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26种呋喃酮类似物对Sf9细胞毒力测定与活体生物活性比较研究 预览 被引量:2
1
作者 何利钦 任远航 +3 位作者 邓园杰 金洪 陶科 侯太平 《四川大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期403-408,共6页
利用MTT法测定26种呋喃酮类似物对Sf9细胞的毒力,采用浸渍法测定这些化合物对菜青虫3龄幼虫、菜蚜的触杀作用,并对其关联性进行比较.结果表明:26种呋喃酮类似物中,对Sf9细胞有增殖抑制作用的化合物为25种,对菜青虫和蚜虫均有触杀作用.... 利用MTT法测定26种呋喃酮类似物对Sf9细胞的毒力,采用浸渍法测定这些化合物对菜青虫3龄幼虫、菜蚜的触杀作用,并对其关联性进行比较.结果表明:26种呋喃酮类似物中,对Sf9细胞有增殖抑制作用的化合物为25种,对菜青虫和蚜虫均有触杀作用.细胞增殖抑制率与活体生物活性测定结果比较,Sf9细胞与菜青虫的关联性大于与蚜虫的关联性.在四大类化合物中,1-呋喃基-3-取代苯基-2,3-二溴丙酮类化合物(Ⅱ类)细胞毒力测定与活体生物活性关联性大于其他三类,其中的Ⅱ1、Ⅱ3两种化合物的抑制率与校正死亡率均高于60%,抑制率分别为(62.9±3.21)%和(72.5±3.16)%,校正死亡率分别为68.42%、63.95%和73.68%、75.58%,细胞毒力与活体检测关联性很大. 展开更多
关键词 呋喃酮类似物 Sf9 MTT法 毒力 触杀作用
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30种吗啉化合物对昆虫细胞Spodoptera frugiperda(Sf9)的毒力筛选 被引量:3
2
作者 张新刚 史冠莹 +2 位作者 何利钦 陶科 侯太平 《农药》 CAS 北大核心 2012年第4期 301-303,共3页
[目的]利用Spodoptera frugiperda(Sf9)细胞,测定30种吗啉化合物的毒力,研究化合物对细胞周期的影响。[方法]毒力测定采用MTT法,用流式细胞仪进行细胞周期测定。[结果]30种化合物中有27种化合物对Sf9细胞有抑制效果,其中吗啉丙烯酮类... [目的]利用Spodoptera frugiperda(Sf9)细胞,测定30种吗啉化合物的毒力,研究化合物对细胞周期的影响。[方法]毒力测定采用MTT法,用流式细胞仪进行细胞周期测定。[结果]30种化合物中有27种化合物对Sf9细胞有抑制效果,其中吗啉丙烯酮类化合物A3、A4、A6的抑制率超过50%,分别为(69.5±1.54)%、(67.9±1.87)%与(53.6±0.98)%。用50μmol/L的化合物A3处理Sf9细胞后,有凋亡小体出现。同时,化合物A3能干扰细胞正常的增殖周期,使部分细胞被阻滞在DNA合成期(S期)。[结论]化合物A3、A4、A6对Sf9细胞有较强的抑制作用,化合物A3可以干扰正常的细胞周期,并引发细胞凋亡。 展开更多
关键词 Sf9 毒力 MTT法 细胞周期
GFP与水稻条纹病毒病害特异蛋白的融合基因在sf9昆虫细胞中的表达
3
作者 林董 郑璐平 +3 位作者 谢荔岩 吴祖建 林奇英 谢联辉 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期 271-276,共6页
用重叠延伸PCR(overlap Polymerase Chain Reaction,overlap-PCR)方法获得了含有绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)和水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)病害特异性蛋白SP(Disease-specific protein)两者的融... 用重叠延伸PCR(overlap Polymerase Chain Reaction,overlap-PCR)方法获得了含有绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)和水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)病害特异性蛋白SP(Disease-specific protein)两者的融合基因(GFP-SP),并将其克隆至载体pMD18-T,得到的重组质粒pMD18-T-GFP-SP经Xba Ⅰ/Hind Ⅲ双酶切后与经相同方法处理过的杆状病毒转移载体pFastBacHTb相连接构建成重组转移质粒pFastBacHTb-GFP-SP。