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O型口蹄疫病毒样颗粒编码基因的真核表达载体构建及表达 预览
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作者 李淑萍 孙世琪 +2 位作者 莫亚霞 胡永浩 郭慧琛 《动物医学进展》 北大核心 2019年第1期1-6,共6页
为了构建O型口蹄疫病毒(FMDV)病毒样颗粒编码基因的真核表达载体,将FMDV结构蛋白VP0、VP1、VP3的基因分别克隆到真核表达载体pVAX1中,再分别通过带有BsmBⅠ、EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点的引物,分别对重组质粒pVAX-VP0、pVAX-VP1和pVAX-VP3... 为了构建O型口蹄疫病毒(FMDV)病毒样颗粒编码基因的真核表达载体,将FMDV结构蛋白VP0、VP1、VP3的基因分别克隆到真核表达载体pVAX1中,再分别通过带有BsmBⅠ、EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点的引物,分别对重组质粒pVAX-VP0、pVAX-VP1和pVAX-VP3扩增后进行酶切,用T4连接酶连接得到重组的真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3。对重组真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3进行PCR鉴定并测序。用脂质体将重组真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3转染BHK-21细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)及Westernblot检测重组真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3在细胞中的表达情况。结果表明,成功构建了重组真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3,并在BHK-21细胞中得到表达。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 重组真核表达载体 pVAX-VP0VP1VP3构建和表达 病毒样颗粒
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病毒样颗粒限域纳米催化剂提高催化加氢活性
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作者 朱劼 胡加慧 +1 位作者 杨坤 卢晓雪 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第11期2227-2233,共7页
以豇豆褪绿斑驳病毒(CCMV)衣壳蛋白表达基因为模板,构建基因工程菌CCMV-BL21,并通过正交实验优化可溶蛋白表达工艺;采用原位还原法制备病毒样颗粒限域Ru纳米催化剂(Ru@CCMV),以肉桂醛和4-硝基苯酚加氢为模型反应进行评价。目标蛋白的最... 以豇豆褪绿斑驳病毒(CCMV)衣壳蛋白表达基因为模板,构建基因工程菌CCMV-BL21,并通过正交实验优化可溶蛋白表达工艺;采用原位还原法制备病毒样颗粒限域Ru纳米催化剂(Ru@CCMV),以肉桂醛和4-硝基苯酚加氢为模型反应进行评价。目标蛋白的最佳表达条件为:诱导温度25℃,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)终浓度1.0 mmol/L,诱导时间15 h。在该条件下,可溶性蛋白表达量达181 mg/L发酵液,约占表达蛋白总质量的93%。Ru@CCMV在两个反应中均显示较高的催化活性,反应速率常数经计算分别达到0.17 min^-1和0.50 h^-1,高于柠檬酸修饰Ru纳米颗粒(Ru-CA)催化剂(0.11 min^-1和0.36 h^-1)。 展开更多
关键词 病毒样颗粒 豇豆褪绿斑驳病毒 原核表达 纳米催化剂 催化技术
H9N2亚型禽流感病毒样颗粒疫苗的制备研究 预览
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作者 潘学 陈新武 +6 位作者 季雅宁 李雪松 刘芹防 陈鸿军 杨健美 滕巧泱 李泽君 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第1期1-7,共7页
