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两种弧菌感染大黄鱼免疫相关基因的SNP位点分析
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作者 孙明洁 张娜 +2 位作者 徐善良 鲍宝龙 龚小玲 《上海海洋大学学报》 CSCD 北大核心 2019年第5期772-781,共10页
为了探究大黄鱼(Larimichthys crocea)免疫相关基因的SNP与弧菌抗性关系,分别利用鳗弧菌(Vibrioanguillarum和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)人工感染大黄鱼.对感染前后抗感群体的转录组进行高通量测序、筛选并分析其抗病差异:(1... 为了探究大黄鱼(Larimichthys crocea)免疫相关基因的SNP与弧菌抗性关系,分别利用鳗弧菌(Vibrioanguillarum和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)人工感染大黄鱼.对感染前后抗感群体的转录组进行高通量测序、筛选并分析其抗病差异:(1)筛选氨基酸的非同义突变SNP位点在抗鳗弧菌组有17个,而抗副溶血弧菌组的有28个;(2)一代测序验证结果发现,染色体NW_011323507.1上白细胞介素6受体基因(IL-6R)第91 196位碱基G突变为C,导致缬氨酸突变为亮氨酸,该位点G/C在抗鳗弧菌组、对照组样本之间突变基因型CC频率分别为12.5%和0,呈显著性差异(P<0.05);(3)补体Clq/肿瘤坏死因子相关蛋白9(CTRP9)基因在染色体NW_011323975.1上的35 665位碱基突变(A-G),在副溶血弧菌抗感易感群体中突变位点基因型GG频率分别为37.5%和0,呈极显著性差异(P<0.01).结果 表明,IL-6R-91196-G/C位点突变与大黄鱼抗鳗弧菌有关联,CTRP9-35665-A/G位点突变与大黄鱼抗副溶血弧菌有关联,这为大黄鱼抗弧菌群体的选育提供了理论依据. 展开更多
关键词 鳗弧菌 副溶血弧菌 大黄鱼 转录组 免疫基因 SNP
香鱼IGF-1基因特性及其对单核巨噬细胞的功能调控
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作者 徐德志 陆新江 +1 位作者 鲁建飞 陈炯 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期785-798,共14页
胰岛素样生长因子1 (insulin-like growth factor-1, IGF-1)是重要的内分泌激素,不仅调控细胞生长和分化,还参与免疫系统调节。为研究鱼类IGF-1在机体抗菌免疫中发挥的作用,探寻IGF-1对鱼类单核巨噬细胞的调控机制,本研究从香鱼(Plecogl... 胰岛素样生长因子1 (insulin-like growth factor-1, IGF-1)是重要的内分泌激素,不仅调控细胞生长和分化,还参与免疫系统调节。为研究鱼类IGF-1在机体抗菌免疫中发挥的作用,探寻IGF-1对鱼类单核巨噬细胞的调控机制,本研究从香鱼(Plecoglossus altivelis)转录组数据中获得PaIGF-1的cDNA序列(GenBank No.MK005188)。序列全长929 bp,包含1个ORF,编码171个氨基酸,预测分子量为18.86 kD。PaIGF-1氨基酸序列相对保守,与大西洋鲑(Salmo salar) IGF-1具有最高的同源性(77%)。qRT-PCR分析显示,PaIGF-1主要在香鱼肝脏、体肾、头肾和肠道中表达;感染鳗弧菌(Vibrio anguillarum)后,脾脏中PaIGF-1表达在感染8 h显著上调,头肾中PaIGF-1表达在感染24 h显著上调,而在鳃和肝中的表达没有改变。利用原核表达系统诱导表达并纯化PaIGF-1重组蛋白(recombinant PaIGF-1, rPaIGF-1),以rPaIGF-1孵育单核巨噬细胞,发现rPaIGF-1可显著增强单核巨噬细胞的吞噬能力,但其杀菌作用不受影响;qRT-PCR分析显示,rPaIGF-1可显著上调单核巨噬细胞中抑炎因子白介素(interleukin, IL)-10和转化生长因子β(transforming growth factor β, TGF-β)的表达,下调促炎因子IL-1β和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α, TNF-α)的表达;最后,利用rPaIGF-1分别孵育单核巨噬细胞PaCXCR (C-X-C chemokine receptor) 3.1^+和PaCXCR3.2^+,发现rPaIGF-1促进PaCXCR3.2^+中PaSTAT3的磷酸化,而对PaCXCR3.1^+中PaSTAT1和PaSTAT3的磷酸化水平没有影响。以特异性siRNA抑制PaSTAT3表达,可显著下调rPaIGF-1处理的PaCXCR3.2^+中IL-10和TGF-β的表达,表明rPaIGF-1可能通过激活PaSTAT3而抑制单核巨噬细胞的炎症水平。本研究为深入探讨香鱼IGF-1在宿主抗菌免疫中发挥作用的机制提供了基础资料。 展开更多
