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小麦耐盐相关基因TaRSTR的克隆与功能分析 预览
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作者 王玉 连娟 +2 位作者 王聪 赵利利 赵宝存 《山东农业科学》 2020年第1期10-16,共7页
高盐是限制植物生长和发育的重要非生物胁迫因子。以耐盐小麦RH8706-49根部基因表达谱芯片结果为基础,利用电子克隆和RT-PCR方法克隆了一个盐胁迫时上调表达的基因,命名为TaRSTR(登录号:EU263918)。荧光定量PCR分析证实该基因受盐胁迫... 高盐是限制植物生长和发育的重要非生物胁迫因子。以耐盐小麦RH8706-49根部基因表达谱芯片结果为基础,利用电子克隆和RT-PCR方法克隆了一个盐胁迫时上调表达的基因,命名为TaRSTR(登录号:EU263918)。荧光定量PCR分析证实该基因受盐胁迫诱导表达,亚细胞定位结果显示TaRSTR蛋白定位在细胞核里。TaRSTR过表达提高了转基因拟南芥在盐胁迫下的种子萌发率及成年植株的耐受性。TaRSTR基因过表达可显著提高已知耐盐相关基因At FRY1、At P5CS1和AtRD29B的表达量,推测TaRSTR基因通过这些标记基因提高了转基因拟南芥的耐盐性。上述结果表明TaRSTR基因过表达能提高植株的耐盐性,是植物耐盐的正调节子。 展开更多
关键词 小麦 TaRSTR基因 耐盐 实时定量PCR
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PAIP1在肝细胞癌组织中的表达及临床意义 预览
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作者 郑剑锋 杨峻 +3 位作者 李金平 杨小洁 邵文华 秘思思 《实验与检验医学》 CAS 2020年第1期6-8,20,共4页
目的检测肝细胞癌组织及肝癌细胞株中PAIP1的表达水平,并分析其表达水平与肝细胞癌的临床病理特征参数的关系。方法采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)、WB技术检测新鲜手术标本和肝癌细胞株的PAIP1的表达水平,采用免疫组化方法检测肝癌组织芯... 目的检测肝细胞癌组织及肝癌细胞株中PAIP1的表达水平,并分析其表达水平与肝细胞癌的临床病理特征参数的关系。方法采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)、WB技术检测新鲜手术标本和肝癌细胞株的PAIP1的表达水平,采用免疫组化方法检测肝癌组织芯片PAIP1蛋白表达水平,比较肝癌组织和癌旁组织PAIP1的表达水平差异,在线工具分析肝癌数据库PAIP1的表达水平与病人临床病理参数的关联性。结果与癌旁组织相比,新鲜标本中癌组织PAIP1 mRNA的表达水平明显增高;PAIP1在肝癌细胞株中高表达;组织芯片中,PAIP1在细胞胞浆中表达,肝癌组织中PAIP1表达水平高于癌旁组织,PAIP1表达水平与与病人生存率呈负相关。结论肝细胞癌中PAIP1高表达,可能在肝细胞癌的发生、发展过程中发挥作用。 展开更多
关键词 肝细胞癌 PAIP1 实时定量PCR 免疫组织化学
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苯酚胁迫下多刺裸腹溞实时定量PCR内参基因的筛选 预览
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作者 王茜 刘文秀 +1 位作者 高菲 王兰 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期180-186,共7页
为研究苯酚胁迫下多刺裸腹溞(Moina macrocopa)相关基因的表达情况,筛选用于实时定量PCR分析的最佳内参基因。利用内参基因表达的cycle threshold(Ct值)非参数检验、GeNorm、NormFinder和Best-Keeper四种方法对β-actin、16S rRNA和12S ... 为研究苯酚胁迫下多刺裸腹溞(Moina macrocopa)相关基因的表达情况,筛选用于实时定量PCR分析的最佳内参基因。利用内参基因表达的cycle threshold(Ct值)非参数检验、GeNorm、NormFinder和Best-Keeper四种方法对β-actin、16S rRNA和12S rRNA进行分析,筛选出苯酚胁迫下多刺裸腹溞表达相对稳定的内参基因。结果显示,从Ct值初步判定不同浓度苯酚胁迫后,多刺裸腹溞体内β-actin、16S rRNA和12S rRNA均可稳定表达,且稳定性顺序为:16S rRNA>12S rRNA>β-actin,从GeNorm软件分析显示内参基因的稳定性顺序为:16S rRNA=β-actin>12S rRNA,NormFinder和Bestkeeper分析显示的稳定性顺序均为:16S rRNA>β-actin>12S rRNA。基于以上四种方法对三个候选内参基因的筛选,确定了16S rRNA作为多刺裸腹溞实时定量PCR的最佳内参基因,有助于提高qRT-PCR分析的准确性,为进一步研究苯酚胁迫多刺裸腹溞后目的基因功能的表达提供了基础。 展开更多
