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基于不同PCR方法的Ⅱ型鲤疱疹病毒检测技术研究 被引量:1
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作者 谢亚君 税典章 +3 位作者 吴萍 叶元土 王敏 蒋蓉 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期1018-1025,共8页
异育银鲫“鳃出血病”是一种因感染了鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)而引起的疾病,近年来给江苏异育银鲫养殖业造成了巨大的经济损失。为了能够建立及时、有效检出Ⅱ型鲤疱疹病毒的技术,本研究在克隆了CyHV-2解旋酶基因和三联体蛋白基因的基础... 异育银鲫“鳃出血病”是一种因感染了鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)而引起的疾病,近年来给江苏异育银鲫养殖业造成了巨大的经济损失。为了能够建立及时、有效检出Ⅱ型鲤疱疹病毒的技术,本研究在克隆了CyHV-2解旋酶基因和三联体蛋白基因的基础上,建立了检测CyHV-2的普通PCR、双重PCR、巢式PCR、环介导等温扩增、实时荧光定量PCR等方法,并对这5种PCR技术检测CyHV-2的灵敏性进行了系统研究。结果表明,针对CyHV-2病毒的解旋酶基因和三联体蛋白基因,普通PCR能够检测出的极限值是2.4×10^4copies/μL,双重PCR是1.4×10^4copies/μL,巢式PCR是2.4×10^-2copies/μL,荧光定量PCR是2.4×10^-2copies/μL,环介导等温扩增是3.5×10^2copies/μL。通过采用以上方法对从不同地区采集的54尾异育银鲫提取的DNA为模板进行临床检验,测定不同检测方法的阳性检出率。结果表明,实时荧光定量PCR和巢式PCR的检出率很高,分别为89%和90.7%;普通PCR的检出率最低,为68.5%。综合检测灵敏度和阳性检出率,环介导等温扩增(LAMP)是一种适用于生产实践的能有效检测CyHV-2的良好技术。 展开更多
关键词 Ⅱ型鲤疱疹病毒 双重PCR 巢式PCR 环介导等温扩增 荧光定量PCR
贵州省畜禽源葡萄球菌和链球菌快速鉴定双重PCR方法的建立及应用 预览
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作者 张云丹 马光强 +3 位作者 岳筠 周碧君 文明 程振涛 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第3期873-880,共8页
为建立一种可准确、快速鉴定畜禽临床病例常见病原葡萄球菌和链球菌的双重PCR方法,本试验选取葡萄球菌的nuc基因和链球菌的EF-TU基因保守片段分别设计合成了1对特异性引物,构建可同时快速鉴别葡萄球菌和链球菌的双重PCR体系,并进行反应... 为建立一种可准确、快速鉴定畜禽临床病例常见病原葡萄球菌和链球菌的双重PCR方法,本试验选取葡萄球菌的nuc基因和链球菌的EF-TU基因保守片段分别设计合成了1对特异性引物,构建可同时快速鉴别葡萄球菌和链球菌的双重PCR体系,并进行反应条件优化,筛选出最佳引物浓度和退火温度;应用该方法对其他73株革兰氏阳性临床分离细菌进行检测,评价该方法的特异性;将培养的葡萄球菌和链球菌倍比稀释计数后鉴定检测方法的敏感性;应用该检测方法对贵州省部分畜禽葡萄球菌和链球菌临床分离样本进行检测。结果显示,所建立的方法最佳引物添加量均为1μL,最佳退火温度为56℃;其他73株供试菌株检测结果均无扩增条带出现,所建双重PCR方法具有较好的特异性;敏感性试验结果显示,葡萄球菌和链球菌敏感度分别达1.50ng/μL和1.44pg/μL;临床样本复检结果显示,73株临床分离细菌中葡萄球菌40株(54.79%)、链球菌33株(45.21%),与传统细菌分离鉴定方法的符合率为97.26%。本试验建立了一种特异、敏感和快速鉴定贵州省畜禽葡萄球菌和链球菌病原的双重PCR方法,为临床病例快速诊断及流行病学调查提供了有效技术。 展开更多
关键词 葡萄球菌 链球菌 双重PCR
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鸡细小病毒和鸡新城疫病毒双重PCR检测方法的建立 预览
