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青杄PwPEBP基因及其启动子序列的克隆与表达分析
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作者 李兴芬 苗雅慧 +2 位作者 孙永江 张孟娟 张凌云 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期8-20,共13页
【目的】通过研究青杄中的PwPEBP基因及其启动子的表达特性及生物学功能,探究PEBP基因在植物生长发育过程中响应逆境胁迫的功能及作用机制。【方法】本研究从青杄转录组测序中获得PwPEBP的c DNA序列,利用TMHMM、GOR4等在线软件对PwPEBP... 【目的】通过研究青杄中的PwPEBP基因及其启动子的表达特性及生物学功能,探究PEBP基因在植物生长发育过程中响应逆境胁迫的功能及作用机制。【方法】本研究从青杄转录组测序中获得PwPEBP的c DNA序列,利用TMHMM、GOR4等在线软件对PwPEBP蛋白进行生物信息学分析,以此为基础通过PCR技术克隆得到PwPEBP开放阅读框(ORF)序列;同时对其在不同组织与不同逆境及激素处理中的表达水平进行了RT-qPCR技术分析;采用染色体步移法克隆PwPEBP的启动子序列,并利用在线软件BDGP和PlantCARE对PwPEBP启动子序列进行基础启动子区域、转录起始位点和顺式作用元件的预测;最后通过农杆菌瞬时转化烟草法验证PwPEBP启动子的功能。【结果】PwPEBP cDNA长度为1 408 bp,开放阅读框共585 bp,编码194个氨基酸。PwPEBP蛋白分子式为C966H1 484N250O299S6,无信号肽和跨膜结构域,为亲水蛋白,含有25个磷酸化位点;进化树分析显示,PwPEBP蛋白与北美云杉的PEBP单独聚成一簇,属于新的PEBP蛋白。组织特异性分析显示,PwPEBP在成熟叶中表达量最高,嫩叶中表达量最低;PwPEBP在各激素及逆境诱导下均有表达,但对盐处理无响应。克隆的PwPEBP启动子序列长度为903 bp,其具有响应GA、ABA、SA、MeJA的顺式作用元件。GUS染色及Luc定量实验显示,PwPEBP启动子均能响应GA、ABA、MeJA和SA外源激素及干旱、高温、低温等逆境胁迫。【结论】青杄中PwPEBP基因广泛响应干旱、低温、高温等非生物胁迫,其中对干旱胁迫最为敏感,同时还参与了ABA、GA、MeJA和SA激素的信号通路。 展开更多
关键词 青杄 PEBP 启动子 基因表达 胁迫响应
DNA甲基化在基因表达调控中的意义及研究进展 预览
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作者 钟焱 徐慧 彭凤兰 《中国医药导报》 CAS 2019年第14期33-36,共4页
DNA甲基化修饰作用是目前表观遗传学的研究热点。其参与基因表达调控、基因沉默、DNA损伤修复以及癌症发生等重要生物学过程,大多癌症的致病过程、免疫系统疾病、阿尔茨海默病等疾病都涉及表观遗传学改变,基因的甲基化主要发生在富含GC... DNA甲基化修饰作用是目前表观遗传学的研究热点。其参与基因表达调控、基因沉默、DNA损伤修复以及癌症发生等重要生物学过程,大多癌症的致病过程、免疫系统疾病、阿尔茨海默病等疾病都涉及表观遗传学改变,基因的甲基化主要发生在富含GC碱基序列的CpG区域,基因在相应的甲基化转移酶的作用下调控癌基因、致癌基因的表达和DNA的损伤修复等。本文结合最新研究进展综述DNA甲基化在基因组中的基因表达调控中的意义及研究进展。 展开更多
关键词 启动子 甲基化 基因表达调控
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楸子S6PDH基因启动子活性鉴定 预览
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作者 夏惠 梁东 刘继 《西北农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期1492-1499,共8页
