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中草药复方对虾体内外抑弧菌效果研究 预览
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作者 朱宇嘉 辛年香 +4 位作者 朱志东 蔡延渠 吕莉 董碧莲 朱盛山 《科学养鱼》 2019年第7期44-45,29共3页
弧菌是一种革兰氏阴性菌。弧菌病的发作往往伴随弧菌侵入虾体,破坏肝胰腺。笔者对不同产区(广东、广西、海南、山东等地)出现白便、红体、偷死、空肠空胃等常见症状的对虾进行解剖检测,超过85%的病虾体内(肝胰腺或肠道)含有弧菌,且肝胰... 弧菌是一种革兰氏阴性菌。弧菌病的发作往往伴随弧菌侵入虾体,破坏肝胰腺。笔者对不同产区(广东、广西、海南、山东等地)出现白便、红体、偷死、空肠空胃等常见症状的对虾进行解剖检测,超过85%的病虾体内(肝胰腺或肠道)含有弧菌,且肝胰腺出现不同程度的病变。 展开更多
关键词 复方制剂 弧菌 中草药复方 哈维弧菌 最低抑菌浓度 三黄散 溶藻弧菌 HCV 创伤弧菌 体内外 效果研究
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大黄鱼中哈维氏弧菌毒力及耐药特性分析 被引量:1
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作者 吴立婷 廖金轩 +5 位作者 庞茂达 包红朵 周艳 孙利厂 王冉 张辉 《食品安全质量检测学报》 CAS 2019年第8期2111-2119,共9页
目的分析鉴定海产养殖中主要病原哈维氏弧菌的毒力及耐药特性。方法采集来自于网箱养殖区病死大黄鱼,分离幵鉴定哈维氏弧菌,利用微量肉汤稀释法分析分离株对13种抗生素的敏感特性,PCR鉴定耐药基因(tetA、tetB、ermA、ermB、ermC、mecA、... 目的分析鉴定海产养殖中主要病原哈维氏弧菌的毒力及耐药特性。方法采集来自于网箱养殖区病死大黄鱼,分离幵鉴定哈维氏弧菌,利用微量肉汤稀释法分析分离株对13种抗生素的敏感特性,PCR鉴定耐药基因(tetA、tetB、ermA、ermB、ermC、mecA、aac(6’)-Ib、oqxA、sul1、sul2、mcr-1)及其毒力基因。结果从病料中分离幵鉴定出54株哈维氏弧菌,耐药分析表明对硫酸粘杆菌素、庆大霉素、四环素、氨苄西林、复方新诺明和阿莫西林均耐药, 96.2%的分离株对头孢噻呋, 92.6%的分离株对链霉素、阿米卡星表现为耐药, 88.9%的分离株对恩诺沙星, 87.1%的分离株对卡那霉素呈现高度耐受特性。所有分离株同时对9种抗生素显示100%耐药,同时耐受10种抗生素的菌株有94.4%,同时对11和12种抗生素耐受的菌株分别达到85.2%和64.8%,对13种抗生素均产生耐药的菌株达到37.0%(20/54)。耐药基因分析表明四环素类tetA为主要耐药基因,检出率高达81.5%;氨基糖苷类aac(6’)-Ib,β-内酰胺类mecA,磺胺类sul1、sul2,喹诺酮类oqxA和大环内酯类ermA、ermC分别检出4~7株。毒力基因分析表明toxR携带率高达75.9%。结论本研究分析了海产养殖中主要病原哈维氏弧菌感染状况,其耐药严重且普遍携带毒力基因,表明哈维氏弧菌耐药和毒力对海产养殖造成重要威胁。同时本研究为弧菌病的有效防治提供参考依据。 展开更多
关键词 哈维弧菌 耐药特征 耐药基因 毒力基因
凡纳滨对虾烂尾病病原的分离鉴定及药敏分析 预览
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作者 黄雪敏 梁华芳 +4 位作者 薛明 余文智 李成聪 陈耀 温崇庆 《广东海洋大学学报》 CAS 2019年第4期42-48,共7页
【目的】研究广东湛江地区凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)烂尾病主要病原及其药敏特征。【方法】从对虾病灶部位分离纯化细菌,用2株代表菌株对健康虾进行创伤浸浴感染试验,分析菌株形态特征、生理生化特征以及16SrRNA和HSP60基因序列... 【目的】研究广东湛江地区凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)烂尾病主要病原及其药敏特征。【方法】从对虾病灶部位分离纯化细菌,用2株代表菌株对健康虾进行创伤浸浴感染试验,分析菌株形态特征、生理生化特征以及16SrRNA和HSP60基因序列,以哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)和坎氏弧菌(V.campbelli)溶血素基因特异引物扩增菌株基因组DNA,通过纸片扩散法测试菌株对17种药物的敏感性。【结果】从患病亲虾和养殖对虾分别分离获得编号2018B22和2018MZ1的代表菌,两株菌16SrRNA和HSP60基因序列均与哈维氏弧菌最相似,且均可被哈维氏弧菌溶血素基因引物特异扩增,表型特征亦与哈维氏弧菌相近;两株菌均可引起凡纳滨对虾烂尾病,其中菌株2018B22的致病力较2018MZ1更强,而后者的耐药谱更广。【结论】湛江地区凡纳滨对虾烂尾病主要病原为哈维氏弧菌。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 烂尾病 哈维弧菌 鉴定 药敏试验
