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运动预适应与力竭运动大鼠心肌损伤:Rho/ROCK信号通路的作用 预览
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作者 刘晓晨 王改凤 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2020年第11期1714-1719,共6页
背景:目前,关于运动预适应的心肌保护机制尚未完全阐明,据报道Rho/ROCK信号通路在心血管疾病中起到关键作用,运动预适应是否通过Rho/ROCK信号通路对心肌起到保护作用有待研究。目的:基于Rho/ROCK信号通路探讨运动预适应在力竭运动大鼠... 背景:目前,关于运动预适应的心肌保护机制尚未完全阐明,据报道Rho/ROCK信号通路在心血管疾病中起到关键作用,运动预适应是否通过Rho/ROCK信号通路对心肌起到保护作用有待研究。目的:基于Rho/ROCK信号通路探讨运动预适应在力竭运动大鼠心肌损伤中的作用。方法:将60只5周龄的SPF级SD雄性大鼠随机分为3组:安静对照组、单纯力竭运动组、运动预适应+力竭运动组,各组建模结束后1 h,取血清进行全生化分析检测心肌酶谷草转氨酶、磷酸肌酸激酶、乳酸脱氢酶水平,取心肌组织标本进行苏木精-碱性复红-苦味酸染色观察心肌组织病理变化,分析缺血缺氧程度,TUNEL法观察心肌细胞凋亡情况,ELISA法检测心肌组织肿瘤坏死因子α和白细胞介素10水平,Western blot检测心肌组织RhoA、ROCK1、ROCK2、Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果与结论:①单纯力竭运动组谷草转氨酶、磷酸肌酸激酶、乳酸脱氢酶水平显著高于安静对照组(P<0.05);而运动预适应+力竭运动组谷草转氨酶、磷酸肌酸激酶、乳酸脱氢酶水平显著低于单纯力竭运动组(P<0.05);②单纯力竭运动组心肌细胞界限不清楚,呈现出较多斑块状或片状艳红色样区域,与安静对照组相比,有明显的缺血缺氧改变;运动预适应+力竭运动组部分心肌细胞界限不清楚,出现部分斑块状艳红色染色,较单纯力竭运动组缺血缺氧程度明显减轻;③单纯力竭运动组较安静对照组凋亡指数值明显升高,运动预适应+力竭运动组与单纯力竭运动组相比凋亡指数值明显下降(P<0.05);④单纯力竭运动组的肿瘤坏死因子α和白细胞介素10水平显著高于安静对照组(P<0.05),运动预适应+力竭运动组肿瘤坏死因子α和白细胞介素10水平显著低于单纯力竭运动组(P<0.05);⑤单纯力竭运动组的Bcl-2/Bax显著低于安静对照组(P<0.05),运动预适应+力竭运动组Bcl-2/Bax显著高于单纯力竭运动组(P 展开更多
关键词 运动预适应 力竭运动 Rho/ROCK 心肌损伤 心功能 细胞凋亡 蛋白表达
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Microcystin Levels in Selected Cyanobacteria Exposed to Varying Salinity 预览
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作者 Dy’mon Walker Somayeh Gharaie Fathabad +2 位作者 Behnam Tabatabai Sanjeeda Jafar Viji Sitther 《水资源与保护(英文)》 2019年第4期395-403,共9页
Microcystins produced by cyanobacteria pose a great threat to human health by releasing toxins upon cell death. In the present study, we studied microcystin production in the cyanobacterial strains Anabaena cylindrica... Microcystins produced by cyanobacteria pose a great threat to human health by releasing toxins upon cell death. In the present study, we studied microcystin production in the cyanobacterial strains Anabaena cylindrica (B629 and 2949) and Fremyella diplosiphon (SF33) exposed to 1, 2 and 4 g/L sodium chloride (NaCl). Cultures grown for 7 days in BG11/HEPES medium were pelleted, re-grown in the corresponding NaCl levels, and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) performed. ELISA assays revealed enhanced microcystin production in A. cylindrica B629 exposed to 4 g/L NaCl and A. cylindrica 29414 exposed to 2 and 4 g/L NaCl, after growth in the corresponding NaCl levels for 14 days. We observed a significant decrease (p > 0.05) in microcystin levels in the control strains after exposure to NaCl for 5 days. After exposure to 1, 2, or 4 g/L NaCl for 10 days, no microcystin release was observed in A. cylindrica B629, A. cylindrica 29414 or F. diplosiphon SF33. Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis identified the presence of an additional band at 120 - 130 kDa in A. cylindrica B629 exposed to 2 and 4 g/L NaCl, and at 14 kDa in cultures amended with 1 and 2 g/L NaCl as well as the untreated control, indicating that exposure to salinity induces alterations in protein expression. 展开更多
关键词 CYANOTOXIN ELISA Harmful ALGAL BLOOMS Protein Expression Sodium Chloride
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蓝舌病I型病毒VP5蛋白的表达纯化及免疫原性分析 预览
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作者 陈玉梅 党伟华 +5 位作者 刘燕凯 周景明 刘红亮 郭亚楠 张改平 王爱萍 《中国动物检疫》 CAS 2019年第3期69-74,83共7页
为分析蓝舌病I型病毒(BTV-1)VP5蛋白的免疫原性,本研究构建了载体PET-28a-VP5并转化BL21(DE3),然后进行IPTG诱导表达,以及SDS-PAGE和Western-blot分析。结果显示,重组VP5蛋白相对分子质量约为62kDa,与预期结果一致。进一步优化条件,发现... 为分析蓝舌病I型病毒(BTV-1)VP5蛋白的免疫原性,本研究构建了载体PET-28a-VP5并转化BL21(DE3),然后进行IPTG诱导表达,以及SDS-PAGE和Western-blot分析。结果显示,重组VP5蛋白相对分子质量约为62kDa,与预期结果一致。进一步优化条件,发现IPTG为0.2mmol/L、温度为25℃、诱导6h时,重组蛋白在上清中表达量最高,通过Ni柱纯化获得的重组蛋白纯度约为75%。将纯化后的重组蛋白VP5分别以40μg/只和20μg/只免疫Balb/c小鼠,同时设置PBS为阴性对照,对三免后血清进行间接ELISA检测,发现高、低剂量免疫小鼠均能产生针对VP5蛋白的特异性抗体。用灭活BTV-1进行DOT-ELISA检测,发现其能与VP5蛋白免疫的小鼠血清发生特异性反应,说明利用大肠杆菌表达的重组蛋白VP5具有良好的免疫特性,这为进一步开展BTV相关研究奠定了基础。 展开更多
关键词 蓝舌病1型病毒 VP5蛋白 蛋白表达 蛋白纯化 条件优化 免疫分析
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昆虫嗅觉相关可溶性蛋白的研究进展 预览
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作者 张玉 杨斌 王桂荣 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2019年第2期229-240,共12页
昆虫在长期进化过程中形成了一套高度敏感的嗅觉系统,通过该系统昆虫可以完成寻觅配偶、定位寄主及选择产卵位点等多种行为。在昆虫嗅觉系统中的可溶性蛋白主要有气味结合蛋白(odorant-binding protein, OBP)和化学感受蛋白(chemosensor... 昆虫在长期进化过程中形成了一套高度敏感的嗅觉系统,通过该系统昆虫可以完成寻觅配偶、定位寄主及选择产卵位点等多种行为。在昆虫嗅觉系统中的可溶性蛋白主要有气味结合蛋白(odorant-binding protein, OBP)和化学感受蛋白(chemosensory protein, CSP)。OBP可以特异性结合并运输疏水性的气味分子相应的受体,是昆虫化学识别过程的第一步,具有十分重要的作用。CSP与OBP的结构和功能类似,主要参与化合物的识别和运输,尽管没有直接的证据表明CSP也参与了昆虫的化学感受过程,但已有研究发现,CSP在昆虫嗅觉系统中发挥着重要的作用。本文主要从分子特性、蛋白结构、表达模式、生理功能等方面分别对昆虫的OBP和CSP进行了概述,为深入的研究两者的功能提供理论参考,进而为以昆虫嗅觉系统为靶标的害虫防治提供新的思路。 展开更多
关键词 气味结合蛋白 化学感受蛋白 化学通讯 基因表达 蛋白结构
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Rab27B和HPV16/18蛋白质在宫颈鳞癌表达的意义 预览
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作者 辛慧珍 潘璐彤 +8 位作者 齐军 热衣汗古丽·吾不力 陈巧 石敏华 张静 靳馥源 张春贺 李洪涛 潘泽民 《石河子大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2019年第2期223-228,共6页
