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内皮细胞蛋白C受体在造血干细胞中作用的研究进展
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作者 王夕妍 杨仁池 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2019年第3期259-263,共5页
内皮细胞蛋白C受体(EPCR)是蛋白C抗凝系统成分之一,在抗凝调节、细胞保护等方面具有重要意义。研究发现,EPCR是造血干细胞(HSC)的表面标志物之一,可被用于HSC的分选、纯化。EPCR可通过蛋白酶活化受体(PAR)1信号通路等途径,参与HSC及其... 内皮细胞蛋白C受体(EPCR)是蛋白C抗凝系统成分之一,在抗凝调节、细胞保护等方面具有重要意义。研究发现,EPCR是造血干细胞(HSC)的表面标志物之一,可被用于HSC的分选、纯化。EPCR可通过蛋白酶活化受体(PAR)1信号通路等途径,参与HSC及其微环境的调节,介导HSC在骨髓中的保留和造血功能重建。笔者拟就EPCR在HSC分选及纯化中的应用,以及EPCR对于HSC的调节作用及其相关机制的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 内皮细胞 造血干细胞 蛋白酶活化受体1 内皮细胞蛋白C受体 蛋白C 活化蛋白C
白藜芦醇修复内皮细胞氧化损伤抑制促血栓分子表达的作用和机制 预览
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作者 何卫 娄振凯 +3 位作者 王兵 李兴国 赵冲宇 赵学凌 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第3期464-469,共6页
背景:相关研究表明,白藜芦醇具有抗氧化、抑制动脉血栓的作用。目的:探讨白藜芦醇保护内皮细胞氧化损伤,抑制深静脉血栓形成的分子作用。方法:使用人脐静脉内皮细胞进行传代培养;实验分3组:①对照组为正常培养液中培养24h;②H2O2组在培... 背景:相关研究表明,白藜芦醇具有抗氧化、抑制动脉血栓的作用。目的:探讨白藜芦醇保护内皮细胞氧化损伤,抑制深静脉血栓形成的分子作用。方法:使用人脐静脉内皮细胞进行传代培养;实验分3组:①对照组为正常培养液中培养24h;②H2O2组在培养液中加入200μmol/LH2O2培养24h;③H2O2+白藜芦醇组:先分别予以10,20,30μmol/L的白藜芦醇预处理2h,再加入200μmol/LH2O2培养24h。采用MTT法检测细胞活力;Hoechst33258染色法、荧光显微镜观察细胞凋亡;Westernblot检测P-选择素、P-选择素糖蛋白配体1、血管性血友病因子及PI3-K/Akt/GSK3β、NF-κB信号通路关键蛋白表达。结果与结论:①与对照组相比,H2O2能够诱导内皮细胞损伤,白藜芦醇对H2O2诱导的内皮细胞损伤具有修复作用(P<0.05);②与对照组相比,H2O2组细胞凋亡率明显增加(P<0.05);与H2O2组相比,H2O2+白藜芦醇组细胞凋亡率明显减少(P<0.05);③与对照组相比,H2O2组P-选择素、P-选择素糖蛋白配体1、血管性血友病因子、NF-κB和GSK3β蛋白的表达显著上调(P<0.05),Akt总蛋白无明显变化(P>0.05),pAkt蛋白表达下调(P<0.05);与H2O2组相比,H2O2+白藜芦醇组上述蛋白表达被逆转(P<0.05);④结果表明,白藜芦醇能够修复静脉内皮细胞氧化损伤,对P-选择素、P-选择素糖蛋白配体1、血管性血友病因子蛋白表达具有抑制作用,其机制可能与PI3-K/Akt/GSK3β、NF-κB信号通路相关。 展开更多
关键词 白藜芦醇 内皮细胞 氧化应激 国家自然科学基金 组织构建 藜芦属 内皮细胞 氧化性应激 静脉血栓形成 组织工程
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天然牛磺酸对肝硬化门静脉高压大鼠门静脉血流动力学及内皮细胞的影响 预览
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作者 文彬 赵晓芳 +4 位作者 陈然 杨义维 黎莹莹 梁健 邓鑫 《广西医学》 CAS 2019年第2期202-205,共4页
目的探讨天然牛磺酸对肝硬化门静脉高压(PHT)大鼠门静脉系统血流动力学及内皮细胞的影响。方法建立肝硬化PHT大鼠模型。将45只肝硬化PHT大鼠随机分为对照组、结合牛磺酸组(A组)及天然牛磺酸组(B组),每组15只。A组给予结合牛磺酸灌胃,B... 目的探讨天然牛磺酸对肝硬化门静脉高压(PHT)大鼠门静脉系统血流动力学及内皮细胞的影响。方法建立肝硬化PHT大鼠模型。将45只肝硬化PHT大鼠随机分为对照组、结合牛磺酸组(A组)及天然牛磺酸组(B组),每组15只。A组给予结合牛磺酸灌胃,B组给予天然牛磺酸灌胃,对照组给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃。21d后,比较3组大鼠门静脉血流量(PVF)、门静脉压力(PVP)、门静脉阻力(PVR)、平均动脉压(MAP)以及肝脏血流灌注量(HPV)水平,并在超微电镜下观察门静脉内皮细胞超微结构。结果A组及B组PVP、PVR、PVF均低于对照组(均P<0.05);对照组、A组、B组MAP、HPV水平依次升高(P<0.05)。电镜下可见对照组门静脉内皮细胞变性或脱落,基底膜完整性遭破坏,A组及B组内皮细胞结构完整,B组基底膜正常。结论天然牛磺酸可减轻肝硬化门脉高压大鼠门静脉压力,改善效应内皮细胞的超微结构,且其效果优于结合牛磺酸。 展开更多
