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利用酵母双杂交系统筛选与黄瓜花叶病毒外壳蛋白互作的寄主蛋白
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作者 宁小清 张璐 +3 位作者 潘瑞兰 曾泉 陈保善 蒙姣荣 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期3123-3131,共9页
利用酵母双杂交系统,以黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的外壳蛋白(coat protein,CP)为诱饵,从番茄叶片c DNA文库中筛选与其互作的蛋白。结果显示,诱饵载体pBT3-SUC-CMV-CP均能在酵母细胞中正确表达,无自激活活性而且对酵母无... 利用酵母双杂交系统,以黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的外壳蛋白(coat protein,CP)为诱饵,从番茄叶片c DNA文库中筛选与其互作的蛋白。结果显示,诱饵载体pBT3-SUC-CMV-CP均能在酵母细胞中正确表达,无自激活活性而且对酵母无毒性;通过对酵母双杂交文库的筛选和回转验证,共获得了98个阳性克隆,分别编码67个可能与CMV-CP相互作用的蛋白,分别参与植物防御反应、光合作用、物质转运、信号转导、能量代谢、氨基酸代谢、细胞壁的形态建成、植物的激素代谢等。本研究结果表明,CMV CP可同时调控寄主的多个代谢过程,在CMV的致病过程中有多重功能。 展开更多
关键词 黄瓜花叶病毒 外壳蛋白 番茄 酵母双杂交系统 互作蛋白
马铃薯Y病毒属病毒外壳蛋白功能 预览
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作者 苗艳梅 赵敏 《黑龙江农业科学》 2019年第3期165-168,共4页
Potyvirus属于马铃薯Y病毒科(Potyviridae),是最大的植物病毒属,给农业生产造成严重的经济损失。外壳蛋白(CoatProtein简称CP)是Potyvirus属病毒中相对较稳定、功能较复杂的编码蛋白,涉及到病毒传播、运动、抗性及症状表达。本文详细分... Potyvirus属于马铃薯Y病毒科(Potyviridae),是最大的植物病毒属,给农业生产造成严重的经济损失。外壳蛋白(CoatProtein简称CP)是Potyvirus属病毒中相对较稳定、功能较复杂的编码蛋白,涉及到病毒传播、运动、抗性及症状表达。本文详细分析了外壳蛋白的功能,包括参与病毒的蚜传、参与病毒的长距离运动和胞间运动、参与植物病毒病防治和参与病毒症状表达。对病毒蛋白功能的研究为该属病毒的研究发展提供重要的理论基础,对Potyvirus侵染机制及抗病机理研究具有指导价值。 展开更多
关键词 马铃薯Y病毒属病毒 外壳蛋白 蛋白功能
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侵染红肉火龙果的蟹爪兰X病毒贵州分离物基因组分析
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作者 郑乾明 王小柯 +1 位作者 王壮 马玉华 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期219-225,共7页
通过高通量测序和RT-PCR扩增,克隆并分析蟹爪兰X病毒(Zygocactus virus X,ZyVX)贵州分离物ZyVX-GZ基因组序列。对表现病毒病症状的红肉火龙果植株进行高通量测序,获得4条ZyVX相关contig。RT-PCR扩增并拼接获得ZyVX-GZ基因组,全长为6 567... 通过高通量测序和RT-PCR扩增,克隆并分析蟹爪兰X病毒(Zygocactus virus X,ZyVX)贵州分离物ZyVX-GZ基因组序列。对表现病毒病症状的红肉火龙果植株进行高通量测序,获得4条ZyVX相关contig。RT-PCR扩增并拼接获得ZyVX-GZ基因组,全长为6 567 nt,5’-UTR和3’-UTR分别为60nt和70nt。含有5个ORF,分别编码复制酶蛋白、TGB1、TGB2、TGB3蛋白和外壳蛋白。ZyVX-GZ与P39和B1分离物基因组序列一致性均为91%。TGB1-3、外壳蛋白基因与大多数分离物核苷酸和推导的氨基酸序列一致性分别为95%~99%和96%~100%;复制酶基因的核苷酸和推导的氨基酸序列一致性分别为80%~89%和92%~97%。系统进化分析表明,ZyVX群体的遗传分化与寄主种类、地理分布不存在相关性。本研究结果丰富了ZyVX群体的基因组序列信息,为ZyVX的监测和防控提供了基础。 展开更多