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中国对虾来源哈维氏弧菌鉴定及生物学分析 预览
4
作者 樊英 许拉 +4 位作者 王晓璐 盖春蕾 叶海斌 刁菁 李天保 《中国农学通报》 2019年第3期34-39,共6页
从患病中国对虾中分离到优势菌株,对其进行生理生化特性及分子生物学分析。TCBS培养基上菌落呈现绿色(以下称为TCBS-G),通过形态学、生理生化分析,菌株TCBS-G为革兰氏阴性菌,短杆状,两端钝圆,有鞭毛;Biolog GIII分析表明,该菌株生长代... 从患病中国对虾中分离到优势菌株,对其进行生理生化特性及分子生物学分析。TCBS培养基上菌落呈现绿色(以下称为TCBS-G),通过形态学、生理生化分析,菌株TCBS-G为革兰氏阴性菌,短杆状,两端钝圆,有鞭毛;Biolog GIII分析表明,该菌株生长代谢利用情况与弧菌吻合,与哈维氏弧菌特征相似。基于16S rRNA、gyrB、HSP60基因序列分析同源性,16S rRNA未将TCBS-G有效鉴定,gyrB、HSP60基因序列与哈维氏弧菌相聚类,聚合置信度可达99%。综合生物学及分子特征,判定TCBS-G为弧菌属的哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)。底物平板试验结果显示TCBS-G菌株胞外产物具有淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶和DNA酶活性;且能够扩增出哈氏弧菌溶血素基因的保守特异性片段。 展开更多
关键词 中国对虾 哈维弧菌 BIOLOG 16S RRNA GYRB HSP60
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哈维氏弧菌磷脂酶D对不同磷脂单分子层的吸附动力学研究 预览
5
作者 吴宗泽 陈华勇 +2 位作者 杨博 王永华 王方华 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期41-45,53共6页
基于单分子层技术研究了哈维氏弧菌来源磷脂酶D(Vh PLD)对不同磷脂单分子层的吸附动力学。探究初始表面压力条件对VhPLD吸附不同磷脂单分子层(磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰甘油(PG)和磷脂酰肌醇(PI))吸... 基于单分子层技术研究了哈维氏弧菌来源磷脂酶D(Vh PLD)对不同磷脂单分子层的吸附动力学。探究初始表面压力条件对VhPLD吸附不同磷脂单分子层(磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰甘油(PG)和磷脂酰肌醇(PI))吸附动力学参数(ka、kd、KAds)的影响规律。结果表明:VhPLD对磷脂单分子层的吸附动力学参数与磷脂单分子层初始表面压力密切相关;在15 m N/m条件下,VhPLD对不同磷脂单分子层吸附偏好性顺序为PC> PG> PS> PE=PI;在20 m N/m条件下,VhPLD对不同磷脂单分子层吸附偏好性顺序为PG> PI> PC> PS> PE;在25 m N/m条件下,VhPLD对不同磷脂单分子层吸附偏好性顺序则转变为PC> PS> PI> PE=PG。 展开更多
关键词 磷脂酶D 哈维弧菌 磷脂 界面吸附 吸附动力学
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哈维氏弧菌致病因子检测与防治研究进展 预览
6
作者 李桂仙 张春丹 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第6期319-322,329共5页
弧菌疾病是水产品的主要病害,哈维氏弧菌作为世界范围内近年来发现的主要海洋致病菌之一,多次引起水产品的流行性疾病,造成巨大的经济损失。本文对于哈维氏弧菌的主要致病机理以及检测技术进行了归纳,哈维氏弧菌引起宿主疾病的主要原因... 弧菌疾病是水产品的主要病害,哈维氏弧菌作为世界范围内近年来发现的主要海洋致病菌之一,多次引起水产品的流行性疾病,造成巨大的经济损失。本文对于哈维氏弧菌的主要致病机理以及检测技术进行了归纳,哈维氏弧菌引起宿主疾病的主要原因有哈维氏弧菌分泌的胞外产物中的溶血素(vhh),胞外蛋白酶,铁载体等,弧菌自身对于宿主血清清除作用的抗性作用以及环境因素如水温,以及菌群密度感应系统。本文还总结了对哈维氏弧菌疾病检测的防治研究进展,为今后更好的研究与预防海洋弧菌疾病提供有效的参考。 展开更多
关键词 哈维弧菌 致病机理 检测技术 研究进展 防治
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哈维氏弧菌引起的条纹海马表皮溃疡综合征的研究 预览 被引量:1