利用同源PCR技术从楸子(Malus prunifolia)基因组DNA中扩增得到6-磷酸山梨醇脱氢酶(Sorbitol-6-phosphate dehydrogenase,S6PDH)基因的启动子并命名为Mp-S-P。对启动子序列的顺式作用元件进行预测分析发现,Mp-S-P序列中除了含有植物启... 利用同源PCR技术从楸子(Malus prunifolia)基因组DNA中扩增得到6-磷酸山梨醇脱氢酶(Sorbitol-6-phosphate dehydrogenase,S6PDH)基因的启动子并命名为Mp-S-P。对启动子序列的顺式作用元件进行预测分析发现,Mp-S-P序列中除了含有植物启动子的基本结构元件外,还有多个与胁迫和激素诱导相关的元件。以β-葡萄糖苷酸酶(beta-glucuronidase,GUS)作为报告基因,构建含有pMp-S-P-GUS的融合表达载体并通过根癌农杆菌瞬时转化烟草叶片,然后分析该启动子对不同外界条件的响应。结果表明:低温、水杨酸和赤霉素处理可以提高该启动子的活性,而避光、脱落酸和茉莉酸甲酯可以降低该启动子的活性。 展开更多
关键词 启动子 6-磷酸山梨醇脱氢酶 楸子 瞬时表达
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青杄转录因子PwERF8及其启动子序列的克隆与分析 预览
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作者 张鹤华 刘嘉欣 +1 位作者 罗朝兵 张凌云 《林业科学》 CSCD 北大核心 2018年第3期48-60,共13页
是植物的转录因子家族之一,广泛参与生物胁迫和非生物胁迫过程。从青杄中克隆ERF类转录因子PwERF8及其启动子序列,研究PwERF 8基因的表达特性、启动子序列功能,并进一步分析其对非生物胁迫的响应模式,为深入了解青杄的耐逆调控机制提供... 是植物的转录因子家族之一,广泛参与生物胁迫和非生物胁迫过程。从青杄中克隆ERF类转录因子PwERF8及其启动子序列,研究PwERF 8基因的表达特性、启动子序列功能,并进一步分析其对非生物胁迫的响应模式,为深入了解青杄的耐逆调控机制提供理论基础。【方法】通过RACE-PCR技术获得青杄 PwERF 8编码区全长序列。通过染色体步移技术克隆PwERF 8启动子序列。通过PlantCARE在线软件和BDGP在线软件预测启动子序列上的顺式作用元件、基础启动子和转录起始位点,构建pBI121-PwERF 8 promoter∷GUS启动子表达载体,采用农杆菌注射法瞬时转化烟草叶片来验证启动子的功能。构建PGBKT7-PwERF 8载体,转化AH109酵母菌株验证其转录激活活性。构建35S∷PwERF 8-GFP融合表达载体,通过PEG介导瞬时转化拟南芥原生质体进行基因表达的亚细胞定位分析,应用RT-qPCR技术分析该基因的组织特异性和在非生物胁迫下的时空表达特征。【结果】PwERF 8基因的编码区全长序列共1 191 bp,开放阅读框共765 bp,开放阅读框翻译成255个氨基酸。在肽链的N端具有1个保守的由58个氨基酸组成的AP2结构域,在C端含有1个EAR转录抑制基序(DLNLPP)。组织特异性表达分析表明,PwERF 8在茎、根、针叶、花粉、种子中均有表达,但在花粉中,PwERF 8的表达量最高,其次为种子,在茎中的表达量最少。酵母单杂交试验表明,PwERF8蛋白不具有转录激活活性。亚细胞定位分析发现PwERF8蛋白主要定位于细胞核。将启动子序列进行在线分析显示PwERF 8含有GA、ABA、JA和SA等激素的顺式作用元件。进一步在烟草中瞬时过表达PwERF 8启动子并用GUS染色显示,PwERF 8启动子能响应GA、ABA、MeJA和SA等外源激素的处理。GA、ABA、MeJA和SA分别处理青杄幼苗3、6、12 h后,PwERF 8的表达量均显著高于对照,干旱、4℃和42℃处理均能诱导PwERF 8表达,但盐胁迫不能诱导其� 展开更多
关键词 青杄 ERF转录因子 激素 非生物逆境胁迫 启动子 基因表达
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过量表达RdreB1BI对草莓果实品质及相关基因的影响 预览
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作者 阎依超 万春雁 +3 位作者 古咸彬 郭成宝 陈月红 高志红 《中国农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第7期1353-1367,共15页