目的通过免疫组织化学实验探讨Rab27B和HPV16/18蛋白质在宫颈鳞癌组织中表达的意义。方法收集慢性宫颈炎组织和宫颈鳞癌组织连续石蜡切片,采用免疫组织化学实验检测慢性宫颈炎组织和宫颈鳞癌组织中HPV16/18和Rab27B蛋白质的表达水平。... 目的通过免疫组织化学实验探讨Rab27B和HPV16/18蛋白质在宫颈鳞癌组织中表达的意义。方法收集慢性宫颈炎组织和宫颈鳞癌组织连续石蜡切片,采用免疫组织化学实验检测慢性宫颈炎组织和宫颈鳞癌组织中HPV16/18和Rab27B蛋白质的表达水平。通过统计学分析分别研究HPV16/18和Rab27B蛋白质在宫颈鳞癌组织的表达意义。结果HPV16/18在慢性宫颈炎组织中感染率为13.5%,而在宫颈鳞癌组织中为46.2%,差异有统计学意义(P<0.05)。Rab27B蛋白质表达水平在慢性宫颈炎组织中,中、强阳性表达为32.4%。在宫颈鳞癌组织中,中、强阳性表达为63.3%。两者比较具有统计学意义(P<0.05)。宫颈鳞癌组织中Rab27B表达水平高,HPV16/18表达水平也高;慢性宫颈炎组织中Rab27B表达水平较低,HPV16/18表达水平也低(P<0.05)。结论宫颈鳞癌组织中Rab27B蛋白质的高表达结合HPV16/18蛋白质的表达,可能和宫颈鳞癌的发生和发展相关。 展开更多
关键词 Rab27B蛋白质 HPV16/18蛋白质 宫颈鳞癌 免疫组织化学 蛋白表达
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Biophysical characterization and ligand-binding properties of the elongation factor Tu from Mycobacterium tuberculosis
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作者 Juanjuan Yang Jing Hong +4 位作者 Ling Luo Ke Liu Chun Meng Zhi-liang Ji Donghai Lin 《生物化学与生物物理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第2期139-149,共11页
Mycobacterium tuberculosis(Mtb)is the key devastating bacterial pathogen responsible for tuberculosis.Increasing emergence of multi-drug-resistant,extensively drug-resistant,and rifampicin/isoniazid-resistant strains ... Mycobacterium tuberculosis(Mtb)is the key devastating bacterial pathogen responsible for tuberculosis.Increasing emergence of multi-drug-resistant,extensively drug-resistant,and rifampicin/isoniazid-resistant strains of Mtb makes the discovery of validated drug targets an urgent priority.As a vital translational component of the protein biosynthesis system,elongation factor Tu(EF-Tu)is an important molecular switch responsible for selection and binding of the cognate aminoacyl-tRNA to the acceptor site on the ribosome.In addition,EF-Tu from Mtb(MtbEF-Tu)is involved in the initial step of trans-translation which is an effective system for rescuing the stalled ribosomes from non-stop translation complexes under stress conditions.Given its crucial role in protein biosynthesis,EF-Tu is identified as an excellent molecular target for drug design.Here,we reported the recombinant expression,purification,biophysical characterization,and structural modeling of the MtbEF-Tu protein.Our results demonstrated that prokaryotic expression plasmids of pET28a-MtbEF-Tu could be expressed efficiently in Escherichia coli.We successfully purified the 6× His-tagged proteins with a yield of 16.8 mg from 1 l of Luria Bertani medium.Dynamic light scattering experiments showed that MtbEF-Tu existed in a monomeric form,and circular dichroism experiments indicated that MtbEF-Tu was well structured.Moreover,isothermal