关键词 多刺裸腹溞 实时定量PCR 内参基因 苯酚
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比克氏棉色素腺体形态建成与棉酚代谢特性的研究 预览
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作者 胡佳惠 赵天伦 +3 位作者 李诚 余静文 陈进红 祝水金 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2019年第1期54-63,共10页
【目的】对比克氏棉(G.bickii Prokh)种子形成过程和种子萌发过程中的色素腺体形态建成特点、色素腺体与棉酚含量的动态关系及其分子机理进行探究。【方法】以比克氏棉为材料,进行组织切片观察、棉酚含量测定并分析对种子萌发期色素腺... 【目的】对比克氏棉(G.bickii Prokh)种子形成过程和种子萌发过程中的色素腺体形态建成特点、色素腺体与棉酚含量的动态关系及其分子机理进行探究。【方法】以比克氏棉为材料,进行组织切片观察、棉酚含量测定并分析对种子萌发期色素腺体形成及棉酚合成基因的表达谱。【结果】比克氏棉在种胚形成过程中,子叶上形成大量色素腺体原,并在种子萌发后12h形成腔体结构,转换成成熟的色素腺体;比克氏棉种胚形成过程及种子萌发过程中均未检测到棉酚,但从种子萌发12h开始可以检测到较低含量的棉酚。种子萌发期色素腺体形成及棉酚合成相关基因表达谱分析结果表明,GoPGF基因在比克氏棉种子萌发12h的子叶上表达量较高,与比克氏棉色素腺体形成有关;法尼基焦磷酸合成酶(FPS)基因在种子萌发24h的子叶上表达量较高,可能与棉酚向子叶色素腺体转运有关;CYP706B1基因在种子萌发0h较高,HMG1基因在种子萌发0h、36h和48h的子叶上表达量均较高,说明这两个基因与种子萌发后色素腺体腔的形成有关,并参与棉酚的贮运;杜松烯合酶基因(CAD1-A)和HMG2基因与比克氏棉色素腺体形成无密切关系。【结论】种子萌发后的12h为比克氏棉子叶色素腺体形态建成的关键时期,且色素腺体的形态建成与棉酚出现的时间具有同步性。GoPGF、FPS、CYP706B1、HMG1参与色素腺体的形成及棉酚的转运。 展开更多
关键词 比克氏棉 色素腺体 棉酚 实时定量PCR
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火龙果miRNA表达分析的qRT-PCR检测体系建立 预览
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作者 李阿利 杨鹍 +2 位作者 文壮 仇志浪 文晓鹏 《种子》 北大核心 2019年第3期6-10,14共6页
基于火龙果小RNA组测序序列设计miR 396 b特异引物,采用茎环法和加尾法分别对火龙果miR 396 b进行表达分析,并对2个常用内参基因5 S和U 6的稳定性进行评价,建立火龙果miRNA表达分析的qRT-PCR检测体系。结果表明,U 6作为内参基因更稳定;... 基于火龙果小RNA组测序序列设计miR 396 b特异引物,采用茎环法和加尾法分别对火龙果miR 396 b进行表达分析,并对2个常用内参基因5 S和U 6的稳定性进行评价,建立火龙果miRNA表达分析的qRT-PCR检测体系。结果表明,U 6作为内参基因更稳定;茎环法灵敏度高、特异性强,以茎环法设计的引物检测miR 396 b在火龙果不同组织均有表达,且在火龙果幼茎受干旱(15%PEG)处理后呈下调趋势。因此,茎环法实时定量更适用于火龙果miRNA的检测。 展开更多
关键词 火龙果miRNA 茎环法 加尾法 实时定量PCR 内参基因
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岩牡蛎正常和低盐胁迫下定量PCR内参基因的筛选与验证 预览
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作者 宫建文 李琪 于红 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期657-663,共7页
