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Survivin shRNA-APC双基因共表达稳转株对人HT-29结肠癌细胞中PCNA、Ki-67表达的影响
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作者 袁喜先 张蒙蒙 +5 位作者 曲若梅 张玉健 孙元佳 陈月 张书娟 袁晓岚 《中国临床研究》 CAS 2019年第5期597-599,603共4页
目的探讨生存素短发夹RNA-腺瘤性结肠息肉病(SurvivinshRNA-APC)双基因共表达稳转株对HT-29结肠癌细胞裸鼠皮下移植瘤组织细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki-67表达的影响。方法将30只SPF级裸鼠随机分为5组,为SurvivinshRNA-APC双基因组、... 目的探讨生存素短发夹RNA-腺瘤性结肠息肉病(SurvivinshRNA-APC)双基因共表达稳转株对HT-29结肠癌细胞裸鼠皮下移植瘤组织细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki-67表达的影响。方法将30只SPF级裸鼠随机分为5组,为SurvivinshRNA-APC双基因组、SurvivinshRNA及APC单基因组、空载组和阴性对照组,对各组稳转株及HT-29结肠癌细胞分别进行培养,PBS重悬使癌细胞浓度达到2×10^6/ml,于每只裸鼠右前腋下分别接种相对应的细胞悬液,构建移植瘤模型,每6天测量移植瘤体积,待7周后统一处死所有裸鼠,剥离移植瘤,将瘤体组织用多聚甲醛固定,石蜡包埋切片,根据免疫组化检测人HT-29结肠癌细胞裸鼠皮下移植瘤组织细胞中PCNA、Ki-67表达。结果免疫组化结果显示,Ki-67蛋白及PCNA蛋白主要定位于移植瘤组织细胞的胞核内;在阴性对照组和空载组均可见较多棕黄色或棕褐色颗粒,双基因组细胞内可见极少量黄色或淡黄色细颗粒,APC组及SurvivinshRNA组染色程度介于二者之间。APC组、SurvivinshRNA组、双基因组PCNA、Ki-67蛋白表达积分分别低于阴性对照组及空载组(P<0.01);双基因组PCNA、Ki-67蛋白表达积分分别低于APC组、SurvivinshRNA组(P<0.01);阴性对照组与空载组比较、APC组与SurvivinshRNA组比较,PCNA、Ki-67蛋白表达积分差异无统计学意义(P>0.05)。结论SurvivinshRNA-APC双基因共表达稳转株可通过下调HT-29结肠癌细胞裸鼠皮下移植瘤组织细胞中PCNA、Ki-67的表达,抑制移植瘤细胞增殖,其效果较单基因稳转株更为显著。 展开更多
关键词 结肠癌 增殖 增殖细胞核抗原 Ki-67 生存素 生存素短发夹RNA 腺瘤性结肠息肉病
依维莫司增强阿霉素抑制骨肉瘤干细胞的作用 预览
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作者 张斌 杨微 +4 位作者 贺宝霞 杜娟 于卫江 林晓贞 田锋奇 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第5期663-667,共5页
背景:阿霉素能够抑制骨肉瘤细胞的增殖,但是阿霉素对骨肉瘤干细胞的作用以及依维莫司联合阿霉素对骨肉瘤干细胞的作用未见报道。目的:研究mTOR通路抑制剂依维莫司联合骨肉瘤化疗一线药物阿霉素对骨肉瘤干细胞增殖及侵袭的影响。方法:用... 背景:阿霉素能够抑制骨肉瘤细胞的增殖,但是阿霉素对骨肉瘤干细胞的作用以及依维莫司联合阿霉素对骨肉瘤干细胞的作用未见报道。目的:研究mTOR通路抑制剂依维莫司联合骨肉瘤化疗一线药物阿霉素对骨肉瘤干细胞增殖及侵袭的影响。方法:用免疫磁珠分选法分离人骨肉瘤细胞株MG63中的CD133+骨肉瘤干细胞。MTT检测0,0.1,0.2,0.4mg/L阿霉素以及0.2mg/L阿霉素+20μmol/L依维莫司对骨肉瘤干细胞增殖的影响。Transwell小室检测0.2mg/L阿霉素和0.2mg/L阿霉素+20μmol/L依维莫司对骨肉瘤干细胞侵袭的影响。WesternBlot检测0.2mg/L阿霉素和0.2mg/L阿霉素+20μmol/L依维莫司对骨肉瘤干细胞增殖细胞核抗原、基质金属蛋白酶蛋白表达的影响。结果与结论:①阿霉素能在一定质量浓度下抑制骨肉瘤干细胞的增殖,且依维莫司联合阿霉素较单独使用阿霉素时明显抑制骨肉瘤干细胞的增殖,说明依维莫司能够增强阿霉素对骨肉瘤干细胞增殖的抑制作用;②与单独使用阿霉素比较,依维莫司联合阿霉素作用于骨肉瘤干细胞后侵袭细胞数明显减少;③依维莫司联合阿霉素显著抑制骨肉瘤干细胞增殖细胞核抗原、基质金属蛋白酶蛋白的表达,提示依维莫司能够增强阿霉素抑制骨肉瘤干细胞增殖与侵袭的能力。 展开更多
关键词 依维莫司 阿霉素 MG63 骨肉瘤干细胞 增殖 侵袭 增殖细胞核抗原 基质金属蛋白酶9 干细胞 骨肉瘤 TOR丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶 表柔比星 组织工程
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干扰miR-21调控人前列腺癌细胞株PC-3增殖、迁移及侵袭的实验研究 预览
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作者 廖高源 骆华 +1 位作者 刘琛 王小波 《临床和实验医学杂志》 2019年第13期1379-1383,共5页
