE检测结果显示,重组gag蛋白大小约为55000,主要以包涵体形式存在,Western blotting显示该蛋白可与MVV和CAEV感染动物血清发生免疫反应,证实了蛋白序列分析结果。该研究结果可为研制中国SRLVs通用血清学检测技术方法奠定基础。 展开更多
关键词 梅迪-维斯纳病毒 GAG蛋白 原核表达 交叉反应原性 抗原表位
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布鲁氏菌外膜蛋白Omp31的生物信息学预测 认领
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作者 马荣 台桦 卜秀芹 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2020年第7期817-822,共6页
目的采用生物信息学方法预测和分析布鲁氏菌外膜蛋白Omp31的理化性质、信号肽、蛋白结构和抗原表位,为布鲁斯病基因疫苗的研制提供理论基础。方法从GenBank中获取Omp31的氨基酸序列,运用在线软件Protparam分析Omp31的理化性质;采用SOPM... 目的采用生物信息学方法预测和分析布鲁氏菌外膜蛋白Omp31的理化性质、信号肽、蛋白结构和抗原表位,为布鲁斯病基因疫苗的研制提供理论基础。方法从GenBank中获取Omp31的氨基酸序列,运用在线软件Protparam分析Omp31的理化性质;采用SOPMA软件预测和分析布鲁氏菌外膜蛋白Omp31的二级结构。结果利用在线软件预测布鲁氏菌外膜蛋白Omp31分子式为C1135H1725N297O354S4,脂溶性指数为87.31,蛋白质的疏水值为63.26,理论pI值为8.61,原子总数为47900;其氨基酸序列Gly(G)占12.9%,Ala(A)占11.7%。正电荷残基(Arg+Lys)、负电荷残基(Asp+Glu)总数分别为19和24,其不稳定系数48.25。该蛋白为稳定蛋白,亲水性系数GRAVY为-0.091。Omp31无跨膜区域,属于水溶性蛋白,其中无规则卷曲较多,位于蛋白表面。蛋白质中大部分氨基酸可以形成一定的结构域,抗原性总预测值为0.6324。结论生物信息学分析鲁氏菌外膜蛋白Omp31含有多个抗原表位,可能具有免疫原性,表明该蛋白可作为潜在抗原用于疫苗的研制。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 Omp31蛋白 抗原表位 生物信息学分析
马麝出血症病毒VP60主要抗原表位区的串联表达及对家兔的免疫保护效力分析 认领
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作者 包世俊 张金燕 +5 位作者 贺健 张阳阳 邢小勇 温峰琴 伏小平 武小椿 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1536-1545,共10页
马麝病毒性出血症(Moschus chrysogaster viral hemorrhagic disease,McVHD)为马麝的一种急性、高度致死性传染病,其病原马麝出血症病毒(Moschus chrysogaster hemorrhagic disease virus,McHDV)与兔出血症病毒高度同源。为了筛选McHDV... 马麝病毒性出血症(Moschus chrysogaster viral hemorrhagic disease,McVHD)为马麝的一种急性、高度致死性传染病,其病原马麝出血症病毒(Moschus chrysogaster hemorrhagic disease virus,McHDV)与兔出血症病毒高度同源。为了筛选McHDV保护性抗原,为McVHD疫苗研究奠定基础,文中通过对McHDV主要结构蛋白VP60抗原表位的分析,设计引物,应用RT-PCR技术扩增获得三段VP60主要抗原表位区核酸序列,并采用重叠延伸PCR将3段产物连接后克隆至原核表达载体pET-28a(+),成功构建原核表达质粒pET-truncated-VP60后转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3),并经IPTG诱导表达。纯化表达产物免疫3–4月龄非RHD免疫兔,血凝抑制试验测定抗血清效价。首次免疫后21 d,通过攻毒保护试验分析重组蛋白的免疫保护效力。结果表明,McHDV VP60主要抗原表位蛋白在大肠杆菌中成功表达,重组蛋白分子质量约为45 kDa,且以包涵体形式存在;重组蛋白纯化后配制疫苗免疫的新西兰白兔,可100%抵抗McHDV株的攻击,表明所筛选的抗原表位串联表达的重组蛋白具有良好的免疫保护效力,研究结果为McVHD新型疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 马麝 马麝出血症病毒 抗原表位 原核表达 免疫效力
血清4型Ⅰ群禽腺病毒四个主要结构蛋白的生物信息学分析 认领