titration calorimetry experiments displayed that the purified MtbEF-Tu protein possessed intermediate binding affinities for guanosine-5′-triphosphate(GTP)and GDP.The GTP/GDP-binding sites were predicted by flexible molecular docking approach which reveals that GTP/GDP binds to MtbEF-Tu mainly through hydrogen bonds.Our work lays the essential basis for further structural and functional studies of MtbEF-Tu as well as MtbEF-Tu-related novel drug developments. 展开更多
关键词 tuberculosis MtbEF-Tu PROTEIN biosynthesis PROTEIN expression and purification protein-guanine NUCLEOTIDE interaction
淋巴细胞活化基因-3蛋白表达与生物信息学分析
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作者 吴鹏 尹欣悦 陈创夫 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第17期16-19,182共5页
为了研究淋巴细胞活化基因-3蛋白的生物学特性,试验采用PCR方法扩增淋巴细胞活化基因-3胞外区序列,构建重组质粒,将重组质粒转染至HEK293感受态细胞中表达目的蛋白,并对目的蛋白进行SDS-PAGE及Western-blot检测,通过ProtParam软件分析... 为了研究淋巴细胞活化基因-3蛋白的生物学特性,试验采用PCR方法扩增淋巴细胞活化基因-3胞外区序列,构建重组质粒,将重组质粒转染至HEK293感受态细胞中表达目的蛋白,并对目的蛋白进行SDS-PAGE及Western-blot检测,通过ProtParam软件分析淋巴细胞活化基因-3蛋白性质,通过SWISS-MODEL软件预测蛋白质结构。结果表明:PCR法成功扩增出目的条带,大小约为1 430 bp,1. 0%琼脂糖凝胶电泳显示酶切成功;经10%SDS-PAGE凝胶电泳分析,在68 ku处出现目的条带,目的蛋白成功表达;纯化后的蛋白质经Western-blot检测证明具有特异性;目的蛋白具有22种可能的折叠形态,理论等电点pI值为9. 08,蛋白质结构不稳定,亲水性较差。说明试验成功表达了淋巴细胞活化基因-3蛋白。 展开更多
关键词 淋巴细胞活化基因-3蛋白 瞬时转染 HEK293细胞 蛋白表达 蛋白结构
人源CBX7功能结构域的重组表达与纯化 预览
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作者 胡温温 ALTAF Simair +3 位作者 吕缜一 陈婷 张云龙 陆昌瑞 《生命科学研究》 CAS CSCD 2019年第2期92-99,共8页
CBX7 (chromobox 7)在细胞寿命延长和癌症发生中起着重要的调控作用。然而,获取足量的全长CBX7蛋白并用于结构研究极为艰难。实验阐述了CBX7功能结构域CBX7 (aa 145~227)重组表达载体构建的详细过程。同时,通过Ni-NTA亲和层析对融合目... CBX7 (chromobox 7)在细胞寿命延长和癌症发生中起着重要的调控作用。然而,获取足量的全长CBX7蛋白并用于结构研究极为艰难。实验阐述了CBX7功能结构域CBX7 (aa 145~227)重组表达载体构建的详细过程。同时,通过Ni-NTA亲和层析对融合目的蛋白进行了纯化,并利用SDS-PAGE及Western-blot进行了鉴定分析。纯化后的融合蛋白样品通过离子交换和分子筛层析进一步分离剩余杂质。本实验得到的高浓度CBX7蛋白可用于结晶,为后续CBX7的结构和功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人源CBX7 功能结构域 蛋白质表达 蛋白质纯化 肿瘤抑制
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广藿香FPPS重组蛋白表达及互作蛋白筛选分析 预览
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作者 钟李婷 陈秀珍 +6 位作者 唐云 李俊仁 王小兵 刘彦婷 周璇璇 詹若挺 陈立凯 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期10-15,共6页
对广藿香的法尼基焦磷酸酶(PatFPPS)进行重组蛋白的原核表达,并筛选与之互相作用的蛋白。利用PCR扩增PatFPPS编码区并连接到pGEX-6P-1表达载体,测序验证后将质粒转化BL21(DE3)表达菌株,并用IPTG诱导表达蛋白,最终得到带有GST标签的PatF... 对广藿香的法尼基焦磷酸酶(PatFPPS)进行重组蛋白的原核表达,并筛选与之互相作用的蛋白。利用PCR扩增PatFPPS编码区并连接到pGEX-6P-1表达载体,测序验证后将质粒转化BL21(DE3)表达菌株,并用IPTG诱导表达蛋白,最终得到带有GST标签的PatFPPS融合蛋白。利用GST Pull-Down技术,将GST-PatFPPS融合蛋白分别与广藿香叶片总蛋白进行体外孵育,洗脱得到蛋白复合物,经SDS-PAGE及LC-MS/MS鉴定。结果表明,PatFPPS原核表达体系成功建立,获得纯化重组蛋白,并且筛选得到一些候选PatFPPS互作蛋白。利用优化的原核表达体系,可获得可溶性的PatFPPS蛋白,并鉴定得到与之互作的候选蛋白。 展开更多