目的观察干扰微小RNA-21(miR-21)对人前列腺癌细胞株PC-3增殖、迁移及侵袭的影响,并初步探讨其调控机制。方法收集对数期生长PC-3细胞株及人前列腺正常上皮细胞株RWPE-1,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测并对比其miR-21基因... 目的观察干扰微小RNA-21(miR-21)对人前列腺癌细胞株PC-3增殖、迁移及侵袭的影响,并初步探讨其调控机制。方法收集对数期生长PC-3细胞株及人前列腺正常上皮细胞株RWPE-1,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测并对比其miR-21基因表达情况。取对数期生长PC-3细胞株,采用脂质体转染法将miR-21抑制剂(inhibitor)及NC inhibitor质粒转染至PC-3细胞,分别设为干扰组和空载组,另取不做处理PC-3细胞为空白组。采用倒置荧光显微镜检测转染效率;采用MTT法检测并对比各组不同时刻吸光度(OD值);采用划痕试验及Transwell试验检测并对比三组穿膜细胞数及迁移率;采用RT-PCR法检测并对比三组miR-21、基质金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因表达水平;采用蛋白免疫印迹法检测并对比三组TIMP3、MMP-9蛋白表达水平。结果 PC-3细胞miR-21相对表达量显著低于RWPE-1细胞( P <0.05);倒置显微镜下检测转染24 h后干扰组和空载组转染效率分别为(82.16±8.20)%、(80.23±8.69)%;干扰组MTT实验不同时刻OD值均显著低于空白组和空载组( P <0.05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义( P >0.05),三组MTT实验OD值均随时间延长呈显著升高趋势( P <0.05);干扰组12 h、24 h迁移率均显著低于空白组和空载组( P <0.05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义( P >0.05),三组24 h迁移率显著高于12 h( P <0.05);干扰组穿膜细胞数显著少于空白组和空载组( P <0.05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义( P >0.05);干扰组miR-21相对表达量、MMP-9 mRNA和蛋白相对表达量显著低于空白组和空载组( P <0.05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义( P >0.05);干扰组TIMP3 mRNA和蛋白相对表达量显著高于空白组和空载组( P <0.05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义( P >0.05)。结论前列腺癌细胞miR-21异常高表达,干扰m 展开更多
关键词 前列腺癌 微小RNA-21 增殖 迁移 侵袭
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微小RNA-664a-3p在乳腺癌组织的表达及对乳腺癌细胞生物学行为的影响 预览
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作者 张沛 岳青芬 +1 位作者 侯青霞 韩听锋 《医学研究杂志》 2019年第5期165-169,共5页
目的观察微小RNA-664a-3p(miR-664a-3p)在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法提取16例乳腺癌手术标本及其癌旁组织中总RNA,使用荧光实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-664a-3p在乳腺癌及其癌旁组织中的表达量,... 目的观察微小RNA-664a-3p(miR-664a-3p)在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法提取16例乳腺癌手术标本及其癌旁组织中总RNA,使用荧光实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-664a-3p在乳腺癌及其癌旁组织中的表达量,并检测miR-664a-3p在4种乳腺癌细胞株(T47D、MDA-MB-231、BT-549、MCF-7)及正常乳腺上皮细胞MCF-10A中的表达。选取miR-664a-3p表达水平最低的乳腺癌细胞瞬时转染miR-664a-3p模拟物(实验组)或miR-NC(对照组)。qPCR检测转染后细胞中miR-664a-3p的表达。生物信息学软件预测miR-664a-3p的靶基因。使用荧光素酶报告基因实验检测miR-664a-3p对靶基因肿瘤内皮标志物8(TEM8)的靶向作用。qPCR和Western blot法检测TEM8及下游基因的表达。流式细胞术检测细胞周期,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果乳腺癌组织中miR-664a-3p的表达量显著低于癌旁组织(P<0.01)。乳腺癌细胞株中miR-664a-3p的表达量显著低于正常乳腺上皮细胞(P<0.05),其中T47D细胞的表达量最低(P<0.05)。实验组和对照组T47D细胞中miR-664a-3p的表达量分别为24.87±2.17和1.02±0.10(P<0.01)。miR-664a-3p可与TEM8-3'-非编码区(UTR)特异性结合(P<0.01)。与对照组比较,实验组中TEM8 mRNA及蛋白表达下调(P<0.05)。转染miR-664a-3p能够显著抑制T47D细胞周期的进展(P<0.05),降低细胞的增殖能力(P<0.01),抑制细胞的侵袭能力(P<0.01)。结论miR-664a-3p在乳腺癌组织和细胞株表达下调,过表达miR-664a-3p能够通过靶向抑制TEM8基因的表达,抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力。 展开更多