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作者 奉彬 谢芝勋 +9 位作者 邓显文 张艳芳 谢丽基 谢志勤 范晴 曾婷婷 罗思思 黄娇玲 王盛 刘加波 《动物医学进展》 北大核心 2019年第10期1-5,共5页
旨在建立鸡细小病毒(ChPV)与鸡新城疫病毒(NDV)双重PCR检测方法,参考ChPV NS1基因和NDV F基因的保守区域,设计筛选、合成验证两对ChPV和NDV特异性引物,通过优化其反应体系,以及双重PCR的特异性、敏感性试验来评估建立的ChPV与NDV双重PC... 旨在建立鸡细小病毒(ChPV)与鸡新城疫病毒(NDV)双重PCR检测方法,参考ChPV NS1基因和NDV F基因的保守区域,设计筛选、合成验证两对ChPV和NDV特异性引物,通过优化其反应体系,以及双重PCR的特异性、敏感性试验来评估建立的ChPV与NDV双重PCR检测方法。结果表明,建立的双重PCR同时扩增出687 bp ChPV和453 bp NDV片段,对ChPV与NDV的敏感性分别达到64 fg和25 fg,但对其他对照组病原体均无扩增,对ChPV与NDV混合感染的临床病料的检测结果与各病毒单项PCR检测结果相符。说明建立的ChPV与NDV双重PCR检测方法可用于临床上两种病毒混合感染的快速诊断。 展开更多
关键词 鸡细小病毒 鸡新城疫病毒 双重PCR 特异性 敏感性
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双重PCR检测黄秋葵储藏期间青霉和链格孢菌条件的优化 预览
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作者 董彩文 汤久停 +1 位作者 王浩瑾 吴凯 《粮食与油脂》 北大核心 2019年第4期76-80,共5页
以黄秋葵为材料,分离纯化在贮藏过程中引起腐烂的主要病原真菌青霉和链格孢菌。根据基因库上的序列,针对青霉和链格孢菌在18SRNA的序列设计2对引物,建立了用于检测黄秋葵青霉和链格孢菌双重PCR检测方法,并对PCR扩增条件进行了优化,优化... 以黄秋葵为材料,分离纯化在贮藏过程中引起腐烂的主要病原真菌青霉和链格孢菌。根据基因库上的序列,针对青霉和链格孢菌在18SRNA的序列设计2对引物,建立了用于检测黄秋葵青霉和链格孢菌双重PCR检测方法,并对PCR扩增条件进行了优化,优化条件如下:引物Alt4、Alt5和PenF’、PenR的比例为2∶1、退火温度为52℃、Mg^2+浓度为2.5mmol/L、d NTP浓度为0.08mmol/L、循环数为35、延伸时间为50s、退火时间为30s。结果表明,该方法灵敏度较高、特异性强。该试验可以为黄秋葵在储藏期间的病害防治提供重要指导依据。 展开更多
关键词 黄秋葵 青霉 链格孢菌 双重PCR
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猪圆环病毒1型与2型双重PCR检测方法的建立及应用 预览 被引量:1
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作者 王立娇 胡胜云 +3 位作者 张雪 陈天慧 于红欣 周双海 《北京农学院学报》 2019年第1期61-65,共5页
【目的】建立一种可同时检测猪圆环病毒1型(PCV1)和2型(PCV2)的双重PCR检测方法并进行临床应用.【方法】对PCV1和PCV2的单项PCR方法分别进行条件优化后对两种病毒的双重PCR进行条件优化并进行特异性与敏感性试验,然后用单项PCR方法和双... 【目的】建立一种可同时检测猪圆环病毒1型(PCV1)和2型(PCV2)的双重PCR检测方法并进行临床应用.【方法】对PCV1和PCV2的单项PCR方法分别进行条件优化后对两种病毒的双重PCR进行条件优化并进行特异性与敏感性试验,然后用单项PCR方法和双重PCR对临床样品进行比较检测.【结果】双重PCR检测方法对PCV1和PCV2的检测灵敏度分别为1.7×10^3、4×10^3copies/μL,该方法对当前常见猪源DNA病毒的检测结果都是阴性.该方法对2013-2017年15个猪场的145份断奶仔猪样品的检测结果显示,PCV1和PCV2的个体阳性率分别为11.7%和77.2%,与单项PCR方法检测结果无显著(P>0.05)差异,且两种方法检出的PCV1或PCV2的阳性猪场完全一致;临床样品中PCV2的猪场阳性率与个体阳性率都极显著(P<0.01)高于PCV1.【结论】建立了一种有较高敏感性与特异性的PCV1和PCV2的双重PCR检测方法,当前猪场中PCV2感染较PCV1感染明显占优势. 展开更多
关键词 猪圆环病毒1型 猪圆环病毒2型 双重PCR
