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TRV介导的E3泛素连接酶基因NbE 3R14沉默对烟草基础免疫及南方根结线虫寄生的影响 预览
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作者 刘琳硕 贺祥 +2 位作者 李红梅 元青 王暄 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期65-71,共7页
[目的]本文旨在研究E3泛素连接酶基因的沉默对植物基础免疫及线虫寄生的影响,为揭示植物寄生线虫侵染寄主的分子机制提供理论依据。[方法]利用烟草脆裂病毒(TRV)介导的基因沉默技术(VIGS)沉默本氏烟E3泛素连接酶基因NbE 3R14,用flg22处... [目的]本文旨在研究E3泛素连接酶基因的沉默对植物基础免疫及线虫寄生的影响,为揭示植物寄生线虫侵染寄主的分子机制提供理论依据。[方法]利用烟草脆裂病毒(TRV)介导的基因沉默技术(VIGS)沉默本氏烟E3泛素连接酶基因NbE 3R14,用flg22处理基因沉默烟草叶片,RT-qPCR检测PTI(病原相关分子模式触发免疫,PAMPs-triggered immunity)相关基因的表达水平;接种辣椒疫霉于基因沉默烟草叶片,观察叶片病斑症状;采用室内人工接种法测定靶基因的沉默对南方根结线虫寄生的影响。[结果]RT-qPCR检测显示:农杆菌转化的烟草植株中NbE 3R14基因已被成功沉默,flg22处理基因沉默烟草叶片激发的PTI相关基因GRAS 2、WRKY7及WRKY8表达量分别下降41.3%、63.9%及61.8%,与野生型对照(WT)相比均有显著性差异(P<0.05);接种辣椒疫霉36 h后,TRV∷NbE 3R14处理烟草叶片的病斑比WT增大28.5%;南方根结线虫在TRV∷NbE 3R14处理植株上产生的根结数、雌虫数及卵块数与WT相比分别显著增加22.1%、27.4%和17.2%(P<0.05),单卵块卵量则没有差异;而在TRV∷GFP处理植株上产生的根结数、雌虫数、卵块数以及单卵块卵量与WT均无明显差异。[结论]沉默NbE 3R14基因能干扰植物基础免疫,从而导致烟草对辣椒疫霉及南方根结线虫的侵染更为感病。 展开更多
关键词 E3泛素连接酶 病毒介导的基因沉默 RT-QPCR 辣椒疫霉 南方根结线虫
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贵州地区木霉菌分离鉴定及对辣椒疫霉的拮抗作用
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作者 刘青 李升 +4 位作者 梁才康 张红辉 吴静 王嘉福 冉雪琴 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期741-751,共11页
【背景】辣椒疫霉是一种毁灭性的土传病害,当前主要使用化学合成杀菌剂防治,但容易导致环境污染和食品安全等问题。【目的】筛选可拮抗辣椒疫霉的候选菌株,探究分离菌株拮抗辣椒疫霉的生理生化作用机制。【方法】综合应用形态学、核糖体... 【背景】辣椒疫霉是一种毁灭性的土传病害,当前主要使用化学合成杀菌剂防治,但容易导致环境污染和食品安全等问题。【目的】筛选可拮抗辣椒疫霉的候选菌株,探究分离菌株拮抗辣椒疫霉的生理生化作用机制。【方法】综合应用形态学、核糖体RNA (rRNA)基因非转录区ITS序列相似性方法鉴定分离菌株,通过对峙实验筛选抑菌效果较高的拮抗菌株,基于比色法测定分离菌株发酵液粗提物对辣椒疫霉菌丝脂质过氧化、纤维素酶、β-葡萄糖苷酶(β-GC)和多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性的影响。【结果】从腐木和土壤样品中分离得到11株木霉,分属于绿色木霉(Trichodermavirens)、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、钩状木霉(Trichoderma hamatum)和棘孢木霉(Trichoderma asperellum) 4个种。11株木霉对辣椒疫霉均有一定的抑制作用,抑制率达到90%以上的菌株包括:绿色木霉Tv-1(92.68%)、Tv-2 (95.12%),哈茨木霉Thz-2 (92.68%),钩状木霉Tha-1 (90.24%)。以4株高效木霉的发酵液粗提物处理辣椒疫霉菌丝5 d后,因脂质过氧化产生的丙二醛含量显著增加,分别达到1.20、1.48、2.69和3.16 nmol/g,显著高于对照处理的0.77 nmol/g;与对照组相比,β-GC、PG酶活性显著下降,分别降低了12.28%-64.91%、7.2%-15.5%;同时纤维素酶活性呈上升趋势,最显著组为2.647 U/mL,相对于对照组增加了0.831U/mL。【结论】分离得到4株明显抑制辣椒疫霉菌生长的高效木霉菌,主要通过破坏细胞壁结构、降低致病因子酶活力和增强脂质过氧化等方式起拮抗作用,可为辣椒疫病的生物防治提供理论依据和技术支持。 展开更多