关键词 微小RNA-664a-3p 乳腺癌 肿瘤内皮标志物8 增殖 侵袭
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RNA聚合酶Ⅰ抑制剂通过NF-κb调控鼻咽癌细胞系CNE-1的增殖、侵袭与凋亡 预览
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作者 桂超 邓万凯 刘细国 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2019年第4期294-300,共7页
目的探讨RNA聚合酶Ⅰ抑制剂CX-5461对人鼻咽癌细胞CNE-1增殖、侵袭与凋亡的作用机制。方法免疫组织化学染色检测鼻咽癌与癌旁组织NF-κb的表达。Western blot检测相关效应蛋白在蛋白质水平的表达。CCK-8法检测不同浓度药物处理后CNE-1... 目的探讨RNA聚合酶Ⅰ抑制剂CX-5461对人鼻咽癌细胞CNE-1增殖、侵袭与凋亡的作用机制。方法免疫组织化学染色检测鼻咽癌与癌旁组织NF-κb的表达。Western blot检测相关效应蛋白在蛋白质水平的表达。CCK-8法检测不同浓度药物处理后CNE-1细胞系的增殖情况。Transwell法比较药物处理后CNE-1细胞系的侵袭能力变化。流式细胞术检测不同浓度药物处理后鼻咽癌细胞系CNE-1细胞周期和凋亡的变化。结果鼻咽癌组织中磷酸化NF-κb表达较癌旁组织明显增高(P<0.01)。NF-κb总蛋白在蛋白水平无明显变化,但磷酸化水平在药物处理后明显降低(P<0.01)。Bax较对照组明显增高(P<0.01),Bcl-2较对照组明显降低(P<0.01)。药物处理后,发现CNE-1细胞系的增殖、侵袭能力较对照组明显降低且差异具有统计学意义(均P<0.01);细胞凋亡较对照组明显增多(P<0.01),药物处理组较对照组细胞周期明显阻滞在G2期(P<0.01)。结论 RNA聚合酶Ⅰ抑制剂CX-5461能够通过调控NF-κb磷酸化促进鼻咽癌CNE-1细胞系凋亡及周期阻滞,抑制其增殖与侵袭能力。 展开更多
关键词 RNA聚合酶Ⅰ抑制剂 NF-ΚB 鼻咽癌 凋亡 增殖
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下调SRSF7基因对裸鼠移植瘤生长的影响 预览
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作者 闫丽红 杨利军 杨涛 《中国医药指南》 2019年第15期1-2,6共3页
目的通过RNA干扰技术,研究丝氨酸/富含精氨酸的剪接因子(SRSF7)基因对结直肠癌裸鼠移植瘤模型肿瘤生长的影响。方法构建沉默SRSF7基因慢病毒颗粒,感染HCT116结直肠癌细胞,筛选稳定敲低SRSF7的细胞克隆。将处于对数生长期的细胞接种于BAL... 目的通过RNA干扰技术,研究丝氨酸/富含精氨酸的剪接因子(SRSF7)基因对结直肠癌裸鼠移植瘤模型肿瘤生长的影响。方法构建沉默SRSF7基因慢病毒颗粒,感染HCT116结直肠癌细胞,筛选稳定敲低SRSF7的细胞克隆。将处于对数生长期的细胞接种于BALB/c裸鼠皮下,建立皮下移植瘤模型。观察肿瘤生长情况、绘制肿瘤生长曲线;Real-TimePCR检测移植瘤中SRSF7mRNA的表达水平,免疫组化检测Ki-67和cleaved Caspase-3在肿瘤组织的表达;t-test分析移植瘤体积的差别。结果成功构建了结直肠癌皮下移植瘤模型,在成瘤后3周内,实验组与对照组相比,肿瘤体积较小,差别有统计学意义(P<0.05);Real-TimePCR结果显示实验组肿瘤较对照组SRSF7表达减少(P<0.05);Ki-67、cleaved Caspase-3的免疫组化结果显示,与对照组相比,敲减SRSF7基因后,Ki-67表达减少66%、cleaved Caspase-3表达增加37%。结论在动物水平敲减SRSF7可以抑制结直肠癌的增殖。 展开更多
关键词 SRSF7 结直肠癌 裸鼠 增殖
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泛素结合酶UBE2T在结直肠癌中的表达及其生物学作用
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作者 潘烽平 徐言 +2 位作者 徐龙生 马兴杰 陈一鹏 《中华全科医学》 2019年第2期306-309,共4页