实时荧光定量 PCR 已广泛用于基因表达的分析,合适的内参基因选择是获得准确分析结果的关键。本研究选用正常生理状态下岩牡蛎(Crassostrea nippona)的鳃、外套膜、闭壳肌和内脏团 4 种组织以及盐度 10、20 和 30暂养 1 周后的鳃组织为... 实时荧光定量 PCR 已广泛用于基因表达的分析,合适的内参基因选择是获得准确分析结果的关键。本研究选用正常生理状态下岩牡蛎(Crassostrea nippona)的鳃、外套膜、闭壳肌和内脏团 4 种组织以及盐度 10、20 和 30暂养 1 周后的鳃组织为材料,对已报道的常见内参基因(EF1A、GAPDH、RO21、TUB 和 TUA)的稳定性通过 3 种方法(geNorm、NormFinder 和 BestKeeper)进行分析和筛选,发现针对鳃单一组织在不同盐度胁迫下, GAPDH 和RO21 可以作为合适内参基因,而在不同组织中,需要更多的内参基因联合分析才能获得准确的定量表达结果。本研究是首次利用 q-PCR 对岩牡蛎进行内参基因的筛选和验证,为今后该物种低盐胁迫相关的基因表达和功能基因的研究提供重要依据。 展开更多
关键词 岩牡蛎 实时定量PCR 内参基因 低盐胁迫
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死亡诱骗受体3对乳腺癌预后及乳腺癌细胞的体外功能的影响
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作者 葛智成 屈翔 +4 位作者 余和芬 王子函 张慧明 高银光 张忠涛 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第14期1081-1085,共5页
目的观察死亡诱骗受体3(DcR3)对乳腺癌预后的影响和在乳腺癌细胞侵袭功能中的作用。方法通过实时定量聚合酶链反应(PCR)(real-time Q-PCR)进行定量检测包含115例乳腺组织样本的DcR3表达,对应患者随访并分析,中位随访时间10年。通过免疫... 目的观察死亡诱骗受体3(DcR3)对乳腺癌预后的影响和在乳腺癌细胞侵袭功能中的作用。方法通过实时定量聚合酶链反应(PCR)(real-time Q-PCR)进行定量检测包含115例乳腺组织样本的DcR3表达,对应患者随访并分析,中位随访时间10年。通过免疫细胞化学法和RNA提取和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测DcR3在乳腺癌MCF7、MDA-MB-231细胞系中的表达,建立DcR3敲除的细胞亚系并验证。通过侵袭和迁移模型观察减少DcR3表达后产生的影响。结果患者分为预后良好组(n=81)和预后不良组(n=26)。预后不良组(133 350±49 646)拷贝/50 ng RNA较预后良好组(5 393±1 428)拷贝/50 ng RNA,P=0.020)DcR3的表达显著增高;病理分级2级的肿瘤较病理分级1级的肿瘤DcR3表达显著升高[(82 844±34 068)拷贝/50 ng RNA(n=39)]与[(5 371±3 500)拷贝/50 ng RNA,n=20,P=0.029]。成功敲除MCF7细胞系和MDA-MB-231细胞系的DcR3基因,DcR3的敲除降低了MCF7细胞的侵袭和迁移能力(P=0.009,P=0.001),但MDA-MB-231细胞系在这两方面的差异无统计学意义(P=0.475,P=0.102)。结论DcR3促进了乳腺癌细胞的侵袭性,在乳腺癌的转移中起到了一定作用,DcR3检测有助于乳腺癌预后判断。 展开更多
关键词 死亡诱骗受体3 乳腺肿瘤 肿瘤转移 实时定量PCR
MicroRNA-210在宫颈鳞癌中的表达及意义
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作者 张广平 廖亚男 《黑龙江中医药》 2019年第1期189-191,共3页
目的:探讨MicroRNA-210(miR-210)在宫颈鳞癌中的表达及意义。方法:选取2015年2月至2018年2月我院保存的原发性宫颈鳞癌组织标本60例(宫颈癌组),同时选取正常宫颈组织标本35例作为对照组,采用实时定量PCR检测两组miR-210水平以及人乳头... 目的:探讨MicroRNA-210(miR-210)在宫颈鳞癌中的表达及意义。方法:选取2015年2月至2018年2月我院保存的原发性宫颈鳞癌组织标本60例(宫颈癌组),同时选取正常宫颈组织标本35例作为对照组,采用实时定量PCR检测两组miR-210水平以及人乳头瘤病毒(HPV)16。结果:宫颈癌组miR-210相对表达量为(5.21±1.36),明显高于对照组,差异比较有统计学意义(p <0.05);FIGO分期Ⅱb~Ⅳ、中低分化患者miR-210相对表达量分别为(5.96±1.30)和(5.36±1.29),明显高于Ⅰ~Ⅱa、高分化患者(p <0.05);HPV16感染阳性者miR-210表达水平为(5.26±1.30),明显高于HPV16感染阴性者,差异比较有统计学意义(p <0.05)。结论:宫颈鳞癌中miR-210表达明显升高,与患者肿瘤分期及分化程度有一定关系,同时可能与HPV16感染有关,值得进一步研究。 展开更多
关键词 MicroRNA-210 宫颈鳞癌 实时定量PCR 人乳头瘤病毒
