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猪NLRP6蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备 预览
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作者 杨文静 李玉鹏 +5 位作者 梁冬梅 王倩 杨升 乔家运 姚胜宁 李海花 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第9期2707-2714,共8页
试验旨在表达、纯化猪NLRP6蛋白,并制备鼠抗NLRP6多克隆抗体。根据猪NLRP6全基因核苷酸序列(GenBank登录号:XM_003124236.4)设计特异性引物,利用PCR方法从pMD-19T-NLRP6重组载体中扩增NLRP 6基因片段,将扩增产物与原核表达载体pET-32a(+... 试验旨在表达、纯化猪NLRP6蛋白,并制备鼠抗NLRP6多克隆抗体。根据猪NLRP6全基因核苷酸序列(GenBank登录号:XM_003124236.4)设计特异性引物,利用PCR方法从pMD-19T-NLRP6重组载体中扩增NLRP 6基因片段,将扩增产物与原核表达载体pET-32a(+)连接,获得重组质粒pET-32a-NLRP6,经抗性筛选阳性菌、双酶切鉴定、PCR及测序分析后,将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中,并进行IPTG诱导表达及Western blotting鉴定。对获得的重组融合蛋白进行可溶性分析,经变性、镍柱亲和纯化、复性后得到纯化的融合蛋白,将其免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。结果显示,试验成功克隆大小约为576 bp的NLRP 6基因序列,经鉴定重组质粒pET-32a-NLRP6构建正确,通过IPTG诱导获得大小约34 ku的NLRP6重组融合蛋白,Western blotting分析表明其与小鼠抗6×His单克隆抗体呈阳性反应。可溶性分析结果显示,NLRP6重组融合蛋白以包涵体形式存在,约占95%。纯化的NLRP6重组融合蛋白免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,经Western blotting分析显示出特异性反应。本试验成功制备了具有免疫原性的NLRP6蛋白及其鼠源多克隆抗体,为NLRP6蛋白生物学功能及相关疾病致病机制研究提供了基础材料。 展开更多
关键词 猪NLRP6蛋白 克隆 原核表达 克隆抗体
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肾蕨LEAFY基因和启动子的克隆及序列分析
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作者 阚诗卓 徐琪 +4 位作者 赵芮 王琦 伍冉 李映 鄢波 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第14期4623-4630,共8页
以孢子植物肾蕨叶片为材料,采用RT-PCR、RACE和Tail-PCR相结合的方法克隆得到肾蕨LEAFY(简写为LFY)基因的完整片段,该基因DNA全长为1912bp,包含3个外显子和2个内含子序列,有一个1170bp的完整开放阅读框,编码389个氨基酸。经过对该基因... 以孢子植物肾蕨叶片为材料,采用RT-PCR、RACE和Tail-PCR相结合的方法克隆得到肾蕨LEAFY(简写为LFY)基因的完整片段,该基因DNA全长为1912bp,包含3个外显子和2个内含子序列,有一个1170bp的完整开放阅读框,编码389个氨基酸。经过对该基因片段的核苷酸序列分析表明,与荚果蕨的LFY基因在结构上有高度的相似性,同源率高达94%。通过Tail-PCR技术克隆得到1521bp的肾蕨LFY基因的启动子序列。用PlantCARE在线启动子预测工具分析表明:该序列含有启动子的特定结构,如TATAbox,CAAT-box等,还有一些其它的调控元件。本研究以肾蕨为材料,通过对肾蕨LFY基因的克隆,为探讨LFY基因在不开花植物的原始功能奠定基础,进一步阐释了LFY基因的结构和功能。 展开更多
关键词 肾蕨(Nephrolepis auriculata) LFY基因 启动子 克隆
一株新城疫病毒F基因的克隆及其遗传进化分析 预览
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作者 徐萍 徐小博 +2 位作者 TATIANA Fotina 王三虎 赵坤 《湖北农业科学》 2019年第15期132-135,共4页