关键词 IGF-1 香鱼 单核巨噬细胞 鳗弧菌 炎症
大菱鲆鳗弧菌灭活疫苗生产工艺条件的优化
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作者 孙承文 李杰 +4 位作者 赖迎迢 江小燕 莫照兰 黄志斌 陶家发 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第3期328-332,共5页
目的优化大菱鲆鳗弧菌VAM003株灭活疫苗的生产工艺条件。方法通过对大菱鲆鳗弧菌VAM003株培养基(TSB和LB)、培养基盐度(1. 5%、2. 0%、2. 5%、3. 0%、3. 5%NaCl)、接种量(5%、10%、15%)、发酵时间(6~12 h)进行筛选,采用最适发酵条件制... 目的优化大菱鲆鳗弧菌VAM003株灭活疫苗的生产工艺条件。方法通过对大菱鲆鳗弧菌VAM003株培养基(TSB和LB)、培养基盐度(1. 5%、2. 0%、2. 5%、3. 0%、3. 5%NaCl)、接种量(5%、10%、15%)、发酵时间(6~12 h)进行筛选,采用最适发酵条件制备大菱鲆鳗弧菌VAM003株发酵菌液,分别加入不同终浓度的甲醛(0. 1%、0. 2%、0. 3%、0. 4%)灭活24、48、72 h,确定最适灭活条件。采用最适生产工艺制备2批大菱鲆鳗弧菌VAM003株灭活疫苗,并进行安全性及效力试验。结果大菱鲆鳗弧菌VAM003株最适发酵培养条件为:用含2. 5%NaCl的TSB培养基,在接种量10%条件下发酵培养10~12 h,活菌量达5×109 CFU/m L以上;最适灭活条件为:甲醛终浓度0. 2%灭活24 h。大菱鲆注射灭活疫苗后,全部健活,未出现临床症状,摄食、游姿及体色均正常,注射部位无红肿,内脏器官无病变;疫苗的免疫保护率达90%以上。结论成功优化了大菱鲆鳗弧菌VAM003株灭活疫苗规模化生产工艺条件,制备的灭活疫苗具有良好的安全性及效力,可用于大菱鲆鳗弧菌病的预防。 展开更多
关键词 大菱鲆 鳗弧菌 灭活疫苗 安全性 效力
大弹涂鱼TLR基因分子进化研究及其在鳗弧菌胁迫后的表达分析 预览
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作者 周建波 孟繁星 +2 位作者 黎明 王日昕 石戈 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1049-1063,共15页
大弹涂鱼(Boleophthalmus pectinirostris)是一种生活在潮间带的淤泥滩和红树林等两栖环境中的鱼类,其免疫系统面临比水生生活更大的选择压力。Toll样受体基因(简称TLR)是重要的先天免疫成员,一直是鱼类分子免疫学的研究热点之一。为了... 大弹涂鱼(Boleophthalmus pectinirostris)是一种生活在潮间带的淤泥滩和红树林等两栖环境中的鱼类,其免疫系统面临比水生生活更大的选择压力。Toll样受体基因(简称TLR)是重要的先天免疫成员,一直是鱼类分子免疫学的研究热点之一。为了探究大弹涂鱼TLR基因是否因为其独特的生活环境而产生适应性进化以及其TLR基因在受到细菌攻击后的免疫应答模式,本研究从大弹涂鱼皮肤转录组中获得了TLR5, TLR8和TLR9完整序列以及TLR3和TLR7部分序列,采用分子生物信息学对大弹涂鱼TLR5, TLR8和TLR9基因序列以及氨基酸序列进行了分析,并根据所构建的系统发育树对5个TLR基因进行了分子进化分析,采用荧光定量PCR方法对大弹涂鱼5个TLR基因的组织表达分布和鳗弧菌攻击后5个TLR基因的免疫应答模式开展了研究。结果显示, TLR5基因全长3071 bp,包括长度为2646 bp的编码区,共编码882个氨基酸;TLR8基因全长3175 bp,包括长度为3033 bp的编码区,共编码1011个氨基酸;TLR9基因全长3398 bp,编码区长度为3093 bp,共编码1031个氨基酸。大弹涂鱼3个TLR基因与其他物种的TLR基因结构相似,具有高度保守性。位点模型结果表明,鱼类TLR3, TLR5和TLR8是高度保守的,而TLR7和TLR9在长期进化过程中产生了适应性进化;而进化枝-位点模型结果表明,为了适应更加复杂多变的两栖环境,大弹涂鱼TLR9基因可能产生了适应性进化。大弹涂鱼5个TLR基因在8个健康组织(肠,眼,肾,肝,脑,肌肉,脾和皮肤)中均有表达,在肝脏和脾脏中的表达量较高。在受到鳗弧菌(Vibrio anguillarum)攻击后的免疫表达模式表明了大弹涂鱼5个TLR基因在应对细菌入侵时起到了重要作用。 展开更多
关键词 大弹涂鱼 Toll样受体基因 序列分析 分子进化分析 鳗弧菌 基因表达
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青蛤(Cyclina sinensis)IKK基因的克隆及其在鳗弧菌(Vibrio anguillarum)刺激下的表达分析 预览
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作者 侯梓园 高姗 +1 位作者 潘宝平 闫春财 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期437-442,共6页