【目的】研究外源基因Rdre B1BI转入对‘红颊’草莓果实品质及相关基因表达的影响,揭示Rdre B1BI在草莓果实品质调控中的作用及分子机理。【方法】以5个转Rdre B1BI株系及非转基因‘红颊’草莓全红期果实为材料,测定果实纵横径、单果重... 【目的】研究外源基因Rdre B1BI转入对‘红颊’草莓果实品质及相关基因表达的影响,揭示Rdre B1BI在草莓果实品质调控中的作用及分子机理。【方法】以5个转Rdre B1BI株系及非转基因‘红颊’草莓全红期果实为材料,测定果实纵横径、单果重、可溶性糖、可溶性蛋白、抗坏血酸等风味物质及花青苷、总黄酮、总酚等着色物质的含量。应用BLASTn、GENEFINDER和Plant CARE等生物信息学方法分析外源基因和7个次生代谢产物合成途径相关基因(Rdre B1BI、Fractin、Fv C4H、Fv CCR2、Fv GST、Fv F3H、Fv DFR和Fv MYB306)的结构,并预测基因启动子作用元件。采用q RT-PCR定量法检测相关基因表达量,应用7300 system软件和2-△△Ct法分析数据。对生理生化及分子数据进行方差及相关性分析,综合讨论Rdre B1BI的转入对‘红颊’草莓果实品质及相关基因表达的影响。【结果】转基因‘红颊’草莓株系与野生型果实单果重的范围为11.75—15.42 g,纵径和横径的范围分别为35.12—40.42 mm及28.73—32.6 mm,仅株系8果实纵径显著大于株系7,其余指标间差异不显著。其中转基因株系1和7的花青苷含量显著高于野生型;转基因株系1、7及8总黄酮含量显著高于野生型;各转基因株系的总酚含量均显著高于野生型。转基因株系1、7和8果实的可溶性糖含量显著高于野生型(21.70 mg·g-1FW),分别为野生型的2.87、3.39和3.35倍。可溶性固形物含量与可溶性糖含量呈正相关(r=0.811*),但样品果实的可溶性固形物含量间不存在显著性差异。转基因株系草莓成熟果实果肉中氨基酸含量为0.2580—0.3950 g/100 g FW,野生型果实的氨基酸含量为0.5151 g/100 g FW,显著高于各转基因株系草莓果实;转基因株系1和7的可滴定酸含量显著高于野生型;转基因株系1果实的抗坏血酸含量为168.35 mg/100 g FW,显著高于野生型(92.50 mg/100 g FW)。转基因株系9及 展开更多
关键词 草莓 RdreB1BI 过量表达 果实品质 启动子
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Fra-1在乳腺癌细胞中高表达原因及其启动子高转录活性的分子机制研究 预览
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作者 周秋媛 李虹 +2 位作者 王红莉 李伟 徐艳华 《国际检验医学杂志》 CAS 2017年第22期3113-3115,3119共4页
目的探讨Fra-1在乳腺癌细胞中高表达原因,以及Fra-1启动子高转录活性的分子机制。方法选取2株人乳腺癌细胞株MDA231和MCF-7、1株人脐静脉内皮细胞株ECV304进行研究。采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应法和蛋白质印迹法分别检测Fra-1m... 目的探讨Fra-1在乳腺癌细胞中高表达原因,以及Fra-1启动子高转录活性的分子机制。方法选取2株人乳腺癌细胞株MDA231和MCF-7、1株人脐静脉内皮细胞株ECV304进行研究。采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应法和蛋白质印迹法分别检测Fra-1mRNA和蛋白的表达情况;构建Fra-1双荧光报告载体,检测Fra-1启动子转录活性;构建Fra-1启动子短截报告载体及相关位点的突变型报告载体,检测短截报告载体及突变型载体转录活性;通过凝胶迁移阻滞试验观察生物素标记的特异性探针与活化因子蛋白-1(AP1)结合情况。结果乳腺癌细胞株MDA231和MCF-7中,Fra-1的mRNA和蛋白的相对表达量及其启动子全长报告载体转录活性均高于人脐静脉内皮细胞株ECV304,差异有统计学意义(P〈0.05);在构建的一系列Fra-1启动子短截报告载体中,只有pGL3B-256活性明显下降,差异有统计学意义(P〈0.05);AP1突变型报告载体pGL3B-M2、特异性蛋白1及AP1双突变报告载体pGL3B-M3活性明显低于野生型报告载体pGL3B-M1,差异有统计学意义(P〈0.05);凝胶迁移阻滞试验观察到生物素标记的特异性探针与AP1结合发生了明显的阻滞效应。结论在体外培养的乳腺癌细胞株MDA231和MCF-7中,反式作用因子AP1通过激活Fra-1基因启动子上调其表达。 展开更多
关键词 启动子 乳腺癌 反式作用因子
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‘赤霞珠’葡萄Vv5GT3基因启动子的克隆及其对光照的响应 被引量:5
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作者 邢冉冉 潘秋红 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期3128-3134,共7页
