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截短腐败梭菌α毒素的表达及其免疫原性评价 被引量:1
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作者 彭国瑞 彭小兵 +1 位作者 李旭妮 蒋玉文 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期220-225,共6页
为了获得截短腐败梭菌α毒素并评价其毒性、反应原性和免疫原性,根据腐败梭菌α毒素的结构与功能,设计2对引物分别扩增含有穿孔活性区和受体结合区的α毒素基因csaN和csaC,克隆至pET-28a(+)质粒,构建截短α毒素表达载体,转化大肠杆菌BL2... 为了获得截短腐败梭菌α毒素并评价其毒性、反应原性和免疫原性,根据腐败梭菌α毒素的结构与功能,设计2对引物分别扩增含有穿孔活性区和受体结合区的α毒素基因csaN和csaC,克隆至pET-28a(+)质粒,构建截短α毒素表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导csaN和csaC表达,鉴定产物的反应原性和毒性,将经过诱导表达的工程菌灭活制成铝佐剂疫苗免疫家兔1次,通过血清中和试验和攻毒保护试验评价免疫效力,设立重组α全毒素rcsa免疫组作为阳性对照。结果显示,2个截短α毒素在大肠杆菌BL21(DE3)中均获得表达,产物能够与腐败梭菌抗毒素血清发生特异性反应,但失去了小鼠致死毒性。免疫家兔血清中和试验结果显示,csaN组血清的中和效价为1 MLD/0.1 mL,达到《中华人民共和国兽药典三部(2015年版)》效力检验的最低标准,csaC组为0,rcsa组为8 MLD/0.1 mL;csaN和csaC组家兔用1 MLD毒素攻击均未获得保护,而rcsa组家兔4/4获得保护。结果表明,截短α毒素与全毒素相比,失去了毒性但保留了反应原性,仅含穿孔活性结构区的截短部分具有较弱的免疫原性。 展开更多
关键词 腐败梭菌 截短α毒素 毒性 免疫原性
国产甲型肝炎减毒活疫苗安全性及免疫效果比较
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作者 郭雪 陈海平 +5 位作者 姜崴 石煊雯 肖艳慧 丁丽丽 赵淑洁 罗林云 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第5期508-511,共4页
目的比较国产甲型肝炎减毒活疫苗的安全性及免疫原性。方法选择出生后未接种过甲型肝炎疫苗的18~24月龄儿童,按照随机、对照的原则分为实验组和对照组,每组接种不同的国产甲型肝炎减毒活疫苗。观察接种后30d局部及全身反应;免疫后30 d采... 目的比较国产甲型肝炎减毒活疫苗的安全性及免疫原性。方法选择出生后未接种过甲型肝炎疫苗的18~24月龄儿童,按照随机、对照的原则分为实验组和对照组,每组接种不同的国产甲型肝炎减毒活疫苗。观察接种后30d局部及全身反应;免疫后30 d采血,分离血清,检测抗体滴度。结果306名受试者共观察到109例不良反应,实验组及对照组不良反应发生率分别为34.4%和36.8%,差异无统计学意义(P> 0.05);实验组及对照组免疫后甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)抗体阳性率分别为99.3%和99.4%,抗体几何平均滴度(GMT)分别为211.3和224.6 mIU/mL,差异均无统计学意义(P> 0.05)。结论两种国产甲型肝炎减毒活疫苗均具有良好的安全性及免疫原性。 展开更多
关键词 甲型肝炎 减毒活疫苗 安全性 免疫原性
粉尘螨过敏原Der f 32的克隆、表达、免疫学鉴定及其对树突状细胞的调节作用研究
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作者 江贝 肖小军 +4 位作者 欧阳春艳 罗新萍 孙宝清 李靖 刘志刚 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期279-285,共7页
目的克隆、表达粉尘螨Der f 32蛋白,并鉴定其免疫原性及其对树突状细胞(DC)的调节作用。方法合成粉尘螨过敏原Der f 32基因,与pET-24a(+)载体连接,转入大肠埃希菌BL21诱导表达,经亲和层析法纯化后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SD... 目的克隆、表达粉尘螨Der f 32蛋白,并鉴定其免疫原性及其对树突状细胞(DC)的调节作用。方法合成粉尘螨过敏原Der f 32基因,与pET-24a(+)载体连接,转入大肠埃希菌BL21诱导表达,经亲和层析法纯化后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白表达情况,蛋白质印迹(Western blotting)、临床皮肤点刺实验检测重组蛋白的免疫原性。