酶切和测序鉴定证明了其序列的正确性并且无移码现象发生。将此质粒转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac,得到含有目的基因片段的重组杆状病毒穿梭质粒rb-GFP-SP。以之转染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda,sf9)细胞,24~48h后在显微镜200倍可见光视野下观察到被感染细胞发生了细胞和细胞核变大、细胞内颗粒物增多、细胞脱落甚至裂解等一系列与正常的st9昆虫细胞形态有明显区别的变化。荧光显微镜下可见部分细胞发出清晰的绿色荧光,且大部分荧光集中在细胞质部分。这些结果表明,GFP-SP融合蛋白在st9昆虫细胞内成功表达。 展开更多
关键词 水稻条纹病毒 病害特异性蛋白 绿色荧光蛋白 昆虫细胞st9
用细菌/杆状病毒系统在昆虫细胞中表达HIV—2外膜糖蛋白gp105和跨膜糖蛋白g 预览 被引量:5
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作者 张应玖 金宁一 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期 13-16,共4页
目的 用细菌/杆状病毒(Bac to Bac)表达系统在昆虫细胞Sf9中表达HIV-2外膜糖蛋白gp105跨膜糖蛋白gp36,为研制艾滋病疫苗和诊断试剂奠定基础。方法 分别将HIV-2外膜蛋白gp105和跨膜蛋白gp... 目的 用细菌/杆状病毒(Bac to Bac)表达系统在昆虫细胞Sf9中表达HIV-2外膜糖蛋白gp105跨膜糖蛋白gp36,为研制艾滋病疫苗和诊断试剂奠定基础。方法 分别将HIV-2外膜蛋白gp105和跨膜蛋白gp36全基因序列克隆到杆状病毒转座载体pFast Bac THa和pFast Bac THb中我角体启动子下游,构建成重组转座载体pFast Bac HTa-pg105和pFast Bac HTb-gp36,利用细菌/杆状病毒(Bac to Bac)表达系统筛选重组杆状病毒,并在昆虫细胞Sf9中表达HIV-2的gp105和gp36。结果 SDS-PAGE分析结果表明,pg105基因表达产物为-66000u糖蛋白,pg36基因则表达-41000u糖蛋白,与天然产物一致。Western blot结果显示: 展开更多
关键词 HIV-2gp105 gp36 杆状病毒 昆虫细胞 外膜糖蛋白
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小菜蛾中肠氨肽酶N2在昆虫细胞中的表达 被引量:2
5
作者 王俊华 周小毛 +5 位作者 吴青君 王少丽 谢文 陈得峰 徐宝云 张友军 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期 151-157,共7页
利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac baculovirus expression system)表达获得小菜蛾Plutella xylostella (L.)中肠氨肽酶N2 (aminopeptidase N, APN2)蛋白,成功建立了小菜蛾APN2蛋白在昆虫细胞中的表达体系。将对Cry1Ac... 利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac baculovirus expression system)表达获得小菜蛾Plutella xylostella (L.)中肠氨肽酶N2 (aminopeptidase N, APN2)蛋白,成功建立了小菜蛾APN2蛋白在昆虫细胞中的表达体系。将对Cry1Ac毒素敏感和已产生抗性的小菜蛾中肠氨肽酶N2 (APN2) 基因插入表达载体pFAST Bac HTB中,并在草地夜蛾Spodoptera frugiperda细胞系(Sf9)中进行了重组表达。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白免疫印迹技术(Western-blotting)结果显示,在107 kDa处有1条特异性蛋白条带。研究结果表明,小菜蛾中肠APN2基因在Sf9细胞中成功表达,这为继续研究其功能及抗性的关系奠定了基础。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 氨肽酶N 绿色荧光蛋白 Sf9细胞系 杆状病毒表达系统
Expression of Rice Gall Dwarf Virus Outer Coat Protein Gene (S8) in Insect Cells 预览