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珊瑚病原菌株XSBZ03和XSBZ14双重PCR检测方法的建立
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作者 杨思悦 符亚楠 +2 位作者 龙昊 章翔 谢珍玉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1266-1274,共9页
【目的】建立珊瑚病原菌株XSBZ03和XSBZ14的双重PCR检测方法。【方法】以XSBZ03和XSBZ14的特异靶序列为对象,开展引物设计和双重PCR检测方法的构建,并确定该双重PCR方法的特异性、敏感性及可靠性。【结果】该检测方法可特异识别菌株XSB... 【目的】建立珊瑚病原菌株XSBZ03和XSBZ14的双重PCR检测方法。【方法】以XSBZ03和XSBZ14的特异靶序列为对象,开展引物设计和双重PCR检测方法的构建,并确定该双重PCR方法的特异性、敏感性及可靠性。【结果】该检测方法可特异识别菌株XSBZ03和XSBZ14,对XSBZ03和XSBZ14基因组DNA样品的检测极限分别为1.7 pg/pL和2.0 pg/yL;对XSBZ03和XSBZ14在海水样品中的检测极限分别为6xl03CFU/mL和8xl03CFU/mLo【结论】该方法具有特异性强、灵敏度高等优点,可对由菌株XSBZ03和XSBZ14引起的珊瑚疾病进行准确快速的诊断,为今后开展珊瑚疾病防控和无特定病原的珊瑚移植提供了可靠手段。 展开更多
关键词 珊瑚病原 双重PCR 诊断
基于SRY基因鉴定新疆野兔性别 预览
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作者 张玉琮 代慧英 单文娟 《野生动物学报》 北大核心 2019年第1期83-86,共4页
为得到形态上性别鉴定特征十分缺乏的新疆野兔样本的性别数据,本研究采用双重PCR法同时扩增SRY基因和APP基因,通过分析PCR产物,对采自新疆9个地区共121例未知性别的野兔样本进行性别鉴定。在验证PCR结果的可靠性后,鉴定出雌性样本69例,... 为得到形态上性别鉴定特征十分缺乏的新疆野兔样本的性别数据,本研究采用双重PCR法同时扩增SRY基因和APP基因,通过分析PCR产物,对采自新疆9个地区共121例未知性别的野兔样本进行性别鉴定。在验证PCR结果的可靠性后,鉴定出雌性样本69例,雄性样本52例,性别比例经统计学分析后接近1∶1,符合实际。这为后续研究新疆野兔的物种分类、群体遗传学和分子进化等方面提供了基础数据,也在兔类资源的管理保护和开发利用方面有着一定的实际意义。 展开更多
关键词 新疆野兔 SRY基因 双重PCR 性别鉴定
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鸭瘟病毒和番鸭细小病毒双重PCR检测方法的建立及应用
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作者 吴专伟 饶体宇 +6 位作者 鲜思美 彭庆波 张友 包细明 李婷 张益 吴伯梅 《中国家禽》 北大核心 2019年第12期17-21,共5页
为建立一种能同时鉴别鸭瘟病毒(DPV)和番鸭细小病毒(MDPV)的双重PCR方法,根据DPV UL6基因和MDPV NS-VP1基因分别设计并合成两对特异性引物,通过对双重PCR反应的引物浓度和退火温度优化,建立了能快速检测DPV和MDPV的双重PCR方法,并对该... 为建立一种能同时鉴别鸭瘟病毒(DPV)和番鸭细小病毒(MDPV)的双重PCR方法,根据DPV UL6基因和MDPV NS-VP1基因分别设计并合成两对特异性引物,通过对双重PCR反应的引物浓度和退火温度优化,建立了能快速检测DPV和MDPV的双重PCR方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行验证。结果表明:设计的两对特异性引物均能扩增出目的条带,其大小分别约为376 bp和624 bp;优化引物浓度组合为:DPV引物1.0μmol/L,MDPV引物2.5μmol/L,最佳退火温度为52.4℃。DPV和MDPV的核酸最低检出量分别为4 pg和173 pg,建立的双重PCR分别对鹅细小病毒、禽流感病毒、新城疫病毒、鸭疫里默氏杆菌、沙门菌、大肠杆菌、葡萄球菌、鸭源巴氏杆菌核酸扩增结果均呈阴性;对实验室保存的9份临床病料检测结果DPV检出率33.3%(3/9),MDPV检出率55.6%(5/9)。综上所述,建立的双重PCR方法特异性强、敏感性和稳定性较好,为DPV和MDPV的临床病料检测提供了技术支撑。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 番鸭细小病毒 双重PCR