利用构建的青蛤(Cyclina sinensis)转录组文库,筛选到青蛤IKK 基因的类似序列。经设计引物克隆比对后确认为CsIKK 基因。利用生物信息学软件在线对该基因进行结构分析。采用PCR 技术克隆基因,并使用实时荧光定量PCR 技术克隆得到CsIKK ... 利用构建的青蛤(Cyclina sinensis)转录组文库,筛选到青蛤IKK 基因的类似序列。经设计引物克隆比对后确认为CsIKK 基因。利用生物信息学软件在线对该基因进行结构分析。采用PCR 技术克隆基因,并使用实时荧光定量PCR 技术克隆得到CsIKK 基因在青蛤五个不同组织中的表达情况及在鳗弧菌(Vibrio anguillarum)的刺激下IKK 基因在青蛤血淋巴中的时序性表达情况。综合结果得到, CsIKK 基因序列开放阅读框长2298bp,编码765 个氨基酸。IKK 基因在青蛤的血淋巴、外套膜、闭壳肌、肝脏、性腺和鳃六个组织中均表达,在血淋巴中表达量最高。青蛤IKK 基因在鳗弧菌胁迫下表达量在6h 时达到最大值,与对照组相比差异极显著(P<0.01),表明该基因所指导的蛋白是青蛤重要的免疫信号通路蛋白。 展开更多
关键词 青蛤 CsIKK基因 鳗弧菌 荧光定量PCR
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环境因子对鳗弧菌生物膜形成的影响 被引量:4
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作者 尹清干 程俊茗 +4 位作者 刘腾飞 董龙香 苏惠冰 胡鲲 杨先乐 《微生物学通报》 CSCD 北大核心 2018年第1期138-145,共8页
【背景】鳗弧菌是海产动物弧菌病的主要病原,在海水水域中广泛存在。鳗弧菌为了适应环境变化会生成生物膜,形成自我保护,对其防治是水产养殖行业的一大难题。【目的】探讨致病性鳗弧菌(Vibrio anguillarum)BYK0638生物膜的形成特性,... 【背景】鳗弧菌是海产动物弧菌病的主要病原,在海水水域中广泛存在。鳗弧菌为了适应环境变化会生成生物膜,形成自我保护,对其防治是水产养殖行业的一大难题。【目的】探讨致病性鳗弧菌(Vibrio anguillarum)BYK0638生物膜的形成特性,为进一步研究鳗弧菌生物膜形成机制和致病机理提供参考。【方法】采用改良的微孔板法研究静置培养条件下鳗弧菌(V.anguillarum)BYK0638在96孔酶标板上的成膜情况,CCK-8法(Cell counting kit-8)定量检测生物膜中鳗弧菌的活力。【结果】鳗弧菌BYK0638能够在聚苯乙烯酶标板上形成稳定而明显的生物膜,其生物膜的OD450值在24 h达到峰值,60 h后趋于稳定;在107-108 CFU/m L范围内,鳗弧菌生物膜的OD450值显著高于其他试验组(P〈0.05);25°C时的生物膜OD450值显著高于其他温度生物膜的形成量;在p H 4.0-11.0范围内,当p H值为7.0时鳗弧菌形成的生物膜量最高,在p H值为3.0和12.0时鳗弧菌几乎不形成生物膜;在TSB培养基中加入0.03-2.00 mmol/L Ca Cl2,鳗弧菌生物膜形成量与未添加Ca Cl2对照组无显著性差异;在TSB培养基中加入0.03 mmol/L Mg Cl2,可促进鳗弧菌生物膜形成;Na Cl浓度为5%时,形成的生物膜OD450值最高;鳗弧菌在大黄鱼表皮黏液、肝脏、前肠、后肠组织提取液包被的96孔酶标板上形成的生物膜显著高于其他黏液和组织提取液包被组(P〈0.05)。【结论】致病性鳗弧菌BYK0638能形成稳定而明显的生物膜,其生物膜形成与外界环境因子变化有密切的关系,培养时间、初始菌浓度、温度、p H、Mg2+、盐度及不同组织和黏液等各种环境因子均能显著影响鳗弧菌生物膜的形成。 展开更多
关键词 鳗弧菌 生物膜 环境因子
香鱼主要组织相容性复合体MHCIIB的分子克隆及其在鳗弧菌感染下的功能鉴定3
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作者 李长红 丁斐斐 +1 位作者 余莉 陈炯 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期1091-1102,共12页
主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex classⅡ,MHCⅡ)在脊椎动物免疫反应中发挥重要作用。本研究从香鱼(Plecoglossus altivelis)单核/巨噬细胞(monocytes/macrophages,MO/Mφ)转录组中获得了MHCⅡ基因... 主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex classⅡ,MHCⅡ)在脊椎动物免疫反应中发挥重要作用。本研究从香鱼(Plecoglossus altivelis)单核/巨噬细胞(monocytes/macrophages,MO/Mφ)转录组中获得了MHCⅡ基因β链(PaMHCⅡB)cDNA序列。PaMHCⅡB由920个核苷酸组成,包含一个大的开放阅读框,编码251个氨基酸,预测分子质量为28.23kD。