关键词 肝硬化 门静脉高压 天然牛磺酸 结合牛磺酸 血流动力学 内皮细胞 大鼠
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二巯基丁二酸修饰的Fe3O4纳米颗粒对人血管内皮细胞的作用研究 预览
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作者 杜丽帆 张宇 +4 位作者 杨爱云 温涛 刘健 孟洁 许海燕 《北京生物医学工程》 2019年第3期221-226,共6页
目的研究二巯基丁二酸修饰的Fe3O4纳米颗粒(dimercaptosuccinic acid-magnetite nanoparticles,DMSA-Fe3O4)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)功能的影响。方法利用动态光散射法表征DMSA-Fe3O4的粒径... 目的研究二巯基丁二酸修饰的Fe3O4纳米颗粒(dimercaptosuccinic acid-magnetite nanoparticles,DMSA-Fe3O4)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)功能的影响。方法利用动态光散射法表征DMSA-Fe3O4的粒径及表面电荷;采用普鲁士蓝染色、邻二氮菲铁定量和透射电镜观察方法研究HUVECs对DMSA-Fe3O4的摄取规律;利用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测DMSA-Fe3O4对内皮细胞活性的影响;通过酶联免疫吸附试剂盒测定DMSA-Fe3O4对内皮细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)分泌量的影响。结果HUVECs能够大量吞噬DMSA-Fe3O4,其吞噬量具有孵育时间和剂量依赖性;短时间内所测剂量范围DMSA-Fe3O4对细胞活性无显著影响,但长时间高剂量条件使细胞活性明显降低。此外,在高剂量DMSA-Fe3O4暴露下(200μg/mL),内皮细胞分泌VEGF的量约为对照组的3倍。结论DMSA-Fe3O4易于被HUVECs吞噬;高浓度DMSA-Fe3O4与HUVECs长时间培养使细胞活性降低,并刺激内皮细胞分泌VEGF。 展开更多
关键词 FE3O4纳米颗粒 内皮细胞 吞噬 血管内皮生长因子
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EPCs移植对缺血再灌注肾损伤大鼠血管内皮生长因子的影响 预览
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作者 周丽娜 王玉新 +1 位作者 武挺 方林 《医学理论与实践》 2019年第2期160-162,159共4页
目的:探讨EPCs移植对缺血再灌注肾损伤大鼠血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:雄性SD大鼠22头,随机分为3组:对照组、I/R组、EPCs组,术后1d处死各组大鼠,抽取外周血培养及鉴定内皮祖细胞,抽血检测大鼠的生化指标,采用RT-PCR技术测... 目的:探讨EPCs移植对缺血再灌注肾损伤大鼠血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:雄性SD大鼠22头,随机分为3组:对照组、I/R组、EPCs组,术后1d处死各组大鼠,抽取外周血培养及鉴定内皮祖细胞,抽血检测大鼠的生化指标,采用RT-PCR技术测定三组大鼠VEGF mRNA的表达情况,行病理染色观察各组大鼠肾间质血管CD34的表达情况。结果:EPCs移植上调缺血再灌注大鼠VEGF mRNA的表达并改善了该组大鼠的肾功能,减轻了肾间质血管内皮细胞的损伤。结论:EPCs移植减轻大鼠缺血再灌注肾损伤可能与上调VEGF的表达有关。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 内皮细胞 缺血再灌注损伤 内皮细胞
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替米沙坦对同型半胱氨酸诱导内皮细胞炎症损伤及对p38MAPK通路的影响
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作者 吴刚 袁华兵 陈腊梅 《中国药师》 CAS 2019年第5期809-813,共5页
目的:探讨替米沙坦对同型半胱氨酸诱导内皮细胞炎症损伤及对p38MAPK通路的影响。方法:设MS^-1内皮细胞组(MS^-1内皮细胞)、同型半胱氨酸组(5 mg·L^-1同型半胱氨酸+MS^-1内皮细胞)、替米沙坦组(5 mg·L^-1同型半胱氨酸+50 mg... 目的:探讨替米沙坦对同型半胱氨酸诱导内皮细胞炎症损伤及对p38MAPK通路的影响。方法:设MS^-1内皮细胞组(MS^-1内皮细胞)、同型半胱氨酸组(5 mg·L^-1同型半胱氨酸+MS^-1内皮细胞)、替米沙坦组(5 mg·L^-1同型半胱氨酸+50 mg·L^-1替米沙坦+MS^-1内皮细胞),培养结束后,检测各组细胞活力和凋亡率、G1期水平、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平、p-p38MAPK mRNA及蛋白水平、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、半胱氨酸蛋白酶-6(caspase-6)、半胱氨酸蛋白酶-9(caspase-9)蛋白表达水平。