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超表达Notch胞内结构域对人牙周膜干细胞增殖及成骨分化的影响
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作者 邱申彩 龙晏 +2 位作者 陈晓燕 舍玉秀 吴佩玲 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期315-321,共7页
目的探讨超表达Notch胞内结构域(Notch intracellular domain,NICD)对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSC)增殖和成骨分化的影响,为牙周病骨缺损的治疗提供依据。方法以第3代稳定超表达NICD的hPDLSC为实验组... 目的探讨超表达Notch胞内结构域(Notch intracellular domain,NICD)对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSC)增殖和成骨分化的影响,为牙周病骨缺损的治疗提供依据。方法以第3代稳定超表达NICD的hPDLSC为实验组,以正常hPDLSC为阴性对照组,转染空载体的hPDLSC为空白对照组,通过细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测超表达NICD对hPDLSC增殖能力的影响;通过茜素红染色和实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测超表达NICD对hPDLSC成骨相关基因:牙骨质附着蛋白(cementum attachment proteins,CAP)、骨钙蛋白、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor2,RUNX2),Notch信号通路受体Notch1的影响;通过蛋白质免疫印迹法检测超表达NICD对hPDLSC成骨蛋白RUNX2和flag标记蛋白(用以标记NICD)的影响。结果CCK-8结果显示,3组1~2d的A值相比差异均无统计学意义(P>0.05);实验组3~7d的细胞数量(A值分别为0.203±0.016、0.364±0.014、0.449±0.020、0.549±0.020及0.570±0.020)与其他两组相比显著增加(P<0.05)。茜素红染色结果示,与空白对照组及阴性对照组相比,实验组染色的矿化结节形成范围小颜色浅;qPCR结果显示,实验组14及21dCAP基因表达量(0.751±0.058、0.887±0.025)、骨钙蛋白基因表达量(0.592±0.051、0.670±0.045)及RUNX2基因表达量(0.319±0.038、0.684±0.055),均较阴性对照组及空白对照组显著降低(P<0.05),但14及21d的Notch1表达水平(2.507±0.047、4.041±0.219)显著高于阴性对照组及空白对照组(P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示,实验组14及21dflag标记蛋白表达量(0.167±0.007、0.204±0.010)均显著高于阴性对照组及空白对照组(P<0.05),但RUNX2的蛋白表达量(0.075±0.006、0.074±0.013)均显著低于阴性对照组(0.092±0.003、0.118±0.008)及空白对照组(0.174±0.006、0.212±0.008)(P<0.05)。结论超表达NICD可以促进hPDLSC的增殖能力,同时抑制其成骨分化。 展开更多
关键词 细胞增殖 超表达 Notch胞内结构域 牙周膜干细胞 成骨分化
miR-203a-5p通过抑制丝裂原活化蛋白激酶1的表达调控人牙周膜干细胞的炎性反应 预览
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作者 翟新颖 郝文慧 陈茜 《基础医学与临床》 CSCD 2019年第6期846-850,共5页
目的检测炎性人牙周膜干细胞(hPDLSCs)中miR-203a-5p及丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)的表达水平,探讨二者间的靶向关系对牙周炎炎性反应的调控作用。方法分离培养及流式细胞计量术鉴定hPDLSCs;将hPDLSCs分为:对照组、LPS刺激组、miR-203a... 目的检测炎性人牙周膜干细胞(hPDLSCs)中miR-203a-5p及丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)的表达水平,探讨二者间的靶向关系对牙周炎炎性反应的调控作用。方法分离培养及流式细胞计量术鉴定hPDLSCs;将hPDLSCs分为:对照组、LPS刺激组、miR-203a-5p模拟物转染组及miR-203a-5p抑制剂转染组,用RT-qPCR检测miR-203a-5p及MAPK1mRNA表达,Westernblot检测MAPK1蛋白表达,双荧光报告系统验证miR-203a-5p与MAPK1的靶向关系。结果干细胞表面标志物CD73及CD90阳性;LPS刺激组miR-203a-5p的表达明显上调(P<0.05);miR-203a-5p模拟物及LPS使miR-203a-5p的表达明显上调(P<0.05),同时MAPK1mRNA及蛋白的表达下调(P<0.05);miR-203a-5p抑制物使miR-203a-5p的表达量下降(P<0.05),同时MAPK1mRNA及蛋白的表达增加(P<0.05);miR-203a-5p与MAPK1具有靶向作用。结论miR-203a-5p通过靶向下调MAPK1基因的表达来调控牙周炎的炎性反应过程。 展开更多
关键词 miR-203a-5p 牙周膜干细胞 丝裂原活化蛋白激酶1 炎性反应
