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衰老对大鼠骨骼肌组织内质网氧化还原酶-1αDNA甲基化的影响 预览
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作者 熊建团 杨松昊 +5 位作者 张辉 杨安宁 朱光荣 蒋袁絮 杨晓玲 姜怡邓 《宁夏医科大学学报》 2019年第5期440-445,共6页
目的探讨衰老对大鼠骨骼肌组织内质网氧化还原酶-1α(ERO1α)DNA甲基化与内质网应激及凋亡相关蛋白表达的影响。方法以6月龄大鼠为成年组,18月龄大鼠为老年组,每组10只,建立动物模型。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot方法... 目的探讨衰老对大鼠骨骼肌组织内质网氧化还原酶-1α(ERO1α)DNA甲基化与内质网应激及凋亡相关蛋白表达的影响。方法以6月龄大鼠为成年组,18月龄大鼠为老年组,每组10只,建立动物模型。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot方法分别检测成年组与老年组大鼠骨骼肌组织中凋亡相关基因Bcl-2、Caspase 3、Caspase 9、Caspase 12和内质网应激相关基因ATF6、CHOP、GRP78、XBP-1的mRNA和蛋白表达水平;qRT-PCR和Western blot检测ERO1α的mRNA和蛋白表达水平;巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)法检测ERO1αDNA甲基化水平的改变。结果与成年组比较,老年组大鼠骨骼肌组织中Bcl-2 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.01),Caspase 3、Caspase 9、Caspase 12的mRNA和蛋白表达水平均升高(P均<0.01);老年组内质网应激相关指标ATF6的mRNA表达改变与成年组比较差异无统计学意义(P>0.05),而ATF6蛋白表达水平增加(P<0.001);CHOP、GRP78、XBP-1的mRNA和蛋白表达水平较均成年组升高(P均<0.01);老年组大鼠骨骼肌组织中ERO1αmRNA和蛋白表达水平均降低(P均<0.01),而ERO1αDNA甲基化水平升高(P<0.01)。结论衰老大鼠骨骼肌组织ERO1αDNA高甲基化与内质网应激及凋亡相关蛋白的表达水平改变及骨骼肌细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 内质网氧化还原酶-1α 骨骼肌细胞 DNA甲基化 凋亡 衰老 大鼠
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ERO1α介导同型半胱氨酸诱导的肝细胞内质网应激 预览 被引量:2
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作者 周龙霞 杨安宁 +7 位作者 陈久凯 赵丽 王艳华 刘现梅 蔡欣 张鸣号 姜怡邓 曹军 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2014年第34期5228-5234,共7页
目的:探讨内质网氧化还原酶-1α(endoplasmic reticulum oxidoreductin 1α,ERO1α)在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导的肝细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)中的作用及机制.方法:培养人肝细胞,用Hcy(100... 目的:探讨内质网氧化还原酶-1α(endoplasmic reticulum oxidoreductin 1α,ERO1α)在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导的肝细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)中的作用及机制.方法:培养人肝细胞,用Hcy(100μmol/L)干预,同时设对照组,使用酶联免疫法(ELISA)检测ERS相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucoseregulated protein 78,GRP78)、X盒结合蛋白-1(X-box binding protein-1,XBP-1)、内质网类似激酶(protein kinase RNA-like endoplasmic r e t i c u l u m k i n a s e,P E R K)及激活转录因子6(activating transcription factor 6,ATF6)的水平;用不同浓度Hcy(0、50、100、200、500μmol/L)和100μmol/L Hcy+叶酸+维生素B12(VB12)干预,运用实时定量PCR和Western blot检测ERO1αm RNA和蛋白水平;构建ERO1α基因重组质粒和RNA干扰片段并感染肝细胞,检测ERO1αm RNA和蛋白表达变化;采用ELISA法检测其对ERS相关蛋白的调控作用.