本研究利用PCR技术从‘赤霞珠’葡萄(Vitis vinifera L.cv Cabemet Sauvignon)基因组DNA中扩增得到与花色素3,5-O-双葡萄糖苷合成相关的Vv5GT3基因的启动子。对启动子序列的顺式作用元件进行预测分析发现,Vv5GT3基因的启动子序列... 本研究利用PCR技术从‘赤霞珠’葡萄(Vitis vinifera L.cv Cabemet Sauvignon)基因组DNA中扩增得到与花色素3,5-O-双葡萄糖苷合成相关的Vv5GT3基因的启动子。对启动子序列的顺式作用元件进行预测分析发现,Vv5GT3基因的启动子序列除了含有植物启动子的基本结构元件外,还有多个与胁迫和激素诱导相关的顺势调控元件。以荧光素酶基因(Luc)作为为报告基因,构建了Vv5GT3基因启动子的植物表达载体pCAMBIA1300-Vv5GT3 promoter。以根癌农杆菌GV3101感受态细胞为受体,转化植物融合表达载体进行瞬时表达,并对启动子进行了功能活性分析,结果表明该启动子能够驱动Luc报告基因在烟草叶片组织中表达。用不同的光照条件处理被农杆菌侵染的烟草叶片,结果显示长时间光照有利于启动子的激活,而遮光减弱了W5GT3启动子的活性。 展开更多
关键词 '赤霞珠’葡萄 Vv5GT3基因 启动子 瞬时表达 光照处理
紫苏HPPR基因启动子的克隆及植物表达载体构建 被引量:1
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作者 郭宇 郝磊 +3 位作者 吕晓玲 赵雪 王超 何东 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期382-388,共7页
以前期获得的紫苏HPPR基因的c DNA序列为模板,通过设计特异性引物和染色体步移的方法分离出HPPR基因启动子,全长2 216 bp,以此研究HPPR基因启动子的结构及功能特点。生物信息学分析表明,该序列中存在TATA-box和CAAT-box等典型的真核生... 以前期获得的紫苏HPPR基因的c DNA序列为模板,通过设计特异性引物和染色体步移的方法分离出HPPR基因启动子,全长2 216 bp,以此研究HPPR基因启动子的结构及功能特点。生物信息学分析表明,该序列中存在TATA-box和CAAT-box等典型的真核生物启动子基本元件,以及对茉莉酸甲酯、生长素、水杨酸和脱落酸等植物激素应答相关的顺式作用元件,另外也存在非生物胁迫顺式作用元件。将HPPR启动子部分缺失序列替代p BI121载体中的Ca MV35S启动子,构建了与GUS融合的启动子元件缺失表达载体。本试验的研究为该启动子在今后紫苏转基因定向改良提供了有用的候选资源。 展开更多
关键词 紫苏 迷迭香酸 HPPR 启动子 序列分析 缺失片段
苦瓜McAPX2基因及其启动子的克隆与表达分析 预览 被引量:1
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作者 高山 许端祥 +3 位作者 陈中钐 杜文丽 傅睿清 温庆放 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2016年第12期2384-2391,共8页
基于苦瓜叶片均一化文库克隆得到McAPX2基因的cDNA全长序列(GenBank登录号:KJ722767.1),采用染色体步移法获得该基因的启动子序列,实时荧光定量PCR技术检测该基因在不同器官中的表达量及低温胁迫对McAPX2表达量的影响。结果表明:McA... 基于苦瓜叶片均一化文库克隆得到McAPX2基因的cDNA全长序列(GenBank登录号:KJ722767.1),采用染色体步移法获得该基因的启动子序列,实时荧光定量PCR技术检测该基因在不同器官中的表达量及低温胁迫对McAPX2表达量的影响。结果表明:McAPX2基因全长1086 bp,开放阅读框747 bp,编码249个氨基酸;McAPX2属于过氧化物酶家族ClassⅠ的成员,其脂肪族氨基酸指数为83.90,是一个亲水性蛋白,可推测定位于细胞质中;与甜瓜(NP_001284378.1)、黄瓜(ACO90193.1)、南瓜(AHF27424.1)、苦瓜(AGJ72851.1)同源性较高,分别为95%,94%,94%和93%;qRT-PCR结果显示,在苦瓜的根、茎、叶、雌花和幼果等组织器官中McAPX2的表达量存在显著差异,其中根的表达量最大,而在叶片中的表达量最低;在低温胁迫下,随着胁迫时间的延长,McAPX2表达量逐渐上调,处理12 h时达到最大,随后下降,说明该基因的表达与苦瓜耐低温胁迫相关。分离得到McAPX2基因上游调控序列1267 bp,其启动子含有与GA、ABA、CTK、乙烯等激素和病原菌等生物胁迫以及热激、干旱、低温、光等非生物胁迫的相关元件。 展开更多