关键词 复制酶 外壳蛋白 核苷酸 序列一致性
四川省猕猴桃病毒A外壳蛋白基因的序列分析、原核表达及抗血清制备 预览
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作者 吕蕊 彭期定 +3 位作者 杨婷 林宏辉 董家红 席德慧 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1121-1129,共9页
【目的】研究猕猴桃病毒A(Actinidia virus A,AcVA)的发生及其多样性,为我国猕猴桃产业中AcVA病毒的快速检测、科学防控以及猕猴桃品种选育提供科学依据。【方法】通过巢式PCR从四川省猕猴桃感病叶片中扩增AcVA CP基因序列,进行序列分... 【目的】研究猕猴桃病毒A(Actinidia virus A,AcVA)的发生及其多样性,为我国猕猴桃产业中AcVA病毒的快速检测、科学防控以及猕猴桃品种选育提供科学依据。【方法】通过巢式PCR从四川省猕猴桃感病叶片中扩增AcVA CP基因序列,进行序列分析和同源性比对;构建AcVA CP基因的原核表达载体,诱导目的蛋白表达后制备抗血清,用Western blot检测效价。【结果】克隆到3个AcVA四川分离株的完整CP基因序列,成功构建了pET28a-AcVA-DJY4-CP重组质粒,原核表达目的蛋白并制备出特异性抗血清,效价达到1∶5 000。【结论】首次获得了3个AcVA四川分离株,丰富了AcVA的序列多样性,并探索了原核表达的最佳条件,制备了高效价抗血清,为今后AcVA病毒的快速检测和防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 猕猴桃病毒A 外壳蛋白 序列分析 原核表达 抗血清制备
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百合斑驳病毒云南分离物全基因组序列分析及CP结构预测
5
作者 李月月 孙健 +2 位作者 谭冠林 马琨玲 李凡 《植物病理学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期187-194,共8页
对云南嵩明百合上发生的百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMo V)进行全基因组序列测定及分析,并对LMo V嵩明分离物(LMo V-SMi1、LMo V-SMi2)和玉溪分离物(LMo V-YXi1、LMo V-YXi2)外壳蛋白(coat protein,CP)基因进行序列比较,... 对云南嵩明百合上发生的百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMo V)进行全基因组序列测定及分析,并对LMo V嵩明分离物(LMo V-SMi1、LMo V-SMi2)和玉溪分离物(LMo V-YXi1、LMo V-YXi2)外壳蛋白(coat protein,CP)基因进行序列比较,发现云南的LMo V分为2个类群,玉溪分离物属于种群I,嵩明分离物属于种群II。2个类群间的核苷酸和氨基酸同源性分别为86.7%~89.5%、90.1%~92.7%,玉溪分离物和嵩明分离物相比,cp基因发生了3个核苷酸的缺失。对国内外LMo V所有分离物的cp基因氨基酸序列进行系统进化分析,结果表明所有LMo V分离物可划分为2个种群,种群I分离物较种群II分离物几乎均存在1个苏氨酸缺失的差异。此外,对LMo V-SMi2的CP相关特性和空间结构进行了初步预测,认为该蛋白为球状,具有较强的表面可能性,不存在跨膜区域,大多数区域能够形成主要的抗原决定簇,主要集中在aa12-22、aa31-42、aa83-99、aa179-191、aa215-223、aa249-259区段,可作为制备抗血清选择抗原的参考。LM o V-SM i2和LM o V-YXi1在二级结构和三级结构上存在一定的差异,但总体空间结构差异不大。 展开更多
关键词 百合斑驳病毒 基因组 外壳蛋白 特性 结构预测
农药潜在靶标黄瓜花叶病毒外壳蛋白结构的研究进展
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作者 康锦欣 陈凯 +2 位作者 高迪 王冬梅 李向阳 《农药》 CSCD 北大核心 2018年第6期391-394,共4页