7
作者 李营 王波 +5 位作者 张培玉 刘洪展 郑风荣 王宗兴 徐宗军 赵超 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1298-1307,共10页
近年来,条纹海马的养殖在我国发展迅速,但由于多种养殖疾病的频繁暴发,严重制约了条纹海马养殖业的健康发展。自2017年以来,我国北方地区在条纹海马的养殖过程中,多次发生表皮溃疡综合征,患病海马游泳能力减弱,皮肤大面积溃疡,同时伴随... 近年来,条纹海马的养殖在我国发展迅速,但由于多种养殖疾病的频繁暴发,严重制约了条纹海马养殖业的健康发展。自2017年以来,我国北方地区在条纹海马的养殖过程中,多次发生表皮溃疡综合征,患病海马游泳能力减弱,皮肤大面积溃疡,同时伴随烂尾症状,解剖后发现其肠道发白,肝脏及鳃颜色暗淡,死亡率较高,给海马养殖业造成巨大的经济损失。本研究从患病条纹海马的溃烂肌肉及肠道中分离出13株优势菌株,经回归感染实验证实菌株HDM-2可引起条纹海马出现表皮溃疡综合征的类似症状,且半数致死量(LD50)约为2.89×10^8 CFU/mL。为确定菌株HDM-2的分类地位,采用生理生化及基于16S rDNA的分子生物学方法对其进行鉴定,结果显示,HDM-2为哈维氏弧菌;为了解菌株HDM-2的菌体特征,采用透射电镜(TEM)对菌株HDM-2进行观察,结果显示,HDM-2为周生鞭毛,有荚膜,大小约2.20 μm×4.75 μm;为获知HDM-2的抗生素敏感性,采用纸片扩散法进行药敏试验,结果显示,菌株HDM-2对氟苯尼考和头孢他啶等较敏感;患病条纹海马的组织病理学研究表明,菌株HDM-2对条纹海马的皮肤、肝脏以及鳃组织损伤较严重。本文可为条纹海马表皮溃疡综合征的防治及深入研究提供基础资料。 展开更多
关键词 条纹海马 表皮溃疡综合征 病原菌 哈维弧菌 药敏试验
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花鲈结合珠蛋白基因的克隆及其在哈维氏弧菌感染下的表达分析
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作者 乔丹 丁斐斐 +1 位作者 李长红 陈炯 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期2042-2051,共10页
结合珠蛋白(haptoglobin,Hp)又称触珠蛋白,主要由肝脏合成,在感染、损伤及炎症诱导的急性期反应(acute phase response,APR)中发挥重要作用。本研究从花鲈(Lateolabrax japonicus)转录组测序结果中获得其Hp基因(LjHp)全长cDNA序列(GenBa... 结合珠蛋白(haptoglobin,Hp)又称触珠蛋白,主要由肝脏合成,在感染、损伤及炎症诱导的急性期反应(acute phase response,APR)中发挥重要作用。本研究从花鲈(Lateolabrax japonicus)转录组测序结果中获得其Hp基因(LjHp)全长cDNA序列(GenBank No.MK820673)。LjHp由2285个核苷酸组成,包含1个大的ORF,预测编码1个由309个氨基酸组成、分子量约为33.82 kD的前体蛋白,N端22个残基为信号肽。序列分析显示,LjHp具有鱼类Hp的典型特征,与欧洲海鲈(Dicentrarchus labrax)Hp氨基酸同源性高达76.8%;系统进化树分析表明,鱼类Hp形成1个大簇,LjHp与黄鳝(Monopterus albus)Hp形成1个小簇。LjHp mRNA主要在健康花鲈肝脏中表达,其在哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染后,在花鲈的肝脏、脾脏和头肾中表达量显著增加(P<0.05)。Western blot分析表明,LjHp在花鲈血清中存在N-糖基化修饰,并且在哈维氏弧菌感染后血清中LjHp的含量显著上调(P<0.05)。以上结果显示,LjHp mRNA及其蛋白的表达与哈维氏弧菌感染密切相关,揭示其可能作为一个正急性期蛋白参与花鲈抵抗细菌感染。本研究结果为进一步研究鱼类Hp的功能及其在病原菌感染引起的APR中的分子机制提供基础资料。 展开更多
关键词 结合珠蛋白(Hp) 花鲈 哈维弧菌 糖基化 基因表达
哈维氏弧菌PspF基因的克隆及原核表达分析 预览
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作者 马少鸿 黄郁葱 +1 位作者 简纪常 蔡双虎 《广东海洋大学学报》 CAS 2019年第5期1-7,共7页