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高迁移率族蛋白B1对人牙周膜干细胞增殖、分化影响的体外研究 预览
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作者 徐贤寅 朱金晓 +1 位作者 朱文婷 李晓丹 《医学理论与实践》 2019年第10期1456-1458,共3页
目的:探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对于人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖、分化的影响。方法:选取年轻患者拔除的健康第三磨牙,采用胶原酶消化组织块培养得到牙周膜细胞,并利用有限稀释法筛选获得纯化的hPDLSCs。分别以浓度为0、100、200ng... 目的:探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对于人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖、分化的影响。方法:选取年轻患者拔除的健康第三磨牙,采用胶原酶消化组织块培养得到牙周膜细胞,并利用有限稀释法筛选获得纯化的hPDLSCs。分别以浓度为0、100、200ng/ml的HMGB1作用于hPDLSCs,于第3、5天采用MTT法检测细胞数目增殖情况;于第7天采用RT-PCR法检测细胞因子:增殖细胞核抗原(PCNA)、白细胞介素-1b(IL-1b)、肿瘤坏死因子α(TNFα)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的基因表达。结果:HMGB1在100、200ng/ml浓度时,在第3天和第5天hPDLSCs的OD值有明显升高,在第7天PCNA、IL-1 b、TNFα和TRAP的基因表达明显升高。结论:HMGB1对hPDLSCs的增殖具有促进作用,同时使其破骨功能加强,与牙周炎的发展有关。 展开更多
关键词 高迁移率族蛋白B1 牙周膜干细胞 增殖分化
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肿瘤坏死因子α可激活NF-κB信号通路抑制牙周膜干细胞成骨分化 预览
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作者 张赟 常群安 +1 位作者 李生梅 张源 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第25期3993-3997,共5页
背景:既往研究大多侧重于炎症因子激活NF-κB信号通路对骨细胞的影响,关于微炎症环境对人牙周膜干细胞成骨分化及NF-κB信号通路的影响研究较少。目的:探讨肿瘤坏死因子α对人牙周膜干细胞骨向分化及NF-κB信号通路的影响。方法:通过酶... 背景:既往研究大多侧重于炎症因子激活NF-κB信号通路对骨细胞的影响,关于微炎症环境对人牙周膜干细胞成骨分化及NF-κB信号通路的影响研究较少。目的:探讨肿瘤坏死因子α对人牙周膜干细胞骨向分化及NF-κB信号通路的影响。方法:通过酶消化结合组织块法体外培养人牙周膜干细胞,免疫组织化学染色鉴定人牙周膜干细胞来源。该研究获得青海大学附属医院伦理委员会批准,患者均签署知情同意书。将人牙周膜干细胞分为2组,对照组用单纯成骨诱导液培养,肿瘤坏死因子α组用单纯成骨诱导液+10μg/L肿瘤坏死因子α培养。在成骨诱导不同时间点,进行茜素红染色定量分析、碱性磷酸酶活性检测,实时定量RT-PCR检测Osterix、Runx2基因表达水平,Western Blot检测NF-κB信号通路关键蛋白表达水平。结果与结论:①免疫组织化学染色结果显示人牙周膜干细胞抗波形丝蛋白染色表达阳性,抗角蛋白表达阴性;②茜素红染色后肿瘤坏死因子α组形成的矿化结节比对照组数量少、范围小、染色浅;③肿瘤坏死因子α组碱性磷酸酶活性明显低于对照组(P <0.05);④肿瘤坏死因子α组Osterix、Runx2基因表达水平均显著低于对照组(P <0.05);⑤肿瘤坏死因子α组p-IκBα蛋白表达量显著高于对照组(P <0.05),p65、IκBα蛋白表达量显著低于对照组(P<0.05);⑥结果表明,肿瘤坏死因子α能够通过激活NF-κB信号通路抑制人牙周膜干细胞成骨分化。 展开更多
关键词 牙周膜干细胞 肿瘤坏死因子Α 成骨分化 NF-ΚB信号通路 碱性磷酸酶活性 成骨基因
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1,25-二羟基维生素D3对人牙周膜干细胞体外成骨作用的机制研究 预览
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作者 于彬 舒献碧 黄咏梅 《临床和实验医学杂志》 2019年第4期373-376,共4页
目的 探索1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]在人牙周膜干细胞体外骨向分化中的作用。方法 利用流式细胞仪对人牙周膜干细胞(PDLSC)进行细胞膜抗原鉴定;实验分为三组:A组为PDLSC未诱导组,B组为PDLSC成骨诱导组,C组为1,25(OH)2D3+PDLSC... 目的 探索1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]在人牙周膜干细胞体外骨向分化中的作用。方法 利用流式细胞仪对人牙周膜干细胞(PDLSC)进行细胞膜抗原鉴定;实验分为三组:A组为PDLSC未诱导组,B组为PDLSC成骨诱导组,C组为1,25(OH)2D3+PDLSC成骨诱导组。21 d后利用化学定量法检测三组钙含量及碱性磷酸酶(ALP)含量,实时荧光定量PCR检测成骨相关蛋白骨钙素(OCN)、RUNX2、Ⅰ型胶原(COLⅠ)和ALP mRNA表达。结果 PDLSC高表达CD29和CD44,而低表达CD31和CD45;且21 d后三组细胞钙含量及ALP含量:C组 >B组 >A组;OCN、RUNX2、COLⅠ和ALP mRNA表达为C组 >B组 >A组。结论 1,25(OH)2D3可促进PDLSC的体外骨向分化,并可加速PDLSC细胞基质的矿化。 展开更多