结果:与MS^-1内皮细胞组比较,同型半胱氨酸组和替米沙坦组活力、G1期水平显著降低(P<0.05);凋亡率、IL-2、IL-6、TNF-α蛋白水平、p-p38MAPK mRNA及蛋白水平、caspase-3、caspase-6、caspase-9蛋白水平显著升高(P<0.05)。与同型半胱氨酸组比较,替米沙坦组活力、G1期水平显著升高(P<0.05);凋亡率、IL-2、IL-6、TNF-α蛋白水平、p-p38MAPK mRNA及蛋白水平、caspase-3、caspase-6、caspase-9蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论:替米沙坦对同型半胱氨酸诱导的内皮细胞炎症损伤具有保护作用,其机制与替米沙坦抑制p38MAPK炎症信号通路的激活及抑制内皮细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 替米沙坦 同型半胱氨酸 内皮细胞 炎症损伤 P38MAPK
重组人促红细胞生成素抑制内皮细胞凋亡的实验研究 预览
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作者 庞睿 《科学技术创新》 2019年第10期66-67,共2页
目的:探究分析重组人促红细胞生成素对脂多糖诱导的人脐静脉血内皮细胞凋亡的影响并分析其相关机制方法:取人脐静脉血内皮细胞,将其分为四组,分别命名为实验1组、实验2组、实验3组及对照组.实验1组使用脂多糖处理,实验2组先使用重组人... 目的:探究分析重组人促红细胞生成素对脂多糖诱导的人脐静脉血内皮细胞凋亡的影响并分析其相关机制方法:取人脐静脉血内皮细胞,将其分为四组,分别命名为实验1组、实验2组、实验3组及对照组.实验1组使用脂多糖处理,实验2组先使用重组人促红细胞生成素进行孵育后再使用脂多糖处理,实验3组使用重组人促红细胞血管生成素处理,对照组则使用不含有血清的M199进行培养,对四组细胞的凋亡情况进行检测分析。结果:实验1组细胞的DNA亚二倍体含量显著高于对照组,而实验2组细胞的DNA亚二倍体含量高于对照组而低于实验1组,组间均存在具有统计学意义的差异(P<0.05).实验3组的DNA亚二倍体含量与对照组相较无显著差异(P>0.05).结论:重组人促红细胞生成素对由脂多糖诱导的内皮细胞凋亡具有较大的抑制作用,其体现为一种保护性的效果,这样的作用机制可能促使重组人促红细胞生成素作用于内皮细胞的生长及血管的生成。 展开更多
关键词 重组人促红细胞生成素 抑制 内皮细胞 凋亡
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NF-κB p65对OX-LDL处理的内皮祖细胞增殖活性的影响及机制研究 预览
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作者 刘洁 罗展雄 陈祖平 《中国现代医学杂志》 CAS 2019年第13期25-30,共6页
目的研究核因子κB p65(NF-кB p65)对氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)处理的内皮祖细胞增殖活性的影响及机制。方法分离培养人内皮祖细胞,用OX-LDL细胞培养液培养后,分别用实时荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blotting检测细胞中NF-κBp... 目的研究核因子κB p65(NF-кB p65)对氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)处理的内皮祖细胞增殖活性的影响及机制。方法分离培养人内皮祖细胞,用OX-LDL细胞培养液培养后,分别用实时荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blotting检测细胞中NF-κBp65 mRNA及蛋白水平。用NF-κB p65 siRNA慢病毒感染内皮祖细胞,给予OX-LDL处理以后,qRT-PCR和Western blotting检测干扰效果。MTT检测内皮祖细胞的增殖活性,流式细胞术检测内皮祖细胞的凋亡变化,Western blotting检测细胞中活化的Caspase-3、Caspase-9蛋白水平,用比色法检测细胞裂解液中的超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。结果OX-LDL处理可以诱导内皮祖细胞中NF-κB p65表达上调。NF-κB p65 siRNA慢病毒可以下调OX-LDL条件下内皮祖细胞中NF-кBp65的表达水平。OX-LDL处理后的内皮祖细胞的增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中活化的Caspase-3、Caspase-9蛋白水平也升高,细胞中SOD活性降低,MDA含量升高(P<0.05)。敲低NF-κB p65后的内皮祖细胞经OX-LDL诱导后,细胞增殖活性有所升高,细胞凋亡率降低,细胞中活化的Caspase-3、Caspase-9蛋白水平降低,SOD活性升高,MDA含量降低(P<0.05)。结论敲低NF-κB p65能够降低OXLDL诱导的氧化应激及细胞凋亡,提高内皮祖细胞增殖活性。 展开更多
关键词 心血管疾病 内皮细胞 氧化性应激 NF-ΚBP65 细胞增殖 细胞凋亡
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超声联合微泡对内皮细胞一氧化氮合酶磷酸化程度的影响