将重组蛋白Der f 32与小鼠来源的DC2.4共培养24 h,设阳性对照组(加等量重组蛋白Der f 1)和阴性对照组(加等量PBS),流式细胞术检测细胞表面共刺激分子(CD40、 CD83和CD80)的表达。将重组蛋白稀释为10、 20、 30、 40、 50、 60μg/ml等不同浓度,分别与DC2.4共培养48 h后, Western blotting分析T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域蛋白4 (TIM4)的表达情况。结果SDS-PAGE结果显示,重组蛋白Der f 32相对分子质量(Mr)约35 000。临床皮肤点刺实验表明, 42位尘螨过敏患者中有6例对重组蛋白Der f 32过敏,阳性率为14.2%。Western blotting结果显示,重组蛋白Der f 32能与皮试阳性患者血清IgE抗体特异性结合。流式细胞术检测结果显示,重组蛋白Der f 32与DC2.4共培养后, CD40、 CD83、 CD80的表达水平分别为24.5%、 9.6%和24.6%,高于阴性对照组(11.9%、 3.1%和15.6%)(P <0.01),低于阳性对照组(38.2%、 15.0%和39.1%)(P <0.05)。Western blotting检测结果显示, TIM4的表达量随重组蛋白Der f 32浓度的升高逐渐增加,且在Der f 32浓度为50μg/ml时, TIM4的表达量达到最高, TIM4相对灰度值为1.112。结论获得了具有较强免疫原性的粉尘螨新过敏原Der f 32,该蛋白能促进DC表面分子和TIM4的表达。 展开更多
关键词 粉尘螨 Der F 32 免疫原性 树突状细胞
基于多组学的肿瘤新抗原鉴定 预览
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作者 贾忠娟 王琳 +2 位作者 田怡然 海博宁 邵吉民 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1146-1152,共7页
近年来癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和国际癌症基因组联盟(International Cancer Genome Consortium,ICGC)等大规模肿瘤基因组计划的实施,以及伴随的基因组、转录组、蛋白质组和生物信息学等组学技术的快速发展,极大... 近年来癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和国际癌症基因组联盟(International Cancer Genome Consortium,ICGC)等大规模肿瘤基因组计划的实施,以及伴随的基因组、转录组、蛋白质组和生物信息学等组学技术的快速发展,极大推动了肿瘤突变谱鉴定及其产生的肿瘤新抗原(neoantigen)的研究。本文就肿瘤新抗原的鉴定以及基于肿瘤新抗原的免疫治疗技术包括肿瘤治疗性疫苗和细胞治疗等技术的研发作一综述。 展开更多
关键词 肿瘤新抗原 多组学 免疫原性 肿瘤免疫治疗
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虹鳟鱼IHNV-M蛋白微球疫苗的制备及其免疫效果 预览
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作者 潘璇 田晟源 +2 位作者 田洋 李全振 赵宝华 《河北渔业》 2019年第11期28-31,共4页
使用本实验室保存的重组菌株BL21(DE3)(pET-22b-m)经过IPTG诱导,并且经SDS-PAGE验证,在21.6 Ku处有目的蛋白表达;运用乳化-复乳化的方法,制备IHNV-M蛋白微球疫苗。运用灌胃的方法,将制备好的IHNV-M蛋白微球疫苗免疫虹鳟鱼后,经ELISA测... 使用本实验室保存的重组菌株BL21(DE3)(pET-22b-m)经过IPTG诱导,并且经SDS-PAGE验证,在21.6 Ku处有目的蛋白表达;运用乳化-复乳化的方法,制备IHNV-M蛋白微球疫苗。运用灌胃的方法,将制备好的IHNV-M蛋白微球疫苗免疫虹鳟鱼后,经ELISA测定血清中抗体效价。普通虹鳟鱼组和美国金鳟鱼血清中抗体效价分别为1∶128000和1∶25600。 展开更多
关键词 造血器官坏死病病毒 基质蛋白M 微球疫苗 免疫原性
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2011—2017年四川省狂犬病病毒N、G基因序列测定与分析
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作者 冯玉亮 李伟 +2 位作者 林世华 周兴余 张佳珂 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2019年第3期280-286,共7页