从新乡市某养鸡场的疑似新城疫病鸡群中分离到1株新城疫病毒,并对该病毒分离株进行F基因的扩增、序列测定和遗传进化分析。结果表明,该新城疫病毒分离株的F基因全长为1662bp,F蛋白裂解位点区的氨基酸序列为112R-R-Q-K-R-F117,具备强毒... 从新乡市某养鸡场的疑似新城疫病鸡群中分离到1株新城疫病毒,并对该病毒分离株进行F基因的扩增、序列测定和遗传进化分析。结果表明,该新城疫病毒分离株的F基因全长为1662bp,F蛋白裂解位点区的氨基酸序列为112R-R-Q-K-R-F117,具备强毒株的特征;同源性分析表明,该新城疫病毒分离株与国内外流行的基因Ⅶ型强毒株之间的同源性较高,为87.5%~97.7%,其中与国内流行的基因Ⅶd型的参考毒株同源性最高,为95.4%~97.7%,而与现用疫苗株LaSota、Clone-30、B1、Mukteswar等同源性较低,84.2%~86.6%;系统进化树分析表明,该新城疫病毒分离株与基因Ⅶd型参考毒株FJ882014、FJ608335和GU227738处在同一个进化分支上,亲缘关系最近。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F基因 克隆 序列分析 遗传进化
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猪蛋白质二硫化物异构酶A4基因克隆及密码子偏好性分析 预览 被引量:1
4
作者 张小丹 牛熙 +8 位作者 许瑶 阮亦麒 李大鹏 冉雪琴 王嘉福 吴娟 杨镜 田兰 龙艳霞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第4期1074-1085,共12页
试验旨在研究猪蛋白质二硫化物异构酶(protein disulfide isomerase A4,PDIA4)基因的密码子使用特性及其与其他物种密码子使用的差异。试验以香猪子宫组织为试验材料,采用RT-PCR方法扩增获得猪PDIA4基因,参考从NCBI数据库中下载的18个... 试验旨在研究猪蛋白质二硫化物异构酶(protein disulfide isomerase A4,PDIA4)基因的密码子使用特性及其与其他物种密码子使用的差异。试验以香猪子宫组织为试验材料,采用RT-PCR方法扩增获得猪PDIA4基因,参考从NCBI数据库中下载的18个不同物种PDIA 4基因序列,对猪PDIA4基因的密码子使用特性及其与其他物种密码子的使用差异和进化关系进行分析,同时对猪PDIA 4基因与4个模式生物密码子使用偏性进行比较。结果表明,猪PDIA 4基因编码区长1 941 bp,共编码646个氨基酸。与NCBI数据库公布的野猪PDIA 4基因(GenBank登录号:NM_001267834.1)的相似性达99%。猪PDIA 4基因偏好使用G/C结尾的密码子,27种密码子为猪PDIA 4基因的偏好密码子(RSCU>1),其中使用频率最高的前3个密码子分别为CTG(RSCU=3.69)、GCC(RSCU=2.31)和CGC(RSCU=2.29)。比较19个物种PDIA 4基因发现,不同物种间PDIA 4基因的有效密码子数(ENc)、密码子适应指数(CAI)、GC含量以及T、C、A、G、G+C在密码子第3位含量(T3s、C3s、A3s、G3s、GC3s)均存在差异,且密码子偏好以G/C结尾;聚类分析发现,基于CDS序列的系统进化树更符合19个物种的真实分类系统。在密码子使用频率上,猪PDIA 4基因与小鼠基因组间密码子使用偏好程度更为接近,故小鼠更适合作为猪PDIA 4基因的遗传转化和异源表达的受体系统。 展开更多
关键词 PDIA4基因 克隆 密码子偏好性
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发菜1,4-α-葡聚糖分支酶(GBE)的基因克隆及其对干旱胁迫的响应
5
作者 李晓旭 丁苗苗 +6 位作者 王猛 严奉坤 张筝 梁文裕 徐婷婷 王俊 王玲霞 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第19期6305-6313,共9页