【目的】对哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)ZJ0603的PspF基因进行克隆与原核表达分析,优化表达条件。【方法】克隆哈维氏弧菌菌株ZJ0603的FspF基因,对其编码蛋白进行理化性质、信号肽、亚细胞定位、二级结构及三级结构分析,构建表达载体pET2... 【目的】对哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)ZJ0603的PspF基因进行克隆与原核表达分析,优化表达条件。【方法】克隆哈维氏弧菌菌株ZJ0603的FspF基因,对其编码蛋白进行理化性质、信号肽、亚细胞定位、二级结构及三级结构分析,构建表达载体pET28a-PspF,经BamHI和XhoI双酶切和测序鉴定正确后转入表达菌株大肠杆菌BL21,对表达重组菌株进行表达条件优化及Western Blot鉴定。【结果与结论】PspF基因的开放阅读框(ORF)全长为1179bp,编码336个氨基酸,分子质量为38.04ku,理论等电点5.27,不稳定系数41.97,总平均亲水性-0.382,PspF蛋白整体表现为亲水性蛋白。成功构建含pET28a-PspF的表达菌株,其最佳诱导条件为37℃下异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)0.2mmol/L诱导6h,其表达蛋白为38ku。Western Blot结果表明PspF重组蛋白成功获得,蛋白同源性高,具有作为抗弧菌病疫苗的潜力。 展开更多
关键词 哈维弧菌 PspF基因 原核表达 表达优化
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几个理化因素对哈维氏弧菌生物被膜形成的影响 预览 被引量:1
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作者 吴同垒 王洪彬 +2 位作者 张志强 高桂生 史秋梅 《水产学杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期33-37,共5页
将由从患病大菱鲆Scophthalmus maximus肝脏中分离的哈维氏弧菌Vibrio harveyi QHD-1菌株,在盐离子浓度为0%~8%NaCl、温度为4℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃和35℃、pH 1~10(间隔1单位)、添加0%~2.0%(NH4)2SO4和0%~8%MgSO4的50mL TS... 将由从患病大菱鲆Scophthalmus maximus肝脏中分离的哈维氏弧菌Vibrio harveyi QHD-1菌株,在盐离子浓度为0%~8%NaCl、温度为4℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃和35℃、pH 1~10(间隔1单位)、添加0%~2.0%(NH4)2SO4和0%~8%MgSO4的50mL TSB培养液中常规培养,采用改良微孔板法研究盐离子浓度、温度、pH、NH4+、Mg2+对哈维氏弧菌QHD-1生长和生物被膜形成的影响。结果显示,上述因素均影响菌株QHD-1的生长,在盐离子浓度3%、30℃、pH8时,菌株QHD-1生长最好;NH4+、Mg2+能促进QHD-1菌株生长;菌株QHD-1能在聚苯乙烯板上形成生物被膜,且受初始菌液浓度等上述因素的影响;生物被膜形成的最佳条件为:温度30℃、pH8、盐离子5%、初始菌液浓度1.0×109cfu/mL。本研究结果可为生物被膜形成机制与致病机理的研究提供参考。 展开更多
关键词 哈维弧菌 生物被膜 理化因素
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假交替单胞菌对哈维氏弧菌拮抗作用初探 预览
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作者 杨行 章翔 +3 位作者 龙昊 李莹 冯永勤 谢珍玉 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期833-838,共6页
以2216E作为培养基,通过补加氮源和碳源,可使假交替单胞菌WCPW15003的菌悬液中菌体密度由2.31×10^8 cfu/mL升至3.36×10^9 cfu/mL。在pH 7.6、温度30℃、盐度30条件下,当哈维氏弧菌PBVH3311分别为10^3、10^4、10^5、10^6、10^7... 以2216E作为培养基,通过补加氮源和碳源,可使假交替单胞菌WCPW15003的菌悬液中菌体密度由2.31×10^8 cfu/mL升至3.36×10^9 cfu/mL。在pH 7.6、温度30℃、盐度30条件下,当哈维氏弧菌PBVH3311分别为10^3、10^4、10^5、10^6、10^7、10^8 cfu/mL时,假交替单胞菌WCPW15003最小抑菌密度分别为10^3、10^5、10^5、10^7、10^8、10^8 cfu/mL,对应抑菌圈直径分别为(8.40±0.16)、(9.64±0.07)、(8.24±0.22)、(18.15±0.09)、(18.53±1.34)、(11.68±2.58)mm。当哈维氏弧菌PBVH3311密度为10^3~10^5 cfu/mL时,实现10^0%拮抗作用的方程为:6.06=9.09-0.3339 x+0.02325 y+0.00267 x^2-0.0002273 xy+0.0002477 y^2;当哈维氏弧菌PBVH3311密度为10^6~10^8 cfu/mL时,实现10^0%拮抗作用的方程为:6.25=8.395-0.1682 x+0.1161 y+0.0010^6 x^2-0.00000675 xy-0.00010^26 y^2。本研究结果将为今后开发防治热带海水养殖哈维氏弧菌病原的益生菌制剂及其施用技术奠定良好基础。 展开更多