关键词 苦瓜 McAPX2基因 启动子 表达分析
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Yb2O3助剂对Ni/SiC催化剂甲烷二氧化碳重整性能的影响 预览 被引量:5
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作者 郭朋飞 靳国强 +3 位作者 郭聪秀 王英勇 童希立 郭向云 《燃料化学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第6期719-726,共8页
采用浸渍法制备了Ni/SiC和Ni-Ybx/SiC( x=2%、4%、6%、10%,质量分数)催化剂,在固定床反应装置中考察了催化剂在甲烷二氧化碳重整反应中的性能。利用BET、ICP-AES、XRD、H2-TPR、TG-DTA、XPS和TEM等技术对催化剂进行了表征。实验结果表... 采用浸渍法制备了Ni/SiC和Ni-Ybx/SiC( x=2%、4%、6%、10%,质量分数)催化剂,在固定床反应装置中考察了催化剂在甲烷二氧化碳重整反应中的性能。利用BET、ICP-AES、XRD、H2-TPR、TG-DTA、XPS和TEM等技术对催化剂进行了表征。实验结果表明,Yb的适宜添加量为4%-6%。在800℃条件下Ni-Yb4/SiC和Ni-Yb6/SiC催化剂具有优异的催化活性和稳定性,在100 h的重整反应中,甲烷和二氧化碳的转化率始终保持在90%以上。 Yb2 O3助剂能够抑制镍颗粒的生长和减少碳沉积量,因此,Ni-Yb/SiC催化剂在连续反应中表现出稳定的活性。 展开更多
关键词 甲烷二氧化碳重整 Ni-Yb SiC催化剂 助剂 稳定性
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Al-ITQ-13分子筛的快速合成及表征 被引量:3
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作者 贾妙娟 李晓峰 +4 位作者 潘瑞丽 张燕挺 孙晓涛 景超 窦涛 《分子催化》 CSCD 北大核心 2014年第2期97-104,共8页
通过设计首次提出针对ITQ-13分子筛晶化促进剂的合成策略,ITQ-13分子筛.通过X射线粉末衍射(XRD)、扫描电子显微镜(SEM)、N2吸附、原位红外(FTIR)及固体核磁(27Al NMR)等测试手段对ITQ-13分子筛的物化性能进行了表征,考察了晶化过程中结... 通过设计首次提出针对ITQ-13分子筛晶化促进剂的合成策略,ITQ-13分子筛.通过X射线粉末衍射(XRD)、扫描电子显微镜(SEM)、N2吸附、原位红外(FTIR)及固体核磁(27Al NMR)等测试手段对ITQ-13分子筛的物化性能进行了表征,考察了晶化过程中结晶度的变化,得出了晶化过程的动力学参数,对晶化机理进行了探讨.结果表明:快速合成法与传统方法合成的ITQ-13分子筛具有相似的物化性能,并且可以合成含有更多骨架铝的ITQ-13分子筛;NO3-的加入通过极化憎水基团,加速SiOSi物质结合,降低ITQ-13分子筛的成核活化能以及生长活化能,从而可以提高晶化速率,缩短晶化时间至11 h. 展开更多
关键词 ITQ-13分子筛 促进剂 晶化时间 晶化机理
不同亚型人SMYD3启动子转录活性比较 预览
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作者 刘磊 罗学刚 +3 位作者 赵文文 穆爱 辛中帅 张同存 《天津科技大学学报》 CAS 2014年第4期6-10,共5页
利用PCR方法克隆SMYD3两个亚型的启动子区域,并构建其荧光素酶报告质粒。转染COS-7细胞后,利用荧光素酶报告分析技术,对二者启动子的转录活性进行了检测和比较。结果显示:SMYD3亚型1启动子的转录活性要显著高于亚型2启动子,生物信... 利用PCR方法克隆SMYD3两个亚型的启动子区域,并构建其荧光素酶报告质粒。转染COS-7细胞后,利用荧光素酶报告分析技术,对二者启动子的转录活性进行了检测和比较。结果显示:SMYD3亚型1启动子的转录活性要显著高于亚型2启动子,生物信息学分析提示其原因可能与含有转录因子E2F-1结合位点的串联重复序列有关。 展开更多
关键词 SMYD3 启动子 转录活性
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两阶段细胞转化试验研究进展 被引量:2