关键词 木霉 分离鉴定 辣椒疫霉 生物防治
辣椒疫病病原菌的分离与鉴定 预览
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作者 付静 陈建中 +1 位作者 付伟 王更先 《安徽农业科学》 CAS 2019年第4期150-152,157共4页
[目的]明确发生在邯郸地区大名县辣椒大棚中的疫病病原菌。[方法]从辣椒大棚里采集辣椒疫病病样,对病原菌进行分离与纯化,并通过形态学观察、ITS序列分析及致病力测定,对病原菌进行鉴定。[结果]辣椒疫病病原菌为辣椒疫霉(Phytophthoraca... [目的]明确发生在邯郸地区大名县辣椒大棚中的疫病病原菌。[方法]从辣椒大棚里采集辣椒疫病病样,对病原菌进行分离与纯化,并通过形态学观察、ITS序列分析及致病力测定,对病原菌进行鉴定。[结果]辣椒疫病病原菌为辣椒疫霉(Phytophthoracapsici)。[结论]该研究为当地辣椒疫病防治提供科学的理论依据。 展开更多
关键词 辣椒 疫病 病原菌 分离 鉴定 辣椒疫霉
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辣椒疫霉菌葡聚糖酶抑制蛋白的原核表达、纯化及结晶 预览
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作者 王会征 兰玉彬 《山东农业科学》 2019年第10期111-116,共6页
葡聚糖酶抑制蛋白(GIP)是辣椒疫霉菌在病理环境下诱导产生的一类蛋白,是病原菌抗性蛋白的一种。本研究根据辣椒疫霉菌全基因组序列,通过生物信息学分析、序列比对获得葡聚糖酶抑制蛋白全长基因序列。以辣椒疫霉高致病菌株SD33全基因组... 葡聚糖酶抑制蛋白(GIP)是辣椒疫霉菌在病理环境下诱导产生的一类蛋白,是病原菌抗性蛋白的一种。本研究根据辣椒疫霉菌全基因组序列,通过生物信息学分析、序列比对获得葡聚糖酶抑制蛋白全长基因序列。以辣椒疫霉高致病菌株SD33全基因组为模板扩增GIP基因cDNA,并对其进行相关生物信息学分析。基因经测序验证后与载体pET28a(+)连接,构建好的重组质粒转化大肠杆菌(Escherichia coli Rosetta),用IPTG诱导表达重组蛋白6×His-GIP。重组蛋白在5mol/L尿素变性环境下进行亲和层析纯化,对纯蛋白进行透析、复性、浓缩后进行分子排阻层析纯化,并对获得的纯蛋白进行蛋白结晶试验,为进一步阐明GIP作用机理奠定基础。 展开更多
关键词 辣椒疫霉菌 葡聚糖酶抑制蛋白(GIP) 原核表达 纯化 结晶
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重庆地区辣椒疫霉对氟吡菌胺的敏感性及抗性突变体的生物学性状
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作者 王秋月 马冠华 +3 位作者 尹学伟 鲁远源 张晓春 徐毅丹 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期165-174,共10页
为明确重庆地区辣椒疫霉对氟吡菌胺的抗性风险,采用菌丝生长速率法测定了采自重庆未使用过氟吡菌胺地区的110株辣椒疫霉菌株对氟吡菌胺的敏感性,并对辣椒疫霉抗氟吡菌胺突变体的诱导方法及抗性突变体的主要生物学性状进行了研究。结果表... 为明确重庆地区辣椒疫霉对氟吡菌胺的抗性风险,采用菌丝生长速率法测定了采自重庆未使用过氟吡菌胺地区的110株辣椒疫霉菌株对氟吡菌胺的敏感性,并对辣椒疫霉抗氟吡菌胺突变体的诱导方法及抗性突变体的主要生物学性状进行了研究。结果表明:110株辣椒疫霉对氟吡菌胺的EC50平均值为(0.32±0.11)μg/mL,不同菌株的敏感性频率呈连续单峰曲线分布,未出现敏感性明显下降的亚群体,因此可将该EC50平均值作为重庆地区辣椒疫霉对氟吡菌胺田间抗性监测的敏感基线。