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作者 吴玉鹏 李岩峰 马逸 《生物医学工程与临床》 CAS 2019年第1期14-18,共5页
目的探索超声联合微泡对内皮细胞一氧化氮合酶(e NOS)磷酸化程度的影响。方法将人脐静脉内皮细胞分为3组(对照组、单纯超声组、超声微泡组),超声微泡组给予超声(频率1 MHz,输出功率100 k Pa,占空比20%)联合微泡(500μL)刺激2 min,单纯... 目的探索超声联合微泡对内皮细胞一氧化氮合酶(e NOS)磷酸化程度的影响。方法将人脐静脉内皮细胞分为3组(对照组、单纯超声组、超声微泡组),超声微泡组给予超声(频率1 MHz,输出功率100 k Pa,占空比20%)联合微泡(500μL)刺激2 min,单纯超声组给予单纯超声(频率1 MHz,输出功率100 kPa,占空比20%)刺激2 min,对照组无任何干预。应用Western blot方法检测磷酸化一氧化氮合酶(S1177)[p-eNOS(S1177)]和总e NOS表达、4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色检测细胞核数目及台盼蓝染色检测3组细胞存活率。结果3组总e NOS相对表达量分别为1.00±0.09、1.00±0.11、0.99±0.02,差异无统计学意义(P>0.05)。3组p-eNOS(S1177)相对表达量分别为0.41±0.10、0.49±0.08、0.98±0.05,与对照组和单纯超声组比较,超声微泡组p-eNOS(S1177)表达水平显著升高(P<0.05)。p-eNOS(S1177)与总e NOS的比值亦显著升高(P<0.05)。而3组细胞存活率、细胞核数量及细胞核形态未见明显差异(P>0.05)。结论超声联合微泡可以促进e NOS磷酸化、p-eNOS(S1177)表达增加,并且不会对内皮细胞的存活产生影响;为临床应用超声联合微泡治疗微血管阻塞提供了理论基础,也为心血管疾病的治疗提供一个新思路。 展开更多
关键词 超声 微泡 内皮细胞 一氧化氮合酶 磷酸化
肿瘤外泌体在微环境细胞间通讯中的作用及其作为肿瘤标志物的研究进展 预览
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作者 王留军 曾韬(综述) 王越(审校) 《临床检验杂志》 CAS 2019年第5期338-341,共4页
外泌体(exosome)是一种起源于内吞体系统的细胞外囊泡,是微环境中细胞间通讯的重要载体。肿瘤细胞在肿瘤进展过程中可以通过外泌体与微环境的免疫细胞、间质细胞和内皮细胞之间发生相互作用进而促进肿瘤进展。肿瘤外泌体中可以携带蛋白... 外泌体(exosome)是一种起源于内吞体系统的细胞外囊泡,是微环境中细胞间通讯的重要载体。肿瘤细胞在肿瘤进展过程中可以通过外泌体与微环境的免疫细胞、间质细胞和内皮细胞之间发生相互作用进而促进肿瘤进展。肿瘤外泌体中可以携带蛋白质、脂质和核酸等形式的生物信息分子,这些分子既可以对受体细胞进行驯化作用,同时有可能成为肿瘤特异性标志物,在肿瘤临床检验中发挥重要作用,因此,外泌体的研究已成肿瘤基础和临床检验研究中重要的新领域。该文就肿瘤外泌体在微环境中的多种细胞相互作用机制及其作为特异性肿瘤标志物的研究现状和前景作一概述。 展开更多
关键词 外泌体 免疫细胞 间质细胞 内皮细胞 肿瘤发生
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雄激素调节雄激素受体/血管内皮生长因子改善去势大鼠勃起功能障碍的机制
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作者 矫阳田 崔凯 +10 位作者 李瑞 刘康 李浩 张岩 陈智 袁彗星 李明超 王涛 蓝儒竹 刘继红 饶可 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第19期1502-1506,共5页
目的探究雄激素调节阴茎海绵体雄激素受体/血管内皮生长因子(AR/VEGF)改善去势大鼠勃起功能障碍的机制。方法40只健康8周龄SD雄性大鼠随机分成4组:A组为正常对照组;B组为实验组,给予手术切除双侧睾丸;C、D组为干预组,手术去势后每天给... 目的探究雄激素调节阴茎海绵体雄激素受体/血管内皮生长因子(AR/VEGF)改善去势大鼠勃起功能障碍的机制。方法40只健康8周龄SD雄性大鼠随机分成4组:A组为正常对照组;B组为实验组,给予手术切除双侧睾丸;C、D组为干预组,手术去势后每天给予不同浓度的十一酸睾酮(安特尔)灌胃(C组:10mg/kg,D组:20mg/kg)。治疗8周后,检测大鼠血清睾酮浓度,海绵体测压评价大鼠勃起功能,采用免疫组化染色和Western印迹检测各组大鼠阴茎海绵体AR和VEGF的表达。结果B组血清睾酮水平[(1.3±0.6)nmol/L]明显低于A组[(17.1±1.5)nmol/L](P<0.05),补充睾酮后,C组[(8.7±1.2)nmol/L]、D组[(15.5±1.6)nmol/L]血清睾酮水平高于B组,海绵体测压显示B组最大阴茎海绵体内压/平均动脉压(MaxICP/MAP)明显小于A组、C组、D组,D组>C组(均P<0.05);免疫组化和Western印迹显示B组AR、VEGF蛋白表达水平明显小于A组、C组、D组,D组>C组(均P<0.05)。结论应用十一酸睾酮进行雄激素替代治疗可以通过调节AR/VEGF表达保护内皮细胞完整性从而改善去势大鼠勃起功能。 展开更多