目的探索泛素结合酶UBE2T在结直肠癌的表达及其生物学作用。方法运用免疫组化法检测78对结直肠癌和对应癌旁正常组织中UBE2T的蛋白表达水平。脂质体转染法将UBE2T-siRNA及对照NC-siRNA转染结直肠癌细胞SW480后,采用细胞计数试剂盒(CCK-8... 目的探索泛素结合酶UBE2T在结直肠癌的表达及其生物学作用。方法运用免疫组化法检测78对结直肠癌和对应癌旁正常组织中UBE2T的蛋白表达水平。脂质体转染法将UBE2T-siRNA及对照NC-siRNA转染结直肠癌细胞SW480后,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)及平板克隆实验分析增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期情况;Western blotting检测细胞中UBE2T、cyclin D1、cyclin E等蛋白表达情况。结果与正常结直肠组织相比,结直肠癌组织中UBE2T表达水平增高(P<0.001)。癌组织中UBE2T异常高表达与不良病理指标相关:肿瘤大小(P=0.014)、组织分化程度(P=0.005)、浸润深度(P=0.033)和TNM分期(P=0.014)。CCK-8增殖实验和平板克隆形成实验都提示沉默UBE2T表达能显著抑制结直肠癌细胞的增殖。沉默UBE2T抑制周期蛋白cyclin D1和cyclin E的表达,促进结直肠癌细胞发生G1/S期细胞周期阻滞。结论 UBE2T在结直肠癌组织中异常高表达,并与不良病理指标相关。沉默UBE2T通过促进G1/S期细胞周期阻滞抑制结直肠癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 UBE2T 结直肠癌 增殖 细胞周期 CYCLIN D1 CYCLIN E
回转模拟失重对共培养体系中平滑肌细胞增殖及凋亡的影响 预览
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作者 高原 潘益凯 +6 位作者 李程飞 孟欣 石菲 赵疆东 杨长斌 孙喜庆 王永春 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第3期274-278,共5页
目的:探讨回转模拟失重对与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)共培养的人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)增殖及凋亡的影响。方法:建立HUVECs与HASMCs共培养模型,以细胞回转器模拟失重效应,分为正常重力组和模拟失重组;共培养48h时,观察HASMCs形态,采... 目的:探讨回转模拟失重对与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)共培养的人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)增殖及凋亡的影响。方法:建立HUVECs与HASMCs共培养模型,以细胞回转器模拟失重效应,分为正常重力组和模拟失重组;共培养48h时,观察HASMCs形态,采用Western blot检测2组HASMCs细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达,分析模拟失重对共培养的HASMCs细胞增殖及凋亡的影响。结果:共培养48h时,与正常重力组比较,模拟失重组HASMCs形态由长梭形变为多角形或不规则形;PCNA及Bax蛋白表达显著下降(P<0.05)、Bcl-2蛋白表达显著增高(P<0.05)。结论:模拟失重48h可抑制与HUVECs共培养的HASMCs增殖和凋亡。 展开更多
关键词 失重模拟 平滑肌细胞 共培养 增殖 凋亡
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沉默长链非编码PCAT-1对乳腺癌细胞阿霉素耐药性的影响
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作者 丁秋勤 李婉莹 +1 位作者 吴苑苑 高社干 《中国妇幼保健》 CAS 2019年第6期1369-1371,共3页
目的探究沉默长链非编码RNA (lncRNA) PCAT-1对乳腺癌细胞阿霉素(ADM)耐药性的影响。方法 qRTPCR实验检测PCAT-1的mRNA表达水平;通过小RNA干扰技术下调MCF7细胞中PCAT-1的表达,CCK-8和MTT实验检测MCF7、MCF7/ADM细胞增殖的活性;TUNEL实... 目的探究沉默长链非编码RNA (lncRNA) PCAT-1对乳腺癌细胞阿霉素(ADM)耐药性的影响。方法 qRTPCR实验检测PCAT-1的mRNA表达水平;通过小RNA干扰技术下调MCF7细胞中PCAT-1的表达,CCK-8和MTT实验检测MCF7、MCF7/ADM细胞增殖的活性;TUNEL实验检测MCF7/ADM细胞凋亡。结果 PCAT-1在乳腺癌组织和MCF7细胞中的mRNA表达水平明显高于癌旁组织和人乳腺上皮细胞MCF10A。PCAT-1在MCF7/ADM细胞的mRNA表达水平明显高于MCF7细胞。沉默PCAT-1可以促进ADM对MCF7、MCF7/ADM细胞增殖的抑制作用。沉默PCAT-1能够增强ADM诱导的MCF7/ADM细胞的凋亡。此外,沉默PCAT-1可以促进Bax的表达,抑制Bcl-2和PCNA的表达。结论沉默PCAT-1增强ADM对乳腺癌细胞的毒性作用。 展开更多
关键词 PCAT-1 阿霉素 乳腺癌细胞 增殖 凋亡
低氧微环境对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响 预览