通过紫外诱导菌丝体的方法,共获得3株可稳定遗传的抗氟吡菌胺突变体,抗性倍数介于69.5~98.5之间,突变频率为0.86%;抗性突变体BS11-5-1与亲本菌株BS11-5在菌丝生长速率、温度适应性、产孢子囊能力及致病力方面均无显著差异,而抗性突变体JLP11-4-2和JLP11-4-3在菌丝生长速率、温度适应性、产孢子囊能力及致病力方面均显著低于亲本菌株JLP11-4;不同抗性突变体对渗透压的敏感性与亲本菌株之间均存在不同程度差异;3个抗性突变体对Biolog PM1中95种碳源的利用情况与亲本菌株基本相似。交互抗性测定表明,辣椒疫霉抗氟吡菌胺突变体对甲霜灵、霜脲氰、烯酰吗啉、丁吡吗啉及嘧菌酯之间均不存在交互抗性,建议可将氟吡菌胺与上述几种杀菌剂交替或混合使用。 展开更多
关键词 辣椒疫霉 氟吡菌胺 敏感性 抗性突变体 生物学性状
一株抗辣椒疫霉的根际细菌CRJ-9的筛选、鉴定及防治效果研究 预览
6
作者 程睿君 原晨虹 +3 位作者 成巨龙 张家韬 陈国参 安德荣 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期83-89,共7页
为了发掘出抗辣椒疫霉(Phytophthora capsici)的根际细菌,丰富我国有益微生物菌种资源库。本试验从高发病试验田采集健康辣椒根际土壤样品30份,经过稀释涂布、划线培养、病原菌定向筛选后得到对辣椒疫霉有明显拮抗活性且具有良好广谱抑... 为了发掘出抗辣椒疫霉(Phytophthora capsici)的根际细菌,丰富我国有益微生物菌种资源库。本试验从高发病试验田采集健康辣椒根际土壤样品30份,经过稀释涂布、划线培养、病原菌定向筛选后得到对辣椒疫霉有明显拮抗活性且具有良好广谱抑菌能力的根际细菌CRJ-9。试验结果显示:CRJ-9发酵液的抑菌带宽度为(20.83±0.62)mm,抑制率可达到90%左右。利用16S rDNA联合gyrB基因序列鉴定CRJ-9为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。通过温室盆栽试验,结果显示在施药7和14 d后,CRJ-9发酵液对辣椒疫病的相对防治效果分别为81.28%和79.91%,与烯酰吗啉的防治效果差异不显著,说明解淀粉芽孢杆菌CRJ-9能够有效控制辣椒疫病的发生和蔓延,具有极大的应用潜能。 展开更多
关键词 辣椒疫霉 根际细菌 16S RDNA GYRB 解淀粉芽孢杆菌
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尾叶桉叶组织中8个人工启动子转录特性 预览
7
作者 黄真池 李柳如 +2 位作者 钟子倩 沈金玲 李恒 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期21-23,85共4页
理想病原诱导型启动子可准确调控抗病基因的时空表达,在植物抗病基因工程中起着关键作用。将4个病原诱导元件F-box、S-box、Gst1-box、W-box和Mini35S片段组合得到8个人工病原诱导启动子(synthetic pathogen-inducible promoters,SPIP)... 理想病原诱导型启动子可准确调控抗病基因的时空表达,在植物抗病基因工程中起着关键作用。将4个病原诱导元件F-box、S-box、Gst1-box、W-box和Mini35S片段组合得到8个人工病原诱导启动子(synthetic pathogen-inducible promoters,SPIP),按元件排列顺序命名为,FSGW、FSWG、GWFS、GWSF、SFGW、SFWG、WGFS、WGSF。再用其分别替换pBI121中控制gus表达的35S启动子得到重组质粒后导入农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)GV3101。用农杆菌渗入法转化尾叶桉(Eucalyptus urophylla)叶盘,12 h后用GUS染色法检测启动子本底活性。其余叶盘用水杨酸,青枯菌,疫霉菌孢子诱导处理12 h后,提取总RNA、反转录得cDNA,通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测人工启动子的诱导转录特性。GWFS和SFWG对应的叶盘GUS染色较为明显,本底活性相对较高,其余6个启动子本底活性较低,对应的叶盘不着色或着色浅。设CaMV35S的转录活性为1,qPCR结果显示:受水杨酸诱导时,GWSF和SFWG活性升高明显,分别为0.931和1.362;受青枯菌诱导时,WGFS活性升高到0.945;受疫霉菌孢子诱导时,GWFS、SFGW和WGFS活性升高明显,分别为2.030、1.979和2.351。结果表明:病原诱导元件的排列组合显著影响人工启动子的转录特性;8个启动子中WGFS具有本底低、诱导活性相对较高的优点,将其进一步优化后可应用于植物转基因抗病育种。 展开更多