由glgB基因编码的1,4-α-葡聚糖分支酶(GBE)是催化调控α(1-6)糖苷键分支合成的关键酶。本研究从发菜中克隆获得1,4-α-葡聚糖分支酶glgB基因全长2 292 bp(GeenBank登录号:KX679395),编码763个氨基酸。原核表达得到88.6 kD的glgB基因外... 由glgB基因编码的1,4-α-葡聚糖分支酶(GBE)是催化调控α(1-6)糖苷键分支合成的关键酶。本研究从发菜中克隆获得1,4-α-葡聚糖分支酶glgB基因全长2 292 bp(GeenBank登录号:KX679395),编码763个氨基酸。原核表达得到88.6 kD的glgB基因外源蛋白,MALDI-TOF-TOF/MS质谱分析表明外源蛋白为GBE。发菜glgB与点形念珠藻的glgB序列相似性为94%,氨基酸序列相似性为97%;GBE在第747位的甘氨酸疏水性最强,第168位的组氨酸亲水性最强;Thr有15个磷酸化位点,Tyr有12个磷酸化位点、Ser有27个磷酸化位点;GBE二级结构及三级结构由α螺旋、β折叠、随机卷曲和β转角构成。发菜glgB在干旱胁迫下转录水平的表达量逐渐增加,GBE含量增加,糖原合成酶活性和糖原含量均先增加后降低。研究结果为认识glgB基因信息和发菜响应干旱胁迫的糖原代谢和调控机制提供了依据。 展开更多
关键词 发菜(Nostoc flagelliforme) 1 4-α-葡聚糖分支酶 克隆 干旱胁迫 差异表
芽孢杆菌N1碱性蛋白酶的克隆表达及酶学性质
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作者 陈秀娟 周成 +1 位作者 龚劲松 史劲松 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期685-694,共10页
【背景】蛋白酶广泛应用于制革行业中,酶法脱毛对环境污染较小,但蛋白酶对化学试剂的不稳定性及胶原降解活性限制了其工业应用。【目的】克隆芽孢杆菌(Bacillussp.)N1基因组的碱性蛋白酶基因,实现其在大肠杆菌中的异源表达,并对重组酶... 【背景】蛋白酶广泛应用于制革行业中,酶法脱毛对环境污染较小,但蛋白酶对化学试剂的不稳定性及胶原降解活性限制了其工业应用。【目的】克隆芽孢杆菌(Bacillussp.)N1基因组的碱性蛋白酶基因,实现其在大肠杆菌中的异源表达,并对重组酶酶学性质及脱毛作用进行研究。【方法】利用基因组文库法克隆获得蛋白酶基因aprG,构建重组大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3)pLysS/pET-28a-aprG。异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达该重组酶,以福林酚显色法对其酶学性质进行研究,并将AprG作用于羊皮、兔皮和羽毛。【结果】克隆得到蛋白酶基因aprG,并实现其在大肠杆菌中的表达。重组酶AprG最适反应温度为50°C,最适反应pH为10.0。各种金属离子对AprG活性影响较小,且AprG对表面活性剂和氧化剂、还原剂的耐受性较强。底物特异性分析表明,该酶胶原活性较低。AprG对羊皮和兔皮作用显著,且降解羽毛效果明显。【结论】蛋白酶AprG在制革行业中具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 芽孢杆菌N1 克隆 酶学表征 低胶原活性 脱毛作用
山羊CXCR1基因的克隆及组织表达谱研究
7
作者 徐涛 王利 魏勇 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第19期19-24,29,177共8页
为了探究山羊C-X-C趋化因子受体1(C-X-C motif chemokine receptor 1,CXCR1)基因的特点,试验以金堂黑山羊脾脏cDNA为模板克隆了CXCR1基因,借助生物信息学软件及在线软件分析序列,并采用实时荧光定量PCR方法检测CXCR1基因在金堂黑山羊脾... 为了探究山羊C-X-C趋化因子受体1(C-X-C motif chemokine receptor 1,CXCR1)基因的特点,试验以金堂黑山羊脾脏cDNA为模板克隆了CXCR1基因,借助生物信息学软件及在线软件分析序列,并采用实时荧光定量PCR方法检测CXCR1基因在金堂黑山羊脾脏、肺脏、肌肉、心脏和肠的5个组织中的相对表达量。结果表明:克隆得到的CXCR1基因序列全长为1 140 bp,完整CDS编码区长1 107 bp,共编码368个氨基酸;所得氨基酸序列与牛进行比对,两者同源性为96.8%;编码蛋白为带正电荷、具有疏水性的稳定蛋白;有7个跨膜结构和32个磷酸化位点,无信号肽;二级结构中α-螺旋比例最高,为54.35%;获得的三级结构模型与人的CXCR1蛋白(PDB:2lnl.1.A)同源性最高,为81.49%;氨基酸比对结果与系统进化树结果相近,金堂黑山羊与牛的亲缘关系最近;CXCR1基因主要表达于肌肉和心脏。说明CXCR1基因可能在山羊肌肉发育相关的信号通路中发挥作用。 展开更多
关键词 CXCR1基因 PCR扩增 金堂黑山羊 克隆 生物信息学分析 组织表达
基于测序技术的海南地方猪TLR4基因多态性分析