抗黄瓜花叶病毒药剂的作用机制研究对田间蔬菜病毒病的靶向用药和农药减量具有重要的应用价值,而选择合适药剂靶标是作用机制研究的基础。以黄瓜花叶病毒外壳蛋白(CMV CP)为农药潜在靶标进行总结。从结构生物学的角度,详细介绍了CMV C... 抗黄瓜花叶病毒药剂的作用机制研究对田间蔬菜病毒病的靶向用药和农药减量具有重要的应用价值,而选择合适药剂靶标是作用机制研究的基础。以黄瓜花叶病毒外壳蛋白(CMV CP)为农药潜在靶标进行总结。从结构生物学的角度,详细介绍了CMV CP在冷冻电镜及单晶衍射技术下的三维结构;比较了国内外已报道的CMV CP的基因序列,结果表明核心区序列的保守性很强。以盐酸吗啉胍药剂为例,确定了其可能作用于CMV CP的作用机制,并且预测了药物小分子在CMV CP分子中可能的作用位点。从黄瓜花叶病毒外壳蛋白结构的角度对已有的报道进行了总结,为发现新型抗CMV药剂提供了基础。 展开更多
关键词 黄瓜花叶病毒 外壳蛋白 晶体结构 抗病毒药剂 研究进展
黄瓜绿斑驳花叶病毒CP基因克隆及亚细胞定位 预览 被引量:1
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作者 范小燕 杨柳 +6 位作者 季英华 任春梅 缪倩 韩玉春 章松柏 程兆榜 鲁红学 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期281-287,共7页
黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是瓜类作物上一种重要的病毒,近年来在中国多地陆续报道其危害,给西瓜、黄瓜等作物生产造成了惨重的损失。本研究选择2012年采自江苏洪泽的CGMMV西瓜分离物为研究对象,经... 黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是瓜类作物上一种重要的病毒,近年来在中国多地陆续报道其危害,给西瓜、黄瓜等作物生产造成了惨重的损失。本研究选择2012年采自江苏洪泽的CGMMV西瓜分离物为研究对象,经克隆和序列测定显示其CP基因全长486bp,编码一个17500的蛋白质。为进一步研究其亚细胞定位特征,本研究构建了带有YFP荧光标签的重组表达载体CP-YFP,转化农杆菌后浸润接种本氏烟(Mcoiiana benthamiana),激光共聚焦显微镜观察结果显示浸润处理后本氏烟叶片表皮细胞的细胞质及细胞核都有较强的绿色荧光信号,Western blot结果显示带荧光标签的CP在本氏烟叶片中表达正常。这些结果说明CGMMV编码的CP蛋白在细胞质和细胞核均有分布,为进一步研究其功能奠定基础。 展开更多
关键词 黄瓜绿斑驳花叶病毒 外壳蛋白 亚细胞定位
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宁夏地区马铃薯X病毒分离及其CP基因克隆
8
作者 陈虞超 聂峰杰 +4 位作者 张丽 巩檑 甘晓燕 石磊 宋玉霞 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2018年第4期1066-1072,共7页
马铃薯X病毒(potato virus X,PVX)对马铃薯生产影响较大,不同区域内PVX存在多样性和株系差异。本研究通过指示植物法和分子生物学鉴定法,从宁夏隆德县区域内的感病马铃薯上分离到一株马铃薯X病毒(PVX-NX1)。利用RT—PCR技术,克... 马铃薯X病毒(potato virus X,PVX)对马铃薯生产影响较大,不同区域内PVX存在多样性和株系差异。本研究通过指示植物法和分子生物学鉴定法,从宁夏隆德县区域内的感病马铃薯上分离到一株马铃薯X病毒(PVX-NX1)。利用RT—PCR技术,克隆该病毒的外壳蛋白(CP)基因,序列分析结果表明,cP基因全长714bp,编码237个氨基酸残基,与已报道cP基因的核苷酸序列同源性为72.42%~97.34%,氨基酸序列同源性为91.53%~100%。其中,与荷兰分离物X3(属PVX的X3株系)、中国新疆的核苷酸序列同源性分别为96.36%、97.34%,氨基酸同源性均为100%。初步确定PVX-NX1属PVX的X3株系。 展开更多
关键词 马铃薯X病毒 分离 外壳蛋白 基因克隆 序列分析
草莓镶脉病毒外壳蛋白抗原表位预测、克隆、表达及鉴定
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作者 杨菊梅 马建忠 +1 位作者 潘博 李印武 《植物保护学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期439-446,共8页