氨基酸序列分析表明,PaMHCⅡB具有MHC ⅡB的典型特征,主要包括信号肽、2个胞外区和1个保守的connecting peptide/transmembrane/cytoplasmic(CP/TM/CYT)结构域,与北极红点鲑(Salvelinus alpinus)MHCⅡB同源性最高,为65.04%;系统发育分析表明,PaMHCⅡB与北极红点鲑MHCⅡB进化相关性最高。实时荧光定量PCR(quantitative real-timePCR,qPCR)结果显示,PaMHCⅡBmRNA主要在香鱼鳃、肠和脾中表达;鳗弧菌感染(Vibrioanguillarum)后香鱼肝中PaMHCIIBmRNA在感染后12h(hourspostinfection,hpi)时上调显著,在24hpi达到峰值,为对照组的3.18倍,脾、头肾、肠和鳃中PaMHCⅡB mRNA均在4hpi时上调显著,分别在4、8、24和12hpi时达到峰值,分别为对照组的85.18、2.06、4.21和6.81倍(P〈0.05)。香鱼MO/Mφ经鳗弧茵感染后,PaMHCⅡB mRNA的表达水平在4hpi时上调显著,在12hpi时达到峰值,为对照组的3.35倍(P〈0.05)。原核表达了PaMHCⅡB胞外区并制备其抗体。Western印迹分析结果表明,香鱼MO/M(1)中PaMHCⅡB具有N糖基化修饰,且鳗弧茵感染后其蛋白表达水平在12hpi时显著增加,在24hpi时达到峰值,为对照组的3.19倍(P〈0.05)。抗体封闭PaMHCⅡB后,香鱼MO/Mφ吞噬活性被抑制,为对照组的0.28倍(P〈0.05),而且鳗弧茵诱导的4个细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10和TGF-β表达均受到抑制,均在8hpi时被抑制最明显,表达量分别为对照组的0.23、0.41、0.51和0� 展开更多
关键词 香鱼 主要组织相容性复合体 鳗弧菌 基因表达 单核/巨噬细胞
悉生条件下3株嗜盐古菌对卤虫生长及其抗弧菌感染的影响 预览 被引量:2
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作者 王栅月 练秀文 +3 位作者 那婧阳 孙培淇 韩学凯 隋丽英 《中国水产科学》 CSCD 北大核心 2018年第3期512-519,共8页
嗜盐古菌存在于高盐水体中,是高盐环境微生物种群的重要组成部分。本研究利用从日晒盐场结晶池卤水中分离得到的3株红色嗜盐古菌,分别命名为Haloarcula sp.HG-1、Haloferax sp.KN-4和Halorubrum sp.IT-5。采用悉生实验系统,探讨不同盐度... 嗜盐古菌存在于高盐水体中,是高盐环境微生物种群的重要组成部分。本研究利用从日晒盐场结晶池卤水中分离得到的3株红色嗜盐古菌,分别命名为Haloarcula sp.HG-1、Haloferax sp.KN-4和Halorubrum sp.IT-5。采用悉生实验系统,探讨不同盐度(30、100和150)条件下3株古菌能否作为卤虫(Artemia)的唯一饵料,并比较其作为饵料对卤虫存活、生长和抗鳗弧菌(Vibrio anguillarum)感染能力的影响。结果表明,在盐度30的悉生系统中,投喂3株古菌组卤虫存活率和体长均保持较高水平;鳗弧菌攻毒条件下,卤虫存活率有所下降,其中投喂Haloferax sp.KN-4菌株组卤虫抗鳗弧菌感染能力最强。正常和攻毒条件下,在盐度100和盐度150悉生系统中分别投喂3株古菌,卤虫均保持较高存活率和体长,其中投喂Haloarcula sp.HG-1菌株组卤虫具有最高存活率和最长体长,但攻毒组卤虫存活率和生长普遍优于未攻毒组,这可能与高盐条件下V.anguillarum毒力下降有关。本研究利用"卤虫-古菌"悉生实验系统,证实了3株嗜盐古菌均可作为卤虫的唯一饵料,为卤虫提供营养;利用"卤虫-古菌-致病菌"攻毒实验系统,证实3株嗜盐古菌均可以增强卤虫抗鳗弧菌感染能力。本研究结果为研究古菌在高盐环境食物链中的作用提供了基础数据。 展开更多
关键词 嗜盐古菌 悉生卤虫 鳗弧菌 存活 生长
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大菱鲆鳗弧菌灭活疫苗原液发酵条件的优化 预览
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作者 孙承文 李杰 +3 位作者 赖迎迢 江小燕 黄志斌 陶家发 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2018年第6期59-63,共5页
为实现大菱鲆鳗弧菌灭活疫苗中试生产,通过对大菱鲆鳗弧菌菌株VAM003二级种子培养时间、盐度、培养基、接种量、补料等发酵条件的优化筛选,确定大菱鲆鳗弧菌菌株VAM003灭活疫苗发酵原液的发酵工艺条件。鳗弧菌菌珠VAM003接种于含2.5%NaC... 为实现大菱鲆鳗弧菌灭活疫苗中试生产,通过对大菱鲆鳗弧菌菌株VAM003二级种子培养时间、盐度、培养基、接种量、补料等发酵条件的优化筛选,确定大菱鲆鳗弧菌菌株VAM003灭活疫苗发酵原液的发酵工艺条件。鳗弧菌菌珠VAM003接种于含2.5%NaCl的TSB液体发酵培养基,28℃振荡培养12~14h,制备二级种子液,按发酵罐培养基总量的10%接种二级种子液,28℃补料发酵10~12h。在该条件下鳗弧菌菌株VAM003发酵活菌数达到1.20×10^10cfu/mL,比优化前提高120%以上。 展开更多