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作者 王颖 王雪 李波 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1133-1136,共4页
非遗传毒性致癌物在长期动物实验中常表现出致癌活性,因其作用机制不同于遗传毒性致癌物,在常规遗传毒性试验中表现出阴性。因此,有必要建立一种新的检测非遗传毒性致癌物的方法。两阶段细胞转化试验是在体外细胞转化试验的基础上加... 非遗传毒性致癌物在长期动物实验中常表现出致癌活性,因其作用机制不同于遗传毒性致癌物,在常规遗传毒性试验中表现出阴性。因此,有必要建立一种新的检测非遗传毒性致癌物的方法。两阶段细胞转化试验是在体外细胞转化试验的基础上加以改进的一种灵敏、有效的短期试验方法。该方法既可以检测遗传毒性致癌物,也可以检测非遗传毒性致癌物,具有快速、简便、经济的特点。近几年国内外多项研究均致力于适用该方法的新细胞系的建立,并采用了高通量筛选方法以及改进了结果判定的方法以提高结果的准确性和客观性。本文综述了近年来两阶段细胞转化试验方法的改进、发展及其应用前景。 展开更多
关键词 遗传毒理 细胞转化 非遗传毒性致癌物 启动剂 促癌剂
肿瘤基因启动子区异常甲基化与肿瘤的发生 预览 被引量:2
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作者 索美芳 沈佐君 《分子诊断与治疗杂志》 2013年第4期274-278,共5页
肿瘤的发生和发展是一个与多基因、多步骤的致癌因素相关的复杂过程,包括了原癌基因及肿瘤抑制基因的改变、错配修复基因的突变、DNA甲基化和微卫星不稳定性。癌基因的低甲基化与抑癌基因的高甲基化在肿瘤发生、发展中的基因表达调控... 肿瘤的发生和发展是一个与多基因、多步骤的致癌因素相关的复杂过程,包括了原癌基因及肿瘤抑制基因的改变、错配修复基因的突变、DNA甲基化和微卫星不稳定性。癌基因的低甲基化与抑癌基因的高甲基化在肿瘤发生、发展中的基因表达调控、基因结构的稳定等方面发挥重要作用。DNA甲基化是指生物体在DNA甲基转移酶的催化下,以S-腺苷甲硫氨酸(SAM)为甲基供体,将甲基转移到特定碱基上的过程。甲基化异常被认为是肿瘤的一个特征,是基因组中一种重要的表观遗传修饰,与肿瘤的发生、浸润及转移相关。基因局部甲基化模式的改变已成为令人瞩目的研究领域。本文就DNA甲基化及肿瘤基因启动子区甲基化研究的相关进展作简要综述。 展开更多
关键词 DNA甲基化 甲基转移酶 表皮生长因子受体 启动子
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脂联素调控序列荧光素酶报告基因荧光素酶活性的分析 被引量:3
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作者 崔琳 李强 +2 位作者 路玲玲 宰军华 张莎莎 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2013年第6期211-215,共5页
目的: 通过将1 100 bp长度的人脂联素(adiponectin,AD)启动子上游的调控基因(包括启动子,-1066 To+4 bp)插入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic中,构建成含启动子调控序列的荧光素酶报告基因(pGL3-Basic-ADI1100),用于脂联素在中... 目的: 通过将1 100 bp长度的人脂联素(adiponectin,AD)启动子上游的调控基因(包括启动子,-1066 To+4 bp)插入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic中,构建成含启动子调控序列的荧光素酶报告基因(pGL3-Basic-ADI1100),用于脂联素在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中的表达调控研究。 方法: 利用PCR技术扩增1 100 bp长度AD启动子片段,与PUC19T载体连接,将PUC19T-ADI1100质粒,及荧光素酶报告基因pGL3-Basic质粒转染大肠肝菌(DH5a)后扩增,提取并纯化PUC19T-ADI1100和pGL3-Basic;分别以KpnI,XhoI酶切pGL3-Basic;电泳并回收ADI1100片段和pGL3-Basic酶切大片段,在T4 DNA 连接酶的作用下,将ADI1100片段插入荧光素酶报告基因pGL3-Basic中,并转染CHO细胞,检测荧光素酶报告基因活性。 结果: 通过酶切及基因测序的方法证实所构建质粒含有脂联素启动子上游调控序列;瞬时转染实验显示AD启动子在CHO细胞中的转录表达随时间的变化而升高,转染后48 h的双报告基因活性是pGL3-Basic的30倍。 结论: 该荧光素酶报告基因构建成功,为后续筛选有抑制肥胖作用的中药提供基础。 展开更多