关键词 雄激素 内皮细胞 去势 勃起功能障碍
高氟暴露降低人血管内皮细胞紧密连接蛋白ZO-1表达及其机制的初步研究
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作者 孙丽艳 王丽华 苑立军 《中华地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期288-292,共5页
目的观察高氟暴露对人血管内皮细胞紧密连接胞质带状闭合蛋白1(ZO-1)表达的影响,并初步探讨其机制。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞,采用成组设计,分别设置0.0(对照组)和0.4、0.8、1.2mg/L氟处理组(低、中、高剂量组),以及胰岛素样... 目的观察高氟暴露对人血管内皮细胞紧密连接胞质带状闭合蛋白1(ZO-1)表达的影响,并初步探讨其机制。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞,采用成组设计,分别设置0.0(对照组)和0.4、0.8、1.2mg/L氟处理组(低、中、高剂量组),以及胰岛素样生长因子-1(IGF-1)组[加入1.2mg/L的氟离子(F-)前,预先加入100nmol/L的IGF-1处理2h],各组细胞培养24h,提取细胞蛋白,应用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组细胞中ZO-1、磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化AKT(p-AKT)的表达并进行分析。结果对照,低、中、高剂量组间内皮细胞中ZO-1的表达(0.063±0.002、0.043±0.007、0.039±0.004、0.028±0.007)比较差异有统计学意义(F=21.36,P<0.01);各加氟处理组ZO-1的表达均显著低于对照组(P均<0.05);高剂量组ZO-1的表达显著低于低、中剂量组(P均<0.05)。对照,低、中、高剂量组间内皮细胞中PI3K表达(0.032±0.004、0.031±0.002、0.017±0.001、0.017±0.005)和p-AKT与AKT表达比(p-AKT/AKT:0.745±0.046、0.806±0.007、0.666±0.058、0.641±0.040)比较差异有统计学意义(F=20.38、9.57,P<0.01或<0.05);其中高剂量组PI3K表达和p-AKT/AKT均显著低于对照组和低剂量组(P均<0.05);中剂量组p-AKT/AKT显著低于低剂量组(P<0.05)。加入PI3K/AKT通路的激动剂IGF-1后,IGF-1组内皮细胞中ZO-1的表达(0.055±0.015)高于高剂量组(P<0.05)。结论高氟暴露可通过PI3K/AKT信号途径引起血管内皮细胞ZO-1的表达降低。 展开更多
关键词 内皮细胞 紧密连接
腺苷激酶小干扰RNA修饰的角膜内皮细胞诱导调节性T细胞的增生和分泌 预览
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作者 张万红 焦惠英 +1 位作者 阮燕飞 刘元真 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期337-341,共5页
目的探讨腺苷激酶(ADK)小干扰RNA(siRNA)修饰的角膜内皮细胞诱导调节性T细胞(Treg)增生和分泌的作用。方法取第3~5代人角膜内皮细胞,实验分为转染组和未转染组,转染组采用Lipofectamine■ 3000将FAM-ADK siRNA转染进入角膜内皮细胞,采... 目的探讨腺苷激酶(ADK)小干扰RNA(siRNA)修饰的角膜内皮细胞诱导调节性T细胞(Treg)增生和分泌的作用。方法取第3~5代人角膜内皮细胞,实验分为转染组和未转染组,转染组采用Lipofectamine■ 3000将FAM-ADK siRNA转染进入角膜内皮细胞,采用高效液相色谱法检测各组中腺苷的质量浓度。实验分为对照组[转染对照siRNA]、雷帕霉素组(转染对照siRNA后培养液中加入10 ng/ml雷帕霉素)和ADK siRNA组(转染ADK siRNA后培养液中加入10 ng/ml雷帕霉素),采用TUNEL染色检测细胞凋亡比例;采用流式细胞术检测内皮细胞表面细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)和E-选择素的表达。实验分为单独培养组(单纯淋巴细胞培养)、共培养组(淋巴细胞与角膜内皮细胞共培养)和ADK siRNA组(淋巴细胞与ADK siRNA转染的角膜内皮细胞共培养),流式细胞术检测各组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的比例;ELISA法检测各组上清液中白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β(TGF-β)的质量浓度。结果流式细胞术检测结果显示,95.1%的角膜内皮细胞表达siRNA,转染组上清液中腺苷的质量浓度为(38.020±6.658)ng/ml,较对照组的(1.663±0.581)ng/ml明显升高,差异有统计学意义(t=5.437,P=0.006)。TUNEL染色结果显示,雷帕霉素组角膜内皮细胞平均凋亡率较对照组明显升高,ADK siRNA组角膜内皮细胞平均凋亡率较雷帕霉素组明显降低,差异均有统计学意义(t=3.763,P=0.020;t=4.405,P=0.012)。流式细胞术检测结果显示,ADK siRNA组ICAM-1、VCAM-1和E-选择素的平均荧光强度分别为4.060±1.179、3.600±1.234和5.223±1.734,明显弱于对照组的11.600±2.427、11.030±2.291和24.270±4.332,差异均有统计学意义(t=2.794,P=0.049;t=2.857,P=0.046;t=4.081,P=0.015)。单独培养组、共培养组和ADK siRNA组淋巴细胞中Treg细胞比例总体比较,差异有统计学意义(F=12.890,P=0.007),其中ADK siRNA组淋巴细胞中Treg细胞的比例较共� 展开更多