目前,我国现有的商品化灭活苗无法完全保护免疫鸡免受H9N2亚型禽流感病毒流行株的感染。病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗的免疫效果及其安全性优于灭活苗,成为近年研究的热点。本研究旨在建立一种H9N2亚型流感病毒VLP疫苗制备... 目前,我国现有的商品化灭活苗无法完全保护免疫鸡免受H9N2亚型禽流感病毒流行株的感染。病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗的免疫效果及其安全性优于灭活苗,成为近年研究的热点。本研究旨在建立一种H9N2亚型流感病毒VLP疫苗制备的方法。将优化的H9N2亚型禽流感病毒的HA、NA基因和未优化的HA、NA基因分别插入到pFastBackTMDual载体中,得到相应的重组供体。然后将这些重组供体转化至含Bacmid的DH10Bac感受态细胞中,获得含有目的基因的重组杆粒。将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞,红细胞凝集试验、SDS-PAGE和Western blot结果显示,优化的HA、NA基因编码的蛋白在Sf9昆虫细胞中获得了成功表达。通过透射电子显微镜观察细胞上清的浓缩液,能检测到VLP。结果表明,本研究在Sf9昆虫表达系统中成功表达了H9N2亚型禽流感病毒的HA和NA蛋白,并形成了VLP,为进一步研究该病毒VLP疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 流感病毒 基因优化 HA NA 病毒样颗粒
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Rapid and Sparse Labeling of Neurons Based on the Mutant Virus-Like Particle of Semliki Forest Virus
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作者 Fan Jia Xutao Zhu +4 位作者 Pei Lv Liang Hu Qing Liu Sen Jin Fuqiang Xu 《神经科学通报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第3期378-388,共11页
Sparse labeling of neurons contributes to uncovering their morphology, and rapid expression of a fluorescent protein reduces the experiment range. To achieve the goal of rapid and sparse labeling of neurons in vivo, w... Sparse labeling of neurons contributes to uncovering their morphology, and rapid expression of a fluorescent protein reduces the experiment range. To achieve the goal of rapid and sparse labeling of neurons in vivo, we established a rapid method for depicting the fine structure of neurons at 24 h post-infection based on a mutant viruslike particle of Semliki Forest virus. Approximately 0.014 fluorescent focus-forming units of the mutant virus-like particle transferred enhanced green fluorescent protein into neurons in vivo, and its affinity for neurons in vivo was stronger than for neurons in vitro and BHK21(baby hamster kidney) cells. Collectively, the mutant virus-likeparticle provides a robust and convenient way to reveal the fine structure of neurons and is expected to be a helper virus for combining with other tools to determine their connectivity. Our work adds a new tool to the approaches for rapid and sparse labeling of neurons in vivo. 展开更多