关键词 鳗弧菌 发酵菌液 发酵条件 优化
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鳗弧菌菌蜕疫苗的初步制备 预览
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作者 刘丹阳 李超 +2 位作者 张敏 姜光朋 周顺 《青岛农业大学学报:自然科学版》 2018年第4期316-321,共6页
菌蜕作为一种新型疫苗,较好的保留了细菌的原有形态及膜蛋白结构,能够诱导机体产生体液免疫反应及细胞免疫反应.为制备鳗弧菌菌蜕疫苗,本实验通过基因重组技术,构建了含噬菌体PhiX174裂解酶基因E(LysisE)及温控表达系统cIts857的重组... 菌蜕作为一种新型疫苗,较好的保留了细菌的原有形态及膜蛋白结构,能够诱导机体产生体液免疫反应及细胞免疫反应.为制备鳗弧菌菌蜕疫苗,本实验通过基因重组技术,构建了含噬菌体PhiX174裂解酶基因E(LysisE)及温控表达系统cIts857的重组载体pRK-857-E,通过结合转移技术,将重组表达载体转移至鳗弧菌,成功构建鳗弧菌菌蜕.结果表明,42 ℃升温诱导后,菌体OD 600 于1 h时开始下降,3 h后趋于平稳,表示细菌裂解基本完成.平板涂布结果显示,活菌数由诱导前的8.21×10^7 CFU/mL,下降至诱导后的2.31×10^3 CFU/mL,裂解效率接近99.999%.电镜对比观察诱导前后的细菌,发现诱导后的鳗弧菌形态未发生变化,可观察到直径为100-300 nm的跨膜裂解孔洞,且有细胞质流出.本研究成功构建鳗弧菌菌蜕疫苗,并对其裂解效果进行检测,为弧菌菌蜕疫苗的开发奠定了基础. 展开更多
关键词 鳗弧菌 裂解 菌蜕
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Molecular characterization and expression analysis of Lily- type lectin (SmLTL) in turbot Scophthalmus maximus, and its response to Vibrio anguillarum 预览
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作者 夏丹丹 马爱军 +4 位作者 黄智慧 商晓梅 崔文晓 杨志 曲江波 《海洋湖沼学报(英文)》 SCIE CAS CSCD 2018年第2期508-518,共11页
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不同病原菌胁迫下青蛤血淋巴转录组中免疫相关基因的比较 预览
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作者 赵婷 潘宝平 《安徽农业科学》 CAS 2018年第27期84-87,共4页
利用病原微生物革兰氏阳性藤黄微球菌(Micrococcus luteus)和革兰氏阴性鳗弧菌(Vibrio anguillarum)分别侵染活体青蛤,采用第二代测序MiSeq技术测序,构建了青蛤血淋巴中应答2种病原物的转录组文库。根据KEGG等数据库注释信息对Unigene... 利用病原微生物革兰氏阳性藤黄微球菌(Micrococcus luteus)和革兰氏阴性鳗弧菌(Vibrio anguillarum)分别侵染活体青蛤,采用第二代测序MiSeq技术测序,构建了青蛤血淋巴中应答2种病原物的转录组文库。根据KEGG等数据库注释信息对Unigene进行生物学通路注释,预测出青蛤免疫信号通路的差异性表达基因及相关注释信息。结果发现,共注释并筛选出2 605个差异表达基因,其中893个基因注释到15个免疫相关的通路中。该研究可为探索青蛤的免疫识别方式和信号传导路径提供依据。 展开更多
关键词 青蛤 转录组文库 鳗弧菌 藤黄微球菌 免疫相关基因
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魁蚶C型凝集素基因cDNA的克隆及表达分析 预览 被引量:1
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作者 沈淑芳 朱玲 +6 位作者 李加琦 薛素燕 李阳 陈琼琳 毛玉泽 庄志猛 方建光 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2018年第1期128-136,共9页