关键词 腺苷激酶 角膜移植 内皮细胞 调节性T细胞
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利拉鲁肽对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞与单核细胞黏附的影响及作用机制
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作者 李虎 束庆 +2 位作者 杨贤 罗雪梅 严思敏 《中国医师杂志》 CAS 2019年第6期830-834,839共6页
目的探究利拉鲁肽对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞与单核细胞黏附的抑制作用及其机制。方法以高糖(20 mmol/L)诱导的内皮细胞为实验对象,加入不同浓度利拉鲁肽(0、0. 3、3、30 nmol/L)预孵育不同时间,将荧光染料标记的单核细胞与内皮细胞... 目的探究利拉鲁肽对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞与单核细胞黏附的抑制作用及其机制。方法以高糖(20 mmol/L)诱导的内皮细胞为实验对象,加入不同浓度利拉鲁肽(0、0. 3、3、30 nmol/L)预孵育不同时间,将荧光染料标记的单核细胞与内皮细胞共育1 h,随后用M199培养基洗去未黏附的细胞,并用荧光酶标仪检测内皮细胞和单核细胞的黏附状况;用qRT-PCR和ELISA法分别检测黏附分子VCAM-1、ICAM-1的mRNA和蛋白表达;用Western-blot法检测IκBα含量、磷酸化程度以及NF-κB p65亚基在细胞质和细胞核的分布情况;用GST-IκBα为底物检测IKK激酶活力。结果高糖刺激可显著增加内皮细胞与单核细胞的黏附(P <0. 01);显著增加内皮细胞黏附分子VCAM-1、ICAM-1的mRNA和蛋白表达(P <0. 05,P <0. 01);显著增加IKK激酶活力(P <0. 01)、IκBα的磷酸化(P <0. 01)以及NF-κB p65亚基在细胞核中的分布(P <0. 05),显著降低IκBα含量(P <0. 01)。利拉鲁肽可浓度依赖地抑制高糖刺激所产生的上述作用(P <0. 05,P <0. 01)。结论利拉鲁肽可能通过抑制IKK激酶的活性,阻断IκBα的磷酸化及NF-κB的质核移位,进而抑制内皮细胞黏附分子mRNA和蛋白的表达,从而影响内皮细胞和单核细胞的黏附。 展开更多
关键词 利拉鲁肽 内皮细胞 单核细胞 细胞黏附 体外研究
神经调节蛋白-1对脓毒症大鼠心肌血管内皮和心脏功能的影响
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作者 康文 王龙 +2 位作者 王倩文 沈成 王晞 《临床急诊杂志》 CAS 2019年第7期521-527,共7页
目的:研究神经调节蛋白-1(NRG-1)对脓毒症大鼠心肌血管内皮细胞及心功能的影响。方法:将雄性SD大鼠(220~280g)25只随机分为脓毒症组(n=10)、NRG组(n=10)、Sham组(n=5)。采用腹腔注射脂多糖(LPS)10mg/kg建立脓毒症模型,NRG组于术后4h和24... 目的:研究神经调节蛋白-1(NRG-1)对脓毒症大鼠心肌血管内皮细胞及心功能的影响。方法:将雄性SD大鼠(220~280g)25只随机分为脓毒症组(n=10)、NRG组(n=10)、Sham组(n=5)。采用腹腔注射脂多糖(LPS)10mg/kg建立脓毒症模型,NRG组于术后4h和24h尾静脉注射重组人神经蛋白-1(rhNRG-1),0.01μg/g。术后48h检测各组大鼠血流动力学,心肌形态学及超微结构改变,检测血清一氧化氮(NO)含量和细胞间黏附分子-1(ICAM-1))水平,免疫荧光法检测心肌组织血管性血友病因子(vWF)表达情况。结果:与Sham组比较,脓毒症组大鼠光镜下可见心肌纤维排列紊乱和炎性细胞浸润,超微结构可见心肌细胞和线粒体肿胀,嵴断裂甚至消失,NRG组心肌纤维排列较整齐,少量炎性细胞浸润,心肌细胞和线粒体轻度肿胀;血流动力学参数Sham组为MAP(140.30±8.51)mmHg、LVSP(138.50±9.67)mmHg、LVEDP(9.37±0.65)mmHg、+dP/dt max(3418.21±226.10)mmHg/s、-dP/dt max(-3455.00±131.28)mmHg/s、HR(469.50±53.25)次,脓毒症组为MAP(46.97±4.06)mmHg、LVSP(97.17±5.38)mmHg、LVEDP(14.60±0.71)mmHg、+dP/dt max(2219.32±220.50)mmHg/s、-dP/dt max(-1345.05±170.20)mmHg/s、HR(444.50±86.67)次,NRG组为MAP(100.30±10.52)mmHg、LVSP(115.10±6.53)mmHg、LVEDP(4.41±1.25)mmHg、+dP/dt max(3009.49±106.41)mmHg/s、-dP/dt