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作者 时景仁 张文丽 +6 位作者 贺文艳 郭晶晶 潘美晨 徐新民 郭杰 曲沛 王雅杰 《标记免疫分析与临床》 CAS 2019年第5期822-825,共4页
目的观察低氧微环境对胶质瘤细胞增殖和侵袭能力的影响,并进一步探讨其可能机制。方法将胶质瘤细胞A172和U251分别置于普通细胞培养箱(常氧组:21%氧气含量)和低氧工作站(低氧组:2%氧气含量)中培养,采用CCK-8(Cell Counting Kit,CCK8)法... 目的观察低氧微环境对胶质瘤细胞增殖和侵袭能力的影响,并进一步探讨其可能机制。方法将胶质瘤细胞A172和U251分别置于普通细胞培养箱(常氧组:21%氧气含量)和低氧工作站(低氧组:2%氧气含量)中培养,采用CCK-8(Cell Counting Kit,CCK8)法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)和Sox2表达水平。结果低氧组胶质瘤细胞增殖和侵袭水平明显高于常氧组,且HIF-1α和Sox2表达水平也高于常氧组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论低氧微环境可能通过上调Sox2表达促进胶质瘤细胞A172和U251的增殖和侵袭。 展开更多
关键词 胶质瘤 低氧 SOX2 增殖 侵袭
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KLF4沉默与阿霉素诱导的DNA损伤协同抑制肝癌HepG2细胞的生长 预览
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作者 喻兆阳 李娟 +2 位作者 黎华 费东 薛慧颖 《华中师范大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期392-400,458共10页
探究KLF4沉默与经不同作用浓度阿霉素处理诱导的DNA损伤对肝癌HepG2细胞增殖凋亡的影响及其作用机制.应用RNA干扰技术,采用siRNA转染HepG2细胞以沉默KLF4基因.采用MTT法检测KI.F4沉默前后对HepG2细胞增殖的影响,使用流式细胞术检测KLF4... 探究KLF4沉默与经不同作用浓度阿霉素处理诱导的DNA损伤对肝癌HepG2细胞增殖凋亡的影响及其作用机制.应用RNA干扰技术,采用siRNA转染HepG2细胞以沉默KLF4基因.采用MTT法检测KI.F4沉默前后对HepG2细胞增殖的影响,使用流式细胞术检测KLF4沉默前后对HepG2细胞周期变化影响,应用Western blot法检测转染前后HepG2细胞中KLF4蛋白及细胞周期相关蛋白表达变化.Western blot检测到高浓度的阿霉素促进KLF4的表达,并且低浓度的阿霉素可使得细胞停滞在Gz/M期,高浓度的阿霉素则使部分细胞凋亡(19.31%).将KLF4沉默后,发现细胞生长变缓,低浓度的阿霉素处理后,细胞随时间增加而出现更多的细胞凋亡;高浓度的阿霉素处理后,细胞数明显减少,更多的细胞发生凋亡(2& 89%),且在KLF4沉默前后均发现低浓度阿霉素促进p53与p21表达,高浓度阿霉素抑制其表达.阿霉素诱导的DNA损伤可提高KLF4的表达,KLF4依赖于DNA损伤激活的p53促进p21的表达,进而引起G〃S期细胞周期阻滞.沉默KLF4与阿霉素诱导的DNA损伤可协同抑制肝癌细胞的增殖、促进凋亡,其在肝癌细胞HepG2中扮演十分重要的角色. 展开更多
关键词 肝细胞癌 KLF4 阿霉素 RNA干扰 DNA损伤 凋亡 增殖
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AR-A014418对γδT细胞增殖、凋亡及杀伤功能的影响 预览
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作者 郑璐 孙蕾清 +6 位作者 陈复兴 周燏 吕小婷 陈玲 李莹 周忠海 陈永强 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期20-24,共5页
目的:观察糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)选择性抑制剂AR-A014418对体外扩增的γδT细胞的细胞活性包括增殖、凋亡和杀伤功能的影响。方法:采用人淋巴细胞分离液分离健康人外周血中单个核细胞,在γδT细胞完全培养基中培养获得γδT细胞。... 目的:观察糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)选择性抑制剂AR-A014418对体外扩增的γδT细胞的细胞活性包括增殖、凋亡和杀伤功能的影响。方法:采用人淋巴细胞分离液分离健康人外周血中单个核细胞,在γδT细胞完全培养基中培养获得γδT细胞。用不同浓度的AR-A014418诱导培养γδT细胞72 h后,用流式细胞术检测各诱导处理组γδT细胞的增殖、凋亡和杀伤能力;用Western blot检测γδT细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3表达情况。结果:AR-A014418浓度在0.3~10μmol/L时能促进γδT细胞的增殖并抑制其凋亡。同时促凋亡蛋白Cleaved caspase-3和Bax表达逐渐减弱,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达逐渐增强。尤其是在3μmol/L时,γδT细胞增殖活性最强,而且体外杀伤人肝癌HepG2细胞和人胃癌SGC-7901细胞活性也显著提高。结论:GSK-3β抑制剂AR-A014418在3μmol/L浓度时,可以抑制体外扩增γδT细胞的凋亡,并能增强其体外增殖和杀伤肿瘤活性,提示AR-A014418具有一定的免疫调节功能,为今后用于体外扩增γδT细胞提供实验依据。 展开更多