关键词 Semliki Forest virus MUTANT virus-like particle RAPID LABELING SPARSE LABELING NEURONAL morphology
通用H5N1亚型禽流感病毒样颗粒疫苗的制备
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作者 刘静 任志广 +6 位作者 王铁成 李元果 孙伟洋 冯娜 秦川 高玉伟 夏咸柱 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第7期755-760,共6页
目的高致病性H5N1亚型流感病毒可感染人,并不断衍生出多个新的基因谱系,存在着大规模流行的可能性。我国现有的商品化疫苗无法对不同谱系的H5N1流感病毒感染提供有效的保护。病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)疫苗具有良好的免疫... 目的高致病性H5N1亚型流感病毒可感染人,并不断衍生出多个新的基因谱系,存在着大规模流行的可能性。我国现有的商品化疫苗无法对不同谱系的H5N1流感病毒感染提供有效的保护。病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)疫苗具有良好的免疫原性和安全性,成为近年研究的热点。本研究旨在建立H5亚型禽流感病毒通用型病毒样颗粒疫苗的制备方法。 方法将优化的H5N1A/meerkat/Shanghai/SH-1/2012(clade 2.3.2.1)亚型流感病毒的HLHA(HA stem)/5M2e(5个M2e)/HL5M2e(5M2e替代HA的头部嵌入HLHA)、NP基因和M1基因分别插入pFast-BacDual载体,得到相应的重组供体。然后将重组供体转化至含Bacmid的DH10Bac感受态细胞中,获得含有目的基因的重组杆粒。 结果酶切和PCR鉴定表明成功构建了含目的基因的重组杆粒Bacmid-(HLHA/5M2e/HL5M2e、NP、M1)。将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞,IFA试验和Western blot试验皆证实,优化的HLHA(HA stem)/5M2e/HL5M2e、NP基因和M1基因编码的蛋白均获得表达。透射电子显微镜观察VLPs转染Sf9细胞上清的浓缩液中,有球形结构和100nm左右典型VLPs存在。 结论在Sf9昆虫杆状病毒表达系统中成功表达H5N1A/meerkat/Shanghai/SH-1/2012(clade 2.3.2.1)亚型禽流感病毒的HLHA(HA stem)/5M2e/HL5M2e、NP和M1蛋白,并组装成3种VLPs,为进一步研究流感病毒的VLPs疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 流感病毒 基因优化 HLHA(HA stem)/5M2e/HL5M2e NP M1 病毒样颗粒
病毒样颗粒疫苗的免疫机制研究及应用进展
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作者 李焱琳(综述) 李秀玲(审校) 《国际生物制品学杂志》 CAS 2019年第4期203-208,共6页
病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)因具有良好的免疫原性以及较高的安全性,逐渐成为当今药物及疫苗研究的热点.鉴于VLP具有高度重复表面结构的特性,其可通过多种途径引起有效的体液和细胞免疫应答.目前可用多种表达系统表达VLP,且随... 病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)因具有良好的免疫原性以及较高的安全性,逐渐成为当今药物及疫苗研究的热点.鉴于VLP具有高度重复表面结构的特性,其可通过多种途径引起有效的体液和细胞免疫应答.目前可用多种表达系统表达VLP,且随着对VLP研究的深入,已有多种VLP疫苗进入临床试验阶段,部分VLP疫苗已经商业化.此文对VLP免疫机制及VLP疫苗研究进展做一综述. 展开更多
关键词 病毒样颗粒 疫苗 免疫机制
人乳头瘤病毒52型病毒样颗粒制备及其生物活性
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作者 郭晶 刘伟 +3 位作者 董雪 孙博 吴丛梅 殷玉和 《生物技术》 CAS 2019年第2期127-132,139共7页