Orbal氧化沟工艺污水厂中关键酶活性对污水处理效率的影响 被引量:1
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作者 张梦竹 于磊 +1 位作者 王睿 李元志 《环境工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期2142-2151,共10页
针对实际污水处理厂提标改造过程中运行参数变化对运行效果产生影响机制不明确的问题,选取以Orbal氧化沟为核心工艺的某实际污水处理厂,设置2种运行模式,采用PCR-DGGE分析、实时荧光定量PCR分析、酶活性分析等方法研究了不同运行模式下... 针对实际污水处理厂提标改造过程中运行参数变化对运行效果产生影响机制不明确的问题,选取以Orbal氧化沟为核心工艺的某实际污水处理厂,设置2种运行模式,采用PCR-DGGE分析、实时荧光定量PCR分析、酶活性分析等方法研究了不同运行模式下活性污泥中微生物种群结构、功能微生物含量、关键酶活性的特征;分析了微生物种群、关键酶活性与污染物去除率之间的关系;探讨了Orbal氧化沟工艺中运行参数变化对运行效果产生影响的机制。结果表明:适当减少Orbal氧化沟外侧沟道内转刷的开启数量,其沟道内溶解氧分布将发生明显变化;沿水流方向,厌氧或缺氧段将明显延长;长期运行结果显示,进水水质稳定时,减少转刷开启数量没有对生物处理工段内微生物种群结构产生影响。同时,外侧沟道内硝酸还原酶(nitrate reductase, NR)活性(以羟胺计)在夏季和冬季却均有显著增加,分别由模式Ⅰ的1.58 mg·(g·h)-1和0.80 mg·(g·h)-1增加到了模式Ⅱ的2.27 mg·(g·h)-1和1.07 mg·(g·h)-1;相关分析表明,HAO和NR活性与氨氮和总氮去除率呈显著相关,斯皮尔曼相关系数r分别为0.99(P=0.01)和0.88(P=0.12)。在实际污水处理厂中,关键酶活性是运行参数改变对运行效率产生影响的根本原因。 展开更多
关键词 ORBAL氧化沟 微生物种群 实时定量PCR 关键酶活性 运行效率
中国绿水螅抗坏血酸过氧化物酶基因的克隆、抗体制备及表达分析 预览
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作者 张行 田晓晓 +2 位作者 董文芳 王茹梦 潘红春 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期305-314,共10页
为探讨中国绿水螅(Hydra sinensis)抗坏血酸过氧化物酶(Ascorbate peroxidase,APX)基因的起源及功能,研究采用RACE方法克隆了中国绿水螅APX基因的全长cDNA序列。该cDNA序列总长1357 bp,包括5′非编码区107 bp,3′非编码区146 bp及开放... 为探讨中国绿水螅(Hydra sinensis)抗坏血酸过氧化物酶(Ascorbate peroxidase,APX)基因的起源及功能,研究采用RACE方法克隆了中国绿水螅APX基因的全长cDNA序列。该cDNA序列总长1357 bp,包括5′非编码区107 bp,3′非编码区146 bp及开放阅读框(Open reading frame,ORF)1104 bp,共编码367个氨基酸,预测蛋白质分子量为40.79 kD。BLAST结果表明中国绿水螅APX蛋白同源序列绝大部分来自植物界;通过最大似然法(Maximum-likelihood)和贝叶斯分析(Bayesian inference)进行的系统发生分析显示植物界及动物界物种的APX序列各自形成单系群。把APX基因ORF全长序列克隆到原核表达质粒pET-GST中,重组质粒转化E.coliBL21(DE3)菌株,IPTG诱导后成功表达重组融合蛋白GST-APX,再使用纯化的重组蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体用于APX蛋白的免疫印迹分析(Western blotting assay,WB)。在不同光照时长梯度(光强度2000 lx,每天分别光照0、4h、8h、12h、16h、20h及24h)下培养中国绿水螅30d,实时定量PCR(Quantitative real-timePCR,qPCR)及WB检测结果均表明光照时间较长时(每天光照12h以上)绿水螅APX表达呈现一定程度的上调。在长时间光辐射下水螅体内共生绿藻连续进行光合作用所累积的大量活性氧能够扩散到水螅细胞内,此时水螅体内表达上调的APX可能参与清除其细胞内的活性氧。 展开更多
关键词 中国绿水螅 抗坏血酸过氧化物酶 多克隆抗体 实时定量PCR 免疫印迹分析
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大豆GmCBL10基因的克隆与功能分析