PCV3和PCV2双重PCR鉴别诊断方法的建立及应用 预览
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作者 杨克礼 焦祖武 +3 位作者 郭锐 周丹娜 段正赢 田永祥 《现代畜牧兽医》 2019年第3期1-6,共6页
本研究根据GenBank中报道的PCV2和PCV3毒株全基因组序列,设计两对特异性引物,建立了一种多重PCR鉴别诊断方法,两种病毒的预期扩增片段分别大小分别为1 007 bp和505 bp。通过对扩增条件的优化,获得最佳的反应体系为25μL体系,最佳退火温... 本研究根据GenBank中报道的PCV2和PCV3毒株全基因组序列,设计两对特异性引物,建立了一种多重PCR鉴别诊断方法,两种病毒的预期扩增片段分别大小分别为1 007 bp和505 bp。通过对扩增条件的优化,获得最佳的反应体系为25μL体系,最佳退火温度为56℃。该鉴别方法可以同时扩增PCV3和PCV2的特异性片段,而猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、轮状病毒(RV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪德尔塔冠状病毒的基因组及阴性对照均未扩增出任何条带。该方法对PCV3和PCV2的最低检出量均为10 ng/μL。对采自湖北省内规模化猪场的260份淋巴结样品检测。结果显示,PCV3阳性率为16.9%(44/260),PCV2阳性率为46.5%(121/260),PCV3和PCV2混合感染率为4.6%(12/260),双重PCR检测与测序分析的符合率为100%。结果表明,本研究建立了一种简便、灵敏、稳定可靠且特异性强的双重PCR鉴别诊断方法,可为临床样品中PCV3和PCV2的快速鉴别诊断及流行病学研究提供技术支持。 展开更多
关键词 猪环病毒3型 猪圆环病毒2型 双重PCR 鉴别诊断 流行病学
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鸡柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法的建立 预览
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作者 范现成 马峋 +3 位作者 张会军 唐欢 宋军科 赵光辉 《动物医学进展》 北大核心 2019年第2期17-21,共5页
为了建立一种能够快速实现对鸡柔嫩艾美耳球虫( Eimeria tenella )和巨型艾美耳球虫( E.maxima )同时进行检测的双重PCR方法,基于2种艾美耳球虫各自的ITS-1基因筛选2对特异性引物,对制备的阳性DNA样品进行PCR扩增,凝胶电泳检测结果显示... 为了建立一种能够快速实现对鸡柔嫩艾美耳球虫( Eimeria tenella )和巨型艾美耳球虫( E.maxima )同时进行检测的双重PCR方法,基于2种艾美耳球虫各自的ITS-1基因筛选2对特异性引物,对制备的阳性DNA样品进行PCR扩增,凝胶电泳检测结果显示,分别在约450 bp和150 bp处出现目的条带。对PCR反应中的退火温度、MgCl 2浓度、DNA模板量等进行优化。结果表明,当退火温度为59 ℃、MgCl 2浓度为2.5 mmol/L、DNA模板量为2 μL时,双重PCR扩增结果最佳。特异性检测结果显示,所建立的双重PCR对环形泰勒虫、羊巴贝斯虫、隐孢子虫和蓝氏贾第虫的扩增结果均呈阴性,表明建立的方法具有较高的特异性。成功建立了柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法,为临床中鸡球虫病的快速诊断提供了一种可靠的检测方法。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 巨型艾美耳球虫 双重PCR
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羊梭菌病快速鉴别PCR方法的建立及初步应用 预览
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作者 李田美 吴正双 +1 位作者 许大伟 姜艳芬 《动物医学进展》 北大核心 2019年第7期20-25,共6页