目的了解四川省2011—2017年间狂犬病病毒(rabies virus,RABV)株的分子特征以及流行株与疫苗株在核酸、氨基酸和蛋白修饰水平上的差异.方法对采集于2011—2017年间的23份RABV抗原阳性犬脑组织标本,通过RT-PCR以特异性引物扩增病毒核蛋白... 目的了解四川省2011—2017年间狂犬病病毒(rabies virus,RABV)株的分子特征以及流行株与疫苗株在核酸、氨基酸和蛋白修饰水平上的差异.方法对采集于2011—2017年间的23份RABV抗原阳性犬脑组织标本,通过RT-PCR以特异性引物扩增病毒核蛋白(nucleoprotein,N)基因和糖蛋白(glycoprotein,G)基因并测序,通过生物信息学软件分别对N基因和G基因进行基因特征分析.结果对23株RABV(简称四川株)N、G基因测序获得的全序列遗传进化关系分析表明,四川株均为rabies virus种,可分为3个进化分支且具有明显的地域特征,部分四川株与我国东部和北方流行毒株共循环.四川株间N基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为97.4%~100%和99.6%~100%,与参考株N基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为72.1%~99.8%和81.6%~100%.四川株与疫苗株相比在抗原位点、细胞表位以及信号肽序列上有一定差异,但主要抗原性、组织嗜性和毒力没有改变.结论四川株间无明显差异,均为rabies virus种.四川株与疫苗株病毒糖蛋白的氨基酸序列存在不同程度的差异,但毒力未发生改变. 展开更多
关键词 狂犬病病毒 核蛋白 糖蛋白 进化分析 免疫原性
滑液支原体醛缩酶的亚细胞定位及免疫原性
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作者 王宇 祁晶晶 +4 位作者 刘婷 温政 闫遵祥 高崧 于圣青 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期780-789,共10页
【背景】滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)感染能够引起鸡和火鸡的气囊炎、关节渗出性的滑液囊膜及腱鞘滑膜炎等。有研究表明,许多支原体中与代谢相关的酶类不仅分布在细胞质,也分布于细胞膜表面,通过结合宿主细胞的胞外基质蛋白,协... 【背景】滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)感染能够引起鸡和火鸡的气囊炎、关节渗出性的滑液囊膜及腱鞘滑膜炎等。有研究表明,许多支原体中与代谢相关的酶类不仅分布在细胞质,也分布于细胞膜表面,通过结合宿主细胞的胞外基质蛋白,协助病原菌黏附入侵宿主细胞。已有报道牛支原体(Mycoplasma bovis)和鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum)的醛缩酶(Fructose-bisphosphate aldolase,FBA)分布在膜蛋白和胞浆蛋白中,而MS的FBA蛋白还未见相关研究。【目的】对MSFBA蛋白进行生物信息学分析、原核表达、免疫原性分析及亚细胞定位检测,为进一步探索MS代谢相关酶类的生物学功能奠定基础。【方法】通过分析软件PSORTb、SignalP 4.1 Server和TMHMM Server在线预测MSFBA的亚细胞定位、信号肽及跨膜区,并用BLASTn和MEGA 5.0进行同源比对及进化树分析;通过Overlap PCR点突变扩增MS的fba全基因序列,连接表达载体pET-28a(+)并进行原核表达及纯化,获得纯化后的重组MSFBA(rMSFBA)蛋白;用MS阳性血清进行Westernblot鉴定rMSFBA的免疫原性;用纯化的rMSFBA蛋白制备兔多克隆抗体,与MS全菌蛋白、膜蛋白及胞浆蛋白进行Western blot分析,同时对MS全菌进行悬浮免疫荧光分析,检测MSFBA的膜定位情况。【结果】生物信息分析预测MSFBA分布在细胞质中,无信号肽,无跨膜区,在MS种内相似性高达99%,与其他种属FBA相似性在61%-78%之间,进化树显示其与牛鼻支原体(Mycoplasma bovirhinis)、仓鼠支原体(Mycoplasm acricetuli)等的FBA蛋白进化关系较近,与精氨酸支原体(Mycoplasma arginini)、人型支原体(Mycoplasma hominis)等的FBA蛋白进化关系较远;表达rMSFBA蛋白并纯化,经测定其相对分子质量大小约为33kD;rMSFBA能与MS阳性鸡血清特异性结合,证实其具有较好的免疫原性;Western blot显示抗rMSFBA的兔血清能与MS全菌蛋白和胞浆蛋白反应,而与膜蛋白不反应,说明MSFBA蛋白� 展开更多
关键词 滑液支原体 醛缩酶 原核表达 亚细胞定位 免疫原性
C、D型貂源铜绿假单胞菌的生物学特性鉴定及免疫效果评价 预览
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作者 吕娇 闫明灏 +10 位作者 韩坤 程悦宁 廉士珍 徐淑娟 史秋梅 陈丽凤 曲学忠 丛培强 赵辉 闫喜军 白雪 《动物医学进展》 北大核心 2019年第6期23-29,共7页