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作者 王雪松 李永光 李文滨 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期355-361,共7页
为了剖析大豆GmCBL10在盐胁迫下的表达模式,本研究采用PCR技术从‘东农50’中克隆了GmCBL10基因全长序列,由792个碱基组成,共编码263个氨基酸。生物信息学分析发现Gm CBL10不含信号肽,有一个跨膜结构域和多个磷酸化位点,PSORT预测其定... 为了剖析大豆GmCBL10在盐胁迫下的表达模式,本研究采用PCR技术从‘东农50’中克隆了GmCBL10基因全长序列,由792个碱基组成,共编码263个氨基酸。生物信息学分析发现Gm CBL10不含信号肽,有一个跨膜结构域和多个磷酸化位点,PSORT预测其定位于细胞质中。在The Bio-Analytic Resource for Plant Biology (Bar)数据库中分析了GmCBL10的拟南芥同源基因AtCBL10在不同非生物胁迫下的表达模式。对GmCBL10的启动子序列进行分析,发现Gm CBL10启动子区域含有多种与非生物胁迫应答及生理功能相关的顺式作用元件。对GmCBL10进行系统进化树分析,发现大豆GmCBL10与同为豆科的菜豆、木豆、红豆等的相似性很高。对大豆幼苗进行盐胁迫处理,荧光定量PCR结果显示Gm CBL10在盐诱导条件下上调表达,表明Gm CBL10可能作为正向调控因子参与大豆的盐胁迫响应。本研究分析了大豆GmCBL10在盐胁迫下的表达差异,为揭示大豆的抗盐机制提供了初步理论依据。 展开更多
关键词 大豆 GmCBL10基因 盐胁迫 实时定量PCR
板栗实时定量PCR内参基因的筛选与验证
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作者 陈国松 李靖同 +4 位作者 刘阳 曹庆芹 张卿 秦岭 邢宇 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期378-386,共9页
实时荧光定量PCR技术具有高灵敏性和高特异性,被广泛应用于基因表达分析,选取合适的内参基因是利用该技术准确分析目的基因表达变化的前提。本文以板栗的7种不同组织器官(根、茎、叶、种子、花芽、雌花和雄花)为材料,采用qRT-PCR技术分... 实时荧光定量PCR技术具有高灵敏性和高特异性,被广泛应用于基因表达分析,选取合适的内参基因是利用该技术准确分析目的基因表达变化的前提。本文以板栗的7种不同组织器官(根、茎、叶、种子、花芽、雌花和雄花)为材料,采用qRT-PCR技术分析了板栗中6个候选内参基因(EF1α、TUA、TUB、UBQ、18S rRNA和Actin)的表达趋势,运用geNorm、NormFinder和BestKeeper 3种软件对候选内参基因的表达稳定性进行了综合分析,并利用目的基因CmSPL9对筛选出的内参基因进行验证。结果表明:Actin和EF1α在板栗不同组织器官中稳定性最佳, Actin、EF1α或Actin+EF1α可作为板栗的内参基因进行后续试验研究。 展开更多
关键词 板栗 内参基因 实时定量PCR CmSPL9基因
MiR-133a-3p在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌病理特征的关系 预览
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作者 田彩平 杨碎胜 +4 位作者 孙敬阳 马佰菁 荆晓 魏政丽 廖世奇 《甘肃医药》 2019年第4期308-310,共3页
目的:探讨MiR-133a-3p在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌病理特征的关系。方法:收集2018年1月至2019年4月在甘肃省肿瘤医院住院的乳腺癌患者的乳腺癌组织,采用实时定量PCR检测乳腺癌组织中MiR-133a-3p的表达水平。结果:MiR-133a-3p在乳... 目的:探讨MiR-133a-3p在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌病理特征的关系。方法:收集2018年1月至2019年4月在甘肃省肿瘤医院住院的乳腺癌患者的乳腺癌组织,采用实时定量PCR检测乳腺癌组织中MiR-133a-3p的表达水平。结果:MiR-133a-3p在乳腺癌组织中的表达水平明显低于非癌组织中的表达水平(P<0.05);MiR-133a-3p表达水平与患者年龄、肿瘤大小无相关性(P>0.05),但与淋巴结是否转移、TNM分级、ER阴阳性以及PR阴阳性具有显著负相关(P<0.05)。结论:MiR-133a-3p可以作为乳腺癌早期预测、转移以及预后评估的潜在标志物,为乳腺癌的治疗提供新的思路和研究依据。 展开更多
关键词 MiR-133a-3p 乳腺癌组织 实时定量PCR 病理特征