为实现草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的简单和快速检测,应用生物信息学方法分析了SVBV外壳蛋白的线性抗原表位及其理化性质,以大肠杆菌的优势密码子对所预测的优势抗表原位进行设计并合成,同时进行了最佳异源表... 为实现草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的简单和快速检测,应用生物信息学方法分析了SVBV外壳蛋白的线性抗原表位及其理化性质,以大肠杆菌的优势密码子对所预测的优势抗表原位进行设计并合成,同时进行了最佳异源表达条件优化。结果表明,第218-238位的氨基酸残基序列为SVBV外壳蛋白的优势抗原表位,其编码片段为5-AE。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测结果表明,重组融合蛋白的分子量约为24.8 kD,与其理论分子量20.5 kD基本一致。异源表达优化的结果表明,当IPTG浓度为0.5 mmol/L、温度为40℃、诱导时间为4 h时,重组融合蛋白的表达量最高,为23.6 mg/L。Western blot结果表明重组融合蛋白能与His多克隆抗体起特异性反应。串联质谱结果表明,5-AE肽段氨基酸残基序列正确。 展开更多
关键词 草莓镶脉病毒 外壳蛋白 抗原表位 原核表达 质谱鉴定
西瓜花叶病毒抗血清制备及其应用
10
作者 冀树娴 王姝雯 +3 位作者 王健 李向东 朱天生 田延平 《植物病理学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期833-837,共5页
西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)是危害葫芦科作物的重要病毒。制备特异性强、效价高的抗血清对快速准确检测和鉴定WMV具有重要意义。本研究将WMV外壳蛋白(Coatprotein,CP)基因克隆到原核表达载体pE-HISTEV获得pEHISTEV-WMV... 西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)是危害葫芦科作物的重要病毒。制备特异性强、效价高的抗血清对快速准确检测和鉴定WMV具有重要意义。本研究将WMV外壳蛋白(Coatprotein,CP)基因克隆到原核表达载体pE-HISTEV获得pEHISTEV-WMV-CP。将pEHISTEV-WMV-CP转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导,成功表达出分子量约为36kDa的蛋白,与预期WMVCP大小一致。切胶回收WMVCP,与等体积弗氏不完全佐剂充分乳化后免疫健康新西兰大白兔。Westernblotting结果表明,制备的抗血清与WMVCP有反应,与同属的番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)、小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)和烟草花叶病毒属的黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaicvirus,CGMMV)均无反应。酶联免疫吸附测定(PTA-ELISA)结果表明,本研究制备的WMV抗血清效价为1:8192,并且能够检测稀释512倍的病毒汁液。利用该抗血清对田间采集的10个RT-PCR检测为阳性的样品进行检测,全部呈现阳性。本研究利用大肠杆菌表达的CP制备的WMV抗血清具有较高的特异性和灵敏度。研究结果为WMV的快速检测和鉴定奠定了基础。 展开更多
关键词 抗血清 外壳蛋白 原核表达 西瓜花叶病毒
李属坏死环斑病毒辽宁桃树分离物基因组分析
11
作者 李正男 张双纳 +4 位作者 张尊平 范旭东 任芳 胡国君 董雅凤 《园艺学报》 CSCD 北大核心 2017年第12期2275-2284,共10页
采用RT-PCR和RACE技术,克隆了李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)辽宁桃树分离物全长基因组。用Vector NTI Advance 11软件进行基因组结构注释。用SDTv.1.0软件分析该分离物与Gen Bank中公布的其他PNRSV分离物... 采用RT-PCR和RACE技术,克隆了李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)辽宁桃树分离物全长基因组。用Vector NTI Advance 11软件进行基因组结构注释。用SDTv.1.0软件分析该分离物与Gen Bank中公布的其他PNRSV分离物间的核酸一致性,并用MEGA5.0软件和RDP3软件对各PNRSV分离物进行系统发育分析和重组分析。结果显示:PNRSV辽宁桃树分离物基因组由3条正义单链RNA组成。