[目的]利用大肠杆菌系统表达人乳头瘤病毒52型(HPV52) L1蛋白,并获得HPV52病毒样颗粒(VLPs)。[方法]优化并合成HPV52L1基因,构建p ET-30a-52L1表达载体粒,转化大肠杆菌E. coli BL21 StarTM(DE3)。经IPTG诱导表达,阳离子交换层析纯化,SDS... [目的]利用大肠杆菌系统表达人乳头瘤病毒52型(HPV52) L1蛋白,并获得HPV52病毒样颗粒(VLPs)。[方法]优化并合成HPV52L1基因,构建p ET-30a-52L1表达载体粒,转化大肠杆菌E. coli BL21 StarTM(DE3)。经IPTG诱导表达,阳离子交换层析纯化,SDS-PAGE和Western Blotting鉴定,BALB/c小鼠免疫2次,初次后4w检测免疫血清中HPV52中和抗体滴度。[结果]获得纯度90%的HPV52L1蛋白,将获得的HPV52L1蛋白进行解组装和重组装形成VLPs,动态光散射观察到粒径约为70nm,透射电镜观察到50~60nm的均一VLPs,中和抗体滴度达25600。[结论]大肠杆菌系统表达人乳头瘤病毒52型(HPV52) L1蛋白,并经过一步柱层析纯化获得纯度达90%的L1蛋白,经解组装重组装获得粒径大小为50~60nm的VLPs,具有良好免疫原性。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒52型 L1蛋白 可溶性表达 类病毒颗粒
鼠多瘤病毒样颗粒及其在疫苗开发等方面的研究进展
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作者 李郭安 张麟 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2019年第8期760-771,共12页
鼠多瘤病毒(murine polyomavirus,MPV)的病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)是通过MPV的衣壳结构蛋白VP1自组装而成的球形纳米壳状结构. MPV VLP具有独特的纳米结构,在一定条件下能够进行体内或体外自组装,具有丰富的可修饰位点.因此... 鼠多瘤病毒(murine polyomavirus,MPV)的病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)是通过MPV的衣壳结构蛋白VP1自组装而成的球形纳米壳状结构. MPV VLP具有独特的纳米结构,在一定条件下能够进行体内或体外自组装,具有丰富的可修饰位点.因此,容易通过结构的修饰改造实现MPV VLP在诸多领域的应用.本文从MPV VLP的结构特点着眼,回顾MPV VLP的发现历程,介绍MPV VLP的制备表达系统和组装机理,综述MPV VLP的修饰.重点介绍化学修饰和基因工程修饰方法,并通过实例阐述MPV VLP在疫苗开发、药物及其他分子载体等领域的应用及其研究进展.基于对已有研究进展的分析,指出大规模生产、组装机理解析及其应用研究的关键环节,服务于MPV VLP的应用开发. 展开更多
关键词 鼠多瘤病毒 病毒样颗粒 蛋白质 纳米结构 表达 修饰
HPV31 L1 C端截短基因可在昆虫细胞表达体系中高水平制备L1 VLP疫苗 预览
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作者 郝亚茹 张婷 +4 位作者 刘洪洋 王志荣 周艳 夏百成 许雪梅 《基础医学与临床》 CSCD 2019年第3期343-347,共5页
目的利用昆虫细胞表达体系制备人乳头瘤病毒(HPV)31 L1病毒样颗粒(VLP)疫苗。方法化学合成法获得昆虫Sf9细胞偏性密码子优化的、C端删除27个氨基酸编码序列的HPV31L1截短基因(HPV31 L1MΔC),构建重组杆状病毒,感染Sf9细胞进行表达;分别... 目的利用昆虫细胞表达体系制备人乳头瘤病毒(HPV)31 L1病毒样颗粒(VLP)疫苗。方法化学合成法获得昆虫Sf9细胞偏性密码子优化的、C端删除27个氨基酸编码序列的HPV31L1截短基因(HPV31 L1MΔC),构建重组杆状病毒,感染Sf9细胞进行表达;分别采用超声破碎、含离子型表面活性剂(1%SDS等)或含非离子型表面活性剂(0.5% TritonX-100)的裂解缓冲液,制备细胞裂解上清;氯化铯超速离心法纯化后经动态光散射及透射电子显微镜鉴定;0.1μg的HPV31 L1MΔCV LP于第0和2周肌肉免疫BALB/c小鼠,第4周采集血清分析中和活性。结果3种裂解方法制备的上清均显示HPV31 L1MΔC蛋白的特异表达,其表达量约占裂解上清总蛋白的10%;采用非离子型表面活性剂获得的裂解上清纯化后,目的蛋白纯度高,产量达11.5mg/L;纯化蛋白的水化分子直径为103.3nm,均一性好;电镜分析为直径50~60nm的VLP。免疫血清中HPV31中和抗体滴度为1440。结论HPV31L1MΔC在昆虫细胞表达体系制备的VLP产量高、免疫原性好,可用于生产含HPV31L1VLP的多价疫苗。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒31型L1 病毒样颗粒 中和抗体 昆虫细胞