max(-2311.67±157.20)mmHg/s、HR(435.40±83.75)次,脓毒症组与Sham组相比,MAP、LVSP和±dP/dt max降低(P<0.05),LVEDP升高(P<0.05),HR无明显改变(P>0.05);NRG组与脓毒症组相比,MAP、LVSP和±dP/dt max升高(P<0.05),LVEDP降低(P<0.05),HR无明显改变(P>0.05);血清NO含量Sham组为(6.17±1.42)pg/ml,脓毒症组为(7.66±0.78)pg/ml,NRG组为(3.55±0.78)pg/ml,脓毒症组与Sham组间及NRG组与脓毒症组间差异均有统计学意义(P<0.05);血清ICAM-1含量Sham组为(338.593±14.701)pg/ml,脓毒症组为(959.597±55.206)pg/ml,NRG组为(605.010±23.646)pg/ml,脓毒症组与Sham组间及NRG组与脓毒症组间差异均有统计学意义(P<0.05);心肌血� 展开更多
关键词 脓毒症 神经调节蛋白-1 内皮细胞 心肌损伤
Cinaciguat对高糖损伤血管内皮细胞功能的影响
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作者 李艳英 张梅 +1 位作者 李亚楠 班博 《中华全科医学》 2019年第7期1093-1096,共4页
目的糖尿病状态下,一氧化氮(NO)与可溶性鸟苷酸环化酶(soluble guanylatecyclase,sGC)均被氧化,使NO-sGC-环磷酸鸟苷(cGMP)信号通路传导异常,NO-sGC-cGMP信号通路异常是糖尿病血管内皮功能障碍的重要病理基础。可溶性鸟苷酸环化酶激活剂... 目的糖尿病状态下,一氧化氮(NO)与可溶性鸟苷酸环化酶(soluble guanylatecyclase,sGC)均被氧化,使NO-sGC-环磷酸鸟苷(cGMP)信号通路传导异常,NO-sGC-cGMP信号通路异常是糖尿病血管内皮功能障碍的重要病理基础。可溶性鸟苷酸环化酶激活剂(cinaciguat,CIN)可激活失活的sGC进而起到保护血管内皮细胞功能的作用。本研究通过体外实验制造高糖内皮细胞损伤模型,观察CIN对人脐静脉内皮细胞功能的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞,并将细胞分为正常对照组、高糖组、CIN干预组,每组6例。高糖组及CIN干预组均加入33.3 mmol/L的葡萄糖制造高糖细胞损伤模型,而CIN组同时加入0.1μmol/L CIN干预。各组细胞在培养6、24、48 h时,检测上清液中的NO水平及细胞内一氧化氮合酶(NOS)浓度;培养48 h后RT-PCR检测细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达;培养48 h后Western blotting检测细胞间粘附分子-1(ICAM-1)及血管粘附分子-1(VCAM-1)蛋白的表达。结果与正常对照组相比,高糖组NO、NOS含量呈现早期升高晚期下降的趋势,而CIN组上述趋势消失;与正常组比较,高糖组内皮细胞的eNOS mRNA表达水平降低(P<0.05),iNOS mRNA、ICAM-1与VCAM-1蛋白表达明显升高(P<0.05),而CIN组eNOS mRNA表达水平较高糖组明显升高(P<0.05),iNOS、ICAM-1与VCAM-1蛋白的表达水平明显降低(P<0.05)。结论 CIN可平衡NOS的活性,调节NO的生成及ICAM-1与VCAM-1的表达,改善高糖状态下内皮细胞的功能。 展开更多
关键词 可溶性鸟苷酸环化酶 一氧化氮 高糖损伤 内皮细胞
蓬乱蛋白2干扰和过表达慢病毒载体的构建及其在hUVECs中的表达 预览
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作者 生欣 王俊华 +3 位作者 刘月华 郜双林 谢夏丹 范芳 《中国现代医学杂志》 CAS 2019年第1期15-22,共8页
目的获得蓬乱蛋白2(DVL2)基因干扰和过表达慢病毒表达系统,并在人脐静脉内皮细胞中(hUVECs)稳定表达。方法①聚合酶链反应扩增目的基因,设计合成shRNA,以慢病毒表达质粒为基础构建DVL2干扰和过表达载体,酶切电泳、实时荧光定量聚合酶链... 目的获得蓬乱蛋白2(DVL2)基因干扰和过表达慢病毒表达系统,并在人脐静脉内皮细胞中(hUVECs)稳定表达。方法①聚合酶链反应扩增目的基因,设计合成shRNA,以慢病毒表达质粒为基础构建DVL2干扰和过表达载体,酶切电泳、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和测序技术鉴定载体构建是否成功;②以3质粒系统在HEK293T细胞中包装病毒,通过荧光显微镜观察计数并计算病毒滴度;以嘌呤霉素筛选稳定转染的hUVECs,通过荧光显微镜观察计数获得转染效率。将感染好的细胞分为BC组(hUVECs空白对照)、NC组(HBLV-GFP-PURO阴性对照)、干扰组(pHB-shRNA-HDVL2)及过表达组(pHBLV-HDVL2)。③通过qRT-PCR与Western blotting检测分别从mRNA和蛋白表达水平验证目的基因的干扰和过表达水平。结果①插入慢病毒表达载体的基因片段与目的基因的碱基序列完全一致。干扰序列峰形图为单峰,无突变。②病毒包装后,NC组、干扰组、过表达组滴度分别为2×10^8、2×10^8和1×10^8TU/ml,感染人脐静脉内皮细胞的感染效率达98%。③干扰组DVL2的表达较BC组降低,差异有统计学意义(P<0.05),过表达组较BC组升高,差异有统计学意义(P<0.05),其中干扰效率为61%,蛋白质过表达水平为BC组的2.7倍。结论DVL2基因干扰和过表达慢病毒载体构建成功,并能够在原代hUVECs中稳定表达。 展开更多