关键词 脂联素 启动子 荧光素酶报告基因
人乙酰肝素酶基因增强子的初步筛选与鉴定 预览
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作者 陈晓鹏 杨来志 +3 位作者 葛国朝 崔巍 屠佳 田野 《东南大学学报:医学版》 CAS 2013年第5期543-548,共6页
目的:初步筛选并鉴定出人乙酰肝素酶( HPSE )基因内具有增强子( enhancer , enh )活性的DNA片段。方法:增加Kpn I、Sal I酶切位点,将含有报告基因增强型绿色荧光蛋白(pEGFP)质粒载体pEGFP-N1改造为pEGFP-MU。选取HPSE基因5′... 目的:初步筛选并鉴定出人乙酰肝素酶( HPSE )基因内具有增强子( enhancer , enh )活性的DNA片段。方法:增加Kpn I、Sal I酶切位点,将含有报告基因增强型绿色荧光蛋白(pEGFP)质粒载体pEGFP-N1改造为pEGFP-MU。选取HPSE基因5′端启动子上、下游的DNA序列并分为10个片段,分别命名为enhx ( x分别等于1、2、3……10),每段长1200 bp,相邻两段间重复200 bp。分别扩增上述10个片段和猿猴病毒40(SV40)增强子序列,分别插入pEGFP-MU,以构建重组质粒pEGFP-MU-enhx和pEGFP-MU-SV40e,并用脂质体2000转染肝癌细胞BEL-7402、胃癌细胞SGC-7901,荧光显微镜和流式细胞仪分析上述候选序列对启动子( CMV)转录活性的影响。结果:琼脂糖凝胶电泳和DNA测序结果显示,PCR克隆序列与GeneBank中序列完全一致。酶切电泳和测序结果显示,重组质粒pEGFP-MU-enhx和pEGFP-MU-SV40 e构建符合要求。瞬时细胞转染、荧光显微镜和流式细胞仪分析发现,重组质粒pEGFP-MU-enh6、pEGFP-MU-enh7和pEGFP-MU-enh8在人BEL-7402、SGC-7901细胞中表达增强,与阳性对照质粒pEGFP-MU-SV40e相似,其余重组质粒表达较弱。结论:成功克隆人HPSE基因10个增强子候选序列片段,并正确构建重组质粒pEGFP-MU-enhx;其中第6、7和8候选片段可能具有增强子活性。本研究为后续进一步筛选和鉴定有活性的增强子序列缩小了搜寻范围,并为将来利用HPSE增强子进行肿瘤基因治疗提供了实验依据。 展开更多
关键词 乙酰肝素酶 增强子 启动子 肿瘤 质粒
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Screen of Bovine Mammary Gland Epithelial Cell Specifcity Promotor 预览
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作者 Liu Xiao-fei Li Qing-zhang +1 位作者 Qiu You-wen Gao Xue-jun 《东北农业大学学报:英文版》 CAS 2012年第3期72-75,共4页
Three lactoproteins(α-S1-casein,β-lactoglobulin,and β-casein) promotors were cloned,sequenced and compared relative luciferase expression.The results showed that the promotor activity of bovine α-S1-casein gene wa... Three lactoproteins(α-S1-casein,β-lactoglobulin,and β-casein) promotors were cloned,sequenced and compared relative luciferase expression.The results showed that the promotor activity of bovine α-S1-casein gene was the best,and would be used to produce pharmaceutically and medically important proteins in the mammary gland of transgenic animals and also for the construction of an inducible eukaryotic expression vector. 展开更多