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番鸭细小病毒样颗粒的制备与鉴定 被引量:1
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作者 王安平 吴萌 +2 位作者 吴海涛 顾玲玲 朱善元 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期468-474,共7页
为在昆虫细胞中表达番鸭细小病毒主要结构蛋白VP3,并探讨重组蛋白VP3能否在昆虫细胞中自动组装成病毒样颗粒,高保真扩增VP3基因,克隆入杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组转移质粒pFB-VP3,转化DH10Bac感受态细胞,经抗性、蓝白斑筛选... 为在昆虫细胞中表达番鸭细小病毒主要结构蛋白VP3,并探讨重组蛋白VP3能否在昆虫细胞中自动组装成病毒样颗粒,高保真扩增VP3基因,克隆入杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组转移质粒pFB-VP3,转化DH10Bac感受态细胞,经抗性、蓝白斑筛选及PCR鉴定,得到重组Bacmid DNA。将其转染昆虫细胞Sf9,制备重组杆状病毒rBac-VP3,利用SDS-PAGE、Western-blot、间接免疫荧光试验对重组蛋白的表达情况进行检测,负染电镜观察病毒样颗粒,并通过Western-blot对病毒样颗粒进行鉴定。SDS-PAGE和Western-blot结果表明重组蛋白大小正确。间接免疫荧光试验结果显示,重组蛋白获得了成功表达。利用负染电镜可观察到直径约20 nm的典型二十面体病毒样颗粒。Western-blot结果显示该病毒样颗粒由VP3蛋白组成。本研究首次成功利用杆状病毒/昆虫细胞表达系统制备了番鸭细小病毒样颗粒,为番鸭细小病毒病新型基因工程疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 病毒样颗粒 杆状病毒/昆虫细胞表达系统 制备 鉴定
猪圆环病毒2型Cap基因多拷贝质粒的构建及病毒样颗粒的表达 预览
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作者 尹曼曼 刘汉平 楼觉人 《动物医学进展》 北大核心 2019年第9期1-6,共6页
通过构建多拷贝数表达质粒,获得高表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白Cap的毕赤酵母菌株。将Cap的基因克隆到pPIC3.5K载体中后,利用同尾酶技术将表达盒(5′AOX-Cap-TT)重复插入载体,分别构建了含有1、2、4、6个拷贝基因数的表达质粒并通过电转... 通过构建多拷贝数表达质粒,获得高表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白Cap的毕赤酵母菌株。将Cap的基因克隆到pPIC3.5K载体中后,利用同尾酶技术将表达盒(5′AOX-Cap-TT)重复插入载体,分别构建了含有1、2、4、6个拷贝基因数的表达质粒并通过电转化导入KM71菌株,重组菌株经发酵和甲醇诱导,通过SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白的表达;绘制不同拷贝数重组菌株的生长曲线;表达产物经纯化后透射电镜观察是否组装形成病毒样颗粒(VLPs)并免疫小鼠评估其免疫原性。Western blot结果显示,Cap蛋白能够在酵母细胞内表达,且6拷贝质粒的重组菌表达量最高;生长曲线显示拷贝数提高未对菌体正常生长带来影响;电镜下观察到表达的Cap蛋白能够自发装配成直径约为20 nm、与天然PCV2粒子大小相当、均一的VLPs;纯化后的VLPs免疫接种小鼠后能有效刺激机体产生PCV2抗体。含多拷贝数表达质粒的工程菌可显著提高重组毕赤酵母中Cap的表达量。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 CAP蛋白 多拷贝数 毕赤酵母 病毒样颗粒
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诺如病毒病毒样颗粒疫苗研究进展
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作者 刘宇阳(综述) 陈勇 蒋琳(审校) 《国际生物制品学杂志》 CAS 2019年第5期234-238,共5页
诺如病毒(norovirus,NoV)是引起急性胃肠炎的常见病原体。据WHO统计,每年有超过1亿人感染NoV,严重者会发生死亡,因此对该病毒疫苗的研究刻不容缓。目前NoV疫苗的研发主要集中于病毒样颗粒疫苗。此文在NoV生物学特征和流行病学特征的基础... 诺如病毒(norovirus,NoV)是引起急性胃肠炎的常见病原体。据WHO统计,每年有超过1亿人感染NoV,严重者会发生死亡,因此对该病毒疫苗的研究刻不容缓。目前NoV疫苗的研发主要集中于病毒样颗粒疫苗。此文在NoV生物学特征和流行病学特征的基础上,介绍NoV疫苗开发所面临的主要挑战以及病毒样颗粒疫苗研发的现状。 展开更多