关键词 牙周膜干细胞 1 25-二羟基维生素D3 骨钙素 碱性磷酸酶
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低氧对人牙周膜干细胞增殖和分化的影响 预览
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作者 郑树灿 邹晖 +4 位作者 黄旭瑶 邵海宾 周勇 张瑞芳 李朝晖 《口腔医学研究》 CAS 北大核心 2019年第1期38-41,共4页
目的:观察低氧预处理对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)干性的影响。方法:收集hPDLSCs并进行鉴定后,分别在常氧(20%O2)和低氧(5%O2)环境下培养5d,噻唑蓝(methyl thiazol tetrazolium,MTT)法检测细胞的... 目的:观察低氧预处理对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)干性的影响。方法:收集hPDLSCs并进行鉴定后,分别在常氧(20%O2)和低氧(5%O2)环境下培养5d,噻唑蓝(methyl thiazol tetrazolium,MTT)法检测细胞的增殖能力。分别在低氧环境培养1d和5d,实时定量聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time PCR)检测hPDLSCs中干性相关基因Oct4、Sox2、Nanog的mRNA表达水平。细胞增殖核抗原Ki-67染色法和结晶紫染色观察细胞自我更新能力。分别用成骨和成脂诱导hPDLSCs 21d,观察低氧对人牙周膜干细胞多项分化能力的影响。结果:MTT结果显示低氧预处理能显著增强hPDLSCs增殖能力(P<0.05)。Real-time PCR结果显示低氧在第1天和第5天时能够提高细胞的干性基因表达(P<0.05),其中在第5天的时候SOX2的提高最为显著(P<0.05)。结晶紫染色结果表明,低氧环境能够增加细胞克隆形成率(P<0.05)。低氧环境还能增强干细胞的成骨分化能力,成骨相关基因RUNX2的表达显著提高(P<0.05),但是对成脂相关基因的增强不明显,对成脂标志基因PPARγ2的影响不明显。结论:低氧预处理hPDLSCs能够提高细胞的增殖和干性相关基因的表达。另外,低氧环境也能提高干细胞的分化,其中对成骨相关基因的促进作用较为显著,但对成脂分化影响不大。 展开更多
关键词 低氧 牙周膜干细胞 增殖 分化
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雌激素介导下Wnt/β-catenin信号通路调控人牙周膜干细胞的成骨分化 预览 被引量:1
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作者 毛杰 周翊飞 +3 位作者 吴晓玲 余京泓 党海霞 徐晓梅 《中国组织工程研究》 北大核心 2018年第13期2087-2092,共6页
背景:已有实验发现,雌激素能促进人牙周膜干细胞骨向分化,但雌激素调控人牙周膜干细胞成骨分化的具体机制目前尚未明确.目的:探讨雌激素通过Wnt/β-catenin信号通路对人牙周膜干细胞骨向分化的调控作用.方法:采用消化组织块法联合有... 背景:已有实验发现,雌激素能促进人牙周膜干细胞骨向分化,但雌激素调控人牙周膜干细胞成骨分化的具体机制目前尚未明确.目的:探讨雌激素通过Wnt/β-catenin信号通路对人牙周膜干细胞骨向分化的调控作用.方法:采用消化组织块法联合有限稀释克隆法分离培养并纯化得到人牙周膜干细胞,取第3代人牙周膜干细胞随机分为3组:单纯成骨诱导液组(对照组);含1×10-7 mol/L雌激素成骨诱导液组(雌激素组);含100 μg/L Wnt3a成骨诱导液组(Wnt3a组).各组在成骨诱导1,3,5,7 d时检测碱性磷酸酶活性,成骨诱导7 d时采用Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin、GSK-3β、P-GSK-3β、CyclinD1以及成骨相关蛋白Runx-2、OCN的表达水平.结果与结论:①各组碱性磷酸酶活性随时间推移均呈上升趋势.雌激素组和 Wnt3a 组在诱导1,3,5,7 d各时间点碱性磷酸酶表达水平均高于对照组(P 0.05);②雌激素组和Wnt3a组β-catenin、P-GSK-3β、CyclinD1的表达水平高于对照组(P 0.05);③结果表明,雌激素可促进人牙周膜干细胞的成骨分化,这种促进作用的实现可能与雌激素微环境下活化人牙周膜干细胞中的Wnt/β-catenin信号通路有关. 展开更多
关键词 牙周膜干细胞 雌激素 Wnt3a蛋白 WNT/Β-CATENIN信号通路 成骨分化 干细胞
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肿瘤坏死因子-α对人牙周膜干细胞的增殖及成骨分化的影响 预览 被引量:1
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作者 蒙超龙 王祥 +2 位作者 段建民 李洪涛 吕道志 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2018年第2期63-68,共6页