通过cDNA末端快速扩增(Rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆得到魁蚶(Scapharca broughtonii)C型凝集素(C-type lectin,Sb-Lec1)基因,该基因全长为700 bp,其中,5′-UTR为29 bp,3′-UTR为167 bp,开放阅读框长度为504 bp,编码... 通过cDNA末端快速扩增(Rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆得到魁蚶(Scapharca broughtonii)C型凝集素(C-type lectin,Sb-Lec1)基因,该基因全长为700 bp,其中,5′-UTR为29 bp,3′-UTR为167 bp,开放阅读框长度为504 bp,编码167个氨基酸,包括长度为23个氨基酸的信号肽序列、129个氨基酸的糖识别结构域(CRD)以及参与二硫键形成的6个半胱氨酸。预测蛋白分子量为19.11 kDa,理论等电点为4.74。多序列比对结果显示,Sb-Lec1基因CRD编码的氨基酸序列与长牡蛎(Crassostrea gigas)、紫贻贝(Mytilus galloprovincialis)和海湾扇贝(Argopecten irradians)C型凝集素的同源性分别为38%~40%、34%~35%和38%~39%,Sb-Lec1基因编码的氨基酸序列与其他物种的凝集素基因具有相似的结构,均含有形成二硫键的4个保守半胱氨酸。系统进化分析结果显示,魁蚶先与贝类聚为一支,再与脊椎动物聚在一起,表明魁蚶Sb-Lec1基因在进化树上的位置与其传统分类所处位置一致。采用荧光定量PCR技术,检测了Sb-Lec1基因在组织中的表达情况,发现其在肝胰腺、血淋巴、鳃、外套膜、闭壳肌、斧足中均有表达,其中,肝胰腺表达量最高。同时,分析了Sb-Lec1基因在鳗弧菌(Vibrio anguillarum)刺激下的mRNA表达量变化情况。结果显示,与对照组相比,菌刺激组Sb-Lec1基因mRNA在各检测组织中的表达量均显著上调(P<0.05),随着刺激时间的延长,表达量呈先升高后降低的趋势。本研究表明,魁蚶Sb-Lec1基因在机体免疫防御方面发挥重要功能。 展开更多
关键词 C型凝集素 魁蚶 鳗弧菌 基因克隆 基因表达
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鳗弧菌免疫诱导牙鲆IL-1β、IFN-γ和TNF-α基因表达变化 预览
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作者 钱晓宇 王占飞 +3 位作者 绳秀珍 唐小千 邢婧 战文斌 《中国动物检疫》 CAS 2018年第6期101-107,共7页
黏膜免疫是鱼类免疫系统的重要组成部分。多聚免疫球蛋白受体(pIgR)能够介导黏膜抗体的转运和分泌,而细胞因子IL-1β、IFN-γ和TNF-α对pIgR表达具有调节作用。本研究利用实时荧光定量PCR技术(qPCR)测定了牙鲆(Paralichthys olivac... 黏膜免疫是鱼类免疫系统的重要组成部分。多聚免疫球蛋白受体(pIgR)能够介导黏膜抗体的转运和分泌,而细胞因子IL-1β、IFN-γ和TNF-α对pIgR表达具有调节作用。本研究利用实时荧光定量PCR技术(qPCR)测定了牙鲆(Paralichthys olivaceus)组织中TNF-α、IL-1β和IFN-γ基因的表达动态。结果显示:浸泡和腹腔注射两种免疫方式皆可诱导3种基因发生显著上调表达;3种基因的上调表达在96 h内先上升,后降低到对照组水平,其中IL-1β和IFN-γ的上调幅度高于TNF-α,免疫后在牙鲆组织内的表达量分别比对照组高10-60倍和6-30倍,而TNF-α仅比对照组高2-4倍;不同免疫方式诱导的牙鲆各组织中3种基因的应答表达存在差异,浸泡免疫对黏膜免疫组织皮肤和鳃中的基因表达影响较大,显著上调达到峰值的时间短且峰值高,而注射免疫对系统免疫组织脾、头肾以及肝脏中的基因表达影响较大,其中在脾和头肾中注射免疫引起的IL-1β和IFN-γ的变化分别比对照组高50-60倍和30倍,浸泡组比对照组分别高15倍和10倍;前肠、中肠和后肠中,两种免疫方式诱导的3种细胞因子的上调表达量相近或浸泡组稍低。这些结果为进一步研究鱼类细胞因子IL-1β、IFN-γ和TNF-α对pIgR的表达调节提供了资料。 展开更多
关键词 牙鲆 鳗弧菌 白介素1Β 干扰素γ 肿瘤坏死因子α 多聚免疫球蛋白受体
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3种水产致病弧菌的生长速度对比研究 预览 被引量:2
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作者 罗凯 艾克特 +4 位作者 夏理海 李由申 张进雄 许巧情 郜卫华 《长江大学学报:自然科学版》 CAS 2017年第2期25-28,共4页
采用LB液体培养基,按照1:500的比例对鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、溶藻弧菌(V.alginolyticus)和河流弧菌(V.fluvialis)进行扩大培养,并测定不同时间段细菌培养液光密度D600nm值和重量来间接反映其生长情况。结果显示,鳗弧... 采用LB液体培养基,按照1:500的比例对鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、溶藻弧菌(V.alginolyticus)和河流弧菌(V.fluvialis)进行扩大培养,并测定不同时间段细菌培养液光密度D600nm值和重量来间接反映其生长情况。结果显示,鳗弧菌在5.75h时De600nm为1.046,溶藻弧菌在4.5h时D600nm为1.064,河流弧菌在3.75h时D600nm为1.071。这表明河流弧菌生长速度最快,溶藻弧菌次之,鳗弧菌生长速度最慢。 展开更多