关键词 诺如病毒 病毒样颗粒 疫苗 亚单位
人诺如病毒疫苗及治疗药物的研究进展
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作者 张巧玲(综述) 陈勇 蒋琳(审校) 《国际生物制品学杂志》 CAS 2019年第5期239-246,共8页
诺如病毒(norovirus,NoV)是引起急性胃肠炎的主要病原体之一,可以感染所有年龄段的人群。目前针对NoV引发的疾病尚无有效的治疗和预防手段,对于易感人群以及群发性感染,制定预防策略(包括疫苗)是必要的。利用NoV衣壳蛋白VP1以及VP1 P区... 诺如病毒(norovirus,NoV)是引起急性胃肠炎的主要病原体之一,可以感染所有年龄段的人群。目前针对NoV引发的疾病尚无有效的治疗和预防手段,对于易感人群以及群发性感染,制定预防策略(包括疫苗)是必要的。利用NoV衣壳蛋白VP1以及VP1 P区域自我组装形成的病毒样颗粒是NoV疫苗的主要研究方向,通过基因工程技术设计的多种相关疫苗已在不同系统中表达,临床试验证明部分疫苗具有良好的免疫原性。此外,NoV与其他肠道病原体如轮状病毒的联合疫苗也具有良好的前景。此文重点介绍目前处于临床前以及临床研究的NoV疫苗以及NoV相关疾病的治疗药物。 展开更多
关键词 诺罗病毒 病毒样颗粒 疫苗 药物 临床试用
诺如病毒样颗粒疫苗的研究进展
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作者 古琼 李启明 国泰 《中华微生物学和免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第7期542-548,共7页
人诺如病毒(Norovirus,NoV)是引发全球性人类非细菌性急性胃肠炎疾病的主要病原,由于无法进行细胞和小动物模型的培养限制了该疫苗的研发,无法利用传统的减毒活疫苗手段进行疫苗研发。以病毒样颗粒(vires like particle,VLP)为... 人诺如病毒(Norovirus,NoV)是引发全球性人类非细菌性急性胃肠炎疾病的主要病原,由于无法进行细胞和小动物模型的培养限制了该疫苗的研发,无法利用传统的减毒活疫苗手段进行疫苗研发。以病毒样颗粒(vires like particle,VLP)为代表的亚单位疫苗在NoV疫苗的研发过程中具有突出的优势。本文就利用不同表达系统进行NoV VLP疫苗的研发近况进行综述和展望。 展开更多
关键词 诺如病毒:病毒样颗粒 疫苗
中东呼吸综合征冠状病毒RT-RAA快速检测方法的建立及应用 被引量:1
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作者 周冬根 罗洁 +1 位作者 陈健骅 俞雪钧 《病毒学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期45-51,共7页
建立基于重组酶介导的中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)核酸检测方法。本研究设计、合成特异性中东呼吸综合征冠状病毒基因的重组酶介导检测(RAA)引物及探针,制备MERS-CoV假病毒颗粒阳性对照品,通过一系列条件优化建立了MERS-CoV... 建立基于重组酶介导的中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)核酸检测方法。本研究设计、合成特异性中东呼吸综合征冠状病毒基因的重组酶介导检测(RAA)引物及探针,制备MERS-CoV假病毒颗粒阳性对照品,通过一系列条件优化建立了MERS-CoV的快速、灵敏、特异的RT-RAA检测方法,分别与荧光定量RT-PCR检测方法做比较,并且采用首例中国MERS-CoV韩国地区输入病例的咽拭子样品、其它类似呼吸道病毒样本以及英国QCMD的MERS-CoV室间质评灭活样本做临床验证。结果显示:建立的RT-RAA方法检测中东呼吸综合征冠状病毒灵敏度为10拷贝,高于本实验室建立的荧光RT-PCR方法灵敏度(100拷贝),且检测时间(4.8~13.6min)大大低于荧光RT-PCR检测时间(90min);用该方法检测中东呼吸综合征冠状假病毒颗粒为阳性,而检测其他8种对照呼吸道病毒均呈阴性;检测临床阳性样本也与实际结果相符。本研究建立的中东呼吸综合征冠状病毒RT-RAA检测方法灵敏、特异、快速,可用于中东呼吸综合征冠状病毒感染的现场快速诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV) 重组酶介导 假病毒颗粒 现场