从辽宁和黑龙江2个水貂养殖场死亡水貂肺中分离出13株铜绿假单胞菌,血清型鉴定分别为C型和D型,命名为PK13-C和H2F-D。为了解其作为疫苗株的免疫效果,测定了其运动能力、绿脓菌素生成能力、生长曲线、毒力、免疫原性及耐药性。结果表明,P... 从辽宁和黑龙江2个水貂养殖场死亡水貂肺中分离出13株铜绿假单胞菌,血清型鉴定分别为C型和D型,命名为PK13-C和H2F-D。为了解其作为疫苗株的免疫效果,测定了其运动能力、绿脓菌素生成能力、生长曲线、毒力、免疫原性及耐药性。结果表明,PK13-C对小鼠和水貂的毒力分别为7.5×106CFU和7×105CFU,泳动能力及群集运动能力较强,抽动能力较弱,生物被膜形成能力中等;H2F-D对小鼠和水貂的毒力分别为2.05×107CFU和2.2×106CFU,泳动能力较弱,但群集运动及抽动能力较强,生物被膜形成能力较弱。二者对本血清型菌株的免疫保护率均为100%,对异种血清型菌株的保护率为80%~90%。2个株菌均可产生绿脓菌素。生长曲线显示2个菌株于4h进入对数生长期,于18h左右进入平稳期。药敏试验结果表明,2个株菌对氯霉素、复方新诺明、氨苄西林/舒巴坦耐药。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 C型 D型 免疫原性
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高原牧区羊黑疫野毒分离株的生物学鉴定及免疫原性分析 预览
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作者 李生庆 张西云 +5 位作者 李淑萍 胡国元 王亭亭 刘怀新 叶明俊 贾苗 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第7期18-21,I0001,共5页
为提高羊黑疫疫苗的免疫保护力,从青藏高原牧区病死羊体内分离的6株野毒株中筛选具有高免疫原性的B型诺维氏梭菌制苗用菌株,通过16S rRNA分子鉴定、α毒素基因片段的扩增、产毒素能力对比分析,筛选出1株产毒能力较高的TB05野毒株,以标... 为提高羊黑疫疫苗的免疫保护力,从青藏高原牧区病死羊体内分离的6株野毒株中筛选具有高免疫原性的B型诺维氏梭菌制苗用菌株,通过16S rRNA分子鉴定、α毒素基因片段的扩增、产毒素能力对比分析,筛选出1株产毒能力较高的TB05野毒株,以标准株为对照,研制了羊黑疫氢氧化铝菌苗,对其免疫原性进行了对比分析。结果显示,6株菌16S rRNA分子系统发育树亲缘关系较近,均扩增出大小为570 bp的α毒素基因片段;该TB05野毒株在含1.0%葡萄糖,pH值8.4~8.6的VF培养基中37℃72 h产毒最高,可达40000 MLD/mL;疫苗对家兔的免疫保护力是对照组的2倍,血清抗体效价是对照组的3倍,免疫羊180 d后仍可抵抗2个致死量的攻击,免疫期远高于对照组的3个月。表明该野毒株具有较强的产毒稳定性和较好的免疫原性,可作为羊黑疫疫苗生产备用菌株。 展开更多
关键词 B型诺维氏梭菌 分子鉴定 产毒试验 免疫原性
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发热伴血小板减少综合征病毒蛋白Gc原核表达及免疫原性研究
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作者 姚文武 颜浩 +4 位作者 楼秀玉 潘军航 孙逸 茅海燕 张严峻 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS 2019年第4期383-386,共4页
目的对原核表达发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)蛋白Gc免疫原性进行初步研究。方法参照SFTSV HB29病毒株包膜蛋白Gc编码基因,通过大肠埃希菌密码子偏好性优化后化学合成方法得到Gc目的基因。将目的基因导入到载体pET-His中,得到表达... 目的对原核表达发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)蛋白Gc免疫原性进行初步研究。方法参照SFTSV HB29病毒株包膜蛋白Gc编码基因,通过大肠埃希菌密码子偏好性优化后化学合成方法得到Gc目的基因。将目的基因导入到载体pET-His中,得到表达载体pET-His-Gc。经测序确认后转化到BL21(DE3)感受态细胞中表达,纯化后进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot验证。蛋白免疫新西兰大白兔后收集兔血清进行抗体效价测定。结果成功构建了pET-His-Gc融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌中得到可溶性表达,且得到的Gc蛋白具有良好的免疫原性。动物实验结果表明,3次免疫后兔血清的抗体效价可达到1∶512 000。结论实现了SFTSV包膜蛋白Gc的原核表达,为后续SFTSV包膜蛋白的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 发热伴血小板减少综合征病毒 原核表达 免疫原性