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作者 张丙燕 王君娜 +2 位作者 张宇名 冯培祥 徐守振 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第13期1-6,11,162,共8页
为了了解血清4型Ⅰ群禽腺病毒(serotype 4 of groupⅠFowl adenovirus)分离株RZ140718(RZ株)的hexon、penton、fiber-1和fiber-2四个主要结构蛋白的遗传进化、二级结构及抗原表位等生物学信息,试验在对四个蛋白基因扩增测序基础上,应用M... 为了了解血清4型Ⅰ群禽腺病毒(serotype 4 of groupⅠFowl adenovirus)分离株RZ140718(RZ株)的hexon、penton、fiber-1和fiber-2四个主要结构蛋白的遗传进化、二级结构及抗原表位等生物学信息,试验在对四个蛋白基因扩增测序基础上,应用Megalign、MEGA 5.1软件进行氨基酸序列分析并构建系统发育进化树,应用ProtParam、SignalP和SOPMA软件分析理化性质和二级结构,应用BepiPred、ABCpred、IEDB和DNAStar软件综合预测B细胞抗原表位,应用NetMHCpan4.0和NetMHCⅡpan3.2软件预测T细胞抗原表位。结果表明:从RZ株中PCR扩增出hexon、penton、fiber-1和fiber-2这四个蛋白的基因;RZ株的hexon和penton蛋白与GenBank中12个血清型参考株的同源性较高,fiber-1和fiber-2蛋白与4型和10型参考株的同源性较高;RZ株的四个蛋白与GenBank中其他4型中国分离株均位于同一分支上;四个蛋白均为酸性亲水蛋白,无信号肽,均以无规卷曲为主;从四个蛋白中分别得到22,11,11,10个潜在的线性B细胞抗原表位,4,2,4,2个潜在的CTL细胞抗原表位,2,1,1,0个潜在的Th细胞抗原表位。说明hexon蛋白具有较多的潜在优势抗原表位,可用于后续表位疫苗的开发研究。 展开更多
关键词 血清4型Ⅰ群禽腺病毒 遗传进化 生物信息学 二级结构 抗原表位
贝类精氨酸激酶致敏性的研究进展 认领
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作者 赵晓涵 张江涛 +3 位作者 李国明 朱艳 谷瑞增 鲁军 《食品工业》 CAS 北大核心 2020年第2期267-271,共5页
贝类由甲壳类动物和软体动物组成,随着贝类过敏日益增多,贝类过敏原逐渐成为一项重要的研究领域。精氨酸激酶(AK)是贝类中的过敏原之一,关于AK的研究主要集中在酶学性质及分子克隆方向, AK的致敏性方面研究较少,而分析其致敏性的关键是... 贝类由甲壳类动物和软体动物组成,随着贝类过敏日益增多,贝类过敏原逐渐成为一项重要的研究领域。精氨酸激酶(AK)是贝类中的过敏原之一,关于AK的研究主要集中在酶学性质及分子克隆方向, AK的致敏性方面研究较少,而分析其致敏性的关键是系统认识AK的抗原表位,其表位的确定有利于了解相关过敏反应机制。因此,对贝类过敏、贝类精氨酸激酶及其致敏性的研究进展、抗原表位进行论述,并对精氨酸激酶的研究方向进行展望,以期为更好地研究贝类AK的致敏性和开发低致敏甚至无致敏性贝类食品提供参考。 展开更多
关键词 食物过敏 贝类过敏 精氨酸激酶 抗原表位 致敏性
严重急性呼吸综合征冠状病毒2型4种结构蛋白特性分析 认领
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作者 李雪 任林柱 《中国动物检疫》 CAS 2020年第10期92-98,共7页
为深入了解严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)S、M、E、N蛋白的分子生物学特征和基本结构特征,选取S、M、E、N蛋白序列进行生物信息学分析和预测,使用DNAstar、SignalP、TMHHM、PSORT Prediction、BUSCA和ABCpred软件,分析并... 为深入了解严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)S、M、E、N蛋白的分子生物学特征和基本结构特征,选取S、M、E、N蛋白序列进行生物信息学分析和预测,使用DNAstar、SignalP、TMHHM、PSORT Prediction、BUSCA和ABCpred软件,分析并相互验证4种蛋白的结构域特征和S蛋白的潜在B细胞抗原表位,结果预测出了4种结构蛋白的功能结构域,并分析预测出S蛋白潜在的B细胞抗原表位为25~29、75~81、112~116、148~152、773~779 aa。研究结果可为SARS-CoV-2相关的分子生物学和结构生物学研究提供参考,并为疫苗开发等提供理论依据。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2) 结构蛋白 结构域特征 抗原表位 生物信息学分析 分子生物学