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基于实时定量PCR技术的育龄期细菌性阴道病患者阴道菌群结构分析及其临床应用
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作者 李丰悦 丁秀丽 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2019年第11期1274-1278,共5页
目的探讨育龄期女性细菌性阴道病(bacterial vaginosis,BV)患者阴道优势菌群变化及其与临床指标的相关性。方法选择本院门诊确诊的育龄期BV患者35例和同期入院体检的健康体检女性37例,无菌拭子采集阴道中段壁分泌物,提取细菌基因组DNA,... 目的探讨育龄期女性细菌性阴道病(bacterial vaginosis,BV)患者阴道优势菌群变化及其与临床指标的相关性。方法选择本院门诊确诊的育龄期BV患者35例和同期入院体检的健康体检女性37例,无菌拭子采集阴道中段壁分泌物,提取细菌基因组DNA,采用实时定量PCR技术(real-time quantitative PCR,qPCR)进行阴道优势细菌检测,并进行其与临床指标如阴道pH和Nugent评分相关性分析。结果乳杆菌属细菌及其种水平的细菌如惰性乳杆菌、卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌等在BV患者中均显著下降,BV相关阴道致病细菌如加德纳菌属、奇异菌属、埃格特菌属、巨型球菌I型菌属、纤毛菌属和普氏菌属显著升高(均P<0.05)。阴道致病菌群与阴道pH和Nugent评分呈显著正相关,而阴道卷曲乳杆菌和惰性乳杆菌与其呈负相关。结论育龄期BV患者阴道优势菌群显著失衡,并与阴道pH和Nugent评分显著相关,提示阴道优势菌群改变参与BV发生发展。 展开更多
关键词 细菌性阴道病 优势菌群 育龄期 乳杆菌 实时定量PCR
实时定量PCR在先天性小睑裂综合征患者FOXL2基因检测中的应用 预览
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作者 陈丽娟 王中英 +1 位作者 李思佳 胡姗姗 《中国当代医药》 2019年第23期79-82,共4页
目的应用实时定量PCR技术鉴定先天性小睑裂综合征(BPES)患者中FOXL2基因的突变和(或)缺失。方法于2017年8月收集黑龙江省1个BPES患病家系,采集外周血提取基因组DNA,用PCR直接测序法和实时定量PCR法筛查FOXL2基因的全部外显子。结果在此... 目的应用实时定量PCR技术鉴定先天性小睑裂综合征(BPES)患者中FOXL2基因的突变和(或)缺失。方法于2017年8月收集黑龙江省1个BPES患病家系,采集外周血提取基因组DNA,用PCR直接测序法和实时定量PCR法筛查FOXL2基因的全部外显子。结果在此例患病家系中,用PCR直接测序法排除了基因内突变,用实时定量PCR方法确定了FOXL2基因全缺失。这些变异在未患病亲属和50名正常人中并未被检测到。结论本研究是应用实时定量PCR技术检测中国BPES患者FOXL2基因缺失的报道,这项技术丰富了BPES患者的分子遗传学诊断方法。 展开更多
关键词 小睑裂综合征 叉头蛋白L2 实时定量PCR 缺失 突变
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循环microRNA对原发性肝癌诊断价值的初步研究 预览
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作者 赵西太 聂青和 +2 位作者 龙振昼 高禄化 王媛媛 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2019年第2期129-136,共8页
目的筛选原发性肝癌(primary liver cancer,PLC)相关的miRNA,并探索其对PLC的诊断价值。方法生物信息学方法发掘PLC异常表达的miRNA,结合miRNA靶基因预测及PLC相关高频突变基因,确定目的miRNA;收集确诊PLC、肝硬化及非肝病对照患者血浆... 目的筛选原发性肝癌(primary liver cancer,PLC)相关的miRNA,并探索其对PLC的诊断价值。方法生物信息学方法发掘PLC异常表达的miRNA,结合miRNA靶基因预测及PLC相关高频突变基因,确定目的miRNA;收集确诊PLC、肝硬化及非肝病对照患者血浆样本及临床资料,定量PCR检测上述目的miRNA表达水平;以肝硬化为对照,选取有价值的miRNA进行PLC诊断试验,绘制ROC曲线,计算曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度及约登指数(YI)等评价指标。结果筛选得到4种miRNA,分别为miR-10b-5p、miR-21-5p、miR-1258、miR-1269a。