RNA1由3 332个核苷酸构成,具有一个开放阅读框(nt 30~3 167),编码一个约117.0k D的复制酶相关蛋白P1。RNA2由2 591个核苷酸构成,具有一个开放阅读框(nt 27~2 426),编码一个约99.0 k D的复制酶相关蛋白P2。RNA3由1 943个核苷酸构成,具有两个互不重叠的开放阅读框分别编码一个运动蛋白(nt 175~1 026)和一个外壳蛋白(nt 1 100~1 774),这两个开放阅读框的间隔区为73个核苷酸。PNRSV辽宁桃树分离物的RNA1、RNA2和RNA3与其他已经公布的PNRSV分离物间,核酸序列一致性分别为91.8%~98.8%,93.3%~99.2%和87.7%~99.0%。基于RNA1、RNA2和RNA3全长序列构建的系统发育进化树,分别将已报道的PNRSV分离物划分为3个、2个和3个组,PNRSV辽宁桃树分离物分别属于RNA1Ⅰ组、RNA2Ⅰ组和PV96组。基于RNA1、RNA2和RNA3全长序列进行的重组分析表明各PNRSV分离物基因组间不存在重组。PNRSV辽宁桃树分离物基因组序列是世界首个来源于桃树的PV96组基因组序列。 展开更多
关键词 李属坏死环斑病毒 基因组 复制酶相关蛋白 运动蛋白 外壳蛋白
新疆辣椒CMV基因组序列分析与CP基因多克隆抗体制备 预览
12
作者 周东 刘贞 +2 位作者 刘丽 许鹏程 郑银英 《生物技术通报》 CSCD 北大核心 2017年第8期88-94,共7页
克隆新疆辣椒LJ-10 CMV基因组片段,并进行序列分析,构建CMV CP基因的原核表达载体,并制备CP基因的多克隆抗体。利用RT-PCR技术,克隆新疆辣椒LJ-10 CMV的RNA1(3 357 nt)、RNA2(3 042 nt),RNA3(2 212 nt)全基因组片段,与Gen Bank上... 克隆新疆辣椒LJ-10 CMV基因组片段,并进行序列分析,构建CMV CP基因的原核表达载体,并制备CP基因的多克隆抗体。利用RT-PCR技术,克隆新疆辣椒LJ-10 CMV的RNA1(3 357 nt)、RNA2(3 042 nt),RNA3(2 212 nt)全基因组片段,与Gen Bank上登陆的CMV亚组IA、亚组IB、亚组Ⅱ分离物进行序列分析和系统进化树分析。将LJ-10 CMV CP基因克隆到原核表达载体p ET-22b中,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达纯化,以纯化的重组蛋白为抗原免疫兔子,制备CMV特异性抗血清,并进行间接ELISA和Western blotting分析。结果显示,成功克隆了新疆辣椒LJ-10 CMV的RNA1、RNA2、RNA3全基因组片段,序列分析及系统进化树分析表明,该分离物属于CMV亚组IB。成功构建了LJ-10 CMV CP基因的原核表达载体p ET-CMV-CP,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导获得了与预期大小一致的分子量约为27 k D的重组蛋白,制备了CMV的特异性抗血清。间接ELISA和Western blotting分析表明,制备的抗血清效价为1:500-1 000。新疆辣椒LJ-10 CMV分离物属于CMV亚组IB,成功构建了LJ-10 CMV CP基因的原核表达载体,制备了相应的多克隆抗体。 展开更多
关键词 黄瓜花叶病毒 序列分析 外壳蛋白 原核表达 蛋白质印迹检测
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辣椒轻斑驳病毒印基因的原核表达及抗血清制备
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作者 洪鲲 郑兴华 +3 位作者 李欲轲 龚记熠 乙引 万睛姣 《植物病理学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期598-604,共7页
辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle virus, PMMoV)属于烟草花叶病毒属,是辣椒的重要病毒种类之一。将PMMoV的外壳蛋白(cp)基因克隆至原核表达载体pET32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,重组PMMoV CP蛋白以可溶形式表... 辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle virus, PMMoV)属于烟草花叶病毒属,是辣椒的重要病毒种类之一。