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作者 张艳 刘海隆 +1 位作者 王文秀 黄丽丽 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第19期25-29,178共6页
为了了解海南地方猪TLR4基因的多态性,试验采用PCR技术对五指山猪、临高猪和屯昌猪的TLR4基因组序列进行了克隆、测序,应用DNAStar和BioEdit软件分析其序列,SMART、SOPMA、SWISS-MODEL在线软件分析TLR4蛋白的结构,并预测二级结构和三级... 为了了解海南地方猪TLR4基因的多态性,试验采用PCR技术对五指山猪、临高猪和屯昌猪的TLR4基因组序列进行了克隆、测序,应用DNAStar和BioEdit软件分析其序列,SMART、SOPMA、SWISS-MODEL在线软件分析TLR4蛋白的结构,并预测二级结构和三级结构。结果表明:获得的三个品种海南地方猪TLR4基因DNA序列全长均为10 435 bp,其中编码区长2 526 bp,编码841个氨基酸。三个品种猪TLR4基因序列种内比对时,五指山猪在种内有1个核苷酸位点存在多态性;屯昌猪在种内有6个核苷酸位点存在多态性,2处位于编码区;临高猪在种内有3个核苷酸位点存在多态性,1处位于编码区。三个品种猪TLR4基因序列种间比对时,有27个核苷酸位点存在多态性,其中2个为错义突变,导致氨基酸改变。三个品种猪的TLR4基因序列的同源性在99.8%~99.9%之间,高度保守。海南猪TLR4基因在7 209位点的G→T突变和7 781位点的G→A位点突变引起了TLR4蛋白二级结构和三级结构发生改变。说明海南地方猪TLR4基因存在多态性,并且其多态性引起的结构改变可能使TLR4基因功能发生变化。 展开更多
关键词 海南地方猪 TLR4 基因多态性 基因测序 克隆 蛋白质结构
类乌齐牦牛SIRT3基因克隆与生物信息学及差异表达分析 预览
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作者 杨玉梅 柴志欣 +4 位作者 王会 王吉坤 信金伟 姬秋梅 钟金城 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2019年第6期56-62,共7页
本实验旨在丰富牦牛 SIRT3基因的基础研究,通过对西藏类乌齐牦牛 SIRT3基因克隆、生物信息学分析及差异表达分析,进一步探讨 SIRT3基因的生理功能及分子机制。结果表明:类乌齐牦牛 SIRT3基因CDS区长 1 002 bp,编码 333个氨基酸,与普通牛... 本实验旨在丰富牦牛 SIRT3基因的基础研究,通过对西藏类乌齐牦牛 SIRT3基因克隆、生物信息学分析及差异表达分析,进一步探讨 SIRT3基因的生理功能及分子机制。结果表明:类乌齐牦牛 SIRT3基因CDS区长 1 002 bp,编码 333个氨基酸,与普通牛 SIRT3基因 CDS区比对存在碱基突变,编码氨基酸发生错义和同义突变,同义突变发生在碱基第 49、279、342、384 位,错义突变发生在碱基第 149 和 620 位,其编码蛋白属亲水性蛋白,有多个跨膜区域和磷酸化位点,无信号肽片段,主要位于线粒体,二级结构以无规卷曲和α-螺旋为主;SIRT3基因编码蛋白在催化活性、核苷酸结合及辅因子结合等过程发挥主要功能,主要参与生物体代谢过程;类乌齐牦牛 SIRT3基因序列与普通牛一致性较高,亲缘关系最近;QPCR分析显示,SIRT3基因在牦牛肝脏中的表达水平极显著高于其他组织(P<0.01)。 展开更多
关键词 类乌齐牦牛 SIRT3基因 克隆 生物信息学分析 组织表达
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禽呼肠孤病毒σA蛋白在HEK293T细胞中的表达
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作者 任红玉 谢芝勋 +9 位作者 谢丽基 王盛 黄娇玲 范晴 罗思思 张艳芳 曾婷婷 张明秀 谢志勤 邓显文 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第14期59-62,共4页