产气荚膜梭菌β毒素蛋白抗原表位预测及CPB-N蛋白免疫原性分析 预览
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作者 王玉建 商红旗 +3 位作者 朱琳 徐煜琳 胡莉萍 朱瑞良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期188-191,共4页
为获得具有与β毒素蛋白相同免疫原性的新蛋白,本研究对产气荚膜梭菌β毒素蛋白的氨基酸序列进行综合分析,预测其抗原表位并筛选出有效的新蛋白。采用生物信息学方法综合分析β毒素蛋白二级结构、亲水性、可塑性、抗原性、跨膜区域以及... 为获得具有与β毒素蛋白相同免疫原性的新蛋白,本研究对产气荚膜梭菌β毒素蛋白的氨基酸序列进行综合分析,预测其抗原表位并筛选出有效的新蛋白。采用生物信息学方法综合分析β毒素蛋白二级结构、亲水性、可塑性、抗原性、跨膜区域以及信号肽,同时参考ElliPro服务器在线预测。最终预测aa108~aa320区段为优势抗原表位,在此基础上建立β毒素蛋白三维结构模型,标记特殊位点并筛选出B型产气荚膜梭菌新蛋白(CPB-N)。诱导表达CPB-N后通过SDS-PAGE和western blot鉴定,结果显示在约24 ku处有明显条带。采用间接ELISA方法对免疫小鼠的血清和肠道灌洗液样品进行检测,结果表明CPB-N与β毒素蛋白的免疫原性基本相同。CPB-N蛋白的筛选及预防产气荚膜梭菌引起的疾病奠定了重要的研究基础。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 β毒素蛋白 抗原表位 免疫原性
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iNKT细胞联合卵清蛋白对髓源性树突状细胞表型和功能的影响 预览
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作者 郭旭雪 聂汉祥 +1 位作者 陈千慧 邓霓姗 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1483-1488,共6页
目的:观察哮喘小鼠恒定自然杀伤T细胞(iNKT细胞)联合卵清蛋白(OVA)对髓源性树突状细胞(BMDCs)表型和功能的影响。方法:取健康雄性野生型BLAB/c小鼠BMDCs,分别与哮喘小鼠脾脏iNKT细胞联合OVA(iNKT细胞联合OVA组)、脂多糖(LPS组)、iNKT细... 目的:观察哮喘小鼠恒定自然杀伤T细胞(iNKT细胞)联合卵清蛋白(OVA)对髓源性树突状细胞(BMDCs)表型和功能的影响。方法:取健康雄性野生型BLAB/c小鼠BMDCs,分别与哮喘小鼠脾脏iNKT细胞联合OVA(iNKT细胞联合OVA组)、脂多糖(LPS组)、iNKT细胞联合PBS(iNKT细胞联合PBS组)、OVA(OVA组)或PBS(PBS组)共培养20 h,采用流式细胞术检测各组BMDCs表面分子MHC-II、CD80、CD86和CD40的表达水平,ELISA法检测培养上清液中白细胞介素12(IL-12)p70、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-10的水平;取各组共培养后的BMDCs,与DO11.10转基因小鼠脾CD4~+ T细胞共培养48 h,采用ELISA法检测培养上清液中IL-4和干扰素γ(IFN-γ)的水平。结果:iNKT细胞联合OVA组BMDCs表面分子MHC-II、CD80、CD86和CD40及培养上清液IL-12 p70、IL-6和TNF-α水平与LPS组比较差异无统计学显著性(P>0.05),但明显高于iNKT细胞联合PBS组、OVA组和PBS组(P<0.05或P<0.01);iNKT细胞联合OVA组BMDCs与DO11.10 CD4~+ T细胞共培养上清液IL-4水平与LPS组比较差异无统计学显著性(P>0.05),但明显高于iNKT细胞联合PBS组、OVA组和PBS组(P<0.01)。结论:存在OVA时,iNKT细胞可以诱导BMDCs表型和功能的免疫原性成熟。 展开更多
关键词 哮喘 髓源性树突状细胞 恒定自然杀伤T细胞 卵清蛋白 免疫原性
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牛支原体临洮分离株NOX-1的克隆表达、酶学活性及其亚细胞定位研究 预览
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作者 李丹 张志雄 +1 位作者 邢小勇 包世俊 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第3期57-64,共8页