将PMMoV的外壳蛋白(cp)基因克隆至原核表达载体pET32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,重组PMMoV CP蛋白以可溶形式表达,纯化后获得分子量约35 kDa的融合CP蛋白。以该重组蛋白为抗原免疫新西兰兔制备了PMMoV CP特异性抗血清。Western blot检测结果表明该抗血清与重组CP蛋白发生强烈的免疫反应,间接酶联免疫吸附测定(ID-ELISA)结果显示该抗血清针对重组CP蛋白的效价达1∶25 600,针对PMMoV病汁液的效价达1∶4 000,检测灵敏度为1∶3 200,且该抗血清不与PMMoV同属或不同属的其它6种病毒汁液发生免疫反应,具有较好的特异性。利用该抗血清对42份田间辣椒病样进行检测,阳性率达38%,与进口商品化试剂盒检测结果一致,说明该抗血清可用于PMMoV的ELISA诊断。 展开更多
关键词 辣椒轻斑驳病毒 外壳蛋白 原核表达 抗血清
轮状病毒概况及其疫苗的研究进展
14
作者 解长睿 郭晓威 +5 位作者 张敏 孙丹 徐赫韩 李晓微 孙天旭 李海燕 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2017年第12期102-105,共4页
轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起婴幼儿腹泻的主要病原体之一,严重时引发致命性胃肠炎,甚至会因为脱水而导致死亡。世界上几乎每个孩子都至少感染过一次轮状病毒,且无特效药治疗,严重威胁人类健康,造成严重的经济损失。每次感染... 轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起婴幼儿腹泻的主要病原体之一,严重时引发致命性胃肠炎,甚至会因为脱水而导致死亡。世界上几乎每个孩子都至少感染过一次轮状病毒,且无特效药治疗,严重威胁人类健康,造成严重的经济损失。每次感染后都会增强免疫力,因此接种疫苗成为预防轮状病毒的最好手段。世界卫生组织已将轮状病毒疫苗纳入计划免疫程序。文章就轮状病毒结构和分类,轮状病毒疫苗的发展及其应用现状,新型疫苗的研究进展和轮状病毒外壳蛋白在不同体系下的表达情况予以综述。 展开更多
关键词 轮状病毒 结构 疫苗 外壳蛋白 研究进展
马铃薯X病毒外壳蛋白基因的原核表达及多克隆抗体的制备 预览
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作者 万晴姣 李欲柯 +2 位作者 姚东校 乙引 洪鲲 《江苏农业科学》 北大核心 2017年第23期27-30,共4页
采用RT-PCR技术从感染马铃薯X病毒贵州分离物PVX-GZ的普通烟叶片中扩增出该病毒的外壳蛋白基因CP。测序结果表明,该CP基因全长714 bp,编码237个氨基酸残基。构建原核表达载体pET32a(+)-CP,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在25 ... 采用RT-PCR技术从感染马铃薯X病毒贵州分离物PVX-GZ的普通烟叶片中扩增出该病毒的外壳蛋白基因CP。测序结果表明,该CP基因全长714 bp,编码237个氨基酸残基。构建原核表达载体pET32a(+)-CP,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在25 ℃条件下以0.6 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thivgalactopyranoside,简称IPTG)诱导表达重组蛋白基因;SDS-PAGE分析表明,重组蛋白分子量约为45 ku;以该重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备的抗体效价达1 ∶12 800;间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunsorbent assay,简称ELISA)检测显示,该多抗能与PVX病叶汁发生特异性免疫反应,而与其他5种同属或不同属病毒叶汁无血清学交叉反应。结果为病毒血清学检测试剂盒的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 马铃薯X病毒 外壳蛋白 原核表达 多克隆抗体 CP基因 RT-PCR技术 IPTG诱导表达 ELISA检测
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草莓轻型黄边病毒外壳蛋白抗原表位预测、克隆、表达及其免疫原性分析 预览 被引量:1