关键词 尾叶桉 人工病原诱导启动子 水杨酸 青枯菌 疫霉菌
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辣椒疫霉病生防细菌的筛选鉴定及其防效 预览
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作者 赵旖森 张亮 +2 位作者 盛浩 袁红 周清 《中国蔬菜》 北大核心 2019年第1期65-69,共5页
以筛选、获取优良辣椒疫霉病害生防菌株材料为目标,通过平板稀释法与对峙法对水稻土壤耕层可培养细菌进行分离和筛选,成功从167株可培养细菌中分离、筛选获得1株拮抗菌LRS-1,并被鉴定为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)。该拮抗... 以筛选、获取优良辣椒疫霉病害生防菌株材料为目标,通过平板稀释法与对峙法对水稻土壤耕层可培养细菌进行分离和筛选,成功从167株可培养细菌中分离、筛选获得1株拮抗菌LRS-1,并被鉴定为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)。该拮抗菌对辣椒疫霉菌具有68%左右的室内持久抑菌率以及63.4%的温室病害防效;Realtime-PCR检测结果表明该拮抗菌对根围疫霉菌侵染数量具有显著的抑制效果。 展开更多
关键词 辣椒疫霉 拮抗菌 筛选 鉴定 防效
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生物质炭介导生防微生物抑制辣椒疫霉的作用 预览
9
作者 王光飞 马艳 +3 位作者 郭德杰 罗佳 梁永红 仇美华 《中国生态农业学报(中英文)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1015-1023,共9页
生物质炭可有效防控土传病害,筛选并鉴定出生物质炭介导下的生防微生物,可为研究生物质炭防病机理和强化生物质炭防病效果提供理论依据。本研究首先进行秸秆生物质炭防控辣椒疫病盆栽试验,利用定量PCR和平板计数明确生物质炭在防控辣椒... 生物质炭可有效防控土传病害,筛选并鉴定出生物质炭介导下的生防微生物,可为研究生物质炭防病机理和强化生物质炭防病效果提供理论依据。本研究首先进行秸秆生物质炭防控辣椒疫病盆栽试验,利用定量PCR和平板计数明确生物质炭在防控辣椒疫病时可富集的已知生防微生物,再通过选择性培养基初筛和定殖复筛筛选出生物质炭可富集的潜在生防微生物菌株,最后研究各菌株在土壤中对辣椒疫霉的抑制作用。结果表明,秸秆生物质炭使根际辣椒疫霉数量显著降低95.1%、辣椒疫病发生率显著降低91.1%,并使具有生防功能的木霉菌、青霉菌、曲霉菌、芽孢杆菌、假单胞菌和鞘氨醇单胞菌数量显著增加2.22倍、4.09倍、3.89倍、2.45倍、1.45倍和1.30倍。通过平板初筛得到可能被生物质炭富集的22株潜在生防菌株。定殖复筛剔除部分假性生物质炭介导菌株,获得可明确被生物质炭富集的2株木霉菌、3株青霉菌、2株曲霉菌、3株芽孢杆菌、3株假单胞菌、3株链霉菌和2株鞘氨醇单胞菌。木霉菌(TR1和TR3)、青霉菌(PE1)、曲霉菌(AS1和AS2)、芽孢杆菌(BA1、BA2和BA3)、假单胞菌(PS1和PS3)、链霉菌(ST1、ST4和ST5)13个菌株可显著削减土壤辣椒疫霉数量。其中,所有木霉菌和曲霉菌菌株(TR1、TR3、AS1和AS2)及芽孢杆菌(BA1和BA2)、假单胞菌(PS1和PS3)和链霉菌(ST1)9个菌株与生物质炭具有显著的协同抑制辣椒疫霉效果。因此,防控辣椒疫病时,木霉菌、曲霉菌、芽孢杆菌、假单胞菌和链霉菌是生物质炭介导下的主要防病微生物。 展开更多
关键词 生物质炭 生防真菌 生防细菌 辣椒疫霉
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辣椒疫霉质外体疏水小蛋白SCR82编码基因的转录特征、异源表达和功能