为研究牛支原体(M. bovis)临洮分离株(LT strain)NOX-1基因特征表达产物的酶活性,及其在细胞中的具体存在部位,参照GenBank中M. bovis NOX-1HuBei株NOX-1基因序列(GenBank登录号:NC015725.1)设计引物,应用PCR扩增M.bovis临洮株的NOX-1基... 为研究牛支原体(M. bovis)临洮分离株(LT strain)NOX-1基因特征表达产物的酶活性,及其在细胞中的具体存在部位,参照GenBank中M. bovis NOX-1HuBei株NOX-1基因序列(GenBank登录号:NC015725.1)设计引物,应用PCR扩增M.bovis临洮株的NOX-1基因,在完成测序后构建NOX-1基因原核表达载体pET-NOX-1,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后表达。表达产物纯化后进行酶活测定并免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,继而应用Western blot及间接ELISA对NOX-1在M. bovis内的分布进行初步定位。结果显示,M. bovis临洮株NOX-1基因全长1365 bp,重组质粒经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,重组蛋白His-NOX-1的分子量约为50 kDa;重组蛋白酶促反应最适酶促温度为30℃、pH为7.5,双倒数法求得重组蛋白Km和Vmax分别为256.41μmol/L、34.25μmol/(L·min);Western blot及间接ELISA结果表明His-NOX-1在M. bovis细胞膜上和细胞浆中均有分布且胞浆含量较高。本研究结果为进一步研究M. bovisNOX-1的生物学功能奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 牛支原体 NOX-1基因 亚细胞定位 免疫原性
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吲哚美辛人工抗原及其多克隆抗体的制备
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作者 宋炎博 赵贵山 +5 位作者 汝晓飞 侯珂 林梦舟 李辛洁 孟庆蓉 王捍东 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第10期44-48,共5页
为了建立吲哚美辛(indomethacin,IDM)残留的免疫学检测方法,采用碳二亚胺法将载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)分别与IDM偶联,人工合成免疫原(IDM-BSA)和包被原(IDM-OVA)。通过紫外分光光度法、SDS-PAGE、ELISA等方法鉴定人... 为了建立吲哚美辛(indomethacin,IDM)残留的免疫学检测方法,采用碳二亚胺法将载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)分别与IDM偶联,人工合成免疫原(IDM-BSA)和包被原(IDM-OVA)。通过紫外分光光度法、SDS-PAGE、ELISA等方法鉴定人工抗原的合成效果;将IDM-BSA免疫小鼠,利用iELISA和icELISA来测定抗体血清效价。结果显示:IDM能与BSA和OVA成功偶联,通过免疫小鼠获得高效价的多克隆抗体,效价可达1∶6.4×10~4,半数抑制率为27.23 ng/mL。本研究结果为建立动物源性食品中IDM残留的免疫学检测方法奠定基础。 展开更多
关键词 吲哚美辛 多克隆抗体 免疫原性 药物残留 效价
蒜氨酸免疫毒性研究 预览
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作者 李明强 裴天容 +1 位作者 韩志俊 宋姗姗 《现代医药卫生》 2019年第20期3122-3124,共3页
目的分析蒜氨酸的免疫原性及免疫毒性。方法采用高浓度蒜氨酸溶液,以2d静脉注射1次和抗体制备常规方法免疫注射后,进行皮肤和急性超敏反应激发实验,观察实验动物局部皮肤和机体反应,并检测血清蒜氨酸抗体。结果未见局部皮肤和动物机体... 目的分析蒜氨酸的免疫原性及免疫毒性。方法采用高浓度蒜氨酸溶液,以2d静脉注射1次和抗体制备常规方法免疫注射后,进行皮肤和急性超敏反应激发实验,观察实验动物局部皮肤和机体反应,并检测血清蒜氨酸抗体。结果未见局部皮肤和动物机体异常反应,蒜氨酸抗体检测阴性。结论蒜氨酸具有一定的免疫原性,但单纯应用不具备免疫毒性。 展开更多
关键词 蒜氨酸 超敏反应 免疫原性 免疫毒性
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猪多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素亚单位蛋白的制备及免疫原性研究 预览