关键词 假交替单胞菌 哈维弧菌 拮抗 最小抑菌密度 培养基优化
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几种消毒剂对凡纳滨对虾致病性弧菌的杀灭作用 预览 被引量:1
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作者 刘志轩 王印庚 +5 位作者 张正 王凯 蔡生力 包海岩 姚学良 张振 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2018年第3期112-119,共8页
本研究对分离的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)及Vibrio sp.Ex25共4株急性肝胰腺坏死病(AHPND)致病菌(编号分别为PV130903A、PV140731A、PV150526A和PV140... 本研究对分离的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)及Vibrio sp.Ex25共4株急性肝胰腺坏死病(AHPND)致病菌(编号分别为PV130903A、PV140731A、PV150526A和PV140821A)进行了杀灭作用实验,研究了聚六亚甲基胍(PHMG)、双氧水(H_2O_2)、聚维酮碘(PVPI)及二氧化氯(ClO_2)4种消毒剂对4株致病菌的杀灭浓度、杀灭时间及杀灭率的比较分析;同时追踪了PHMG在凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖过程中对池塘水体弧菌的杀灭效果。结果显示,2μl/L的ClO_2作用1 h、1μl/L的PHMG或1μl/L的H_2O_2作用2 h、8μl/L的PVPI作用6 h可完全杀灭4种弧菌,PHMG和PVPI的杀菌率随时间的推移逐渐升高,H_2O_2和ClO_2的杀菌率在达到峰值之后均有不同程度的下降。在池塘养殖水体的弧菌杀灭实验中,浓度为0.5、1、2μl/L的PHMG可使养殖水体中的弧菌总量分别在第4天、第3天和第3天下降到最低值,分别为初始弧菌总数的79.14%、82.48%和87.30%;各浓度实验组弧菌总量达到最低值后逐步升高,直到第11天时上述各浓度实验组的弧菌总量仍然低于消毒前初始值的3.58%、5.53%和6.10%。综合比较分析,这4种消毒剂对致病性弧菌的杀菌能力强弱为:PHMG〉H_2O_2〉ClO_2〉PVPI。结合消毒剂的杀菌浓度、杀菌效果、持续时间以及使用成本等几个方面考虑,认为PHMG具有高效、持久等优点,在水产养殖中将会有良好的应用前景。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 哈维弧菌 溶藻弧菌 VIBRIO sp. 聚六亚甲基胍 杀菌效果
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中草药对哈维氏弧菌体外抑菌试验 被引量:1
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作者 王洪彬 靳晓敏 +4 位作者 朱利霞 吴同垒 张志强 高桂生 史秋梅 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2018年第12期102-104,共3页
为了测定24味中草药对哈维氏弧菌的体外抑菌效果,筛选出具有较好体外抑菌作用的单味中草药,试验采用水提法提取诃子、知母等24味中草药的有效成分,琼脂平板打孔法和试管二倍稀释法分别测定中草药对哈维氏弧菌的抑菌圈直径、最小抑菌浓度... 为了测定24味中草药对哈维氏弧菌的体外抑菌效果,筛选出具有较好体外抑菌作用的单味中草药,试验采用水提法提取诃子、知母等24味中草药的有效成分,琼脂平板打孔法和试管二倍稀释法分别测定中草药对哈维氏弧菌的抑菌圈直径、最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果表明:乌梅、苏木、黄芩、夏枯草、连翘、女贞子这6种药物抑菌效果较好,其中黄芩和苏木的平均抑菌圈直径在25 mm以上,MIC和MBC均为31.25 mg/m L。说明中草药具有一定的抑菌效果。 展开更多
关键词 哈维弧菌 中草药 体外抑菌试验 最小抑菌浓度 最小杀菌浓度
基于响应面法分析乌梅和抗生素对哈维氏弧菌的协同抑制作用 预览
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作者 钟志鸿 王菲 +6 位作者 陈永贵 邓恒为 王世锋 孙云 陈雪芬 郭伟良 周永灿 《南方水产科学》 CSCD 北大核心 2018年第6期81-88,共8页