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作者 张子辉 黄沈鑫 +4 位作者 陶航 张烨 赵耀 纪兆林 陈孝仁 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1586-1599,共14页
[目的]分析PcF/SCR质外体疏水小蛋白SCR82编码基因在辣椒疫霉生长发育和侵染寄主阶段的转录特征,克隆其cDNA和基因组全长序列,分析蛋白性状及其序列保守性,利用大肠杆菌表达并获得纯化蛋白,分析其生物学功能。[方法]提取辣椒疫霉菌丝、... [目的]分析PcF/SCR质外体疏水小蛋白SCR82编码基因在辣椒疫霉生长发育和侵染寄主阶段的转录特征,克隆其cDNA和基因组全长序列,分析蛋白性状及其序列保守性,利用大肠杆菌表达并获得纯化蛋白,分析其生物学功能。[方法]提取辣椒疫霉菌丝、游动孢子囊、游动孢子、萌发休止孢和7个侵染时间点(1.5、3、6、12、24、36、72 h)的本氏烟根部总RNA,利用半定量RT-PCR分析scr82的转录表达水平;通过高保真PCR从萌发休止孢cDNA和基因组DNA中克隆出该基因全长序列;利用软件对SCR82进行生物信息学分析,挖掘其他物种中的同源序列,预测蛋白性状;将cDNA全长序列克隆到含6×His-SUMO序列的pET28a(+)中,在不同温度(22、37℃)和IPTG浓度(0.1、0.2、0.5、1.0 mmol/L)组合条件下利用大肠杆菌Rossette 2菌株表达该蛋白,利用Ni2+亲和层析柱纯化蛋白;将蛋白浸润本氏烟和拟南芥叶片,分析它是否引起植物细胞死亡,蛋白浸润12、24 h后利用RT-qPCR分析本氏烟中3个抗性相关基因(NbMC1、NbSOD、NbPOX)的表达量变化。[结果] scr82基因在辣椒疫霉萌发休止孢和侵染寄主阶段上调表达;该基因为辣椒疫霉中单拷贝基因,不含内含子,开放阅读框为249 bp;预测其编码82个氨基酸,包含长度为21个氨基酸的信号肽序列和7个半胱氨酸但不含有任何已知功能域,蛋白疏水性强,二级结构主要为α-螺旋和不规则卷曲,在疫霉菌中保守;含重组质粒的菌株在22℃经0.2 mmol/L的IPTG诱导过夜(~16 h)产生大小约24 kDa的融合蛋白,纯化获得30 mg/mL的可溶性蛋白;融合蛋白不引起本氏烟和拟南芥叶片的细胞死亡,但导致本氏烟抗性相关基因均上调表达。[结论]本研究获得了辣椒疫霉胞外疏水小蛋白SCR82的原核表达蛋白,该蛋白不引起植物细胞死亡,但触发植物的防卫反应。 展开更多
关键词 辣椒疫霉 PcF/SCR效应蛋白 疏水性 RT-PCR 原核表达 植物防卫反应
瞬时沉默乙醛脱氢酶对辣椒疫霉效应因子RxLR129113功能的影响 预览
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作者 王俪颖 梁涛 +4 位作者 朱彤彤 马艳飞 江伟霖 冀瑞卿 张修国 《山东农业大学学报:自然科学版》 北大核心 2019年第1期31-34,共4页
辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)产生的效应因子RxLR129113在本氏烟上的功能之一是抑制BAX引起的细胞坏死,而且已经证实乙醛脱氢酶(ALDH)是RxLR129113的互作蛋白。为了探究乙醛脱氢酶(ALDH)是否影响Rx LR129113抑制BAX引起的细胞坏死... 辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)产生的效应因子RxLR129113在本氏烟上的功能之一是抑制BAX引起的细胞坏死,而且已经证实乙醛脱氢酶(ALDH)是RxLR129113的互作蛋白。为了探究乙醛脱氢酶(ALDH)是否影响Rx LR129113抑制BAX引起的细胞坏死,本研究利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术,克隆了乙醛脱氢酶(ALDH)基因片段,插入到烟草脆裂病毒载体(TRV)中,构建了pTRV-ALDH的VIGS载体,转入农杆菌侵染本氏烟后qrt-PCR验证成功沉默了ALDH基因。在沉默ALDH基因的本氏烟上瞬时表达RxLR129113,24 h接种BAX。结果表明,在NbALDH沉默植株上,RxLR129113仍然抑制BAX引起的细胞坏死。本研究结果表明RxLR129113与ALDH互作不影响其抑制BAX引起的细胞坏死,为进一步深入开展辣椒疫霉效应因子RxLR129113功能机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 辣椒疫霉 实时荧光定量PCR 基因沉默(VIGS)技术 表达量