为了正确表达禽呼肠孤病毒(ARV)σA蛋白,试验拟构建σA基因的真核表达质粒,并将其在人胚肾细胞(HEK293T)中准确表达,参照GenBank中ARVS2基因序列(登录号为KF741763.1)设计特异性引物,以pMD18-T-σA重组载体为模板,应用PCR的方法扩增σA... 为了正确表达禽呼肠孤病毒(ARV)σA蛋白,试验拟构建σA基因的真核表达质粒,并将其在人胚肾细胞(HEK293T)中准确表达,参照GenBank中ARVS2基因序列(登录号为KF741763.1)设计特异性引物,以pMD18-T-σA重组载体为模板,应用PCR的方法扩增σA基因的特异性序列,并将其克隆到pMD18-T载体中,构建重组pMD18-T-σA表达质粒,再用限制性内切酶KpnⅠ和NotⅠ同时双酶切pMD18-T-σA和真核表达质粒pEF1α-HA,将胶回收的σA基因和pEF1α-HA进行连接,构建真核表达质粒pEF1α-HA-σA。真核表达质粒经菌落PCR、双酶切和测序验证正确后,将其转染HEK293T细胞,于24h后收取蛋白质,通过WesteRn-blot验证目的蛋白。结果表明:本试验成功克隆了ARVσA基因,构建了其真核表达质粒pEF1α-HA-σA,并在HEK293T细胞中表达。说明该蛋白可以在HEK293T细胞中准确表达。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒 σA基因 克隆 σA蛋白 真核表达质粒
金黄色葡萄球菌ymdB基因的克隆表达及生物信息学分析
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作者 夏佳音 陈新江 +2 位作者 李文通 吴佳艳 羊晓敏 《生物技术》 CAS 2019年第3期215-219,共5页
[目的]克隆、表达金黄色葡萄球菌ymd B基因,并对其编码产物进行生物信息学分析。[方法]以金黄色葡萄球菌ATCC 25923菌株的基因组DNA为模板,用聚合酶链式反应扩增ymd B基因,将扩增基因酶切后与表达载体pET-32a(+)连接,构建重组质粒并转... [目的]克隆、表达金黄色葡萄球菌ymd B基因,并对其编码产物进行生物信息学分析。[方法]以金黄色葡萄球菌ATCC 25923菌株的基因组DNA为模板,用聚合酶链式反应扩增ymd B基因,将扩增基因酶切后与表达载体pET-32a(+)连接,构建重组质粒并转化大肠杆菌TG1,增菌培养后提取质粒,经PCR、基因测序鉴定后,再转化大肠杆菌BL21(DE3),对转化菌株进行诱导后,进行10%SDS-PAGE分析。使用Protparam、PSORT、CDD、Signal P 4. 1、TMpred、Net Phos 3. 1 Server、PSIPRED、SWISS-MODEL等软件,分析YmdB蛋白的氨基酸数目、相对分子质量、理论等电点、带电荷氨基酸总数、半衰期、稳定性、疏水性、亚细胞定位、保守结构域、信号肽、跨膜区、磷酸化位点、二级结构、三维结构等。[结果]构建了表达载体pET-32a(+)-ymd B,在37℃经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后获得表达。YmdB蛋白由266个氨基酸组成,相对分子质量为30134. 53Da,等电点为6. 23,正电荷氨基酸总数为33个,负电荷氨基酸总数为35个,在大肠杆菌内的半衰期为10 h以上,是稳定的亲水蛋白质,定位于细胞质中,与YmdB蛋白家族具有相似的保守结构域,没有信号肽,有一个跨膜区和14个磷酸化位点,二级结构中ɑ螺旋、β折叠和无规则卷曲分别占42. 11%、9. 40%、48. 49%,三维空间结构与二级结构预测结果大致相同。[结论]成功克隆、表达了金黄色葡萄球菌ymdB基因,并对YmdB蛋白进行了生物信息学分析,为深入研究该蛋白的分子作用机理打下一定基础。 展开更多
关键词 ymdB基因 ymdB蛋白 克隆 原核表达 生物信息学 金黄色葡萄球菌
互联网带火的“宠物经济”会终结于“无边界”的克隆吗? 预览
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作者 最极客 《计算机应用文摘》 2019年第18期18-20,共3页
最近,中国首个克隆猫“大蒜”引发了关注。大蒜由北京希诺谷生物科技有限公司培育,是接受了一只已故的英国短毛猫的主人的“订制”而来的。大蒜一事标志着中国在克隆领域又前进了一大步,同时也反映了中国宠物市场的巨大利润空间。
关键词 克隆 宠物经济 网带 生物科技 利润空间 宠物市场 大蒜 中国
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龙脑樟Actin基因的克隆与序列分析 预览
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作者 张君诚 许晓颖 +1 位作者 邹函卓 杨琳 《三明学院学报》 2019年第4期13-16,共4页