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生长抑素和耐热木聚糖酶的融合表达及性质研究 认领
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作者 黄坤龙 苏小运 姚斌 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期235-243,共9页
旨在获得具有抗原性和免疫原性的融合蛋白CbXyn10C-SS,并对其进行高效表达和酶学性质分析。生长抑素(Somatostatin,SS)从多途径阻碍饲料转化效率和动物生长,使用SS免疫动物可避免其抑制作用。然而SS免疫的研究多以DNA疫苗为载体,少见重... 旨在获得具有抗原性和免疫原性的融合蛋白CbXyn10C-SS,并对其进行高效表达和酶学性质分析。生长抑素(Somatostatin,SS)从多途径阻碍饲料转化效率和动物生长,使用SS免疫动物可避免其抑制作用。然而SS免疫的研究多以DNA疫苗为载体,少见重组功能性SS蛋白的高效制备方法。木聚糖酶提高饲料转化率并在饲料中广泛应用,且微生物法发酵制备重组木聚糖酶技术已经非常成熟。将SS基因连接在细菌Caldicellulosiruptor bescii来源的耐热木聚糖酶基因CbXyn10C的3'端进行融合表达。融合蛋白CbXyn10C-SS具有抗原性和免疫原性,且该蛋白的理化性质和催化常数与CbXyn10C非常相似,具高度的热稳定性和较强的催化性能,适合饲料制粒。成功高效表达了能同时作为饲用木聚糖酶和生长抑素抗原的融合蛋白CbXyn10C-SS。 展开更多
关键词 生长抑素 木聚糖酶 融合表达 抗原表位
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幽门螺杆菌OmpP1蛋白的生物信息学分析 认领
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作者 王海燕 何梦雅 +5 位作者 余飞艳 张柯 Wajid Ameen Mirza 陈帅印 张荣光 段广才 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2020年第1期1-4,9共5页
目的应用生物学软件预测幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)ompP1基因编码蛋白(OmpP1)的结构与功能。方法从NCBI数据库中获取ompP1基因的相关信息,应用软件MEGAX 10.0.5构建Hp进化树,应用生物信息学软件分析OmpP1蛋白的氨基酸序列、理... 目的应用生物学软件预测幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)ompP1基因编码蛋白(OmpP1)的结构与功能。方法从NCBI数据库中获取ompP1基因的相关信息,应用软件MEGAX 10.0.5构建Hp进化树,应用生物信息学软件分析OmpP1蛋白的氨基酸序列、理化性质、跨膜区、信号肽、糖基化和磷酸化位点、空间结构以及抗原表位。结果 ompP1基因核苷酸序列编码区长1 764 bp,编码587个氨基酸;生物信息学分析显示ompP1基因在不同菌株间的同源性为96.2%~97.17%,其编码的OmpP1蛋白是一种性质稳定、偏碱性的亲水蛋白;该蛋白无跨膜区和信号肽,含有糖基化和磷酸化位点;OmpP1二级结构中含α-螺旋178个,延长链162个,β转角37个,无规则卷曲210个,分别占30.32%、27.60%、6.30%和35.78%;三级结构分析显示OmpP1含有OM_channels蛋白家族特征性结构域;BepiPred1.0和SYFPEITHI9预测该蛋白含有22个B淋巴细胞和28个CTL淋巴细胞相关抗原表位。结论 Hp OmpP1为碱性亲水性蛋白,含有T、B细胞抗原表位,可为其抗原性研究和高效表位疫苗的研发提供理论参考。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 外膜蛋白P1 生物信息学 抗原表位
嵌合人偏肺病毒(hMPV)表位的重组流感病毒免疫保护效果 认领
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作者 李晓燕 朱丛中 +4 位作者 郭丽茹 孔梅 邹明 庄志超 苏旭 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期11-18,共8页