关键词 AR-A014418 ΓΔT细胞 增殖 凋亡 杀伤功能
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淫羊藿苷对结肠癌增殖、侵袭抑制作用及机制研究 预览
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作者 张蕾 乔大伟 +2 位作者 董小耘 孔桂美 卜平 《扬州大学学报:农业与生命科学版》 CAS 北大核心 2019年第3期81-85,共5页
淫羊藿苷(Ica)梯度处理人结肠癌细胞HT29,采用MTT法、流式细胞术、Transwell小室检测Ica对HT29细胞增殖、周期、凋亡、侵袭和迁移的影响;蛋白组织学技术寻找Ica作用前后的差异蛋白,Western blot对部分蛋白进行验证。结果表明:Ica能够抑... 淫羊藿苷(Ica)梯度处理人结肠癌细胞HT29,采用MTT法、流式细胞术、Transwell小室检测Ica对HT29细胞增殖、周期、凋亡、侵袭和迁移的影响;蛋白组织学技术寻找Ica作用前后的差异蛋白,Western blot对部分蛋白进行验证。结果表明:Ica能够抑制HT29增殖;阻滞细胞由G0/G1期向S期的发展;诱导HT29细胞凋亡;抑制细胞侵袭和迁移;Ica干预24h后,乙醛脱氢酶2(ALDH2)和钙离子依赖性磷脂结合蛋白1(CPNE1)上调,Western blot验证结果一致。这一研究提示Ica可显著抑制HT29细胞的增殖、侵袭和迁移,诱导细胞凋亡,其机制可能与上调ALDH2和CPNE1有关。 展开更多
关键词 淫羊藿苷 结肠癌 增殖 侵袭 迁移 乙醛脱氢酶2 钙离子依赖性磷脂结合蛋白1
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二甲双胍改善长期体外培养骨髓间充干细胞的增殖和分化功能 预览
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作者 章淑艳 倪德胜 王维戚 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期345-350,共6页
目的:观察二甲双胍(metfomin, Met)能否改善体外长期培养小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)的增殖和成骨分化功能。方法:分离小鼠BMMSCs进行体外培养,选取P1代和P6代细胞,P6代细胞用Met处理,检测细胞增殖,克隆形成,ALP活性、矿化结节和成骨... 目的:观察二甲双胍(metfomin, Met)能否改善体外长期培养小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)的增殖和成骨分化功能。方法:分离小鼠BMMSCs进行体外培养,选取P1代和P6代细胞,P6代细胞用Met处理,检测细胞增殖,克隆形成,ALP活性、矿化结节和成骨基因mRNA表达水平。使用试剂盒检测细胞ROS水平,并检测抗氧化、干细胞属性(干性)及衰老相关基因的mRNA表达情况。结果:小鼠P6代BMMSCs的增殖和成骨分化功能明显低于P1代细胞,Met可以显著提高P6代细胞的增殖和成骨分化能力,并提高细胞的抗氧化功能和干性,降低衰老相关基因表达。结论:Met能够增强体外长期培养的小鼠BMMSCs的增殖和分化功能,这种作用可能是通过改善氧化应激和提高干性实现的。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞(BMMSCs) 长期培养 二甲双胍 增殖 成骨分化
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三七总皂苷对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭、凋亡及酶活性的影响 预览
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作者 刘静 张微 张谦 《北方药学》 2019年第7期127-129,共3页
目的:探讨三七总皂苷(PNS)对肝癌HepG2细胞增殖、迁移、酶活性及凋亡的影响。方法:应用不同浓度的PNS分别作用于HepG2细胞24、48、72h,采用MTT法测定细胞增殖率,Transwell实验检测肝癌细胞侵袭能力,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,全自动... 目的:探讨三七总皂苷(PNS)对肝癌HepG2细胞增殖、迁移、酶活性及凋亡的影响。方法:应用不同浓度的PNS分别作用于HepG2细胞24、48、72h,采用MTT法测定细胞增殖率,Transwell实验检测肝癌细胞侵袭能力,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,全自动生化分析仪检测肝癌细胞酶活性的改变。结果:PNS能抑制肝癌HepG2细胞的增殖和迁移,降低肝癌细胞酶活性,促进肝癌细胞的凋亡。 展开更多
关键词 三七总皂苷 肝癌 增殖 侵袭 凋亡 酶活性