利用同源克隆的方法设计特异性引物,从龙脑樟中获得一个333bp的基因片段,编码110个氨基酸。该片段的蛋白分子量为12.37ku,理论等电点为5.03,平均疏水性(GRAVY)为-0.312,α螺旋、β片层和无规则卷曲的比例分别为40.04%、10.09%和45.87%... 利用同源克隆的方法设计特异性引物,从龙脑樟中获得一个333bp的基因片段,编码110个氨基酸。该片段的蛋白分子量为12.37ku,理论等电点为5.03,平均疏水性(GRAVY)为-0.312,α螺旋、β片层和无规则卷曲的比例分别为40.04%、10.09%和45.87%。同源比对和进化树分析结果都表明,龙脑樟Actin基因与香樟、山鸡椒的Actin基因具有较高的同源性。龙脑樟Actin基因片段的克隆,为深入研究该基因的表达调控及龙脑樟遗传与进化关系提供理论基础。 展开更多
关键词 龙脑樟 ACTIN基因 克隆 序列分析
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家蝇天蚕素Cec4的原核表达与纯化
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作者 彭建 刘巍巍 +3 位作者 吴兆颖 杨燕琴 尚小丽 吴建伟 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第2期182-185,共4页
目的构建家蝇天蚕素(Cecropin)Cec4原核表达质粒,表达及纯化Cec4蛋白。方法从家蝇cDNA文库中筛选家蝇天蚕素基因Cec4,设计并合成特异性引物,PCR扩增Cec4基因,连接克隆载体后转入DH5α感受态细胞,通过重组子鉴定及测序完成目的基因的克... 目的构建家蝇天蚕素(Cecropin)Cec4原核表达质粒,表达及纯化Cec4蛋白。方法从家蝇cDNA文库中筛选家蝇天蚕素基因Cec4,设计并合成特异性引物,PCR扩增Cec4基因,连接克隆载体后转入DH5α感受态细胞,通过重组子鉴定及测序完成目的基因的克隆。用限制性内切酶BamHI和HindⅢ双酶切目的基因和质粒,构建GST表达载体pGEX 4T-1-Cec4,转化到大肠埃希菌BL-21中,利用IPTG诱导表达重组Cec4蛋白,经亲和层析纯化后进行SDS-PAGE电泳分析。结果 PCR扩增获得的Cec4基因全长为192 bp,连接到表达载体pGEX 4T-1获得重组质粒pGEX 4T-1-Cec4,转化大肠埃希菌BL-21后经30℃、0.6 mmol/L的IPTG诱导18 h,表达相对分子质量约为26×10~3上清表达的融合蛋白,亲和层析纯化后的蛋白浓度为0.117 mg/ml。结论成功构建重组质粒pGEX 4T-1-Cec4并表达和纯化获得Cec4蛋白,为其进一步研究奠定了实验基础。 展开更多
关键词 家蝇 CEC4 克隆 原核表达
牦牛Bcl-2、Bax基因克隆及其在生殖轴上的表达分析 预览
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作者 夏忆 王琴 +3 位作者 何向东 陈莹 吉格莫体 字向东 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第7期1881-1889,共9页
试验旨在分析Bcl-2与Bax基因的序列特性,并分析其在母牦牛生殖轴上的表达特点,为探讨其在牦牛繁殖活动中的调控作用奠定基础。试验采集健康母牦牛与母黄牛下丘脑、垂体、卵巢、输卵管及子宫组织样品,通过RT-PCR扩增并克隆Bcl-2与Bax基因... 试验旨在分析Bcl-2与Bax基因的序列特性,并分析其在母牦牛生殖轴上的表达特点,为探讨其在牦牛繁殖活动中的调控作用奠定基础。试验采集健康母牦牛与母黄牛下丘脑、垂体、卵巢、输卵管及子宫组织样品,通过RT-PCR扩增并克隆Bcl-2与Bax基因,并采用生物信息学软件进行序列分析;利用实时荧光定量PCR法检测Bcl-2与Bax基因在牦牛与黄牛不同组织中的表达差异。结果表明,牦牛Bcl-2编码区全长690 bp,编码229个氨基酸;与黄牛Bcl-2基因核苷酸序列同源性最高,为99.86%,其次是山羊、绵羊,同源性分别为98.41%、97.97%;系统进化树表明,牦牛与黄牛亲缘关系最近。牦牛Bax基因编码区全长579 bp,编码192个氨基酸,与黄牛、藏山羊和金堂黑山羊同源性较高,分别为99.83%、99.48%和99.48%,其次是绵羊、马、人,同源性分别为99.14%、95.34%、94.30%;系统进化树表明,牦牛与黄牛亲缘关系最近。Bcl-2和Bax蛋白不存在信号肽,均为酸性不稳定的疏水蛋白。Bcl-2与Bax基因在黄牛及牦牛下丘脑、垂体、卵巢、输卵管和子宫组织中均有表达,其中牦牛卵巢、子宫中Bcl-2基因表达量分别显著和极显著高于黄牛(P<0.05;P<0.01);牦牛子宫、输卵管中Bax基因表达量显著高于黄牛(P<0.05),牦牛卵巢中Bcl-2/Bax比值极显著高于黄牛(P<0.01),子宫和垂体中显著高于黄牛(P<0.05)。表明Bcl-2与Bax在动物进化中非常保守且在繁殖活动中起重要作用,牦牛卵巢、子宫、输卵管和垂体中的高表达量可能与牦牛处于极端恶劣环境的细胞抗凋亡作用有关。 展开更多