结果:与对照组比较,Hcy组GRP78、ATF6、P E R K、X B P-1水平升高(P〈0.01,P〈0.01,P〈0.05,P〈0.01);不同浓度Hcy干预后,肝细胞内ERO1αm RNA及蛋白水平呈下降趋势,且随着Hcy浓度的增加而减少(P〈0.01),呈剂量依赖关系;将ERO1α重组质粒转染肝细胞后,ERO1αm RNA及蛋白表达明显增加(P〈0.01);将三个不同的ERO1αsi RNA片段转染肝细胞后,ERO1αm RNA及蛋白表达降低(P〈0.01),其中si RNA2作用最明显(P〈0.01);与Hcy组相比,Hcy+p ERO1α组GRP78、XBP-1、PERK及ATF6均明显降低(P〈0.01),而Hcy+si RNA2组均明显升高(P〈0.01).结论:Hcy可能通过下调ERO1α引起肝细胞GRP78-XBP-1/PERK/ATF6表达增加促进ERS发生. 展开更多
关键词 同型半胱氨酸 内质网应激 内质网氧化还原酶-1α 肝细胞 GRP78-XBP-1/PERK/ATF6
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内质网氧化还原酶1α表达下调对结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和自噬的影响
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作者 王国琴 张旭明 +4 位作者 王胜超 吴敏 李云峰 黄尤光 张洪涛 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期325-334,共10页
目的:探讨敲减内质网氧化还原酶1α(endoplasmic reticulum oxidoreduclin1α,ERO 1α)基因表达对结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和自噬的影响,以及其潜在的作用机制。方法:利用TCGA(e Cancer Genome Atlas)数据库检索ERO1αmRNA在结肠癌... 目的:探讨敲减内质网氧化还原酶1α(endoplasmic reticulum oxidoreduclin1α,ERO 1α)基因表达对结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和自噬的影响,以及其潜在的作用机制。方法:利用TCGA(e Cancer Genome Atlas)数据库检索ERO1αmRNA在结肠癌组织中的表达情况;应用蛋白质印迹法检测结肠癌细胞株SW480、RKO、SW620、HCT116和HT29中ERO1α蛋白的表达水平。分别构建含ERO1α-shRNA的重组慢病毒(shERO1α组)及其对照(shCtrl组)并感染结肠癌RKO细胞,72 h后用荧光显微镜评估两组细胞的慢病毒感染效率;采用蛋白质印迹法检测病毒感染后细胞中ERO1α的表达水平;采用FCM法检测细胞凋亡,并用蛋白质印迹法检测凋亡相关分子的表达;用Cellomics细胞计数仪检测细胞增殖,并采用平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;采用Transwell小室法检测细胞迁移能力;最后,采用蛋白质印迹法检测细胞自噬关键分子的表达。结果:结肠癌组织中ERO1αmRNA表达水平明显高于相应的癌旁组织(P<0.001)。结肠癌RKO细胞中ERO1α蛋白表达水平相对最高。成功构建shERO1α重组慢病毒,其对RKO细胞的感染效率超过80%。与对照组shCtrl相比,shERO1α可有效敲减ERO1α基因的表达(P<0.01)。ERO1α敲减促使细胞凋亡率升高(P<0.05),Caspase-3表达水平上调(P<0.01),Bcl-2表达水平下调(P<0.01)。ERO1α敲减使结肠癌RKO细胞的增殖、克隆形成和迁移能力均明显降低(P值均<0.01)。ERO1α敲减细胞中自噬相关蛋白LC3和Beclin 1的表达水平明显升高(P值均<0.05),而P62蛋白表达水平明显下调(P<0.05)。结论:ERO1α在结肠癌组织和细胞株中呈高丰度表达。ERO 1α基因敲减促进结肠癌细胞凋亡,抑制细胞增殖和迁移,并促使细胞自噬水平增高,表明ERO1α在结肠癌恶性进展中发挥重要作用。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 内质网应激 细胞凋亡 自噬 内质网氧化还原酶1α
小鼠ERO1α基因慢病毒干扰载体的构建与鉴定 预览
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作者 陈风雷 胡佳慧 +3 位作者 戴安娜 刘婉洋 屈玉杏 许显玉 《动物医学进展》 北大核心 2019年第11期28-35,共8页