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作者 杨菊梅 马建忠 +4 位作者 王永刚 邓子兵 魏艳 潘博 李印武 《食品科学》 CSCD 北大核心 2017年第16期71-78,共8页
应用IEDB、DNAStar、DNAMAN和SnapGene等生物信息学工具对草莓轻型黄边病毒外壳蛋白的氨基酸残基序列进行分析。选择一段抗原性较强的肽段(位于外壳蛋白27~38氨基酸残基处),依据大肠杆菌(Escherichiacoli)的密码子偏好性化学合成... 应用IEDB、DNAStar、DNAMAN和SnapGene等生物信息学工具对草莓轻型黄边病毒外壳蛋白的氨基酸残基序列进行分析。选择一段抗原性较强的肽段(位于外壳蛋白27~38氨基酸残基处),依据大肠杆菌(Escherichiacoli)的密码子偏好性化学合成了该肽段的DNA编码序列(AE)。AE片段克隆至E.coli表达载体pET32a(+)的EcoRⅠ和XhoⅠ位点,获得重组质粒pET32a(+)-AE。含AE片段的开放阅读框长561bp,编码了一个187氨基酸残基的重组融合蛋白,理论分子质量为20.29kD。重组质粒pET32a(+)-AE分别在E.coliBL21(DE3)和E.coliRosetta中进行了诱导表达和条件优化。重组融合蛋白在E.coliRosetta中的最佳表达条件为1.5mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)、35℃诱导表达2h,产率为13.22mg/L;在E.coliBL21(DE3)中的最佳表达条件是为0.5mmol/LIPTG、30℃诱导表达2h,产率为9.55mg/L。重组融合蛋白经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、质谱鉴定表明,其含有所预测的草莓轻型黄边病毒外壳蛋白抗原表位肽段AE。AE重组融合蛋白经Ni2+亲和色谱纯化、EK酶切、分子筛除去融合蛋白标签后,免疫产蛋鸡。从免疫鸡所产鸡蛋中提取鸡卵黄免疫球蛋白(immunoglobulinofyolk,IgY),Dot-Blot检测抗体结合活性。结果表明,所提取的IgY可特异性识别AE肽段和SMYEV外壳蛋白。这一结果表明所预测的AE肽段具有较好的免疫原性。 展开更多
关键词 草莓轻型黄边病毒 外壳蛋白 抗原表位预测 原核表达 质谱鉴定 免疫原性
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长沙地区南瓜的小西葫芦黄花叶病毒检测及其分子进化分析 预览 被引量:1
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作者 刘嘉裕 戴良英 +4 位作者 刘勇 张德咏 谭新球 李迅 唐前君 《湖南农业大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2017年第3期274-281,共8页
对长沙地区160份南瓜疑似病毒病样品进行小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaicvirus,ZYMV)检测,检出率达46.9%。为进一步明确长沙地区ZYMV分离物的分类地位和分子进化特征,克隆获得了1个长沙地区ZYMV外壳蛋白基因,与GenB... 对长沙地区160份南瓜疑似病毒病样品进行小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaicvirus,ZYMV)检测,检出率达46.9%。为进一步明确长沙地区ZYMV分离物的分类地位和分子进化特征,克隆获得了1个长沙地区ZYMV外壳蛋白基因,与GenBank已报道的ZYMV外壳蛋白基因比对,并进行基因重组、系统发生、遗传差异、选择压力、种群结构和基因漂流分析。结果显示:长沙地区ZYMV外壳蛋白基因没有发生明显的重组,突变与负选择作用是其进化的主要驱动力,种群结构相对稳定,但正处于扩张的趋势中;ZYMV不同分离物外壳蛋白基因形成3个有明显地理相关性的美洲、欧洲和亚洲种群,美洲和欧洲种群与亚洲种群之间基因交流不频繁,可能受到遗传漂变的影响,而欧洲种群与亚洲种群之间基因交流较频繁。 展开更多
关键词 南瓜 小西葫芦黄花叶病毒 外壳蛋白 分子进化 长沙地区
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甘薯乔治亚曲叶病毒中国分离物外壳蛋白基因的分子变异及在大肠杆菌中的表达 预览
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作者 赵晓立 乔奇 +4 位作者 王永江 侯爱芹 许君 郑文明 张振臣 《江苏师范大学学报:自然科学版》 CAS 2017年第1期34-37,共4页