目的:观察不同浓度肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)的增殖及成骨分化的影响。方法:有限稀释法分离培养hPDLSCs,流式细胞仪检测细胞表面标志物表达后,分别用0.1、1、10、50 ng/mL的TNF-α作用于hPDLSCs,CCK-8法... 目的:观察不同浓度肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)的增殖及成骨分化的影响。方法:有限稀释法分离培养hPDLSCs,流式细胞仪检测细胞表面标志物表达后,分别用0.1、1、10、50 ng/mL的TNF-α作用于hPDLSCs,CCK-8法检测细胞的增殖活性。取第3代hPDLSCs,并分别在0、0.1、10 ng/mL TNF-α的作用下进行成骨诱导7、21 d,用Real-time PCR检测hPDLSCs中Runx2、Osterix、OPN及BSP的表达量,对成骨诱导21 d后的各组细胞进行茜素红染色,观察钙化结节形成情况。结果:培养的hPDLSCs高表达CD105(96.6%)、CD90(97.1%),低表达CD34(1.89%)、CD45(1.65%)。0.1、1、10 ng/mL TNF-α作用于hPDLSCs 1、2、3 d,细胞增殖活性与对照组相比均无显著差异(P〈0.05),而50 ng/mL TNF-α作用于hPDLSCs 1-3 d时的细胞增殖活性均降低(P〈0.05)。成骨诱导7 d后,0.1 ng/mL TNF-α组hPDLSCs中Runx2及Osterix的表达水平均高于对照组(P〈0.05),而10 ng/mL TNF-α组的Runx2、Osterix表达量均低于对照组(P〈0.05)。成骨诱导21 d后,0.1 ng/mL TNF-α组中的Runx2、Osterix、OPN、BSP表达量均高于对照组(P〈0.05),而10 ng/mL TNF-α组中各成骨基因的表达量均较对照组降低(P〈0.05);0.1 ng/mL TNF-α组的钙结节形成量多于对照组,而10 ng/mL TNF-α组的钙结节形成量少于对照组。结论:高浓度TNF-α可抑制hPDLSCs增殖,低剂量TNF-α可促进hPDLSCs向成骨细胞分化。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子-Α 牙周膜干细胞 增殖 成骨分化
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转化生长因子-β1对人牙周膜干细胞生物学行为的影响
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作者 龙晏 邱申彩 +4 位作者 李淑慧 舍玉秀 王娜 陈晓燕 吴佩玲 《中华实用诊断与治疗杂志》 2018年第11期1044-1046,共3页
目的探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)增殖和迁移能力的影响及作用机制。方法对数生长期人PDLSCs随机分为TGF-β1组(培养液+10μg/L TGF-... 目的探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)增殖和迁移能力的影响及作用机制。方法对数生长期人PDLSCs随机分为TGF-β1组(培养液+10μg/L TGF-β1)和对照组(培养液),采用CCK-8法检测2组培养第1、2、3、4、5、6、7天细胞增殖能力;培养48h,采用Transwell小室法检测2组细胞迁移能力,Western blot法检测2组Notch1胞内段(Notch1intracellular domain,NICD)蛋白相对表达量。结果 TGF-β1组培养第1天细胞吸光度值(0.45±0.02)与对照组(0.45±0.03)比较差异无统计学意义(P〉0.05),培养第2、3、4、5、6、7天细胞吸光度值(0.81±0.08、1.82±0.07、2.14±0.09、2.49±0.11、2.69±0.12、2.78±0.08)均高于对照组(0.61±0.04、1.17±0.05、1.47±0.10、1.99±0.11、2.20±0.03、2.29±0.08)(P〈0.05);培养48h,TGF-β1组迁移细胞数目[(61.40±2.30)%]较对照组[(31.80±1.48)%]多,NICD蛋白相对表达量(0.49±0.01)较对照组(0.35±0.01)高(P〈0.05)。结论 TGF-β1可激活Notch1信号通路,促进人PDLSCs增殖和迁移。 展开更多
关键词 牙周膜干细胞 转化生长因子-Β1 细胞增殖 细胞迁移
AGEs和TNF-α 对人牙周膜干细胞骨向分化能力的协同抑制作用
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作者 杨晓红 杨琨 +2 位作者 崔晓霞 刘琪 金岩 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第12期5648-5653,共6页
本实验旨在研究糖基化终末产物(AGE-BSA)和TNF-α对人牙周膜干细胞增殖及骨向分化能力的影响。本实验通过体外组织块酶消化法和有限稀释法克隆化培养牙周膜干细胞,使用流式细胞仪检测细胞表型分子stro-1、CD146、CD44、CD90的表达而对... 本实验旨在研究糖基化终末产物(AGE-BSA)和TNF-α对人牙周膜干细胞增殖及骨向分化能力的影响。本实验通过体外组织块酶消化法和有限稀释法克隆化培养牙周膜干细胞,使用流式细胞仪检测细胞表型分子stro-1、CD146、CD44、CD90的表达而对其进行干细胞鉴定后,取第3代人牙周膜干细胞在100μg/mLAGE-BSA及10ng/mLTNF-α刺激下进行增殖能力检测;同时矿化诱导,设A组(AGE-BSA刺激组),T组(TNF-α刺激组),AT组(AGE-BSA/TNF-α共同刺激组),不含AGE-BSA/TNF-α的常规矿化诱导组作为对照;于诱导的21d茜素红染色观察钙结节形成情况,诱导7d,碱性磷酸酶染色观察ALP活性、实时定量聚合酶链反应(realtimePCR)和Western blotting检测成骨相关基因及蛋白表达情况。流式细胞仪显示细胞阳性表达STRO-1、CD146、CD44、CD90;成骨诱导21d后茜素红染色和定量分析显示,AT组骨结节形成量最低,A组及T组相对于对照组骨结节形成量存在下降;差异均有统计学意义(p<0.05)。成骨诱导7d后ALP染色,ALP活性变化趋势与茜素红定量分析相同。成骨诱导7d后RT-PCR检测成骨相关基因BSP、OCN、ALPmRNA表达,AT组表达水平最低,A组及T组有下降趋势,差异均有统计学意义(p<0.05)。Western blotting检测显示,各组总蛋白BSP蛋白表达趋势与RT-PCR趋势相同。AGEs与TNF-α均具有对HPDLSC的骨向分化能力的抑制作用,两者共同刺激对HPDLSC骨向分化能力存在协同抑制作用。 展开更多