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miR-486-3p通过调控血小板衍生生长因子相关蛋白1抑制卵巢癌细胞增殖的研究
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作者 孙冰纯 洪龙年 +2 位作者 廖靖 范可心 黄金智 《中国计划生育和妇产科》 2019年第7期77-81,共5页
目的探讨miR-486-3p和血小板衍生生长因子相关蛋白1(platelet-derived growth factor-associated protein 1, PDAP 1)基因在卵巢癌中的表达情况以及它们的相互调控关系。方法回顾性分析2015~2017年在广东医科大学第一附属医院住院并经... 目的探讨miR-486-3p和血小板衍生生长因子相关蛋白1(platelet-derived growth factor-associated protein 1, PDAP 1)基因在卵巢癌中的表达情况以及它们的相互调控关系。方法回顾性分析2015~2017年在广东医科大学第一附属医院住院并经临床和病理证实为卵巢癌的8例患者临床卵巢癌肿瘤组织标本,收集同期4例卵巢非恶性病变者(阴性对照组)的标本,通过荧光实时定量PCR和免疫印迹技术,分析miR-486-3p和PDAP 1在卵巢癌的表达情况。采用生物信息学和双荧光素酶实验证实它们之间的调控关系,并研究它们对卵巢癌细胞增殖的影响。结果 miR-486-3p在卵巢癌细胞和肿瘤组织中均出现显著下调(P<0.05),而PDAP 1则过表达(P<0.05)。它们的表达量间呈负相关关系(r=-0.82,P<0.05),进一步研究证实PDAP 1是miR-486-3p的靶点。上调miR-486-3p或抑制PDAP 1的表达均可导致卵巢癌细胞增殖受抑。结论以miR-486-3p和PDAP 1为靶点的基因治疗有望应用于卵巢癌治疗。 展开更多
关键词 miR-486-3p PDAP 1 卵巢癌 增殖
在胃癌BGC-823细胞中侧群细胞的分选及其干细胞特性研究
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作者 耿嘉 刘越敏 罗慧英 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期873-876,共4页
目的对胃癌BGC-823细胞株中的侧群(SP)细胞进行分选,并对其干细胞特性进行研究。方法将胃癌BGC-823细胞株传代培养至呈对数生长期后,取适量细胞悬液分为2组:对照组(加入SP抑制剂——终浓度为50μmol·L-1维拉帕米,分离NSP细胞)和实... 目的对胃癌BGC-823细胞株中的侧群(SP)细胞进行分选,并对其干细胞特性进行研究。方法将胃癌BGC-823细胞株传代培养至呈对数生长期后,取适量细胞悬液分为2组:对照组(加入SP抑制剂——终浓度为50μmol·L-1维拉帕米,分离NSP细胞)和实验组(不加维拉帕米,分离SP细胞),用流式细胞仪分选出SP细胞和非侧群(NSP)细胞,研究SP细胞的干细胞特征:用噻唑蓝(MTT)法比较2种细胞的增殖能力;用细胞划痕实验比较2种细胞的迁移能力;用Transwell小室实验比较2种细胞的侵袭能力。结果从胃癌BGC-823细胞中分选得到约2%SP细胞。孵育后第4天,NSP细胞和SP细胞的增殖水平(光密度值)分别为0. 62±0. 42,0. 93±0. 17;第7天,这2种细胞的增殖水平(光密度值)分别为0. 81±0. 21,1. 96±0. 42;实验组与对照组比较,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。经7,14,21 d孵育后,实验组中SP细胞比例分别降为(52. 03±2. 08)%,(3. 07±0. 88)%和(2. 16±0. 15)%;而对照组中SP细胞比例在21 d内基本维持在0. 03%左右,表明SP细胞不断通过分裂进行自我更新和分化,而NSP细胞基本不具有自我更新及分化的能力。经2 d孵育后,实验组与对照组在聚碳酸酯膜上每个视野中细胞数分别为(75. 22±4. 31),(22. 15±1. 77)个,组间比较差异有统计学意义(P <0. 05),提示SP细胞具有更强的侵袭能力。结论在胃癌BGC-823细胞株中,存在一定比例的SP细胞。与NSP细胞比较,SP细胞具有更强的增殖、分化、迁移和侵袭能力,提示胃癌BGC-823细胞株中分选所得的SP细胞具有肿瘤干细胞的特性。 展开更多
关键词 胃癌BGC-823细胞株 侧群细胞 增殖 迁移 侵袭
长链非编码RNA MEG3对头颈鳞状细胞癌增殖和侵袭的影响 预览
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作者 季叶枫 于洋 +2 位作者 苗利民 杨建荣 袁华 《口腔医学》 CAS 2019年第5期400-403,共4页