关键词 广藿香 蛋白表达 广藿香醇 互作蛋白 茉莉酸甲酯
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METTL3在结直肠癌组织中的表达及其临床意义 预览
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作者 黄忠炎 王剑飞 +1 位作者 孙金杰 田洋洋 《浙江医学》 CAS 2019年第12期1308-1311,共4页
目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法收集67例病理检查诊断为结直肠癌患者的结直肠癌组织、配对癌旁正常组织及肝脏、淋巴结转移组织,采用免疫组化技术,检测METTL3蛋白的表达情况,RT-PCR技术检测METTL... 目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法收集67例病理检查诊断为结直肠癌患者的结直肠癌组织、配对癌旁正常组织及肝脏、淋巴结转移组织,采用免疫组化技术,检测METTL3蛋白的表达情况,RT-PCR技术检测METTL3 mRNA相对表达量情况。通过ROC曲线分析确定METTL3 mRNA相对表达量的截断值,以此分析METTL3 mRNA的表达与各临床病理因素之间的关系,并分析METTL3 mRNA的表达水平与结直肠癌患者生存预后的关系。结果相比于正常组织,METTL3 mRNA在结直肠癌组织中表达明显升高(P<0.05),且METTL3 mRNA相对表达量的截断值为2.85。免疫组化结果显示,与正常结直肠组织相比,METTL3蛋白在结直肠癌组织中核染明显。METTL3 mRNA的高表达(相对表达量>2.85)与淋巴结转移密切相关(P<0.01),与性别、年龄、肿瘤大小、组织分化、远处转移、侵袭深度无相关(均P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,与METTL3 mRNA低表达的结直肠癌患者比较,METTL3 mRNA高表达患者在随访的4年间生存率明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论METTL3在结直肠癌组织中呈高表达,与患者淋巴结转移及生存预后有关。 展开更多
关键词 结直肠癌 甲基转移酶样3 基因表达 蛋白表达 预后
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灯盏乙素对Chang Liver细胞中CYP2C9的影响 预览
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作者 丁未尧 陈丽平 赖泳 《大理大学学报》 CAS 2019年第2期5-9,共5页
目的:探讨灯盏乙素对Chang Liver细胞中CYP2C9表达的影响。方法:采用MTT(噻唑蓝)法检测灯盏乙素对Chang Liver细胞增殖活力的影响,采用RT-PCR和Western-blot法分别检测细胞中CYP2C9 mRNA和蛋白的相对表达量。结果:灯盏乙素对Chang Live... 目的:探讨灯盏乙素对Chang Liver细胞中CYP2C9表达的影响。方法:采用MTT(噻唑蓝)法检测灯盏乙素对Chang Liver细胞增殖活力的影响,采用RT-PCR和Western-blot法分别检测细胞中CYP2C9 mRNA和蛋白的相对表达量。结果:灯盏乙素对Chang Liver细胞增殖有抑制作用,呈浓度依赖性,半数抑制率(IC50)为1.87 mmol/L。RT-PCR结果表明,与DMSO(二甲基亚砜)组比,药物浓度为5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L时,细胞CYP2C9 mRNA表达量显著下降(P<0.05)。Western-blot结果表明,与DMSO组比较,药物浓度为20.0、40.0 μmol/L时细胞CYP2C9 蛋白表达显著减少(P<0.05)。结论:灯盏乙素对Chang Liver细胞中CYP2C9 mRNA和蛋白的表达有不同程度的抑制作用。 展开更多
关键词 灯盏乙素 CYP2C9 MRNA表达 蛋白表达 CHANG Liver细胞
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重组SSB蛋白表达、鉴定及评价 预览
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作者 杜琴 卢小岚 +7 位作者 王强 汪光蓉 罗文依 王舒琪 姚丽华 张国元 刘剑平 王东生 《重庆医学》 CAS 2019年第14期2438-2442,共5页
目的构建SSB蛋白原核表达质粒,在大肠埃希菌中诱导表达后进行纯化。方法以Hela细胞提取RNA后逆转录的cDNA为模板,利用聚合酶链反应(PCR)扩增出带酶切位点BamHⅠ和XhoⅠ的人SSB蛋白基因序列,经酶切后插入PET41a质粒中,构建成GST-SSB-6*Hi... 目的构建SSB蛋白原核表达质粒,在大肠埃希菌中诱导表达后进行纯化。方法以Hela细胞提取RNA后逆转录的cDNA为模板,利用聚合酶链反应(PCR)扩增出带酶切位点BamHⅠ和XhoⅠ的人SSB蛋白基因序列,经酶切后插入PET41a质粒中,构建成GST-SSB-6*His-pet41a重组表达质粒,转化入感受态大肠埃希菌OverExpress C41(DE3)中,经异丙基β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,利用C端的His标签(Histag)进行Ni-树脂柱亲和层析纯化,SDS-PAGE鉴定重组蛋白表达形式,蛋白印迹法(WB)鉴定重组蛋白的免疫原性,酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定其免疫反应性和特异性。结果 PCR扩增获得目的基因,菌落PCR示重组表达质粒构建成功,转化感受态OverExpress C41(DE3)后经诱导有高效表达,SDS-PAGE显示GST-SSB-6*His重组蛋白为上清可溶性表达,WB示重组蛋白有足够的免疫原性,能与外周血中的抗SSB抗体发生特异性反应,特异性达100%。结论成功构建了GST-SSB-6*His-PET41a重组表达质粒,经诱导表达后可纯化出目的蛋白,为进一步建立应用于国产仪器的全自动定量检测抗SSB自身抗体的磁微粒化学发光试剂,奠定了基础。 展开更多