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沉默氧增强蛋白(OEE2)对辣椒疫霉效应因子RxLR19781的免疫功能影响 预览
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作者 梁涛 王俪颖 +3 位作者 朱彤彤 马艳飞 江韦霖 冀瑞卿 《山东农业大学学报:自然科学版》 北大核心 2019年第1期40-43,共4页
辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)是一种寄生范围广且能够产生大量RxLR效应因子来参与侵染寄主的病原卵菌。资料表明目前对多数辣椒疫霉RxLR效应因子在植物体内如何行使功能积累较少。本研究从辣椒疫霉菌中分离鉴定1个效应分子RxLR197... 辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)是一种寄生范围广且能够产生大量RxLR效应因子来参与侵染寄主的病原卵菌。资料表明目前对多数辣椒疫霉RxLR效应因子在植物体内如何行使功能积累较少。本研究从辣椒疫霉菌中分离鉴定1个效应分子RxLR19781,为了初步明确RxLR19781的功能特性,本研究借助于烟草脆裂病毒(Tobacco rattlevirus,TRV)介导的基因沉默技术,将RxLR19781的互作蛋白基因NbOEE2在本氏烟中瞬时沉默,通过qRT-PCR验证得到NbOEE2沉默植株,在沉默后的本氏烟植株中接种RxLR19781并验证该RxLR效应因子的功能。结果表明,在NbOEE2沉默植株上,RxLR19781不抑制辣椒疫霉游动孢子侵染。本研究结果表明OEE2可有效调控RxLR19781的功能特性,为进一步深入开展辣椒疫霉效应因子RxLR19781功能机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 辣椒疫霉 效应因子 TRV 基因沉默
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辣椒疫霉效应分子RxLR19781与其互作蛋白的酵母互作一对一验证 预览
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作者 陈姗姗 艾聪聪 +5 位作者 盛慧 孙柏华 冯锐 王中洋 黄恺浩 王晓梅 《山东农业大学学报:自然科学版》 北大核心 2019年第1期44-48,共5页
辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)引起的辣椒疫病是毁灭性土传病害,短期内暴发成灾,该病害严重发生常给辣椒生产造成严重损失。植物病原卵菌分泌大量的胞内效应分子,即RxLR效应分子,能干扰寄主植物细胞的正常生理代谢和功能,在病原卵... 辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)引起的辣椒疫病是毁灭性土传病害,短期内暴发成灾,该病害严重发生常给辣椒生产造成严重损失。植物病原卵菌分泌大量的胞内效应分子,即RxLR效应分子,能干扰寄主植物细胞的正常生理代谢和功能,在病原卵菌侵染寄主及与寄主植物互作过程发挥着重要的作用。酵母双杂交(Yeast two hybrid,Y2H)系统是研究蛋白质相互作用最常用的方法,它既可以在cDNA文库中筛选互作的未知靶标蛋白,同时还可以验证两个目的蛋白之间的互作关系。本研究分别以辣椒疫霉cDNA基因组,辣椒cDNA基因组为模板,克隆了辣椒疫霉效应因子RxLR19781以及其疑似互作蛋白泛素连接酶E2 10和辣椒脂质转移蛋白EARLI 1,并将它们分别成功构建到PGBKT7和PGADT7载体上。运用酵母共转化技术,将带有AD载体的互作蛋白和带有BD载体的效应因子共同转化到酵母感受态Y2HGold中,对它们是否存在互作关系进行了深入研究。结果表明,两个疑似互作蛋白都与效应因子RxLR19781互作。但由于酵母双杂交存在一定的假阳性,因此该效应分子与互作蛋白的互作有待进一步深入的研究。 展开更多
关键词 辣椒疫霉菌 RXLR效应分子 酵母双杂交
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不同微生物菌剂对辣椒疫病的防控效果及对土壤性状的影响 预览