关键词 牦牛 黄牛 BCL-2基因 BAX基因 克隆 组织表达
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水貂DCT基因启动子的克隆及转录调控元件分析
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作者 王亚琪 胡露露 +4 位作者 王瑞宁 刘铮铸 巩元芳 李祥龙 彭永东 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第9期146-150,183共6页
为了找到水貂多巴色素异构酶(DCT)基因启动子活性区域及转录因子结合位点,试验采用PCR扩增与克隆,构建双荧光素酶报告基因重组质粒,分别转染到293T细胞和A375细胞,测定其活性,并利用在线软件对序列进行生物信息学分析,预测水貂DCT基因... 为了找到水貂多巴色素异构酶(DCT)基因启动子活性区域及转录因子结合位点,试验采用PCR扩增与克隆,构建双荧光素酶报告基因重组质粒,分别转染到293T细胞和A375细胞,测定其活性,并利用在线软件对序列进行生物信息学分析,预测水貂DCT基因核心启动子区域的转录因子结合位点。结果表明:得到的6个不同长度的启动子片段均具有明显的启动子活性,且-1 292~+113 bp区域活性最高,提示其为水貂DCT基因核心启动子区域;成功筛选出337 bp水貂DCT基因活性较高的启动子片段,发现转录因子特异性蛋白1(Sp1)可能是调控启动子活性的重要转录因子。 展开更多
关键词 水貂 启动子 DCT基因 克隆 活性
单增李斯特菌llsB基因克隆及序列分析 预览
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作者 王欣雨 尹华 +2 位作者 任静静 李红欢 蒋建军 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第7期1890-1898,共9页
试验旨在对新疆绵羊脑炎临床分离株LM90SB2单增李斯特菌llsB基因进行克隆及生物信息学分析,以期进一步完善单增李斯特菌溶血素S的功能研究。根据GenBank中单增李斯特菌F2365基因全长序列(登录号为:AE017262)设计其特异性引物,利用PCR方... 试验旨在对新疆绵羊脑炎临床分离株LM90SB2单增李斯特菌llsB基因进行克隆及生物信息学分析,以期进一步完善单增李斯特菌溶血素S的功能研究。根据GenBank中单增李斯特菌F2365基因全长序列(登录号为:AE017262)设计其特异性引物,利用PCR方法对新疆分离株LM90SB2的llsB基因进行扩增,回收目的基因与pMD19-T载体连接,采用PCR、双酶切鉴定筛选阳性菌并进行测序,对所获序列进行同源性比对及遗传变异分析。结果显示,新疆分离株LM90SB2的llsB基因序列全长为876 bp,共编码291个氨基酸;LM90SB2分离株llsB基因核苷酸序列与10-0809、81-0592、81-0558、02-1792、NTSN、02-1289不同分离株同源性均为100%,与CIIMS-PH-1、NRRLB-57603株的同源性均为99.9%,与J1816、R2-502株的同源性为44.7%~45.0%。分子进化树显示,LM90SB2菌株llsB基因与血清型为4b的菌株亲缘关系较近,聚类为同一分支。蛋白质二级结构预测表明,LM90SB2 llsB蛋白为亲水性蛋白,无信号肽,不形成跨膜结构。本试验成功克隆了LM90SB2株llsB基因,为深入探讨该基因功能提供全面的理论依据。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 llsB基因 克隆 生物信息学分析
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鸡马立克病病毒康乐株meq基因的克隆与分析 预览
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作者 东丽丽 《畜牧兽医杂志》 2019年第5期11-16,共6页