关键词 SSB 重组质粒 蛋白表达 蛋白鉴定
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重组RPLP0蛋白的表达、鉴定及评价 预览
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作者 卢小岚 王强 +6 位作者 杜琴 梁骑 罗文依 王舒琪 张国元 刘剑平 王东生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第15期1857-1861,共5页
目的:构建重组RPLP0蛋白的原核表达载体并诱导表达,对表达产物进行纯化鉴定及评价。方法:设计重组RPLP0蛋白基因,经PCR扩增获得目的基因;在其5′和3′端引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点,构建pET41a-GST-RPLP0-6*His融合基因表达载体;对该质... 目的:构建重组RPLP0蛋白的原核表达载体并诱导表达,对表达产物进行纯化鉴定及评价。方法:设计重组RPLP0蛋白基因,经PCR扩增获得目的基因;在其5′和3′端引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点,构建pET41a-GST-RPLP0-6*His融合基因表达载体;对该质粒载体进行酶切鉴定和测序验证,将鉴定正确的重组质粒载体转化至大肠杆菌并以IPTG诱导表达;经过尿素溶液纯化及复性以后得到复性的重组RPLP0蛋白;采用Western blot分析重组RPLP0蛋白的免疫原性;采用ELISA法对其抗体结合性、特异性进行分析。结果:酶切及测序结果显示,本实验成功克隆出重组RPLP0蛋白基因,将获得的目的基因构建至原核表达载体pET41a,经IPTG诱导后成功表达目的蛋白。SDS-PAGE电泳结果显示重组RPLP0蛋白为包涵体表达蛋白,分子量约为61 kD。Western blot检测显示重组RPLP0蛋白具有完全的免疫原性;ELISA检测显示重组RPLP0蛋白具有良好的抗体结合性和特异性。结论:表达、鉴定并分析了重组RPLP0蛋白,为深入研究RPLP0蛋白的功能及应用奠定基础。 展开更多
关键词 RPLP0 重组质粒 重组蛋白 蛋白表达
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小鼠FGF 21基因克隆及his-mFGF21融合蛋白的诱导表达 预览
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作者 唐青蓝 李红梅 +3 位作者 张礼林 王玉丰 颜礼完 周君 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第5期552-556,共5页
目的:对小鼠FGF21基因进行克隆并诱导表达FGF21融合蛋白。方法:以带有小鼠FGF21的T载体pMD19-T-mFGF21为模板特异性扩增FGF21基因片段,将扩增产物克隆至pET-28a(+),得到pET-28a(+)-mFGF21的重组子,并转化于大肠杆菌BL21(DE3),使用IPTG... 目的:对小鼠FGF21基因进行克隆并诱导表达FGF21融合蛋白。方法:以带有小鼠FGF21的T载体pMD19-T-mFGF21为模板特异性扩增FGF21基因片段,将扩增产物克隆至pET-28a(+),得到pET-28a(+)-mFGF21的重组子,并转化于大肠杆菌BL21(DE3),使用IPTG诱导融合蛋白的表达,纯化后采用WesternBlot进行鉴定。结果:pET-28(+)-mFGF21重组质粒构建成功,表达出可溶性的his-mFGF21融合蛋白,经纯化后该蛋白his-mFGF21可与FGF21抗体特异性结合。结论:成功构建pET-28(+)-mFGF21重组子,并表达出his-mFGF21蛋白。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子 基因克隆 融合蛋白 诱导表达 蛋白纯化
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人腺病毒六邻体高变区蛋白的亚克隆表达及纯化
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作者 李烨 曲丽欣 +10 位作者 董妥 王迎晨 张哲 杜溪乔 路冰 高虹 商蕾 李宇 O.N.Reva V.I.Zlobin 曲章义 《国际免疫学杂志》 CAS 2019年第3期229-234,共6页