纳入确诊PLC39例、肝硬化38例和无肝病对照者8例,检测上述miRNA血浆表达水平,结果显示,与肝硬化患者比较,PLC患者miR-10b-5p、miR-21-5p表达水平升高,差异有统计学意义(P=0.028、0.004);而miR-1258表达水平基本相同(P=0.985),miR-1269a表达升高,但差异无统计学意义(P=0.223)。miR-10b-5p、miR-21-5p和AFP诊断PLC的AUC为0.651、0.730、0.731(P<0.05),YI为0.273、0.458、0.379;以上3个指标两两或三者进行平行诊断试验和系列诊断试验,可显著提高灵敏度或特异度;miR-10b-5p、miR-21-5p、miR-1258和AFP联合诊断PLC的AUC为0.885(P<0.001),YI为0.639。结论生物信息学方法筛选目的miRNA是简便、可靠的方法,但临床验证过程必不可少。单个miRNA诊断PLC准确性一般,多个miRNA联合或联合AFP可显著提高PLC诊断准确性,有望成为miRNA诊断PLC的主要方法。 展开更多
关键词 原发性肝癌 循环MICRORNA 生物信息学 分子诊断 实时定量PCR
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血清miRNA-363联合超声弹性成像在诊断老年甲状腺乳头状癌中的临床意义 预览
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作者 殷晓星 周琨 +1 位作者 徐晗 马保金 《老年医学与保健》 CAS 2019年第3期373-375,380共4页
目的探讨血清miRNA-363联合超声弹性评分(ES)和弹性应变比值(SR)在老年甲状腺乳头状癌中的临床意义。方法选择2017年1月—2018年12月在复旦大学附属华山医院静安分院诊断为甲状腺乳头状癌患者118例,为甲状腺乳头状癌组;选择同期75例诊... 目的探讨血清miRNA-363联合超声弹性评分(ES)和弹性应变比值(SR)在老年甲状腺乳头状癌中的临床意义。方法选择2017年1月—2018年12月在复旦大学附属华山医院静安分院诊断为甲状腺乳头状癌患者118例,为甲状腺乳头状癌组;选择同期75例诊断为老年甲状腺腺瘤者为对照组。采用实时定量PCR测定2组血清miRNA-363,采用超声测定ES和SR。结果甲状腺乳头状癌组的血清miRNA-363较甲状腺腺瘤组降低(P<0.01),而甲状腺乳头状癌组的ES和SR水平高于甲状腺腺瘤组(P<0.01)。甲状腺乳头状癌患者血清miRNA-363与ES(r=-0.762,P<0.01)和SR(r=-0.813,P<0.01)呈负相关,同样甲状腺乳头状癌患者ES与SR呈正相关(r=0.781,P<0.01)。以血清miRNA-363,ES和SR联合检测作为检验变量,以发生甲状腺乳头状癌为状态变量绘制ROC曲线,联合检测的灵敏度为94.1%,特异性为76.0%,其AUC为0.940联合检测的曲线下面积优于miRNA-363(Z=3.780,P<0.01),ES(Z=5.256,P<0.01)和SR(Z=4.976,P<0.01),而血清miRNA-363,ES和SR的曲线下面积之间的比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论血清miRNA-363联合声弹性成像检测与甲状腺乳头状癌的恶性程度相关,在诊断老年甲状腺乳头状癌具有较高的灵敏度和特异性,在早期诊断甲状腺乳头状癌具有重要的临床意义。 展开更多
关键词 老年 甲状腺乳头状癌 微小RNA 弹性成像 早期诊断 实时定量PCR
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哮喘大鼠肺组织Bid和骨膜蛋白检测的意义 预览
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作者 王恩智 叶馨楠 +4 位作者 鲍林灵 戴巧俊 夏雨虹 陈晓 蒋珍凤 《现代实用医学》 2019年第8期1000-1001,1136,I0001共4页
目的通过检测哮喘肺组织Bid和骨膜蛋白的表达水平,探讨Bid和骨膜蛋白参与哮喘炎症的机制。方法复制哮喘大鼠模型并取肺组织,采用免疫组化法和实时定量PCR法检测肺组织骨膜蛋白、BidmRNA与Bid蛋白的表达。结果哮喘组骨膜蛋白、BidmRNA和... 目的通过检测哮喘肺组织Bid和骨膜蛋白的表达水平,探讨Bid和骨膜蛋白参与哮喘炎症的机制。方法复制哮喘大鼠模型并取肺组织,采用免疫组化法和实时定量PCR法检测肺组织骨膜蛋白、BidmRNA与Bid蛋白的表达。结果哮喘组骨膜蛋白、BidmRNA和Bid蛋白的表达水平高于对照组(均P<0.05)。肺组织BidmRNA与Bid蛋白间、Bid蛋白与骨膜蛋白间均呈正相关(r=0.61、0.60,均P<0.05)。结论哮喘肺组织中骨膜蛋白和Bid可能具有促进哮喘气道炎症的作用。 展开更多