关键词 鳗弧菌(Vibrio anguillarum) 溶藻弧菌(V.alginolyticus) 河流弧菌(V.fluvialis) 生长速度
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两种弧菌对菲律宾蛤仔代谢途径影响的比较研究 预览
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作者 刘小莉 侯承宗 +7 位作者 来涌凯 高军 李洁 尚秋爽 龙静 邓小玉 邱文彬 孙虎山 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期143-147,共5页
采用基于核磁共振波谱技术的代谢组学技术,探索菲律宾蛤仔在受到鳗弧菌和灿烂弧菌感染的代谢物变化特征,构建菲律宾蛤仔对弧菌感染后的代谢网络调控图谱,并比较两种弧菌毒性效应的差异。试验结果表明,3种代谢物葡萄糖、谷氨酸、苏氨酸... 采用基于核磁共振波谱技术的代谢组学技术,探索菲律宾蛤仔在受到鳗弧菌和灿烂弧菌感染的代谢物变化特征,构建菲律宾蛤仔对弧菌感染后的代谢网络调控图谱,并比较两种弧菌毒性效应的差异。试验结果表明,3种代谢物葡萄糖、谷氨酸、苏氨酸在两种弧菌感染时均发生了变化,表征鳗弧菌感染的代谢物为牛磺酸、精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸;而表征灿烂弧菌污染的代谢物为甜菜碱、二甲基甘氨酸、胆碱、谷氨酸、亚牛磺酸。 展开更多
关键词 鳗弧菌 灿烂弧菌 菲律宾蛤仔 代谢物 核磁共振波谱技术
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大黄鱼过氧化氢酶基因的克隆及其对鳗弧菌感染的响应 预览 被引量:3
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作者 严林飞 安昕 +3 位作者 包苗苗 何建瑜 吴常文 刘慧慧 《水产学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期641-648,共8页
为探究过氧化氢酶(catalase,CAT)对大黄鱼机体的保护作用,实验基于大黄鱼基因组序列数据库克隆获得CAT基因1584 bp的完整开放阅读框(GenBank登陆号:KKF-14425.1),该序列编码527个氨基酸残基,包含与其他动物高度保守的酶活性中心序... 为探究过氧化氢酶(catalase,CAT)对大黄鱼机体的保护作用,实验基于大黄鱼基因组序列数据库克隆获得CAT基因1584 bp的完整开放阅读框(GenBank登陆号:KKF-14425.1),该序列编码527个氨基酸残基,包含与其他动物高度保守的酶活性中心序列FDRERIPERVVHAKGA、亚铁血红素结合信号序列RLFSYPDTH、3个催化位点残基His75、Asn148和Tyr358,以及12个NADPH结合位点等,理论分子量为59.98 ku,等电点为8.37。多序列比对显示,大黄鱼CAT氨基酸序列与其他鱼类具有较高的一致性,与同属于石首鱼科的军曹鱼和条石鲷同源性高达94%,在进化树中也聚类于同一进化分支,说明该序列为CAT家族成员。实时荧光定量PCR检测显示,大黄鱼CAT基因在所检测的7种组织(肝脏、脾脏、脑、肾、肌肉、鳃、肠)中均有表达,但在肝脏中表达水平最高(为肌肉中的6.68倍)。鳗弧菌感染后,大黄鱼肝组织中CAT基因的表达随着时间的推移而变化明显,感染后12 h,达到最高(7.48倍),随后逐渐下降,到72 h已基本恢复到原始水平,注射PBS的对照组,CAT基因表达只略有上调,说明病原菌侵染可能引起鱼体产生大量活性氧自由基及H2O2,CAT基因则可以清除体内过量的活性氧,进而防止它们对细胞造成损伤。 展开更多
关键词 大黄鱼 鳗弧菌 过氧化氢酶(CAT) 基因克隆
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环境胁迫对大菱鲆C-型凝集素功能的影响 预览 被引量:3
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作者 夏丹丹 马爱军 +4 位作者 黄智慧 王新安 孙志宾 崔文晓 曲江波 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期161-170,共10页