根据GenBank已公布的产气荚膜梭菌和腐败梭菌的α毒素基因序列,分别设计并合成针对2种α毒素基因的特异性引物,通过扩增条件的优化,建立快速鉴别产气荚膜梭菌和腐败梭菌的双重PCR方法。特异性试验显示,产气荚膜梭菌和腐败梭菌参考菌株... 根据GenBank已公布的产气荚膜梭菌和腐败梭菌的α毒素基因序列,分别设计并合成针对2种α毒素基因的特异性引物,通过扩增条件的优化,建立快速鉴别产气荚膜梭菌和腐败梭菌的双重PCR方法。特异性试验显示,产气荚膜梭菌和腐败梭菌参考菌株均扩增出了相应的预期目的条带,而大肠埃希菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌和链球菌则均未能扩增出相应条带。灵敏度试验结果显示,产气荚膜梭菌和腐败梭菌基因组DNA最低检测量分别为17.95pg/μL和1.261pg/μL。应用该方法对样品进行检测,其中5份为产气荚膜梭菌阳性。成功建立了特异性强、敏感性高的双重PCR方法,可以有效进行产气荚膜梭菌和腐败梭菌的快速鉴别,对羊梭菌病病原快速鉴定及流行病学调查具有重要意义。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 腐败梭菌 Α毒素 鉴别 双重PCR
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山羊痘病毒与小反刍兽疫病毒双重PCR检测方法的建立 预览
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作者 王璐瑶 宫英阑 +3 位作者 郝雪飘 王建昌 张若曦 袁万哲 《中国动物检疫》 CAS 2019年第11期72-76,共5页
为建立一种灵敏、准确、快速的山羊痘病毒(GTPV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)双重PCR检测方法,根据GenBank上登录的GTPV、PPRV两种病毒的基因序列设计检测引物,在常规PCR基础上,对反应条件及反应体系进行优化,建立了这两种病毒的双重PCR检测... 为建立一种灵敏、准确、快速的山羊痘病毒(GTPV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)双重PCR检测方法,根据GenBank上登录的GTPV、PPRV两种病毒的基因序列设计检测引物,在常规PCR基础上,对反应条件及反应体系进行优化,建立了这两种病毒的双重PCR检测方法,并进行了特异性、敏感性检验。结果显示:仅GTPV和PPRV核酸样品扩增出与预期目标相符的目的片段,而其他病原对照均未出现目的条带;GTPV的最低检出量为0.283ng/μL,PPRV的最低检出量为6.459ng/μL。结果表明,本研究建立的双重PCR检测方法可一次性同时完成PPRV、GTPV两种病原的检测,且具有较高的特异性和敏感性。本方法的建立为山羊痘和小反刍兽疫的临床诊断、流行病学研究、疫情监测提供了技术支持。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 小反刍兽疫病毒 双重PCR 特异性 敏感性
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鸡毒支原体与鸡滑液囊支原体双重PCR检测方法的建立 预览 被引量:1
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作者 杨斌 朝洛门 +7 位作者 陈志鹏 苏日娜 张月梅 宋越 萨娜 萨日盖 萨茹丽 赵世华 《畜牧与饲料科学》 2019年第2期12-15,共4页
为建立能同时检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum, MG)和鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)的双重PCR诊断方法,该研究根据GenBank 中登录的MG gapA基因序列和MS heat shock ATP-dependent protease基因序列,设计2对特异性引... 为建立能同时检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum, MG)和鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)的双重PCR诊断方法,该研究根据GenBank 中登录的MG gapA基因序列和MS heat shock ATP-dependent protease基因序列,设计2对特异性引物,通过对PCR扩增条件的优化,建立了能够同时检测MG和MS的双重PCR诊断方法。