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作者 叶旻硕 俞键烽 +1 位作者 马艳 黄有军 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第4期811-817,共7页
采用盆栽试验的方法,研究解淀粉芽孢杆菌(BB2)、长枝木霉(TB2)、棘孢曲霉(BAS1)3种微生物菌剂对辣椒疫病的防控效果以及对土壤性状的影响。通过测定病情指数、植株生物量、土壤化学及土壤微生物等指标,研究不同处理下辣椒疫病的发生程... 采用盆栽试验的方法,研究解淀粉芽孢杆菌(BB2)、长枝木霉(TB2)、棘孢曲霉(BAS1)3种微生物菌剂对辣椒疫病的防控效果以及对土壤性状的影响。通过测定病情指数、植株生物量、土壤化学及土壤微生物等指标,研究不同处理下辣椒疫病的发生程度以及相应土壤性状的变化特征。研究结果表明,3种微生物菌剂均有一定的防控效果;辣椒移栽前期,BAS1处理从第13 d开始病情指数增长较快,第19 d后增长逐渐平缓,而BB2、TB2处理则从第25 d起病情指数开始加速增长;移栽后40 d,各处理的防治效果从高到低依次为BB2、TB2、BAS1,其中BB2的防治效果最高,达到了60%以上。土壤微生物数量测定结果显示,3种微生物菌剂处理后,土壤中相应微生物的数量显著高于其他处理,而辣椒疫霉的数量显著低于对照,表明3种微生物在辣椒根际均有较好的定殖作用,且能抑制病原菌的增殖。 展开更多
关键词 辣椒疫病 微生物菌剂 土壤微生物 定殖 辣椒疫霉
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甜瓜种质资源对疫病的抗性鉴定研究 预览
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作者 王平勇 赵光伟 +6 位作者 孔维虎 贺玉花 欧点点 张健 徐永阳 徐志红 刘璐璐 《中国农学通报》 2018年第20期144-150,共7页
旨在通过苗期人工接种鉴定,筛选高抗疫病的甜瓜材料。本研究采用灌根接种法,向植株根茎部土壤注入浓度为1×106个/m L的游动孢子悬浮液,对收集到的166份甜瓜材料进行了抗性鉴定,这些材料中有薄皮类型甜瓜41份,厚皮类型甜瓜104份,野... 旨在通过苗期人工接种鉴定,筛选高抗疫病的甜瓜材料。本研究采用灌根接种法,向植株根茎部土壤注入浓度为1×106个/m L的游动孢子悬浮液,对收集到的166份甜瓜材料进行了抗性鉴定,这些材料中有薄皮类型甜瓜41份,厚皮类型甜瓜104份,野生材料15份,近缘种6份。最终筛选到4份免疫材料,25份高抗材料。在供试的厚皮类型甜瓜中有66%的材料抗性水平在中抗及以上,而薄皮类型中有98%的抗性水平是感病或高感。通过相关性分析发现厚皮类型甜瓜对疫病的抗性要显著高于薄皮类型甜瓜。在免疫和高抗材料中有14份单瓜重达到1 kg以上,有8份果实可溶性固形物含量在10%以上。这些兼具高抗、高产和高可溶性固形物的材料,可用于抗病基因的定位、克隆等遗传学研究,也可作为育种亲本将抗病基因转移到农艺性状优良但抗性差的甜瓜品种中。 展开更多
关键词 甜瓜 种质资源 疫病 疫霉菌 抗性鉴定
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A Phytophthora capsici RXLR Effector Targets and Inhibits a Plant,PPlase to Suppress Endoplasmic Reticulum-Mediated Immunity
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作者 Guangjin Fan Yang Yang +5 位作者 Tingting Li Wenqin Lu Yu DU Xiaoyu Qiang Qujiang Wen Weixing Shan 《分子植物:英文版》 SCIE CAS CSCD 2018年第8期1067-1083,共17页
关键词 PHYTOPHTHORA 植物免疫 压制 指向 Arabidopsis 蜂窝 T-DNA
辣椒疫霉菌RT-PCR检测技术的建立及应用 被引量:4
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作者 程颖超 康华军 +4 位作者 石延霞 柴阿丽 张红杰 谢学文 李宝聚 《园艺学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期997-1006,共10页