大菱鲆C-型凝集素(SmLec1)是一种重要的免疫因子,本实验通过分析其活性特点以及环境胁迫对其表达调控的影响,探讨其在大菱鲆先天免疫应答过程中的潜在功能以及养殖环境中的应用。实验利用原核表达系统进行重组表达,并通过纯化获得19 k... 大菱鲆C-型凝集素(SmLec1)是一种重要的免疫因子,本实验通过分析其活性特点以及环境胁迫对其表达调控的影响,探讨其在大菱鲆先天免疫应答过程中的潜在功能以及养殖环境中的应用。实验利用原核表达系统进行重组表达,并通过纯化获得19 ku重组目的蛋白;活性分析结果显示,SmLec1对所选6种细菌的凝集作用存在差异,其中对鳗弧菌和爱德华氏菌具有明显的凝集作用;在选取的8种糖类中,木糖、果糖、蔗糖、乳糖和甘露糖能够抑制SmLec1的凝集活性;在理化因子(pH、温度)中,pH〈7和温度〉37°C时对SmLec1的凝集活性产生抑制;鳗弧菌感染实验显示,感染6 h时肝组织的SmLec1表达量明显上升,在12 h时达到最高值,随后有所下降;温度胁迫时肝组织的SmLec1 m RNA表达量受到温度的影响显著,在19°C开始升高,22-27°C呈降低趋势,其他组织变化不显著。盐度胁迫对SmLec1在各盐度的表达量变化不显著。研究表明,SmLec1能够抑制鳗弧菌的感染,其表达受到温度的影响,本研究为进一步明确SmLec1蛋白的抗菌机理和探索对大菱鲆疾病的免疫学防治途径提供科学依据。 展开更多
关键词 大菱鲆 C-型凝集素 鳗弧菌 蛋白重组 凝集活性 环境胁迫
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溴化呋喃酮对鳗弧菌群体感应调控行为的抑制研究 预览 被引量:1
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作者 潘玉荣 张彩丽 +1 位作者 朱素芹 曾名湧 《生物技术通报》 CSCD 北大核心 2017年第4期231-237,共7页
以群体感应抑制剂—溴化呋喃酮为研究对象,探究其对鳗弧菌群体感应相关基因和致病因子的抑制作用。利用荧光定量PCR检测亚抑菌浓度溴化呋喃酮对鳗弧菌van I/R和luxS基因表达量的影响,利用鞭毛染色观察溴化呋喃酮对鳗弧菌生物膜以及鞭毛... 以群体感应抑制剂—溴化呋喃酮为研究对象,探究其对鳗弧菌群体感应相关基因和致病因子的抑制作用。利用荧光定量PCR检测亚抑菌浓度溴化呋喃酮对鳗弧菌van I/R和luxS基因表达量的影响,利用鞭毛染色观察溴化呋喃酮对鳗弧菌生物膜以及鞭毛形成的作用,通过平板扩散法检测溴化呋喃酮对鳗弧菌胞外酶的作用。结果表明,溴化呋喃酮能够显著抑制鳗弧菌van I和luxS基因的表达量,溴化呋喃酮能够降低鳗弧菌分泌蛋白酶和明胶酶能力,能抑制鞭毛生长和生物膜的形成并降低其运动能力。 展开更多
关键词 溴化呋喃酮 鳗弧菌 群体感应 鞭毛 胞外酶 生物膜
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大菱鲆家系选育二代7种免疫因子的分析 预览
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作者 田岳强 郭建丽 +4 位作者 黄智慧 马爱军 王新安 杨志 曲江波 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期9-17,共9页
为选育高成活率的大菱鲆(Scophthalmus maximus)抗鳗弧菌(Vibrio anguillarum)群体,对30个大菱鲆选育二代家系(F2)和1个普通养殖群体进行鳗弧菌攻毒实验(周期为14 d),统计分析死亡率。选取死亡率不同的6个选育家系和普通养殖群... 为选育高成活率的大菱鲆(Scophthalmus maximus)抗鳗弧菌(Vibrio anguillarum)群体,对30个大菱鲆选育二代家系(F2)和1个普通养殖群体进行鳗弧菌攻毒实验(周期为14 d),统计分析死亡率。选取死亡率不同的6个选育家系和普通养殖群体构成7个实验组,采用半定量-聚合酶链反应(semi-quantitative polymerase Chain reaction,RT-PCR)技术对它们肝脏、脾脏、头肾的相关免疫因子——溶菌酶(Lysozyme)、抗菌肽(Hepcidin)、热激蛋白70(HSP70)、热激蛋白90(HSP90)、免疫球蛋白(Ig M)、C-型凝集素(C-type lectin)、Lily-型凝集素(Lily-type lectin)的表达量开展研究,并应用SPSS 16.0软件对攻毒前后各免疫因子的表达量与攻毒后存活率之间的相关性进行分析。研究结果表明:攻毒前后选育家系幼鱼肝脏、脾脏、头肾中7个免疫因子的表达量普遍高于普通养殖幼鱼,且在7个实验组中,攻毒后的表达量相较攻毒前均呈现下降趋势;攻毒前,肝脏中lysozyme、Ig M的表达量与存活率为极显著性正相关(P〈0.01),HSP70、HSP90、C-type lectin、Lily-type lectin的表达量与存活率为显著性正相关(P〈0.05);脾脏中,Hepcidin、HSP70和HSP90的表达量与存活率为极显著性正相关(P〈0.01);头肾中,HSP70的表达量与存活率为显著正相关(P〈0.05)。综上,可以推断选育家系相对于普通养殖群体大菱鲆抗鳗弧菌性能更强,且7种免疫因子在鳗弧菌感染鱼体的过程中发挥重要的抗感染作用;从F2中获得一个抗鳗弧菌性能较强的家系(23号),可用于今后大菱鲆抗鳗弧菌品系的选育指导工作,为大菱鲆高成活率群体的选育提供参考资料和理论依据。 展开更多
关键词 大菱鲆(Scophthalmus maximus) 鳗弧菌(Vibrio anguillarum) 选育家系 免疫因子 RT-PCR
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