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作者 何海 郝成武 +3 位作者 凌晨 张飞 候凤 贺笋 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第11期3396-3403,共8页
为获得针对猪萎缩性鼻炎主要病原体——多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素的高免疫原性抗原,本试验构建、表达并验证该毒素的亚单位蛋白抗原,将猪多杀性巴氏杆菌毒素PMT基因与pMD19-T载体进行连接、转化,经序列分析鉴定后,分别使用Bam HⅠ、Hi... 为获得针对猪萎缩性鼻炎主要病原体——多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素的高免疫原性抗原,本试验构建、表达并验证该毒素的亚单位蛋白抗原,将猪多杀性巴氏杆菌毒素PMT基因与pMD19-T载体进行连接、转化,经序列分析鉴定后,分别使用Bam HⅠ、Hin dⅢ与BlpⅠ限制性内切酶将其酶切为3个基因片段。将片段1(Tox1)、片段2(Tox2)和片段3(Tox3)分别亚克隆至原核表达载体pET32-b、pET32-a和pET32-b中,构建3个重组表达载体。将重组表达载体转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后,分别进行SDS-PAGE与Western blotting检测,并使用小鼠与豚鼠初步研究其免疫原性。结果显示,构建的3个基因片段长度分别为776、409与410 bp,与GenBank中相关序列具有高度同源性;3个蛋白片段表达正常,表达量分别达到379.95、447.62与459.82μg/mL,SDS-PAGE验证条带分别为75、77与53 ku;因3个片段位置不同,仅Tox3有Western blotting检测条带,与理论预测相符;使用3种表达蛋白免疫小鼠与豚鼠后,二免后14 d,血清经试剂盒检测阳性率达到100%,对二免后14 d小鼠攻毒保护率达到93%。本研究成功构建了PMT的3个亚单位活性片段,且具有较好的免疫原性。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素 亚单位活性片段 免疫原性
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禽白血病病毒p27基因的原核表达及生物信息学分析
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作者 徐明国 杨宁宁 +6 位作者 刘志科 张桂枝 吴鹏 易继海 吴文星 王震 陈创夫 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第13期21-26,172-174共9页
为了进一步研究禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)p27蛋白的结构与功能,并获得具有反应原性的重组蛋白p27,试验通过PCR技术克隆p27基因,构建克隆载体pMD19-T-p27,并应用生物信息学软件对获得的p27基因序列进行分析,构建重组表达载... 为了进一步研究禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)p27蛋白的结构与功能,并获得具有反应原性的重组蛋白p27,试验通过PCR技术克隆p27基因,构建克隆载体pMD19-T-p27,并应用生物信息学软件对获得的p27基因序列进行分析,构建重组表达载体pET-28a-p27,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达,通过SDS-PAGE和Western-blot对获得的重组蛋白p27进行分析。结果表明:通过PCR技术克隆获得ALV p27基因,并成功构建了克隆载体pMD19-T-p27;生物信息学分析发现,p27蛋白由239个氨基酸组成,分子式为C(1140)H(1853)N(323)O(339)S6,理论等电点为6.23,无信号肽和跨膜区,含有8个丝氨酸磷酸化位点和13个苏氨酸磷酸化位点,无糖基化位点,共有9个抗原表位,二级结构和三级结构中以α-螺旋为主;成功构建了重组表达载体pET-28a-p27,并在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中高效表达;诱导6小时时蛋白质表达量最大,分子质量约为27 ku,且以可溶性为主;重组蛋白p27具有较好的反应原性和特异性。说明试验获得了具有反应原性的重组蛋白p27,为建立禽白血病快速诊断方法和新型疫苗的研发提供了理论基础。 展开更多
关键词 禽白血病 P27基因 反应原性 抗原表位 生物信息学分析
戊型肝炎病毒ORF2抗原的制备及其免疫原性评价
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作者 卢井才 宋月爽 +6 位作者 刘大维 闫慧 孙世洋 孙博 袁若森 孔维 姜春来 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第6期614-617,共4页