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牛Meg9基因序列及结构的预测与分析 预览
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作者 张坤 苏红 +2 位作者 石运娇 李冬杰 李世杰 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期91-95,共5页
应用生物信息学方法对牛Meg9基因的序列进行预测及分析,发现牛Meg9基因共含有3个外显子,存在3种可变剪切体。与鼠、人和羊序列进行相似性分析,发现牛Meg9基因与绵羊相似性最高,为92%。应用在线软件对牛Meg9基因启动子区及转录因子结合... 应用生物信息学方法对牛Meg9基因的序列进行预测及分析,发现牛Meg9基因共含有3个外显子,存在3种可变剪切体。与鼠、人和羊序列进行相似性分析,发现牛Meg9基因与绵羊相似性最高,为92%。应用在线软件对牛Meg9基因启动子区及转录因子结合位点进行预测,发现启动子可能位于5′侧翼区1 903~1 953bp处,有16种转录因子结合位点。CpG Island在线软件分析发现牛Meg9基因5′侧翼区和内含子1处共有3个CpG岛。以上研究结果将为研究牛Meg9基因的功能及印记的分子机理奠定基础。 展开更多
关键词 牛Meg9基因 可变剪切 启动子 CPG岛
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柽柳类锌指基因ThZFL的功能分析 预览 被引量:2
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作者 曲冠证 郑唐春 +2 位作者 杜兆伟 赵思雯 夏德安 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期6-10,70共6页
为了研究柽柳ThZFL基因的功能,将ThZFL基因过表达转入烟草后,对转基因烟草进行盐胁迫、干旱胁迫,并利用酵母双杂交及染色体步移技术,获得柽柳ThZFL基因的互作蛋白与启动子。结果表明:柽柳THZ儿基因能显著提高转基因烟草盐胁迫下种... 为了研究柽柳ThZFL基因的功能,将ThZFL基因过表达转入烟草后,对转基因烟草进行盐胁迫、干旱胁迫,并利用酵母双杂交及染色体步移技术,获得柽柳ThZFL基因的互作蛋白与启动子。结果表明:柽柳THZ儿基因能显著提高转基因烟草盐胁迫下种子的发芽率、离体叶片的分化和植株的生长能力;通过酵母双杂交筛选出两个与ThZFL蛋白互作的蛋白;ThZFL基因启动子驱动G吣活性显示,在幼苗的整体、叶脉和毛状体中表达显著,但在幼叶和茎尖处表达微弱。 展开更多
关键词 柽柳 类锌指基因 盐胁迫 酵母双杂交 启动子
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响应重力负荷变化的抗肌萎缩表达载体构建
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作者 车速 黄庆生 +2 位作者 李琦 叶琳洁 杨慧 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期23-27,共5页
目的:为了验证‘肌肉生长抑制素’启动子(PM)对去负荷(失重)的响应能力,观察PM调控下的抗萎缩蛋白(mM)表达载体在肌细胞去负荷时的表达水平及抗萎缩活性。方法:首先,构建了PM调控下的荧光素酶表达载体(pGL3-PM-Luc),检测模拟... 目的:为了验证‘肌肉生长抑制素’启动子(PM)对去负荷(失重)的响应能力,观察PM调控下的抗萎缩蛋白(mM)表达载体在肌细胞去负荷时的表达水平及抗萎缩活性。方法:首先,构建了PM调控下的荧光素酶表达载体(pGL3-PM-Luc),检测模拟失重下荧光素酶基因在肌细胞中的表达水平,验证PM对重力负荷变化的响应。随后,构建了PM调控下的mM表达载体‘pGL3-PM-mM’,观察模拟失重下mM在肌细胞中的表达及其对肌细胞增殖的影响。结果:模拟失重下,‘pGL3-PM-Luc’转染的肌细胞荧光素酶表达提高了29%,‘pGL3-PM-mM’载体转染的肌细胞,mM表达上调了2.6倍,细胞增殖活性提高了24%。结论:PM在失重条件下可开启下游基因的表达,依此特点构建的mM表达载体,其mM的表达能随负荷减少而增加,且可促进肌细胞的增殖活性。 展开更多
关键词 肌肉萎缩 肌肉生长抑制素 肌肉生长抑制素前肽 启动子 失重
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