为了给哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)疾病防治新手段的开发提供基础实验数据,筛选了协同抗哈维氏弧菌的乌梅(Fructus mume)水提液与抗生素复合物。首先绘制药物浓度对数对抑菌圈直径标准曲线,采用全组合法筛选与乌梅水提液具有协同抗菌活... 为了给哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)疾病防治新手段的开发提供基础实验数据,筛选了协同抗哈维氏弧菌的乌梅(Fructus mume)水提液与抗生素复合物。首先绘制药物浓度对数对抑菌圈直径标准曲线,采用全组合法筛选与乌梅水提液具有协同抗菌活性的抗生素,然后采用中心组合设计法(CCD)结合响应面法(RSM)分析乌梅水提液与筛出抗生素复合后两两药物间的交互作用,并确定最佳复合配比。全组合法筛出的四环素、土霉素、金霉素和强力霉素分别与乌梅水提液具有协同抗菌作用,RSM分析显示将这4种药物复合后,乌梅水提液与土霉素对哈维氏弧菌存在显著协同抗菌作用;土霉素分别与金霉素和强力霉素存在交互抑制作用;乌梅水提液、土霉素、金霉素和强力霉素最佳复合配比为45∶0.12∶0.00∶0.00(mg·mL^–1)。模型预测最优复合物对哈维氏弧菌的抑菌圈直径为18.54mm,琼脂扩散法平行3次测得该复合物的抑菌圈直径为(19.03±0.07)mm,相对误差为2.6%,表明该方法结果可靠,为考察药物间的交互作用提供了新思路。 展开更多
关键词 哈维弧菌 乌梅 抗生素 响应面分析法 协同抗菌
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鲈鱼CD63基因克隆及表达分析
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作者 刘艳杰 张剑 +1 位作者 朱跃骅 钱云霞 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期830-838,共9页
抗原分化簇63(cluster of differentiation 63, CD63)属于四次跨膜蛋白超家族成员,在细胞粘附、信号转导和免疫细胞激活中扮演重要角色。近年来鲈鱼(Lateolabrax japonicus)养殖病害严重,为加强鲈鱼疾病、免疫相关基础的研究,本... 抗原分化簇63(cluster of differentiation 63, CD63)属于四次跨膜蛋白超家族成员,在细胞粘附、信号转导和免疫细胞激活中扮演重要角色。近年来鲈鱼(Lateolabrax japonicus)养殖病害严重,为加强鲈鱼疾病、免疫相关基础的研究,本实验通过cDNA末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends, RACE)技术克隆鲈鱼CD63 cDNA全长序列,共1 219 bp,包括114 bp的5'-UTR,723 bp的ORF和382 bp的3'-UTR,ORF编码240个氨基酸,蛋白质理论相对分子量为26.26 kD,等电点为8.43。该蛋白是四次跨膜蛋白,包括3个胞内区,4个跨膜区和2个胞外区,第2个胞外大环有保守的Cys-Cys-Gly 结构和3个潜在的N-糖基化位点(Asn128, Asn150和Asn172)。该蛋白羧基端有1个酪氨酸溶酶体靶基序(GYEVM, Gly-Tyr-Glu-Val-Met)。序列分析显示,鲈鱼CD63与其他鱼类有较高的相似性。qRT-PCR结果显示,CD63在鲈鱼肝、脾、头肾、肠、鳃、脂肪、肌肉、脑和血液中都有表达,其中肝脏、肌肉和头肾中表达量较高。腹腔注射哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)后6 h,鲈鱼头肾中CD63表达显著上调(P<0.05)。脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激巨噬细胞,24 h后CD63表达显著上调(P<0.05)。聚肌胞苷酸(polyinosinic-polycytidylic acid, Poly I:C刺激12及24 h后,CD63表达量显著增加(P<0.05)。结果表明,CD63在病原菌侵袭和免疫应答中发挥重要作用,这为进一步研究鱼类免疫应答分子调控网络提供了一定的理论基础。 展开更多
关键词 CD63 哈维弧菌 脂多糖(LPS) 聚肌胞苷酸(Poly I:C) 巨噬细胞
半滑舌鳎抗哈维氏弧菌病的遗传力和育种值分析
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作者 卢昇 李泽宇 +7 位作者 李仰真 刘洋 王杉 杨英明 赵玉柱 马腾 魏敏 陈松林 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期1770-1777,共8页