为了解甘肃省鸡群马立克病病毒(MDV)的分子流行病学特征及meq基因的遗传演化规律,以甘肃省康乐县某鸡场马立克病的自然发病鸡为研究对象,采集9只病鸡肝脏组织,提取肝细胞基因组DNA,进行meq基因的PCR扩增、克隆及测序,将所得序列用BioEdi... 为了解甘肃省鸡群马立克病病毒(MDV)的分子流行病学特征及meq基因的遗传演化规律,以甘肃省康乐县某鸡场马立克病的自然发病鸡为研究对象,采集9只病鸡肝脏组织,提取肝细胞基因组DNA,进行meq基因的PCR扩增、克隆及测序,将所得序列用BioEdit软件与GenBank上登录的参考毒株进行比较分析。结果显示,MDVmeq基因在进化上存在某种地理位置上的相关性,国内毒株成为一个分支,国外毒株成为另一个分支。本研究所获9株康乐株与国内近几年分离株GXY2、0095亲缘关系很近,与国内近几年分离株的核苷酸同源性在99.3%以上,且第319位核苷酸由T突变成C,第502位核苷酸由C突变成G,这两处突变是近几年国内分离的野毒株特有的。此外,9株康乐株均在550位核苷酸由C突变成T,其中4株在304、306位核苷酸由G突变为A和C,这些突变是否与毒株致肿瘤性和毒力有关,有待探究。 展开更多
关键词 马立克病病毒 MEQ基因 克隆 序列分析
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微泡菌ALW1几丁质酶Chi18A的克隆及信息学分析 预览
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作者 李鹤宾 梁梅芳 +3 位作者 陈仲巍 姜泽东 倪辉 朱艳冰 《集美大学学报:自然科学版》 CAS 2019年第3期179-185,共7页
以微泡菌(Microbulbifersp.)ALW1的基因组为模板,利用几丁质酶基因的特异性引物进行PCR扩增,然后将产物插入到pMD18-T载体后进行DNA序列测定,并对目的基因编码的蛋白质序列进行信息学分析。结果显示,克隆的目的基因大小为1644bp,预测编... 以微泡菌(Microbulbifersp.)ALW1的基因组为模板,利用几丁质酶基因的特异性引物进行PCR扩增,然后将产物插入到pMD18-T载体后进行DNA序列测定,并对目的基因编码的蛋白质序列进行信息学分析。结果显示,克隆的目的基因大小为1644bp,预测编码含有547个氨基酸残基的蛋白质。该蛋白质序列与其他菌株来源的几丁质酶序列具有70%左右的相似性,表明预测目的基因编码几丁质酶。该蛋白质具有2个几丁质结合结构域和1个GH18家族酶的催化结构域,属于糖苷水解酶(glycoside hydrolase,GH)家族18,命名为几丁质酶Chi18A。模拟的三维结构显示,Chi18A含有(βα)8桶状结构。 展开更多
关键词 微泡菌 几丁质酶 克隆 信息学分析
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光倒刺鲃mc5r基因的克隆及对饥饿的响应 预览
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作者 周惠强 陈凯棱 +3 位作者 舒琥 杨扬 钟东明 张明清 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期99-106,共8页
通过同源克隆和染色体步移对光倒刺鲃(Spinibarbus hollandi)黑素皮质素受体-5 (melanocortin receptor-5,mc5r)基因进行了克隆,应用生物信息学方法对mc5r 基因序列和推测的氨基酸序列进行分析,采用荧光定量PCR 技术研究其mRNA 的组织... 通过同源克隆和染色体步移对光倒刺鲃(Spinibarbus hollandi)黑素皮质素受体-5 (melanocortin receptor-5,mc5r)基因进行了克隆,应用生物信息学方法对mc5r 基因序列和推测的氨基酸序列进行分析,采用荧光定量PCR 技术研究其mRNA 的组织分布、日周期变化以及饥饿再投喂的表达情况。结果表明mc5r 基因长度为1 947 bp,含有1 个987 bp 的外显子,编码329 个氨基酸。通过序列同源比对及系统发育进化分析,光倒刺鲃mc5r 的氨基酸序列与鲤(Cyprinus carpio)、犀角金线鲅(Sinocyclocheilus rhinocerous)的mc5r 同源性达到98%。光倒刺鲃mc5r 在大脑中显著表达,在间脑、心脏的表达量次之,在中脑、小脑表达量较少,在肾脏、胃、肌肉、脾、肠、性腺、肝脏、延脑、眼中微量表达。光倒刺鲃mc5r mRNA 的日周期表达量随昼夜节律而变化,饥饿再投喂实验发现饥饿再投喂组鱼其脑中表达量会显著升高,随后会有下降趋势,表明mc5r 可能与光倒刺鲃的摄食调控有关。 展开更多
关键词 光倒刺鲃 黑素皮质素受体-5 克隆 日周期表达 饥饿响应
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