HCV多中和抗原表位嵌合病毒样颗粒免疫获得血清内中和抗体评价 预览
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作者 王晓岩 张海 +5 位作者 雷迎峰 林芳 崔颖 李斌 张惠中 韦三华 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第5期707-711,720共6页
目的:纯化的HCV多中和抗原表位及HCV包膜蛋白E2嵌合的HBV S抗原病毒样颗粒免疫新西兰兔,测定免疫血清内的中和抗体。分析中和抗体对HCVpp感染Huh7.5的中和作用。方法:纯化的HCV多中和抗原表位及包膜蛋白E2嵌合的HBV S抗原病毒样颗粒(... 目的:纯化的HCV多中和抗原表位及HCV包膜蛋白E2嵌合的HBV S抗原病毒样颗粒免疫新西兰兔,测定免疫血清内的中和抗体。分析中和抗体对HCVpp感染Huh7.5的中和作用。方法:纯化的HCV多中和抗原表位及包膜蛋白E2嵌合的HBV S抗原病毒样颗粒(VLPs-MEp S、VLPs-E2S)10μg皮下接种新西兰兔,间隔2周共免疫3次,采集不同时间免疫兔血清,ELISA方法测定血清内的抗体,PBS组作为对照;制备1b型HCVpp,观察血清抗体对HCVpp感染Huh7.5的中和作用,对免疫血清保护性进行初步评价。结果:免疫后血清中产生一定水平的中和抗体,血清中和抗体测定VLPs-MEp S明显高于VLPs-E2S(P〈0.05)。VLPs-MEp S与VLPs-E2S组均显著高于对照PBS组(P〈0.01)。对HCVpp抑制作用,VLPs-MEp S高于VLPs-E2S组(P〈0.05),最高中和率可达61.49%,二者均高于对照组(P〈0.01)。结论:嵌合病毒样颗粒免疫新西兰兔后产生一定水平中和抗体,该中和抗体具有保护作用,为研发中和抗体表位疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒(HCV) 表位 病毒样颗粒 中和抗体 免疫
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嵌合有HCV多中和抗原表位的乙肝S抗原病毒样颗粒的制备与鉴定
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作者 王晓岩 张海 +6 位作者 雷迎峰 林芳 崔颖 李斌 舒放 张惠中 韦三华 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期107-110,共4页
制备嵌合HCV多中和表位及HCV包膜蛋白E2的HBVS抗原病毒样颗粒(virus—like particle,VLP),并进行鉴定、纯化和浓缩。HEK293T细胞用DMEM培养至90%密度时,将构建的重组真核表达载体pCI-MEpS、pCI-E2S用脂质体法转染HEK293T细胞,48... 制备嵌合HCV多中和表位及HCV包膜蛋白E2的HBVS抗原病毒样颗粒(virus—like particle,VLP),并进行鉴定、纯化和浓缩。HEK293T细胞用DMEM培养至90%密度时,将构建的重组真核表达载体pCI-MEpS、pCI-E2S用脂质体法转染HEK293T细胞,48h后在培养上清中得到自我装配的嵌合HCV多中和表位及包膜蛋白E2的HBV病毒样颗粒(VLP—MEpS,VLP-M2S)。蔗糖密度梯度离心,透析浓缩后。电化学发光法进行HBsAg定量测定、电镜分析和Western blotting鉴定。制备出的嵌合病毒样颗粒VLP—MEpS和VLP-E2S经浓缩后其HBsAg定量最高达到3×10^4ng/mL。实验表明我们成功制备出嵌合有HCV多中和抗原表位的HBVVLP,为进一步分析诱导的中和抗体研究奠定基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 中和表位 病毒样颗粒 制备
禽流感H9N2病毒样颗粒疫苗佐剂的筛选及其对鸡的免疫效果评价 预览
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作者 周康森 顾盼 +2 位作者 王玲玲 吴胜昔 蔡家利 《重庆理工大学学报:自然科学版》 2017年第5期99-104,147共7页
为使禽流感H9N2病毒样颗粒疫苗尽早投入市场,有效防控H9N2禽流感的流行,拟从油乳、ISA 206和微球佐剂中筛选出一种最适用于禽流感H9N2病毒样颗粒疫苗的佐剂。首先对H9N2病毒样颗粒血凝效价及血凝素(HA)含量的测定,然后制备出禽流感H9N... 为使禽流感H9N2病毒样颗粒疫苗尽早投入市场,有效防控H9N2禽流感的流行,拟从油乳、ISA 206和微球佐剂中筛选出一种最适用于禽流感H9N2病毒样颗粒疫苗的佐剂。首先对H9N2病毒样颗粒血凝效价及血凝素(HA)含量的测定,然后制备出禽流感H9N2病毒样颗粒油乳疫苗、ISA 206佐剂疫苗、微球疫苗,并对其稳定性、无菌性和安全性等进行检验。通过溶菌酶含量、血凝抑制试验以及T淋巴细胞刺激指数等试验检测其非特异性免疫和特异性免疫水平。结果表明:微球VLP疫苗组溶菌酶含量高于其他各疫苗组(p﹤0.01),能引起非特异性免疫;微球VLPs(口服)疫苗组的血凝抑制滴度高于其他各疫苗组(p﹤0.01),抗体增长趋势与阳性对照组无显著差异(p〉0.05),产生了有效的体液免疫应答;微球VLP疫苗(口服)疫苗组T淋巴细胞刺激指数最高。微球口服疫苗其免疫原性强,安全稳定,能诱导机体产生有效的免疫应答,可为新型病毒样颗粒疫苗佐剂的选择提供参考。 展开更多