特异性检测结果显示,该方法能够扩增出729 bp的MG和309 bp的MS特异性片段,对禽巴氏杆菌、大肠杆菌、鸡白痢沙门菌、副鸡禽杆菌核酸扩增均为阴性;敏感性检测结果显示,对MG和MS DNA的最低检出量均为5×10^-2 ng/μL;临床样品的检测结果显示,所建立的双重PCR方法可同时有效地检测出MG、MS混合感染和单独感染。该研究建立的鸡毒支原体与鸡滑液囊支原体双重PCR方法具有良好的特异性、敏感性、重复性,为快速、高效检测MG和MS提供了技术支持。 展开更多
关键词 鸡毒支原体 鸡滑液囊支原体 双重PCR
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大鼠冠状病毒和仙台病毒的双重PCR检测方法的建立与应用 预览
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作者 孟钰榕 郑龙 +7 位作者 祝岩波 王璇 尤红煜 刘健敏 栗彦宁 连伟光 张东明 王俊霞 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期181-186,共6页
目的建立快速检测实验大鼠冠状病毒和仙台病毒的双重PCR方法。方法根据大鼠冠状病毒N基因、仙台病毒L基因设计特异性引物;经过双重PCR优化,特异性和敏感性的检测,建立双重PCR体系。应用该PCR体系检测人工感染仙台病毒组织DNA样本和实验... 目的建立快速检测实验大鼠冠状病毒和仙台病毒的双重PCR方法。方法根据大鼠冠状病毒N基因、仙台病毒L基因设计特异性引物;经过双重PCR优化,特异性和敏感性的检测,建立双重PCR体系。应用该PCR体系检测人工感染仙台病毒组织DNA样本和实验动物组织样本,并与ELISA方法比对。结果双重PCR扩增出大鼠冠状病毒(168bp)和仙台病毒(262bp)目的条带,PCR扩增产物测序结果利用核酸BLAST功能进行同源序列对比,仙台病毒和大鼠冠状病毒同源性分别为100%和99%。仙台病毒和大鼠冠状病毒的检测下限为1.56×10^2copies/μL。特异性检测对小鼠肝炎病毒扩增,产生片段大小近似大鼠冠状病毒产物。应用建立的双重PCR体系检测人工感染仙台病毒组织DNA样本,30份DNA标本均被检出;检测94份实验动物肺组织样本,结果均阴性。结论建立的双重PCR方法操作简单、快速、特异性强、灵敏度高,能够实现对实验动物仙台病毒和大鼠冠状病毒病原体的快速检测。 展开更多
关键词 大鼠冠状病毒 仙台病毒 双重PCR
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猪圆环病毒2型和3型双重PCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 徐朋丽 赵宇 +5 位作者 张宇 韩昊莹 张鸿鑫 郑慧华 田润博 陈红英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期25-30,共6页
猪圆环病毒3型(PCV3)是一种新的猪圆环病毒,与猪皮炎和肾病综合征、母猪繁殖障碍及心脏和多系统炎症相关。为了建立一种同时快速检测猪圆环病毒2型(PCV2)和PCV3的双重PCR方法,根据GenBank收录的PCV2和PCV3基因序列,分别在PCV2 Cap基因和... 猪圆环病毒3型(PCV3)是一种新的猪圆环病毒,与猪皮炎和肾病综合征、母猪繁殖障碍及心脏和多系统炎症相关。为了建立一种同时快速检测猪圆环病毒2型(PCV2)和PCV3的双重PCR方法,根据GenBank收录的PCV2和PCV3基因序列,分别在PCV2 Cap基因和PCV3 Rep基因高度同源保守区设计并筛选2对特异性引物,经过双重PCR反应条件的优化,建立了同时检测PCV2/3的双重PCR检测方法。本方法可同时扩增出PCV2、PCV3的486,270bp特异性片段,而扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)等病原核酸结果均为阴性;PCV2/3最低检出量分别为139,21.7拷贝/μL。经临床应用表明,本试验建立的双重PCR方法简便、快速,敏感度高,特异性强,为PCV2/3的鉴别诊断和联合检测提供了依据。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪圆环病毒3型 双重PCR