关键词 糖基化终末产物 肿瘤坏死因子 牙周膜干细胞 骨向分化
miR-146a在人炎症牙周膜干细胞中的表达及其与TLR4靶向调控作用的研究 预览
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作者 冯娜 李珂 邵江红 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2018年第1期1-5,共5页
目的:检测miR-146a在人健康及脂多糖(LPS)刺激炎症牙周膜干细胞(PDLSCs)后的表达情况,并探讨其与TLR4的作用关系。方法:分别提取牙周健康者和牙周炎患者的PDLSCs,通过Real-Time PCR检测人健康及LPS刺激后炎症PDLSCs中miR-146 a的m... 目的:检测miR-146a在人健康及脂多糖(LPS)刺激炎症牙周膜干细胞(PDLSCs)后的表达情况,并探讨其与TLR4的作用关系。方法:分别提取牙周健康者和牙周炎患者的PDLSCs,通过Real-Time PCR检测人健康及LPS刺激后炎症PDLSCs中miR-146 a的mRNA表达水平;Real-Time PCR、Western blot及荧光素酶报告基因检测miR-146a与TLR4的相互作用关系。结果:炎症PDLSCs中miR-146a的mRNA表达水平明显高于健康组(P〈0.05);LPS刺激的炎症PDLSCs中miR-146a的mRNA表达水平显著增高(P〈0.05)。与空白组相比,过表达miR-146a后,TLR4 mRNA及蛋白的表达水平均明显降低(P〈0.05);抑制miR-146 a的表达后,TLR4 mRNA及蛋白的表达水平均显著增加(P〈0.05);荧光素酶报告基因检测结果显示,miR-146 a与TLR4的3'UTR具有靶向抑制作用。结论 :miR-146 a在人炎症PDLSCs中表达上调,同时可显著下调其靶基因TLR4的表达,推测miR-146a可能参与了DPLSCs的炎症反应调控。 展开更多
关键词 牙周膜干细胞 MIR-146A TLR4 炎症
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MAPK和AKT磷酸化下调参与Toll样受体抑制的人牙周膜干细胞的成骨分化 预览
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作者 朱云艳 李倩 +1 位作者 张怡美 周彦恒 《北京大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第1期33-41,共9页
目的:探讨Toll样受体(Toll like receptors,TLR)对人牙周膜干细胞成骨分化的影响及其可能的分子机制。方法:应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)及流式细胞术检测TLR在人牙周膜... 目的:探讨Toll样受体(Toll like receptors,TLR)对人牙周膜干细胞成骨分化的影响及其可能的分子机制。方法:应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)及流式细胞术检测TLR在人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,h PDLSCs)上的表达。在成骨培养基中加入多种浓度的不同TLR配体培养7~14 d,检测TLR对h PDLSCs成骨的影响。通过Western blotting方法检测TLR配体刺激h PDLSCs 7 d后,丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)及蛋白激酶B(protein kinase B,PKB or AKT)磷酸化水平的变化及runt相关转录因子2(runt related transcription factor 2,Runx2)的变化,并对比加入MAPK及AKT抑制剂后Runx2的变化,探究TLR是否通过影响下游的MAPK及AKT的活化而影响h PDLSCs的成骨分化。结果:TLR1、TLR3、TLR4、TLR6在h PDLSCs上表达较高,不同TLR的阳性细胞百分比为TLR1 2.82%±0.68%,TLR2 1.26%±0.09%,TLR3 13.23%±2.05%,TLR4 3.64%±0.79%,TLR6 3.21%±1.64%,其趋势与TLR在h PDLSCs中mRNA表达相一致。高浓度的TLR配体(Poly I:C 10 mg/L,LPS 10 mg/L,Pam3CSK4 1 mg/L,FSL-1 50μg/L)刺激h PDLSCs可减少矿化结节的形成,减弱ALP染色及降低ALP活性。高浓度TLR配体刺激还可下调细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)、P38、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)及AKT的磷酸化水平,伴随Runx2的表达水平下调,应用MAPK及AKT抑制剂也可下调Runx2的表达。结论:高浓度的TLR配体刺激可抑制h PDLSCs的成骨分化,这种抑制作用和MAPK及AKT磷酸化降低相关。 展开更多