目的克隆表达人腺病六邻体高变区片段,了解其结构和功能,为研发腺病毒基因工程重组疫苗奠定基础。方法根据生物信息学软件预测的腺病毒六邻体的高变区域,选择目标基因,设计其对应的引物,并以团队保存的人腺病毒六邻体核酸序列为模板,聚... 目的克隆表达人腺病六邻体高变区片段,了解其结构和功能,为研发腺病毒基因工程重组疫苗奠定基础。方法根据生物信息学软件预测的腺病毒六邻体的高变区域,选择目标基因,设计其对应的引物,并以团队保存的人腺病毒六邻体核酸序列为模板,聚合酶链反应扩增目标基因,定向插入载体pQE32中构建工程质粒。通过酶切和基因测序鉴定阳性工程质粒,并诱导其在大肠杆菌M15中高效表达带有组氨酸标记的靶蛋白,应用镍树脂亲和层析的方法分离纯化靶蛋白。结果构建了含有人腺病毒六邻体高变区片段的重组质粒,同时探索出其在大肠杆菌M15中高效表达的条件,纯化目标蛋白,其分子量约为188000,与应用生物信息学分析预测的结果相同。结论成功地克隆、表达和纯化了人腺病毒六邻体高变区片段。 展开更多
关键词 人腺病毒 六邻体高变区片段 蛋白质表达 蛋白质纯化
疏肝健脾饮对乳腺癌癌前病变裸鼠淋巴管生成的影响研究 预览
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作者 李斐斐 刘晓菲 +2 位作者 张洋 王圆圆 韩笑 《现代中西医结合杂志》 CAS 2019年第21期2292-2296,共5页
目的研究疏肝健脾饮对乳腺癌癌前病变裸鼠淋巴管生成途径COX-2/VEGF通路中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3)、环氧合酶-2(COX-2)蛋白及mRNA表达的影响,探讨疏肝健脾饮对乳腺癌癌前病变淋巴管生成的干预作用... 目的研究疏肝健脾饮对乳腺癌癌前病变裸鼠淋巴管生成途径COX-2/VEGF通路中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3)、环氧合酶-2(COX-2)蛋白及mRNA表达的影响,探讨疏肝健脾饮对乳腺癌癌前病变淋巴管生成的干预作用机制,寻找中药复方抑制淋巴管生成的作用靶点。方法取120只BALB/c-nudemice裸鼠,采用乳腺原位移植MCF-10AT细胞株方法建立癌前病变模型,建模成功后随机分成6组,每组20只。模型对照组裸鼠予以0.9%氯化钠溶液灌胃,疏肝健脾饮组、疏肝理气组、健脾化痰组、活血化瘀组分别予以相应中药制剂灌胃,均1次/d;他莫昔芬组给予他莫昔芬腹腔注射,每周2次。各组均连续干预9周。至第9周周末处死各组裸鼠,分别采用Western-blot、RT-PCR技术检测肿瘤组织中VEGF-C、VEGFR-3、COX-2蛋白及mRNA表达情况。结果疏肝健脾饮组、疏肝理气组、活血化瘀组、他莫昔芬组VEGF-C蛋白及mRNA相对表达量均明显低于模型对照组(P均<0.05),且疏肝健脾饮组均明显低于活血化瘀组(P均<0.05)。疏肝健脾饮组、健脾化痰组、他莫昔芬组VEGFR-3蛋白相对表达量均明显低于模型对照组(P均<0.05),且疏肝健脾饮组及他莫昔芬组均明显低于疏肝理气组(P均<0.05);疏肝健脾饮组、疏肝理气组、他莫昔芬组COX-2蛋白相对表达量均明显低于模型对照组(P均<0.05),且疏肝健脾饮组及他莫昔芬组均明显低于健脾化痰组及活血化瘀组(P均<0.05)。疏肝健脾饮组、疏肝理气组、他莫昔芬组VEGFR-3mRNA相对表达量均明显低于模型对照组(P均<0.05),且疏肝健脾饮组和他莫昔芬组明显低于活血化瘀组(P均<0.05);疏肝健脾饮组、他莫昔芬组COX-2mRNA相对表达量均明显低于模型对照组和疏肝理气组(P均<0.05)。疏肝健脾饮组与他莫昔芬组VEGF-C、VEGFR-3、COX-2蛋白及mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论疏肝健� 展开更多
关键词 疏肝健脾饮 乳腺癌癌前病变 淋巴管生成 蛋白表达 基因表达
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Cry1Ia和Cry2Ab融合蛋白的表达 预览
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作者 郭小琴 钱红梅 +3 位作者 郭俊佩 史宗勇 高建华 王兴春 《山西农业大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2019年第3期101-105,共5页
[目的]苏云金芽孢杆菌表达的杀虫蛋白Cry1Ia和Cry2Ab对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性。为充分利用已有Cry蛋白,本文构建了两者的融合蛋白,并对融合蛋白的原核表达进行检测。[方法]本文将两个基因的编码基因,按照两种先后顺序拼... [目的]苏云金芽孢杆菌表达的杀虫蛋白Cry1Ia和Cry2Ab对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性。为充分利用已有Cry蛋白,本文构建了两者的融合蛋白,并对融合蛋白的原核表达进行检测。[方法]本文将两个基因的编码基因,按照两种先后顺序拼接起来,获得cry1Ia-cry2Ab融合基因和cry2Ab-cry1Ia融合基因。另外,将Cry1Ia蛋白N端第一个α-螺旋(73个氨基酸)的编码序列删除后,接入cry2Ab基因5'端,获得第三个融合基因cry1IaD73-cry2Ab。将3个基因分别插入pHT304载体,并由cry1Ac基因的启动子和终止子调控其在Bt细胞中表达。[结果]SDS-PAGE结果显示,Cry1Ia-Cry2Ab、Cry2Ab-Cry1Ia和Cry1IaD73-Cry2Ab三个融合蛋白均能够在Bt细胞中表达,其测定分子量与预期大小一致,分别约152kDa、152kDa和144kDa。蛋白印迹法分析发现,在表达过程中,三种融合蛋白均有一定比例的降解。另外,不同温度对融合蛋白的表达也有不同程度的影响。[结论]本研究构建了3种融合杀虫基因并在Bt细胞中成功表达,为进一步解析这类融合蛋白的杀虫活性和机理奠定了基础。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 cry1Ia CRY2AB 融合蛋白 蛋白表达