6
作者 Guo-cheng FAN Fang-luan GAO +5 位作者 Tai-yun WEI Mei-ying HUANG Li-yan XIE Zu-jian WU Qi-ying LIN Lian-hui XIE 《中国病毒学:英文版》 CAS CSCD 2010年第6期 401-408,共8页
为了获得瑞斯胆量的 P8 蛋白质,与生物活动使病毒(RGDV ) 相形见绌,它的外部上衣蛋白质基因 S8 在 Spodoptera frugiperda (Sf9 ) 被表示用 baculovirus 表示系统的昆虫房间。S8 基因是进 pFastBac 的 subcloned ? 1 向量,生产 recom... 为了获得瑞斯胆量的 P8 蛋白质,与生物活动使病毒(RGDV ) 相形见绌,它的外部上衣蛋白质基因 S8 在 Spodoptera frugiperda (Sf9 ) 被表示用 baculovirus 表示系统的昆虫房间。S8 基因是进 pFastBac 的 subcloned ? 1 向量,生产 recombinant baculovirus 转移向量 pFB-S8。在转变以后, pFB-S8 被介绍进能干的房间(E。coli DH10Bac ) 包含梭向量, Bacmid,产生 recombinant bacmid rbpFB-S8。在被 recombinant baculovirus rvpFB-S8 在感染的不同复合感染以后, Sf9 房间在不同时间被收集并且由 SDS 页,西方的弄污和 immunofluorescence 显微镜学分析了。P8 蛋白质的表示水平在在 Sf9 房间的 transfection 以后的 4872 h 之间是最高的。Immunofluorescence 显微镜学证明 RGDV 的那 P8 蛋白质在 Sf9 房间的细胞质形成了有小斑点的结构。 展开更多
关键词 外壳蛋白基因 水稻瘤矮病毒 昆虫细胞 杆状病毒转移载体 重组杆状病毒 杆状病毒表达系统 SF9细胞 荧光显微镜
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BIV—1—gp120在重组杆状病毒系统中的表达 预览
7
作者 张应玫 金宁一 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2000年第3期 7-8,11,共3页
将中国株HIV-1B亚型gp120全基因序列克隆到杆状病毒转座载体pFastBacI中多角体启动子下游,构建成重组转座载体pFastBacI-gp120,利用细菌/杆状病毒(Bac to Bac)表达系统筛选重组杆状... 将中国株HIV-1B亚型gp120全基因序列克隆到杆状病毒转座载体pFastBacI中多角体启动子下游,构建成重组转座载体pFastBacI-gp120,利用细菌/杆状病毒(Bac to Bac)表达系统筛选重组杆状病毒,在昆虫细胞Sf9中高效表达了HIV-1的外膜糖蛋白gp120,SDS-PAGE和Western blot分析结果一致,证明表达了2种糖基化程度不同的gp120。 展开更多
关键词 HIV-1 GP120 杆状病毒 昆虫细胞 重组表达
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血管生长抑制因子angiostatin在昆虫细胞中的表达及活性研究 预览
8
作者 徐晓琳 刘戈飞 黄东阳 《癌症:英文版》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第9期 1096-1101,共6页
背景与目的:抑制新生血管的形成,有助于抑制肿瘤的生长,减少和预防肿瘤转移的发生.血管抑素(angiostatin)是一种重要的内源性新生血管生成抑制剂,对血管内皮细胞增殖有较强的抑制作用.为获得具有高活性的Angiostatin表达,本研究通过杆... 背景与目的:抑制新生血管的形成,有助于抑制肿瘤的生长,减少和预防肿瘤转移的发生.血管抑素(angiostatin)是一种重要的内源性新生血管生成抑制剂,对血管内皮细胞增殖有较强的抑制作用.为获得具有高活性的Angiostatin表达,本研究通过杆状病毒表达系统表达重组的angiostatin,分析其在昆虫细胞中表达和生物活性.方法:用带有angiostatin的杆状病毒转移载体pBlueBacHis2B和病毒DNA共同转染Sf9细胞,构建重组病毒,蚀斑实验筛选,PCR分析确定后扩增产生大量高滴度的病毒贮存液;用SDS-PAGE电泳和Western blot对感染不同时间后分泌的重组蛋白做时间表达分析:用ProBondTM纯化系统对表达的重组angiostatin进行纯化,分光光度计确定蛋白含量,SDS-PAGE电泳确定蛋白纯度;采用MTF法测定重组蛋白angiostatin对原代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的抑制作用而后通过鸡胚尿囊膜实验进一步证实其抗血管形成作用.