关键词 TOLL样受体 牙周膜干细胞 成骨分化 丝裂原活化蛋白激酶 蛋白激酶B
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p38 MAPK通路调控BMP9诱导hPDLSCs成骨分化的体外研究
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作者 张奕 胡婷 +2 位作者 叶国 向学熔 胡娜 《上海口腔医学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期596-601,共6页
目的:检测骨形成发生蛋白9(bone morphogenetic proteins9,BMP9)对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)的成骨诱导分化能力,并探讨p38MAPK通路在该成骨分化中的作用。方法:培养hPDLSCs,腺病毒载体(Ad-BMP9)... 目的:检测骨形成发生蛋白9(bone morphogenetic proteins9,BMP9)对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)的成骨诱导分化能力,并探讨p38MAPK通路在该成骨分化中的作用。方法:培养hPDLSCs,腺病毒载体(Ad-BMP9)感染hPDLSCs后,通过碱性磷酸酶(alkalinephos phatase,ALP)活性测定与染色、定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)、钙盐沉积等方法,分别检测ALP、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)的表达及钙盐沉积量,评价BMP9诱骨分化的能力。在Ad-BMP9感染hPDLSCs36h后,检测BMP9作用hPDLSCs后对p38及MKK3/6磷酸化(p-p38,p-MKK3/6)的影响,以及p38MAPK通路抑制剂SB203580预处理后BMP9-p38-MAPK通路对hPDLSCs成骨分化的影响。采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析。结果:在Ad-BMP9作用下,ALP活性、OPN和OCN的表达均显著高于对照组(P<0.01),ALP染色与钙盐沉积结果与之吻合。Western印迹法检测发现,BMP9可增强p-p38、p-MKK3/6的表达。加入p38MAPK通路抑制剂后,ALP、及OPN、OCN的表达均显著降低(P<0.01),钙盐沉积、基质矿化也显著减弱。结论:在hPDLSCs的分化过程中,BMP9对其具有诱骨分化能力。MKK3/6-p38MAPK通路参与了该成骨分化过程且具有正向调节作用。 展开更多
关键词 牙周膜干细胞 BMP9 成骨分化 P38MAPK
功能性复合膜与人牙周膜干细胞的生物相容性研究
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作者 杨昊 雷敏 +1 位作者 伊远平 支方静 《现代口腔医学杂志》 CAS 2018年第6期344-347,共4页
目的研究功能性复合膜(functional complex film,FCF)的生物学性能,为牙周组织再生技术中生物膜的研发及应用提供实验依据。方法FCF是复合载重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP2)的甲基丙烯酸缩水甘油酯右旋糖酐(dex-GMA)凝胶微球的引导组织... 目的研究功能性复合膜(functional complex film,FCF)的生物学性能,为牙周组织再生技术中生物膜的研发及应用提供实验依据。方法FCF是复合载重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP2)的甲基丙烯酸缩水甘油酯右旋糖酐(dex-GMA)凝胶微球的引导组织再生膜,利用拔除的第三磨牙培养出人牙周膜干细胞(periodontal ligamentstem cells,PDLSCs),经鉴定后与FCF的浸提液、降解液共同培养,对FCF与人PDLSCs的细胞相容性进行实验研究。结果FCF具有良好的生物活性,其浸提液、降解液对人PDLSCs的增殖和分化具有明显的促进作用(P<0.05)。结论FCF不仅可以满足引导组织再生膜的要求,对人PDLscs具有良好的生物相容性,还能够持续稳定地促进其生长分化,是理想的生物膜材料。 展开更多
关键词 功能性复合 牙周膜干细胞 引导组织再生 生物学评价
Hedgehog信号通路在人牙周膜干细胞应力成骨中的作用及转导机制 预览
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作者 张洁 《浙江实用医学》 2018年第5期313-316,共4页
目的探讨Hedgehog信号通路在人牙周膜干细胞(PDLSCs)应力成骨中的作用及转导机制。方法通过构建人SMO基因的siRNA慢病毒表达载体,感染人牙周膜干细胞,应用Flexcell FX-4000T应力加载系统分别对感染后的PDLSCs施加最大型变量12%,... 目的探讨Hedgehog信号通路在人牙周膜干细胞(PDLSCs)应力成骨中的作用及转导机制。方法通过构建人SMO基因的siRNA慢病毒表达载体,感染人牙周膜干细胞,应用Flexcell FX-4000T应力加载系统分别对感染后的PDLSCs施加最大型变量12%,最小型变量0的正弦波,频率0.1Hz的张应力,提取加力0、6、12、24小时后的蛋白,采用Western印迹法检测Hedgehog重要信号分子Gli-1、Patchl、SMO的表达,同时检测成骨分化因子Runx2、ALP的表达。结果SMO基因沉默后,与对照组相比,SMO特异性siRNA慢病毒组成骨分化因子Runx2、ALP表达减弱,重要信号分子Gli-1、Patchl表达也显著减弱。结论Hedgehog信号通路调控了PDLSCs的应力成骨过程,这种调控作用主要表现在成骨分化的早期,且应力刺激12小时时具有较强的促成骨分化作用。 展开更多