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卵巢癌手术切除组织中SOCS-3表达情况及其与病理特征的关系 预览
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作者 岳晚侠 蒙树勇 康博 《临床医学研究与实践》 2019年第31期69-70,共2页
目的分析细胞因子信号传导抑制蛋白-3(SOCS-3)在卵巢癌手术切除组织中的表达及其与病理特征的关系。方法选取我院2018年1月至2019年1月收治的68例卵巢癌患者作为研究对象,检测卵巢癌手术切除组织及癌旁组织中SOCS-3的表达情况,并探讨SOC... 目的分析细胞因子信号传导抑制蛋白-3(SOCS-3)在卵巢癌手术切除组织中的表达及其与病理特征的关系。方法选取我院2018年1月至2019年1月收治的68例卵巢癌患者作为研究对象,检测卵巢癌手术切除组织及癌旁组织中SOCS-3的表达情况,并探讨SOCS-3的表达与病理特征的关系。结果卵巢癌组织中的SOCS-3表达量明显低于癌旁组织(P<0.05)。卵巢癌Ⅰ~Ⅱ期、中~高分化、无淋巴结转移的卵巢癌组织中SOCS-3的表达量分别高于卵巢癌Ⅲ~Ⅳ期、低分化、有发生淋巴结转移的卵巢癌组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论SOCS-3的表达减少与卵巢癌的发生、发展有关,可作为评估卵巢癌预后的生物学标志。 展开更多
关键词 细胞因子信号传导抑制蛋白-3 卵巢癌 蛋白表达
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Cry1Ia蛋白的表达与纯化 预览
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作者 郭小琴 钱红梅 +4 位作者 郭星 高佳丽 张义茹 高建华 王兴春 《山西农业科学》 2019年第5期748-750,769共4页
苏云金芽孢杆菌表达的Cry1Ia蛋白对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性。为便于后期评价不同的Cry1Ia蛋白,建立了Cry1Ia蛋白的表达与纯化体系。将一个cry1Ia基因的编码基因接入pET28aDel表达载体,并将其转化大肠杆菌BL21(DE3)star菌... 苏云金芽孢杆菌表达的Cry1Ia蛋白对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性。为便于后期评价不同的Cry1Ia蛋白,建立了Cry1Ia蛋白的表达与纯化体系。将一个cry1Ia基因的编码基因接入pET28aDel表达载体,并将其转化大肠杆菌BL21(DE3)star菌株。在大肠杆菌中诱导Cry1Ia蛋白的表达,并与Bt中的表达产物进行比较。最后,利用Cry1Ia蛋白C端包含的组氨酸标签,对大肠杆菌表达的Cry1Ia蛋白进行纯化。结果显示,大肠杆菌中Cry1Ia蛋白随着表达时间的延长,产物积累显著,并且其表达量高于Bt菌株,因此,其更适宜生产完整的Cry1Ia蛋白。对大肠杆菌表达的Cry1Ia进行纯化,获得了理想的结果。研究构建了Cry1Ia蛋白的大肠杆菌表达体系,并成功对其进行纯化,可为进一步研究此类蛋白的杀虫活性和机制奠定基础。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 大肠杆菌 cry1Ia 蛋白表达 蛋白纯化
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人跨膜蛋白39A原核表达载体构建、条件优化及可溶性表达 预览
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作者 李向茸 马瑞仙 +4 位作者 李倩 王兴陇 李生军 张海霞 冯若飞 《基础医学与临床》 CSCD 2019年第7期932-936,共5页
目的构建人跨膜蛋白39A基因(TMEM39A)的原核表达载体,优化表达条件并获得可溶性表达的TMEM39A。方法以HEK293细胞的总RNA为模板,反转录PCR扩增TMEM39A,构建其原核表达载体pGEX-6P-1-TMEM39A,并在不同温度、IPTG浓度、A600nm值及时间条... 目的构建人跨膜蛋白39A基因(TMEM39A)的原核表达载体,优化表达条件并获得可溶性表达的TMEM39A。方法以HEK293细胞的总RNA为模板,反转录PCR扩增TMEM39A,构建其原核表达载体pGEX-6P-1-TMEM39A,并在不同温度、IPTG浓度、A600nm值及时间条件进行诱导表达,然后利用上述获得的最佳诱导条件进行大量表达,分析其可溶性和抗原性。结果重组表达载体pGEX-6P-1-TMEM39A与GenBank中的TMEM39A(登录号:BC021277.2)的核苷酸序列同源性为99.9%,氨基酸序列同源性为100%。重组蛋白GST-TMEM39A在69和60 ku处出现两条特异性条带,采用单因素方法对不同温度、IPTG浓度、A600nm值及时间进行分析得出GST-TMEM39A的最佳诱导条件为25℃、A600nm值为0.6~0.8、IPTG浓度为0.1 mmol/L诱导9 h;在此基础上进行大量表达,并以可溶性形式获得了TMEM39A与GST蛋白的融合表达。结论成功构建了TMEM39A的原核表达载体,确定了GST-TMEM39A的最佳表达条件并实现其的可溶性表达,为后续纯化TMEM39A、制备抗体开展功能研究奠定物质基础,并为深入探讨TMEM39A与许多疾病或病毒的关系提供科学依据。 展开更多
关键词 跨膜蛋白39A 条件优化 融合蛋白 可溶性表达
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