水产品中创伤弧菌和副溶血弧菌双重PCR检测方法的建立
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作者 胡元庆 钟颖 李凤霞 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2019年第7期831-835,849共6页
目的建立一种同步检测创伤弧菌和副溶血弧菌的双重PCR方法。方法选择副溶血弧菌tlh基因和创伤弧菌vvhA基因作为靶序列各设计一对引物。用合成的引物对副溶血弧菌和创伤弧菌进行双重PCR扩增,确定特异性和最低检出限。然后用此方法对53株... 目的建立一种同步检测创伤弧菌和副溶血弧菌的双重PCR方法。方法选择副溶血弧菌tlh基因和创伤弧菌vvhA基因作为靶序列各设计一对引物。用合成的引物对副溶血弧菌和创伤弧菌进行双重PCR扩增,确定特异性和最低检出限。然后用此方法对53株副溶血弧菌和7株创伤弧菌进行检测。结果确定了双重PCR检测创伤弧菌和副溶血弧菌的最优反应条件,其中退火温度为60℃,方法具有较好的特异性。对副溶血弧菌的最低限为1.0×10~2 CFU/mL,创伤弧菌最低限为4.2×10~4 CFU/mL。双重PCR对分离株检测符合率达100%。结论建立的双重PCR方法简便、快速、特异性好,可同时检测副溶血弧菌和创伤弧菌,为水产品中病原菌的基层检测提供解决方案。 展开更多
关键词 创伤弧菌 副溶血弧菌 双重PCR
马梨形虫病双重PCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 瓦热斯·吐尔松 王振宝 +4 位作者 阿兵 宋瑞琪 刘世芳 闻秀秀 巴音查汗 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2018年第15期120-123,共4页
为了建立马梨形虫病双重PCR检测方法,试验根据Gen Bank发表的驽巴贝斯虫和马泰勒虫18S rRNA保守基因序列分别合成2对特异性引物,以核酸混合物为模板,优化反应条件建立马梨形虫病双重PCR检测方法,并检验该方法的特异性和敏感性。同时用... 为了建立马梨形虫病双重PCR检测方法,试验根据Gen Bank发表的驽巴贝斯虫和马泰勒虫18S rRNA保守基因序列分别合成2对特异性引物,以核酸混合物为模板,优化反应条件建立马梨形虫病双重PCR检测方法,并检验该方法的特异性和敏感性。同时用该双重PCR检测方法对采自昭苏种马场的马疑似病例全血进行检测,并与镜检法和单重PCR法进行比较。结果表明:该双重PCR检测方法能对驽巴贝斯虫和马泰勒虫核酸扩增出大小为529 bp和789 bp特异性目的片段,而对双芽巴贝斯虫、环形泰勒虫、羊泰勒虫、牛巴贝斯虫核酸的扩增均为阴性;驽巴贝斯虫和马泰勒虫阳性DNA被稀释1×108倍时均能检出其相应目的片段;对采集的46份马疑似病例血样进行PCR诊断,其中驽巴贝斯虫感染率为30.4%(14/46),马泰勒虫感染率为41.3%(19/46);双重PCR检测方法与单重PCR方法的符合率为100%。说明建立的双重PCR检测方法具有一定的特异性和敏感性,可用于驽巴贝斯虫和马泰勒虫临床感染隐性病例的联合检测与鉴别诊断。 展开更多
关键词 马泰勒虫 驽巴贝斯虫 单重PCR 双重PCR 建立
检测牛传染性鼻气管炎病毒和牛支原体的双重PCR方法的建立及应用 被引量:1
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作者 张颖慧 王牧川 +1 位作者 张斌 汤承 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第7期824-829,共6页
牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)是引起牛呼吸道疾病综合征(BRDC)的常见病原,临床上多见混合感染。本试验的目的是建立同时检测IBRV和M.bovis的双重PCR方法。通过设计引物、优化反应体系及条件,... 牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)是引起牛呼吸道疾病综合征(BRDC)的常见病原,临床上多见混合感染。本试验的目的是建立同时检测IBRV和M.bovis的双重PCR方法。通过设计引物、优化反应体系及条件,成功建立了同时检测IBRV和M.bovis的双重PCR方法。该方法具有良好的特异性和稳定性,且对IBRV和牛支原体的检测下限分别为2.03×10^4copies/L和1.65×10^4copies/L,灵敏度较好。利用该方法对四川省7个肉牛养殖场67份疑似BRDC样本进行检测,结果显示,IBRV和M.bovis阳性率分别为46.27%和32.84%,其中IBRV和M.bovis混合感染率为19.40%,表明四川省肉牛养殖场IBRV和M.bovis感染情况较普遍。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 牛支原体 双重PCR