关键词 HEDGEHOG 牙周膜干细胞 SMOOTHENED RNA 动态张应力 成骨分化
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DMOG对人牙周膜干细胞成骨分化和成血管能力影响的体外研究 预览
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作者 张璐 许敏 +2 位作者 李汉青 王芳 何家才 《安徽医科大学学报》 北大核心 2018年第8期1178-1183,共6页
目的探讨二甲氧已二酰甘氨酸(DMOG)对人牙周膜干细胞(h PDLSCs)体外成骨分化和成血管能力的影响。方法采用组织块法分离培养h PDLSCs,应用流式细胞仪进行鉴定。给予0、0.1、1、10、100μmol/L的DMOG处理,MTT法分析DMOG对h PDLSCs增... 目的探讨二甲氧已二酰甘氨酸(DMOG)对人牙周膜干细胞(h PDLSCs)体外成骨分化和成血管能力的影响。方法采用组织块法分离培养h PDLSCs,应用流式细胞仪进行鉴定。给予0、0.1、1、10、100μmol/L的DMOG处理,MTT法分析DMOG对h PDLSCs增殖能力和细胞活力影响,RTPCR检测核心结合因子2(RUNX2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、血管内皮生长因子(VEGF)基因mRNA表达,Western blot法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、VEGF蛋白表达。成骨诱导14 d后行ALP染色及茜素红染色。结果从人牙周膜组织中分离培养的细胞经鉴定为h PDLSCs。MTT结果显示,DMOG可呈剂量依赖性地抑制h PDLSCs的增殖(P〈0.05),DMOG能提高缺血清条件下h PDLSCs的细胞活力(P〈0.05)。RT-PCR和Western blot结果显示,10μmol/L的DMOG可显著上调RUNX2、ALP、OCN基因mRNA表达(P〈0.05),而100μmol/L的DMOG可显著上调VEGF基因mRNA和HIF-1α、VEGF蛋白水平的表达(P〈0.05)。ALP和茜素红染色显示,10μmol/L的DMOG可显著促进h PDLSCs成骨分化中ALP的表达和钙结节的形成。结论DMOG通过上调HIF-1α的表达,促进h PDLSCs的成骨分化和成血管能力。 展开更多
关键词 二甲氧已二酰甘氨酸 牙周膜干细胞 低氧诱导因子-1Α 成骨分化 成血管能力
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姜黄素对人牙周膜干细胞增殖及炎症因子表达的影响 预览
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作者 贾斌 董颖韬 +1 位作者 苗莉 祖斌 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2018年第3期131-135,共5页
目的:探讨姜黄素对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖及炎性因子表达水平的影响。方法:体外培养hPDLSCs并对其进行鉴定。模型组为α-MEM培养液(含10μg/mL脂多糖)中培养的hPDLSCs体系,干预组为姜黄素预处理后加入α-MEM培养液(含10μg/mL脂多... 目的:探讨姜黄素对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖及炎性因子表达水平的影响。方法:体外培养hPDLSCs并对其进行鉴定。模型组为α-MEM培养液(含10μg/mL脂多糖)中培养的hPDLSCs体系,干预组为姜黄素预处理后加入α-MEM培养液(含10μg/mL脂多糖)中培养的hPDLSCs体系,对照组为α-MEM培养液(不含10μg/mL脂多糖)进行培养的hPDLSCs体系。MTT法测定各组hPDLSCs的增殖能力,RT-PCR法测定hPDLSCs中IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA的表达水平。结果:hPDLSCs培养2~7 d时,3组间OD值为对照组<干预组<模型组(P<0.05);与对照组相比,模型组及干预组hPDLSCs中IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的表达水平均显著增加(P<0.05),但干预组IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的表达水平明显低于模型组(P<0.05)。结论:姜黄素对脂多糖介导下的hPDLSCs增殖具有一定的抑制作用,可降低炎性因子表达。 展开更多
关键词 姜黄素 脂多糖 牙周膜干细胞 IL-6 TNF-α IL-1Β
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化脓链球菌脂磷壁酸对人牙周膜干细胞分化能力的影响 预览
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作者 靳路远 朱文晶 夏登胜 《北京口腔医学》 CAS 2018年第1期1-4,共4页