目的探究长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG3)对头颈鳞癌细胞增殖和侵袭的影响。方法体外培养头颈部鳞癌细胞系HN6转染MEG3,分为MEG3阴性对照组(MEG3对照组)、MEG3慢病毒过表达转染组(MEG3过表达组)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测... 目的探究长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG3)对头颈鳞癌细胞增殖和侵袭的影响。方法体外培养头颈部鳞癌细胞系HN6转染MEG3,分为MEG3阴性对照组(MEG3对照组)、MEG3慢病毒过表达转染组(MEG3过表达组)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测MEG3 mRNA表达;CCK-8、transwell检测细胞增殖、侵袭耐力;蛋白免疫印迹法(western blottingWB)检测细胞中ZEB2、波形蛋白(vimentin)、E-钙黏着蛋白(E-cadherin)蛋白表达情况。结果在HN6细胞系中,与MEG3对照组相比,MEG3过表达组细胞中MEG3 mRNA表达升高(P<0.05)。与阴性对照组相比,MEG3过表达组细胞增殖、侵袭能力均降低(P<0.05)。与阴性对照组相比,MEG3转染组ZEB2、vimentin蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。结论 MEG3表达升高后可抑制头颈鳞癌细胞的增殖、侵袭,其机制可能与抑制细胞上皮-间充质转化有关。 展开更多
关键词 头颈部鳞癌(HNSCC) 母系表达基因3(MEG3) 增殖 侵袭 上皮-间充质转化(EMT)
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鳖龙软肝汤含药血浆对HBV相关性肝癌患者外周血树突状细胞增殖的影响
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作者 伍玉南 李秀 +4 位作者 张冬 邓松华 王若宇 彭建平 孙克伟 《辽宁中医杂志》 CAS 2019年第3期646-649,I0005共5页
目的:观察鳖龙软肝汤含药血浆对HBV相关性肝癌患者外周血树突状细胞增殖的影响。方法:选择32例湖南中医药大学第一附属医院2016年6月-2017年2月肝病研究所HBV相关性肝癌、中医辨证为肝郁脾虚证患者分别采集抗凝外周静脉血,分离外周血单... 目的:观察鳖龙软肝汤含药血浆对HBV相关性肝癌患者外周血树突状细胞增殖的影响。方法:选择32例湖南中医药大学第一附属医院2016年6月-2017年2月肝病研究所HBV相关性肝癌、中医辨证为肝郁脾虚证患者分别采集抗凝外周静脉血,分离外周血单个核细胞(PBMCs),体外培养使DCs增殖,培养第五天(D5)采用大鼠鳖龙软肝汤含药血浆低、中剂量进行干预24 h、48 h、72 h,并设立空白血浆组,通过CCK-8试剂、酶标仪检测干预的不同时间后细胞的增殖(OD值)。结果:鳖龙软肝汤含药血浆对HBV相关性肝癌患者外周血树突状细胞的增殖有促进作用,且呈时间和浓度依赖性:24 h低剂量组5%、10%、20%,48 h低剂量组5%、10%、20%,72 h低剂量组20%的含药血浆与相对应空白血浆组比较有显著性差异(P <0. 01),其中48 h低剂量20%含药血浆组对树突状细胞的增殖最明显(P <0. 01)。结论:鳖龙软肝汤能刺激HBV相关性肝癌、中医辨证为肝郁脾虚患者外周血DCs的增殖,而以低剂量20%的含药血浆干预48 h效果最佳。 展开更多
关键词 鳖龙软肝汤 HBV相关性肝癌 树突状细胞 CCK-8 增殖
食管鳞状细胞癌中单羧酸转运蛋白4的表达及对EC109细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响 预览
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作者 刘耀河 秦宁 +7 位作者 杨瑜 宋锐 侯歌 王成 郭振江 梁冰 张艳 刘宗文 《郑州大学学报:医学版》 CAS 北大核心 2019年第3期353-358,共6页
目的:探讨食管鳞状细胞癌(食管鳞癌)中单羧酸转运蛋白4(MCT4)的表达及对EC109细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:免疫组化法检测60例食管鳞癌和19例正常食管黏膜组织中MCT4蛋白的表达。Western blot法检测正常食管上皮细胞Het1-A和... 目的:探讨食管鳞状细胞癌(食管鳞癌)中单羧酸转运蛋白4(MCT4)的表达及对EC109细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:免疫组化法检测60例食管鳞癌和19例正常食管黏膜组织中MCT4蛋白的表达。Western blot法检测正常食管上皮细胞Het1-A和食管鳞癌细胞EC109、EC9706中MCT4蛋白的表达。将靶向MCT4的siRNA转染至EC109细胞中,Western blot法检测MCT4蛋白的表达,采用乳酸试剂盒检测胞外乳酸含量,采用CCK-8法、划痕实验和Transwell技术检测细胞增殖率、迁移率和侵袭率;以未转染细胞和转染阴性对照siRNA的细胞作对照。结果:食管鳞癌组织中MCT4高表达率高于正常组织(70.0%vs 26.3%,P<0.001),低分化癌组织中的高表达率高于高中分化癌组织(P=0.037)。EC9706、EC109细胞中MCT4蛋白表达水平高于Het1-A(P<0.05)。与对照组比较,MCT4 siRNA转染的EC109细胞胞外乳酸含量降低,细胞增殖率、迁移率和侵袭率均降低(P<0.001)。结论:下调MCT4的表达能够抑制食管鳞癌细胞的恶性生物学行为。 展开更多
关键词 单羧酸转运蛋白4 食管鳞状细胞癌 增殖 迁移 侵袭
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