结果:成功构建了滴度为2×108 pfu/ml的angiostatin重组杆状病毒,并在昆虫细胞Sf9中高效表达了分子量为53 ku的angiostatin重组蛋白,纯度约为90%,重组angiostatin蛋白不仅在体外显著抑制内皮细胞的生长(IC50为2.3 μg/ml),而且显著抑制鸡胚尿囊膜血管的生长.结论:此系统可制备高滴度angiostatin重组杆状病毒贮存液,并在Sf9昆虫细胞中高效表达该重组蛋白,经在体和离体细胞学实验验证其对内皮细胞的增殖具有抑制作用. 展开更多
关键词 血管 内皮细胞 血管抑制素/拮抗和抑制剂 杆状病毒 基因转染 草地贪夜蛾(Sf9) 昆虫细胞
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不同杀虫成分对Sf9细胞凋亡的影响 预览 被引量:5
9
作者 贾建文 黄劲飞 +2 位作者 王文祥 胡美英 钟国华 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期 29-35,共7页
通过倒置显微形态观察凋亡小体、DNA琼脂糖凝胶电泳确证的模型,研究了8种代表性杀虫成分对草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda离体培养细胞系Sf9的凋亡诱导效果,以探讨不同杀虫成分对昆虫细胞凋亡的影响.结果表明,印楝素0.15-1.50μg/mL... 通过倒置显微形态观察凋亡小体、DNA琼脂糖凝胶电泳确证的模型,研究了8种代表性杀虫成分对草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda离体培养细胞系Sf9的凋亡诱导效果,以探讨不同杀虫成分对昆虫细胞凋亡的影响.结果表明,印楝素0.15-1.50μg/mL处理后72 h内、喜树碱0.35-3.50μg/mL处理后36 h,Sf9细胞产生大量典型凋亡小体,处理时间延长或剂量加大则以造成细胞坏死为主;DNA电泳产生典型的DNA Ladder,表明印楝素和喜树碱对Sf9具有明显的细胞凋亡诱导作用.印楝素1.5μg/mL诱导处理Sf9细胞凋亡高峰期为处理后24-48 h,喜树碱0.35-3.50μg/mL诱导处理Sf9细胞凋亡高峰期为处理后12 h.苦参碱、氟铃脲、毒死蜱、灭多威、氯氰菊酯以0.1-10.0μg/mL及昆虫蜕皮激素20-羟基蜕皮酮(20-hydroxyecdysone)以0.048-4.800μg/mL处理后72 h内对Sf9均无明显的细胞凋亡诱导作用.杀虫剂对昆虫细胞凋亡诱导效应随供试化合物、细胞种类、处理剂量、处理时间而异. 展开更多
关键词 细胞凋亡 草地贪夜蛾细胞系Sf9 印楝素 喜树碱
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吖啶橙对草地贪夜蛾sf9细胞和AcMNPV病毒的损伤效应 预览
10
作者 邓平建 房师松 +3 位作者 李喜梅 倪惠波 王叶元 林健荣 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2007年第2期 125-128,共4页
背景与目的:探索吖啶橙对昆虫细胞的遗传损伤。材料与方法:用不同浓度的吖啶橙处理草地贪夜蛾Sf9细胞、AcMNPV病毒,观察其对细胞生长发育,微核发生率,AcMNPV感染力的影响。结果:sf9细胞经5μg/ml的吖啶橙处理后,细胞分裂生长速度减慢... 背景与目的:探索吖啶橙对昆虫细胞的遗传损伤。材料与方法:用不同浓度的吖啶橙处理草地贪夜蛾Sf9细胞、AcMNPV病毒,观察其对细胞生长发育,微核发生率,AcMNPV感染力的影响。结果:sf9细胞经5μg/ml的吖啶橙处理后,细胞分裂生长速度减慢,细胞表面粗糙,微核发生率为10.4‰,10μg/ml时可引起细胞膜破碎或死亡,微核发生率为22‰,出现三核,多核甚至核裂现象。当AcMNPV经吖啶橙处理后再感染sf9细胞,AcMNPV可在细胞内增殖,形成多角体,并出现一些类似三角形或四角形的异常多角体。结论:用一定剂量的吖啶橙处理草地贪夜蛾sf9细胞和AcMNPV病毒,可对细胞产生损伤和引起AcMNPV发生异常多角体。 展开更多
关键词 吖啶橙 草地贪夜蛾sf9细胞 AcMNPV病毒 损伤
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