针对小鼠ERO1α基因构建短发卡RNA(Short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体。根据NCBI中小鼠ERO1α基因序列,设计3条针对ERO1α的shRNA序列和1条阴性对照shRNA序列。将shRNA序列连接到慢病毒载体pCD513B-U6上,同时进行PCR鉴定及测序,分别... 针对小鼠ERO1α基因构建短发卡RNA(Short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体。根据NCBI中小鼠ERO1α基因序列,设计3条针对ERO1α的shRNA序列和1条阴性对照shRNA序列。将shRNA序列连接到慢病毒载体pCD513B-U6上,同时进行PCR鉴定及测序,分别命名为pCD513B-ERO1α-shRNA和pCD513B-NC-shRNA。将构建好的重组质粒和包装辅助质粒共转染HEK 293T细胞,包装产生慢病毒。将所得病毒悬液进行浓缩,同时梯度稀释转导HEK 293T细胞,检测病毒滴度。浓缩后的慢病毒转导RAW 264.7细胞,通过RT-qPCR和Western blot技术进行有效片段的筛选。之后,将筛选的慢病毒转到多种细胞系或者原代细胞,用RT-qPCR和Western blot技术检测ERO1α基因的表达情况。PCR及测序结果表明,重组慢病毒干扰载体pCD513B-ERO1α-shRNA构建成功,所包装的慢病毒其病毒滴度为5×10^7 TU/mL~10×10^7 TU/mL。RT-qPCR和Western blot结果表明,pCD513B-ERO1α-shRNA-3抑制ERO1α表达的效果最好,干扰效率在80%左右。pCD513B-ERO1α-shRNA-3能够转导多种细胞,并显著抑制ERO1α的表达,干扰效率在70%~90%。成功构建针对小鼠ERO1α基因的shRNA重组慢病毒载体,为进一步研究ERO1α功能奠定了技术基础。 展开更多
关键词 内质网氧化还原酶1α 慢病毒载体 SHRNA
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ERO1L蛋白在胃癌组织中表达水平变化及临床意义 预览 被引量:1
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作者 张勇刚 宋卫东 李伟 《解放军医药杂志》 CAS 2016年第12期48-51,共4页
目的 探讨了内质网氧化物蛋白(ERO1L)在胃癌组织中的表达变化以及与患者预后的关系。方法选取2009年6月—2011年6月接受胃癌根治术的128例患者的胃癌组织作为研究对象,并选择相同患者的癌旁无病变组织作为对照。采用实施荧光定量PCR、... 目的 探讨了内质网氧化物蛋白(ERO1L)在胃癌组织中的表达变化以及与患者预后的关系。方法选取2009年6月—2011年6月接受胃癌根治术的128例患者的胃癌组织作为研究对象,并选择相同患者的癌旁无病变组织作为对照。采用实施荧光定量PCR、Western blot和免疫组织化学分析肿瘤组织和癌旁组织ERO1L mRNA和蛋白质表达水平。并分析ERO1L蛋白的表达水平与胃癌患者预后的关系。结果 与癌旁组织比较,胃癌组织中ERO1L mRNA和蛋白质水平明显增加(P〈0.05)。ERO1L蛋白主要表达于细胞质中,经评定其中102例ERO1L表达呈阳性,26例表达呈阴性。ERO1L阳性组患者术后1、3和5年的累积生存率明显低于阴性组(P〈0.05)。结论ERO1L在胃癌组织中呈高表达状态,并与患者预后密切相关。 展开更多
关键词 内质网氧化还原酶1L 基因表达 胃肿瘤 预后
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内质网氧化还原酶1-Lα在高血压血管内皮损伤中的作用 预览 被引量:2
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作者 王李瑶 路静 +5 位作者 张建忠 董俭达 曹相玫 郭凤英 贺茂涛 景丽 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期824-827,共4页
目的探讨内质网氧化还原酶1-Lα( Ero1-Lα)在高血压导致内皮细胞损伤中的变化,从而进一步阐明内质网应激在高血压发生发展过程中的重要作用。方法利用不同浓度血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)持续刺激培养的人脐静脉内皮细胞( HUVECs)24 ... 目的探讨内质网氧化还原酶1-Lα( Ero1-Lα)在高血压导致内皮细胞损伤中的变化,从而进一步阐明内质网应激在高血压发生发展过程中的重要作用。方法利用不同浓度血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)持续刺激培养的人脐静脉内皮细胞( HUVECs)24 h模拟高血压状态。利用MTT法检测细胞的凋亡率。利用免疫荧光化学和Western blot法检测Ero1-Lα在内皮细胞中的表达。结果 AngⅡ作用24 h后的HUVECs出现凋亡。随着AngⅡ的浓度升高,HUVECs的凋亡增加,Ero1-Lα的Western blot表达和免疫荧光平均光密度值明显上升。结论 AngⅡ可诱导HUVECs凋亡,Ero1-Lα的高表达参与了AngⅡ诱导的HUVECs凋亡。 展开更多
关键词 血管紧张素Ⅱ 内皮细胞损伤 内质网氧化还原酶1-Lα
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