目的 研究脂磷壁酸(LTA)对牙周膜干细胞(PDLSCs)分化能力的影响,从而探讨G+细菌毒素LTA对人牙周膜干细胞再生牙周组织的影响。方法 用0.1、1和10μg/ml的LTA作用于PDLSCs,采用MTT方法及流式细胞术检测细胞的增殖及凋亡情况,使用碱... 目的 研究脂磷壁酸(LTA)对牙周膜干细胞(PDLSCs)分化能力的影响,从而探讨G+细菌毒素LTA对人牙周膜干细胞再生牙周组织的影响。方法 用0.1、1和10μg/ml的LTA作用于PDLSCs,采用MTT方法及流式细胞术检测细胞的增殖及凋亡情况,使用碱性磷酸酶染色和茜素红染色对细胞的成骨分化能力进行比较;应用油红O染色鉴定成脂分化能力,实时定量PCR检测成骨成脂相关基因的变化,研究LTA在PDLSCs分化中的作用。结果 1μg/ml及10μg/ml LTA显著降低PDLSCs增殖率,细胞凋亡增加。ALP染色及活性结果表明,早期成骨能力各组之间没有显著差异;茜素红染色结果及钙离子浓度定量测定显示,随LTA浓度升高,PDLSCs晚期成骨能力降低,并具有LTA浓度依赖性。成骨相关基因Runx2表达表现相同变化趋势。油红O染色结果表明,随着LTA浓度的增加,PDLSCs的成脂分化能力升高,成脂相关基因PPARγ表达升高,具有LTA浓度依赖性。结论 LTA降低PDLSCs成骨分化能力,同时促进细胞成脂分化能力,表明LTA抑制PDLSCs介导的牙周组织再生。 展开更多
关键词 脂磷壁酸 牙周膜干细胞 成骨分化 成脂分化
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人牙周膜干细胞与人牙髓干细胞的表型及生长特性比较 预览 被引量:2
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作者 蔡洪桢 贺慧霞 +1 位作者 王飞翔 张绍清 《中华老年口腔医学杂志》 2017年第2期91-96,共6页
目的:比较人牙周膜干细胞(human Periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)和牙髓干细胞(human Dental pulp stem cells,hDPSCs)的表型及生长特性,为深入研究这两种细胞生物学特性提供依据。方法:组织块法培养获得原代人牙周膜... 目的:比较人牙周膜干细胞(human Periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)和牙髓干细胞(human Dental pulp stem cells,hDPSCs)的表型及生长特性,为深入研究这两种细胞生物学特性提供依据。方法:组织块法培养获得原代人牙周膜细胞和牙髓细胞,采用有限稀释法分别对两者克隆化培养、分离纯化得到hPDLSCs和hDPSCs,采用倒置相差显微镜观察细胞形态、CCK8法检测细胞生长活性并绘制两者生长曲线、流式细胞技术检测干细胞表面标志物,分析比较两种细胞集落形成率(colony formation ratio,CFR)。结果:hPDLSCs和hDPSCs镜下形态相似,生长曲线均呈"S"形,牙周膜细胞中STRO-1表达hPDLSCs阳性率为15.88±0.48%,牙髓细胞中STRO-1表达hDPSCs阳性率为11.86±0.43%,两者无显著性差异。两种干细胞均阳性表达间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)表面标志物STRO-1、CD29、CD44、CD90、CD73和血管内皮标志物CD105,其中STRO-1、CD29、CD90、CD73、CD105及CD166百分率达90%以上,阴性表达造血干细胞表面标志物CD34和CD45。hDPSCs的集落形成率(4.31±0.08%)显著高于hPDLSCs的集落形成率(2.68±0.06%)(P〈0.05)。结论:hPDLSCs和hDPSCs细胞的形态相似,均高表达MSCs表面特异性标志物,hDPSCs的集落形成率显著高于hPDLSCs,说明hDPSC自我更新能力较hPDLSCs强,可为深入研究这两种干细胞提供实验依据。 展开更多
关键词 牙周膜干细胞 牙髓干细胞 表型
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周期性张、压应力作用下人牙周膜干细胞RANKL/OPG的变化 预览 被引量:1
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作者 张淋坤 赵志河 +1 位作者 张春香 余秋丽 《西南医科大学学报》 2017年第2期150-154,共5页
目的:对周期性张、压应力作用下人牙周膜干细胞(hPDLSCs)RANKL、OPG及RANKL/OPG比值的变化进行初步探讨。方法:用3 000 ?滋strain,0.5 Hz的周期性张、压应力对hPDLSCs分别加载0(对照组)、3、6、12、24 h。Western blotting检测R... 目的:对周期性张、压应力作用下人牙周膜干细胞(hPDLSCs)RANKL、OPG及RANKL/OPG比值的变化进行初步探讨。方法:用3 000 ?滋strain,0.5 Hz的周期性张、压应力对hPDLSCs分别加载0(对照组)、3、6、12、24 h。Western blotting检测RANKL 和OPG的变化,计算RANKL/OPG比值的变化。结果:周期性张应力作用3 h,RANKL/OPG比值达到最低点(0.902 ± 0.196),显著低于对照组水平(P = 0.000),此后开始上升,但直到24 h,仍低于对照组水平。周期性压应力作用3 h,RANKL/OPG比值达到最高点(1.058 ± 0.147),显著高于对照组水平(P = 0.000),6 h(0.996 ± 0.103)回落到对照组水平(P = 0.152),此后直到24 h(0.8449 ± 0.041),显著低于对照组水平(P = 0.000)。结论:周期性张、压应力都可以上调hPDLSCs的RANKL 和OPG表达。在周期性张应力加载的最初24 h,hPDLSCs不能促进破骨细胞分化;而周期性压应力加载的最初6 h,hPDLSCs可以促进破骨细胞分化,此后转而抑制破骨细胞分化。 展开更多
关键词 破骨分化 牙周膜干细胞 NF-κB受体活化因子配体 NF—κB受体活化因子 骨保护素
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