半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)是我国沿海地区特有的海水经济养殖品种,在高密度工厂化养殖过程中该品种易受哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染患腹水病并大量死亡,严重影响了该品种养殖产业的健康发展,本研究以本实验室2016年建... 半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)是我国沿海地区特有的海水经济养殖品种,在高密度工厂化养殖过程中该品种易受哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染患腹水病并大量死亡,严重影响了该品种养殖产业的健康发展,本研究以本实验室2016年建立的半滑舌鳎家系为基础,从22个家系中分别选取1 999尾和1715尾295日龄左右的幼鱼进行哈维氏弧菌人工感染实验。实验一共进行288 h,于300 h终止,2次实验感染后存活率范围分别为:0-95.45%和0-87.30%,平均存活率分别为31.17%和26.88%。成对t检验结果表明,2次感染实验中各家系感染后存活率无显著性差异(P=0.21〉0.05)。本研究采用0/1(0表示死亡, 1表示存活)和每尾实验鱼在实验中的存活时间作为半滑舌鳎抗哈维氏弧菌的表型,并利用3种遗传评定模型对该性状进行分析。此外,对各家系育种值(家系中所有个体育种值均值)进行相关性分析和成对t检验以比较3种模型对该性状的估算能力。结果表明,半滑舌鳎抗哈维氏弧菌遗传力为0.17±0.05-0.36±0.20,属中低遗传力。相关性分析结果显示,3种模型估算出的各家系育种值之间的Pearson相关系数范围为0.94-0.97,呈高度正相关关系。3组家系育种值有相似的排名,成对t检验结果表明3组排名之间没有显著性差异(P〉0.05)。上述结果表明,半滑舌鳎抗哈维氏弧菌属于中低遗传力性状,存在较为丰富的遗传变异,适合采用家系选育的方式对该性状进行选育。此外,3种模型对半滑舌鳎抗哈维氏弧菌遗传参数的估算能力相似。本研究在人工感染实验的基础上,利用3种遗传评定模型分析了半滑舌鳎抗哈维氏弧菌遗传参数,得到了该性状的遗传力和各家系育种值,补充了半滑舌鳎抗哈维氏弧菌遗传参数估计相关内容,为选育抗哈维氏弧菌的半滑舌鳎苗种提供了参考。 展开更多
关键词 遗传力 半滑舌鳎 哈维弧菌 抗病力
哈维氏弧菌RT-LAMP检测方法建立与应用 预览
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作者 涂志刚 杨海朋 +4 位作者 崔婧 严耿杰 李丹萍 周永灿 邱名毅 《中国水产科学》 CSCD 北大核心 2018年第6期1325-1334,共10页
哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是引起海南省后水湾深水网箱养殖卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)“烂身病”的主要病原菌.为了能够快速诊断该病原菌, 急需建立一种耗时短、准确以及便捷的检测方法.本研究利用分离到的致病菌株 QT520 的 ... 哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是引起海南省后水湾深水网箱养殖卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)“烂身病”的主要病原菌.为了能够快速诊断该病原菌, 急需建立一种耗时短、准确以及便捷的检测方法.本研究利用分离到的致病菌株 QT520 的 ToxR 基因序列设计特异性引物和加入 SYTO-9 特异荧光染料, 建立了一种可以实时、快速检测哈维氏弧菌的LAMP法(RT-LAMP). 该方法对哈维氏弧菌的基因组DNA及菌液灵敏度分别为100 fg/μL和103 cfu/mL, 与 Real-time PCR法检测灵敏度相当, 比普通 PCR的检测灵敏度要分别高 1000倍和 10倍, 能有效区分哈维氏弧菌与坎氏弧菌(Vibrio campbellii); 可以实时观察检测结果, 且检测时间只需要 40 min; 具有耗时短、特异性和灵敏度高、仪器便携、操作简单且能实时观察检测结果等优点, 非常适合在生产现场进行哈维氏弧菌的检测. 展开更多
关键词 RT-LAMP 哈维弧菌 卵形鲳鲹 烂身病 快速检测
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大黄与抗生素体外协同抗哈维氏弧菌研究 预览
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作者 郭伟良 陈永贵 +6 位作者 邓恒为 钟志鸿 王菲 王世锋 孙云 陈雪芬 周永灿 《水产科学》 CSCD 北大核心 2018年第6期735-741,共7页