甘薯乔治亚曲叶病毒(Sweet potato leaf curl Georgia virus,SPLCGV)是侵染甘薯的重要病毒.本研究利用PCR方法克隆了11个SPLCGV中国分离物的外壳蛋白(CP)基因并进行了序列测定.序列分析结果表明,SPLCGV中国分离物cp基因全长均为765... 甘薯乔治亚曲叶病毒(Sweet potato leaf curl Georgia virus,SPLCGV)是侵染甘薯的重要病毒.本研究利用PCR方法克隆了11个SPLCGV中国分离物的外壳蛋白(CP)基因并进行了序列测定.序列分析结果表明,SPLCGV中国分离物cp基因全长均为765bp,编码254个氨基酸残基.SPLCGV中国分离物cp基因的核苷酸序列相似性为91.4%~100%,推测的氨基酸序列相似性为95.7%~100%,存在较大的分子变异.将SPLCGV四川分离物(Sichuan7:2012)cp基因的部分片段克隆至原核表达载体pET-28a(+)上,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达.SDS-PAGE分析表明,经IPTG诱导,产生了预期大小的蛋白条带,说明cp基因在大肠杆菌中得到了高效表达. 展开更多
关键词 甘薯乔治亚曲叶病毒 外壳蛋白 分子变异 原核表达
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天津地区番茄褪绿病毒的分子检测与基因组部分序列分析 预览 被引量:2
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作者 金凤媚 薛俊 +2 位作者 宋建 于海涛 段红英 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第2期23-27,共5页
为了确定天津番茄产区是否发生了番茄褪绿病毒病,了解该病毒天津分离物的主要基因是否发生变异,对该地区发生的To CV进行了分子检测,并对该病毒的外壳蛋白(CP)和热激蛋白70类似物(Hsp70h)的核苷酸和氨基酸进行了序列分析。结果表明... 为了确定天津番茄产区是否发生了番茄褪绿病毒病,了解该病毒天津分离物的主要基因是否发生变异,对该地区发生的To CV进行了分子检测,并对该病毒的外壳蛋白(CP)和热激蛋白70类似物(Hsp70h)的核苷酸和氨基酸进行了序列分析。结果表明,天津分离物CP蛋白的核苷酸和氨基酸序列与已报道的具有代表性的不同国家的分离物相似性均在97.3%以上。Hsp70h蛋白的核酸和氨基酸序列与已报道的具有代表性的不同国家的分离物相似性均在97.2%以上。表明CP和Hsp70h蛋白是2个最保守的蛋白。这是首次在分子水平上证明番茄褪绿病毒在天津地区为害。 展开更多
关键词 番茄褪绿病毒 分子检测 外壳蛋白 热激蛋白70类似物 基因序列分析
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水稻条纹病毒外壳蛋白自身互作的活性区段研究 预览
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作者 兰汉红 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2016年第9期957-961,共5页
水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)的外壳蛋白(coat protein,CP)参与病毒转录、复制等多个生物学过程。病毒蛋白之间的互作对病毒侵染活性非常重要,在明确RSV外壳蛋白CP能够自身互作的基础上,通过构建CP蛋白N端、M区段和C端(CP-... 水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)的外壳蛋白(coat protein,CP)参与病毒转录、复制等多个生物学过程。病毒蛋白之间的互作对病毒侵染活性非常重要,在明确RSV外壳蛋白CP能够自身互作的基础上,通过构建CP蛋白N端、M区段和C端(CP-N、CP-M和CP-C)的酵母表达载体,利用酵母双杂交系统确定外壳蛋白CP自身互作的活性区段。结果表明,N端和C端第1~81个氨基酸是参与水稻条纹病毒CP蛋白自身互作的活性区段。这一研究结果不仅有助于加深理解RSV CP蛋白在病毒基因组稳定、复制过程中的作用,也有助于加深了解RSV、寄主和传播介体之间关系。 展开更多
关键词 水稻条纹病毒 外壳蛋白 酵母双杂交 蛋白互作 活性区段
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