猪圆环病毒2型和3型双重PCR检测方法的建立与应用 预览 被引量:2
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作者 季程远 王蔚怡 +5 位作者 黄欣 方庆励 欧阳康 陈樱 韦祖樟 黄伟坚 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期913-916,共4页
为建立一种快速且同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)和3型(PCV3)的方法,本研究根据GenBank中PCV2和 PCV3的全基因组序列,设计了两对特异性引物,通过对扩增条件的优化,建立了能够同时检测PCV2和PCV3的双重PCR方法。该方法可以同时扩增... 为建立一种快速且同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)和3型(PCV3)的方法,本研究根据GenBank中PCV2和 PCV3的全基因组序列,设计了两对特异性引物,通过对扩增条件的优化,建立了能够同时检测PCV2和PCV3的双重PCR方法。该方法可以同时扩增PCV2的266 bp和PCV3 的594 bp特异性片段,而对猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪瘟病毒、猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒和猪流行性腹泻病毒的基因组扩增结果均为阴性。对PCV2和PCV3的最低检出量均为100拷贝/μL。对广西境内100份健康屠宰猪淋巴结样品检测结果显示,单一PCR与双重PCR检测符合率为100 %。结果表明,本研究建立了一种简便快捷、反应灵敏、稳定可靠且特异性强的双重PCR技术,为临床样品中PCV2和PCV3的快速检测提供了有效的技术支持。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪圆环病毒3型 双重PCR 检测
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双重PCR结合EMA检测副溶血性弧菌及携带trh相关毒性的活菌细胞 预览
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作者 刘月苹 吕淑霞 +1 位作者 李雪彤 林英 《核农学报》 CSCD 北大核心 2018年第8期1580-1587,共8页
为建立一种有效鉴别副溶血性弧菌及trh相关毒性活菌细胞的方法,本研究针对副溶血性弧菌种属特异的tlh基因以及trh毒性基因设计引物进行双重PCR检测,采用双重PCR与DNA染料叠氮溴化乙锭(EMA)结合,在鉴定副溶血性弧菌活细胞的同时检测tr... 为建立一种有效鉴别副溶血性弧菌及trh相关毒性活菌细胞的方法,本研究针对副溶血性弧菌种属特异的tlh基因以及trh毒性基因设计引物进行双重PCR检测,采用双重PCR与DNA染料叠氮溴化乙锭(EMA)结合,在鉴定副溶血性弧菌活细胞的同时检测trh毒性。结果表明,该检测方法对海产品中的副溶血性弧菌及trh相关毒性活菌细胞的检测具有特异性,且灵敏度较高。在浓度为2.0×10^8CFU·m L^-1,EMA浓度为1.0~8.0μg·m L^-1的副溶血性弧菌悬液中,EMA激活光解20 min时,可抑制死菌细胞DNA的双重PCR扩增而不能抑制活菌细胞DNA的双重PCR扩增,从而实现副溶血性弧菌活细胞及trh基因相关毒性的鉴别。本研究建立的方法可以特异、高效的针对副溶血性弧菌及trh相关毒性活菌细胞进行检测,为食品检测提供了参考依据。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 毒性 活细胞 双重PCR 叠氮溴化乙锭
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