哈维氏弧菌是海水养殖动物主要病原菌之一。采用化学计量学方法筛选体外协同抗哈维氏弧菌的中草药水提液与抗生素。首先采用琼脂扩散法筛选体外具有抗哈维氏弧菌的中草药水提液,然后采用全组合方法筛选与中草药水提液体具有体外协同抗... 哈维氏弧菌是海水养殖动物主要病原菌之一。采用化学计量学方法筛选体外协同抗哈维氏弧菌的中草药水提液与抗生素。首先采用琼脂扩散法筛选体外具有抗哈维氏弧菌的中草药水提液,然后采用全组合方法筛选与中草药水提液体具有体外协同抗哈维氏弧菌的抗生素,再采用中心组合设计试验结合响应面法,考察中草药水提液与多种具有协同抗菌作用的抗生素复合后的交互作用,并给出最佳复合比。试验结果表明,大黄水提液具有体外抗哈维氏弧菌活性,四环素、土霉素和强力霉素分别与大黄水提液具有体外协同抗哈维氏弧菌活性,其最佳复合比为0.07∶0.12∶0.10∶45,模型预测该复方抑菌圈直径为16.07 mm,3次平行试验测定该复方的抑菌直径为(15.90±0.09)mm,与预测值间相对误差为1.06%。 展开更多
关键词 哈维弧菌 中草药 抗生素 响应面法
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哈维氏弧菌拮抗菌WCPW15003的筛选及其适宜生长条件的探究 预览
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作者 于秀起 张越美 +4 位作者 郭聪 杨行 章翔 龙昊 谢珍玉 《海南大学学报:自然科学版》 CAS 2018年第3期255-261,共7页
从海南海水养殖系统中筛选出1株能明显抑制凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)体内哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的菌株WCPW15003,其平均抑菌圈直径为(16. 72±0. 33)mm;经形态学、16S rDNA基因序列分析以及生理生化特性鉴定,该... 从海南海水养殖系统中筛选出1株能明显抑制凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)体内哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的菌株WCPW15003,其平均抑菌圈直径为(16. 72±0. 33)mm;经形态学、16S rDNA基因序列分析以及生理生化特性鉴定,该菌为假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)菌株,其适宜的生长条件为:温度为20~40℃、盐度(NaCl)为0‰~100‰、pH为7~9.在水体中菌液密度为108cfu/mL的条件下,凡纳滨对虾[均重为(2. 0±0. 5)g/尾]没有出现死亡及其他异常现象.本研究结果可为今后开发热带海水病原——哈维氏弧菌的益生菌制剂和探索其施用方法奠定重要的基础. 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 哈维弧菌 假交替单胞菌 益生菌
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海南地区养殖石斑鱼皮肤溃疡病病原的分离、鉴定、药敏分析及病理学研究 预览 被引量:1
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作者 许悦 王印庚 +4 位作者 周永灿 张正 廖梅杰 李彬 梁友 《海南大学学报:自然科学版》 CAS 2018年第2期153-163,共11页
2016年,针对海南岛沿岸9个石斑鱼养殖场的石斑鱼皮肤溃疡病的调查发现,该疾病的发病面积广、死亡率高,对养殖产业的危害严重.从9个采样点3种患病石斑鱼样品的组织中分离得到了9株优势菌株,人工回感试验表明,其感染特征与自然病症一致,... 2016年,针对海南岛沿岸9个石斑鱼养殖场的石斑鱼皮肤溃疡病的调查发现,该疾病的发病面积广、死亡率高,对养殖产业的危害严重.从9个采样点3种患病石斑鱼样品的组织中分离得到了9株优势菌株,人工回感试验表明,其感染特征与自然病症一致,证明这9株菌均为皮肤溃疡病的致病原,在经过生理生化和16S rDNA序列分析后,这9株菌均被鉴定为哈维氏弧菌(Vibrio harveyi).人工回感试验证实,菌株SY-1对珍珠龙胆石斑鱼的毒力最强,其14天每克鱼体重的半致死剂量(LD50值)为7.18×10^4cfu;药敏实验的分析表明,这9株病原菌对34种抗菌药物的药敏谱基本一致,但对氟苯尼考、强力霉素、四环素等药物高度敏感;病理学的研究表明,患病鱼的鳃丝、皮肤、肌肉、肝脏、脾脏、肾脏、肠道和脑等组织器官都发生了不同程度的病理变化,因此认为该病为全身性感染.本研究表明,目前海南地区养殖石斑鱼皮肤溃疡病的致病原有较高的病原同一性,主要为哈维氏弧菌;而较早报道的溶藻弧菌、副溶血弧菌等致病菌的优势度大大降低了,其致病力有所下降,并且与海南地区养殖石斑鱼皮肤溃疡病的相关度不大. 展开更多
关键词 石斑鱼 海水养殖 海南岛 皮肤溃疡病 哈维弧菌 病理学 全身性感染
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