关键词 H9N2禽流感病毒 病毒样颗粒 佐剂 微球
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猪圆环病毒2d亚型病毒样颗粒的制备与鉴定 被引量:2
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作者 侯强 侯绍华 +5 位作者 贾红 姜一曈 鑫婷 李明 陈青 朱鸿飞 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2017年第11期1385-1391,共7页
本研究从临床病料中扩增获得猪圆环病毒2型(PCV2)Cap基因,并进行序列分析和抗原性比对,然后利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞内将Cap基因进行表达,目的蛋白进行Western-blot、IFA、质谱鉴定以及透射电镜和免疫电镜检测。结果表明,扩增... 本研究从临床病料中扩增获得猪圆环病毒2型(PCV2)Cap基因,并进行序列分析和抗原性比对,然后利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞内将Cap基因进行表达,目的蛋白进行Western-blot、IFA、质谱鉴定以及透射电镜和免疫电镜检测。结果表明,扩增获得的PCV2 Cap基因属于PCV2d亚型,在抗原性方面与国内PCV2a、PCV2b代表性毒株及疫苗株存在4个部位的差异;在昆虫细胞内PCV2d Cap蛋白成功表达并具有良好的免疫原性;PCV2d Cap蛋白在昆虫细胞内完成自组装,形成与天然病毒结构相似的病毒样颗粒(VLP)。本研究首次在昆虫细胞内制备出PCV2d亚型病毒样颗粒,为PCV2d亚单位疫苗研制及诊断抗原开发奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2d亚型 核衣壳蛋白 杆状病毒表达系统 病毒样颗粒
杆状病毒-昆虫细胞系统表达的戊型肝炎病毒衣壳蛋白p495的纯化、结构解析以及免疫原性分析 被引量:1
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作者 林庆山 蒋婕 +9 位作者 李婷婷 张玉云 张振勇 郑明华 王凯航 郑清炳 俞海 顾颖 夏宁邵 李少伟 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期342-348,共7页
本研究目的是利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统建立戊型肝炎病毒(HEV)p495蛋白的高效稳定表达和可放大纯化的方法,研究其理化性质和解析三维结构,与上市戊肝疫苗益可宁(Hecolin)进行免疫原性的比较。本研究选择基因1型HEV毒株的开放... 本研究目的是利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统建立戊型肝炎病毒(HEV)p495蛋白的高效稳定表达和可放大纯化的方法,研究其理化性质和解析三维结构,与上市戊肝疫苗益可宁(Hecolin)进行免疫原性的比较。本研究选择基因1型HEV毒株的开放读码框2(ORF2)的aa112-606片段构建杆状病毒,感染昆虫细胞进行重组蛋白的表达,经过PEG沉淀和阴离子交换层析的纯化,获得纯度为95%以上的p495蛋白,每升细胞培养液最终获得15mg的目的蛋白。经ELISA、分析超离、分子排阻色谱和电镜负染等分析显示p495蛋白具有良好的抗原性且呈现为均一的病毒样颗粒(VLP),沉降系数为51.3S,颗粒直径约20nm。冷冻电镜三维结构解析获得分辨率为3.8的三维结构,揭示p495形成了T=1的等二十面体结构,与已报道的晶体结构相一致。小鼠免疫实验表明p495蛋白与益可宁中p239抗原的免疫原性相当。本研究为进一步开展HEV的受体鉴定、表位结构研究以及疫苗改进等奠定良好的基础。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 病毒样颗粒 真核表达系统 HEVP495蛋白冷冻电镜三维重构 免疫应答
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