目的评价重组嵌合表达人偏肺病毒(hMPV)表位的流感病毒的免疫应答及免疫保护效果。方法用8质粒系统拯救出的在NS基因中嵌合hMPV表位的重组流感病毒免疫BALB/c小鼠,检测其刺激机体产生的针对hMPV和流感病毒的抗体滴度,及脾细胞分泌细胞... 目的评价重组嵌合表达人偏肺病毒(hMPV)表位的流感病毒的免疫应答及免疫保护效果。方法用8质粒系统拯救出的在NS基因中嵌合hMPV表位的重组流感病毒免疫BALB/c小鼠,检测其刺激机体产生的针对hMPV和流感病毒的抗体滴度,及脾细胞分泌细胞因子含量。免疫后小鼠用hMPV和流感病毒进行攻击,对攻击后小鼠肺组织和鼻甲骨中病毒含量采用数字PCR方法进行测定,同时对肺组织进行HE染色,评价其对肺部损伤的保护作用。结果重组流感病毒株rFLU/hMPV/B(嵌入了hMPV的B细胞表位)免疫小鼠后,产生了针对hMPV和流感病毒的特异性抗体。rFLU/hMPV/CTL+Th(嵌入了CTL表位/Th细胞表位)免疫小鼠后,产生了针对流感病毒的特异性抗体及hMPV特异的细胞毒性T淋巴细胞反应(IFN-γ分泌增多)。rFLU/hMPV/B和rFLU/hMPV/CTL+Th引起了平衡的Th1/Th2免疫应答。用hMPV和流感病毒攻击重组病毒免疫后小鼠,肺组织病理HE染色结果显示重组病毒免疫后小鼠肺病变明显减轻,肺组织和鼻甲骨中hMPV和流感病毒含量也明显减少。结论重组的2株嵌合有hMPV B细胞表位和CTL表位/Th细胞表位的重组流感病毒株,可刺激机体产生针对hMPV和/或流感病毒体液免疫应答,嵌合有hMPV CTL表位/Th细胞表位的重组流感病毒株还可刺激机体产生hMPV特异性的细胞免疫应答,对hMPV和流感病毒攻击也有一定保护作用,该重组病毒株有潜在疫苗应用价值。 展开更多
关键词 人偏肺病毒 流感病毒载体 抗原表位 免疫保护
羊口疮病毒B2L蛋白抗原表位预测及重组蛋白设计与验证 认领
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作者 孙正楠 张焕容 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第3期686-695,共10页
为得到羊口疮病毒(ORFV)B2L蛋白的可能抗原表位及截短后高效表达的表位蛋白,本试验采用DNAStar、Mega 7.0等软件对部分NCBI已登录的B2L基因序列进行分析,并应用不同在线服务器对其编码蛋白的信号肽、跨膜区、细胞毒性T细胞表位、辅助性... 为得到羊口疮病毒(ORFV)B2L蛋白的可能抗原表位及截短后高效表达的表位蛋白,本试验采用DNAStar、Mega 7.0等软件对部分NCBI已登录的B2L基因序列进行分析,并应用不同在线服务器对其编码蛋白的信号肽、跨膜区、细胞毒性T细胞表位、辅助性T细胞表位、B细胞表位和二级结构进行预测,同时参考多模板进行三级结构预测,综合抗原表位、亲水性、表面可及性和抗原指数等主要预测数据进行抗原位点分析及融合His·tag抗原表位蛋白的设计,构建并原核表达截短后高效表达的表位蛋白。结果显示,得到了几个可能的优质抗原表位,分别为88-93、133-138、172-175、251-254、311-313和370-377位氨基酸;纯化并复性的蛋白以多聚体形式存在;Western blotting结果显示,其具有良好的反应原性。该研究确定了ORFV B2L蛋白抗原位点,构建并原核表达了截短后高效表达的表位蛋白,为羊口疮诊断制剂及亚单位疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 羊口疮病毒(ORFV) B2L基因 蛋白结构 抗原表位 重组蛋白
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南非2型口蹄疫病毒结构蛋白抗原表位研究进展 认领
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作者 李茜 代军飞 +6 位作者 丁耀忠 李国秀 侯谦 Ashenafi Kiros Wubshet 马炳 张永光 张杰 《动物医学进展》 北大核心 2020年第6期81-85,共5页
口蹄疫病毒(FMDV)感染会引起偶蹄动物发生口蹄疫(FMD),产生急性系统性传染性水疱。其分为7个血清型,包括A、O、C型,亚州1型(Asia 1)及南非1、2、3型(SAT1、2、3)。其中,SAT FMDV具有明显的地域性,主要集中在撒哈拉沙漠以南,侵害水牛及... 口蹄疫病毒(FMDV)感染会引起偶蹄动物发生口蹄疫(FMD),产生急性系统性传染性水疱。其分为7个血清型,包括A、O、C型,亚州1型(Asia 1)及南非1、2、3型(SAT1、2、3)。其中,SAT FMDV具有明显的地域性,主要集中在撒哈拉沙漠以南,侵害水牛及野生动物,容易发生抗原变异,疫苗交叉保护效果低。近几年的报告表明,中东地区暴发了SAT2FMDV,跨越了长久以来的地域界限,也对我国的养殖业造成了潜在的威胁。我国在SAT FMDV方面的研究较少,有必要建立特异性和灵敏性高的SAT FMDV监测方法作为战略储备,以防其跨境传播。论文主要介绍了SAT2FMDV结构蛋白抗原表位国内外研究进展,以期为今后研发有关SAT2FMDV战略储备表位疫苗提供理论依据。 展开更多
关键词 南非2型 口蹄疫病毒 结构蛋白 抗原表位 疫苗
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