关键词 哮喘 BID 骨膜蛋白 发病机制 免疫组化 实时定量PCR
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尖裸鲤实时荧光定量PCR内参基因的筛选 预览
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作者 孙海成 吕晓楠 +4 位作者 佟广香 尹家胜 薛淑群 张丽娜 韩英 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期370-375,共6页
为筛选能够稳定表达的内参基因用于尖裸鲤Oxygymnocypris stewarti实时荧光定量PCR分析,以尖裸鲤血液、心脏、肝、脾、鳃、头肾、中肾、后肾、前肠、中肠、后肠、性腺、眼、垂体、脑、红肌、白肌和皮肤18个组织为材料,应用实时荧光定量... 为筛选能够稳定表达的内参基因用于尖裸鲤Oxygymnocypris stewarti实时荧光定量PCR分析,以尖裸鲤血液、心脏、肝、脾、鳃、头肾、中肾、后肾、前肠、中肠、后肠、性腺、眼、垂体、脑、红肌、白肌和皮肤18个组织为材料,应用实时荧光定量PCR技术比较了GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶)、HPRT1(次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶1)、RPL13(核糖体蛋白L13)、RPL19(核糖体蛋白L19)、RPL13a(核糖体蛋白L13a)、SDHA(琥珀酸脱氢酶亚基A)和ACTB(β-肌动蛋白)7个候选内参基因的表达情况,并采用GeNorm、NormFinder和BestKeeper软件对7个候选内参基因的稳定性进行分析。结果表明:GeNorm分析显示,7个候选内参基因的平均表达稳定值(M)依次为RPL13=RPL13a<RPL19<GAPDH<ACTB<SDHA<HPRT1,其中RPL13和RPL13a的M值均最小(0.62);NormFinder分析显示,7个候选内参基因的M值依次为RPL13<RPL13a<RPL19<GAPDH<ACTB<SDHA<HPRT1,其中RPL13的M值最小(0.30);BestKeeper分析显示,7个候选内参基因的标准差(S.D.)依次为RPL13<RPL19<GAPDH<HPRT1<RPL13a<SDHA<ACTB,变异系数(CV)值依次为RPL13<RPL19<HPRT1<GAPDH<SDHA<RPL13a<ACTB,其中RPL13的标准差(0.84)和变异系数(4.54%)均最小;7个候选内参基因在尖裸鲤不同组织中的表达量存在差异。研究表明,7个内参基因中RPL13的表达较为稳定,可作为尖裸鲤实时荧光定量PCR分析的适宜内参基因,本研究结果可为尖裸鲤遗传学及分子生物学等研究提供基础数据。 展开更多
关键词 尖裸鲤 实时定量PCR 内参基因
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食管鳞癌PBMC中lncRNA-SNHG20的表达及临床意义
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作者 温立鸿 马军 岳保红 《河南预防医学杂志》 2019年第7期498-501,共4页
目的探究长链非编码RNASNHG20在食管鳞状细胞癌患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义。方法择取2018年1月至2018年6月郑州大学第二附属医院收治的食管鳞状细胞癌患者40名作为研究组,另择取同期健康体检者30名作为对照组,采用实时定量... 目的探究长链非编码RNASNHG20在食管鳞状细胞癌患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义。方法择取2018年1月至2018年6月郑州大学第二附属医院收治的食管鳞状细胞癌患者40名作为研究组,另择取同期健康体检者30名作为对照组,采用实时定量PCR检测两组患者外周血单个核细胞中SNHG20的相对表达量,比较两组结果差异,分析其在食管鳞癌中的临床意义。结果研究组外周血单个核细胞中SNHG20表达量检测结果低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),且与食管癌肿瘤分化程度、淋巴结浸润、是否远端转移和TNM分期密切相关。结论食管鳞状细胞癌患者外周血单个核细胞中SNHG20表达变化与其病情之间存在紧密联系,可作为一个潜在的无创性分子指标。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 外周血单个核细胞 SNHG20 实时定量PCR
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