目的制备戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)ORF2抗原,并对其免疫原性进行分析。方法通过基因合成获得HEV ORF2目的基因,构建重组杆状病毒,并在sf9昆虫细胞中优化表达;采用超声、硫酸铵沉淀及层析纯化HEV ORF2蛋白,免疫小鼠分析其免... 目的制备戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)ORF2抗原,并对其免疫原性进行分析。方法通过基因合成获得HEV ORF2目的基因,构建重组杆状病毒,并在sf9昆虫细胞中优化表达;采用超声、硫酸铵沉淀及层析纯化HEV ORF2蛋白,免疫小鼠分析其免疫原性。结果制备的重组杆状病毒滴度为1×108 PFU/m L;重组蛋白表达条件MOI为1,收获时间为5 d时,表达量最高为20 mg/L;通过纯化获得HEV ORF2蛋白纯度> 95%;其疫苗组血清特异性抗体效价与PBS对照组比较差异有统计学意义(P <0. 05)。结论成功表达并纯化了HEV ORF2蛋白,该纯化方法可获得纯度较高的目的蛋白,且制备的HEV ORF2蛋白具有很好的免疫原性,可用于制备和开发预防性疫苗。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 ORF2抗原 sf9昆虫细胞 免疫原性
糖基化反应对白果蛋白免疫原性及结构的影响 预览
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作者 孙红 杨小明 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第15期14-19,共6页
本文采用湿热法对白果蛋白(ginkgo seed protein,GSP)与葡萄糖进行糖基化反应,以期降低GSP免疫原性。采用酶联免疫吸附法检测蛋白免疫原性,优化GSP糖基化工艺,并分析GSP紫外吸收、内源荧光发射及二级结构的变化,研究糖基化反应对其结构... 本文采用湿热法对白果蛋白(ginkgo seed protein,GSP)与葡萄糖进行糖基化反应,以期降低GSP免疫原性。采用酶联免疫吸附法检测蛋白免疫原性,优化GSP糖基化工艺,并分析GSP紫外吸收、内源荧光发射及二级结构的变化,研究糖基化反应对其结构的影响。结果表明,蛋白/葡萄糖比例为1∶3,糖基化温度为90℃,糖基化时间为60 min,在此工艺下可以有效降低GSP约54%的免疫原性。同时,糖基化能使GSP的紫外吸收氨基酸残基暴露,减少其表面荧光发射基团数量,并增加GSP α-螺旋和无规则卷曲含量,减少其β-折叠和转角结构含量。 展开更多
关键词 糖基化 白果蛋白 免疫原性 紫外吸收 内源荧光 二级结构
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稳定表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的CHO-K1细胞系的建立及免疫原性分析 预览
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作者 武乐祎 吴素芳 +4 位作者 车影 张强 李鹏 卞广林 王选年 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1056-1063,共8页
建立高表达PCV2-Cap蛋白的CHO-K1悬浮稳转细胞系,鉴定蛋白的免疫原性,为开发新型且有效防治猪圆环病毒的亚单位疫苗奠定基础。构建重组质粒pEE12.4-PCV2-Cap,转染CHO-K1细胞,通过加压筛选,有限稀释,细胞悬浮驯化及Western blot检测得到... 建立高表达PCV2-Cap蛋白的CHO-K1悬浮稳转细胞系,鉴定蛋白的免疫原性,为开发新型且有效防治猪圆环病毒的亚单位疫苗奠定基础。构建重组质粒pEE12.4-PCV2-Cap,转染CHO-K1细胞,通过加压筛选,有限稀释,细胞悬浮驯化及Western blot检测得到高表达Cap蛋白的悬浮稳转单克隆细胞株,并对该细胞株进行发酵,纯化得到的目的蛋白,通过小鼠免疫验证其免疫原性。结果表明PCV2-Cap蛋白能够在CHO-K1细胞中正确表达;发酵过程中活细胞密度高达6×10^6个·mL^-1,细胞活力在80%以上,PCV2-Cap蛋白表达量约为370mg·L^-1;利用间接ELISA检测小鼠免疫后血清中的抗体水平,证明了利用CHO-K1细胞生产的Cap蛋白具备良好的免疫原性。本研究成功构建了表达PCV2-Cap蛋白的CHO-K1悬浮稳转细胞系,并进一步对目的蛋白进行免疫原性分析,为猪圆环病毒亚单位疫苗的开发打下扎实的基础。 展开更多
关键词 CHO-K1 PCV2-Cap 稳转细胞系 免疫原性
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