关键词 蓬乱蛋白2/Wnt蛋白质类 慢病毒载体 内皮细胞 RNA干扰 过表达
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Notch信号通路在血管功能调控中的作用研究进展 预览
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作者 林康 罗泽宇 +7 位作者 高原 潘益凯 李程飞 石菲 曹新生 赵疆东 胡泽兵 王永春 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第3期264-268,296共6页
目的:正常的血管系统是维持内环境稳定和细胞生长代谢的基础,其功能的维持由多个内外因素共同决定,血管内皮生长因子(VEGF)、Wnt/β-catenin、Notch、促血管生成素Ⅰ/Ⅱ(Ang-Ⅰ/Ⅱ)等多个信号通路对血管发育的各个阶段产生重要影响,其中... 目的:正常的血管系统是维持内环境稳定和细胞生长代谢的基础,其功能的维持由多个内外因素共同决定,血管内皮生长因子(VEGF)、Wnt/β-catenin、Notch、促血管生成素Ⅰ/Ⅱ(Ang-Ⅰ/Ⅱ)等多个信号通路对血管发育的各个阶段产生重要影响,其中Notch信号通路作为人体内一条进化上十分保守的传导通路,在血管功能调控中起着特殊的作用。本文就近年来Notch信号通路对血管内皮细胞(VECs)和血管平滑肌细胞(SMCs)的调节作用的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 NOTCH 信号通路 心血管 平滑肌细胞 内皮细胞 基因调控
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回转模拟失重对共培养体系血管内皮细胞Notch3信号通路相关蛋白表达的影响 预览
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作者 潘益凯 李程飞 +6 位作者 孟欣 高原 石菲 赵疆东 杨长斌 孙喜庆 王永春 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第3期269-273,278共6页
目的:探讨模拟失重条件下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)和人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)共培养的细胞模型体系中HUVECs的Notch3信号通路相关蛋白表达。方法:分别取HUVECs和HASMCs,分为正常重力组和模拟失重组,共培养48h时,观察HUVECs形态;提... 目的:探讨模拟失重条件下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)和人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)共培养的细胞模型体系中HUVECs的Notch3信号通路相关蛋白表达。方法:分别取HUVECs和HASMCs,分为正常重力组和模拟失重组,共培养48h时,观察HUVECs形态;提取两组HUVECs细胞的总蛋白,采用Westernblot技术检测Notch3、Jagged1、c-Src和RBP-Jκ蛋白表达。结果:共培养48h时,正常重力组HUVECs细胞呈现为多角形、以“铺路石”样紧密排列,模拟失重组HUVECs则多为圆形、边角变钝;与正常重力组比较,模拟失重组HUVECs中Notch通路相关蛋白Notch3、Jagged1、c-Src及RBP-Jκ的表达显著降低(P<0.05)。结论:模拟失重可引起共培养模型中HUVECs细胞Jagged1和Notch3的蛋白表达降低,其机制可能与c-Src表达降低有关。 展开更多
关键词 失重模拟 内皮细胞 平滑肌细胞 共培养 NOTCH3
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微粒体在缺血性卒中的作用 预览
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作者 周蕾 吴冬雨 +5 位作者 姚小梅 时彦莹 朱宪策 黄晶 王春雪 张宁 《中国卒中杂志》 2019年第6期619-624,共6页
在血管内皮功能障碍、急慢性血管炎症和高凝状态下均可发现由血小板、白细胞和内皮细胞释放的微粒体.不同种类的微粒体在缺血性卒中病理过程中的作用有所不同:缺血性卒中患者外周血白细胞微粒升高,高水平的白细胞微粒体能加重血管内皮... 在血管内皮功能障碍、急慢性血管炎症和高凝状态下均可发现由血小板、白细胞和内皮细胞释放的微粒体.不同种类的微粒体在缺血性卒中病理过程中的作用有所不同:缺血性卒中患者外周血白细胞微粒升高,高水平的白细胞微粒体能加重血管内皮细胞损伤,血浆中长期及高水平的血小板微粒体可诱导微血管血栓形成.另外,不同种类的微粒体均能反映血管内皮损伤的程度,诱导内皮细胞功能失调,加重内皮功能障碍,同时微粒体中携带的信使RNA和微小核糖核酸等能促进内皮细胞增殖,促进动脉粥样硬化斑块内新生血管生成,使斑块更易破裂出血. 展开更多
关键词 微粒体 缺血性卒中 内皮细胞 血栓形成
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