根据辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leonian)与致病疫霉菌(Phytophthora infestans)及其他8种常见土传病害病原菌Actin基因序列差异,设计并筛选出辣椒疫霉菌的特异性引物YM2F/YM2R,建立辣椒疫霉菌的实时荧光定量PCR检测体系,并... 根据辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leonian)与致病疫霉菌(Phytophthora infestans)及其他8种常见土传病害病原菌Actin基因序列差异,设计并筛选出辣椒疫霉菌的特异性引物YM2F/YM2R,建立辣椒疫霉菌的实时荧光定量PCR检测体系,并利用该体系定量检测人工模拟带菌样品及田间发病土壤样品中的辣椒疫霉菌。试验结果表明,利用该引物建立的实时荧光定量PCR检测体系线性关系良好,灵敏度为1×10^-1 pg·μL^-1,是普通PCR的100倍。该体系无需病原菌的分离培养即可对土壤中的辣椒疫霉菌进行快速、特异且定量检测。对田间土壤样品的检测结果表明,在一定范围内病害发生、流行程度与病原菌密度成正比,从而为该病的流行监测和早期防控提供科学依据。 展开更多
关键词 辣椒疫霉菌 南瓜 荧光定量PCR 检测技术 ACTIN
辣椒疫霉RXLR型效应子PcAvh2的序列多态性、基因转录特征及功能 被引量:2
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作者 陈孝仁 张烨 +2 位作者 黄沈鑫 邢玉平 纪兆林 《微生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期2204-2215,共12页
【目的】分析辣椒疫霉中RXLR型效应子PcAvh2的序列多态性,研究该效应子在辣椒疫霉生长发育和侵染阶段的转录特征及其生物学功能。【方法】本研究通过高保真扩增,分析2个烟草疫霉、1个恶疫霉和31个辣椒疫霉菌株的PcAvh2序列;提取辣椒疫... 【目的】分析辣椒疫霉中RXLR型效应子PcAvh2的序列多态性,研究该效应子在辣椒疫霉生长发育和侵染阶段的转录特征及其生物学功能。【方法】本研究通过高保真扩增,分析2个烟草疫霉、1个恶疫霉和31个辣椒疫霉菌株的PcAvh2序列;提取辣椒疫霉菌丝、游动孢子囊、游动孢子、萌发休止孢和7个侵染时间点(1.5、3、6、12、24、36、72 h)的本氏烟根部总RNA,利用RT-qPCR分析PcAvh2的转录表达水平;利用PVX瞬时表达系统,分析PcAvh2是否抑制6种效应子(BAX、INF1、PsojNIP、PsCRN63、PsAvh241、R3a/Avr3a)激发的植物免疫反应;利用CaCl2-PEG介导的原生质体稳定转化技术,沉默PcAvh2基因,分析辣椒疫霉致病力的变化。【结果】PcAvh2为典型的RXLR效应子,在辣椒疫霉群体中该效应子具有10个等位基因,而且烟草疫霉和恶疫霉中也存在该效应子。该基因在辣椒疫霉的侵染阶段上调表达,它能够抑制6种效应子激发的植物免疫反应,进一步研究发现基因沉默导致辣椒疫霉的致病力显著下降。【结论】RXLR型效应子PcAvh2是辣椒疫霉中一个重要的侵染致病因子。 展开更多
关键词 辣椒疫霉 RXLR效应子 序列多态性 RT-PCR 免疫反应 基因沉默
辣椒疫霉菌诱导辣椒酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定 预览 被引量:1
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作者 王玉姣 陈姗姗 +3 位作者 孙柏华 艾聪聪 王中洋 张修国 《山东农业大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2018年第3期379-382,共4页
辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)引起的辣椒疫病是在世界范围内广泛分布的毁灭性病害之一,对我国辣椒生产造成严重的经济损失.为深入研究辣椒疫霉的致病机制,寻找辣椒疫霉在辣椒体内的互作蛋白,利用SMART同源重组交换技术,在酵母菌... 辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)引起的辣椒疫病是在世界范围内广泛分布的毁灭性病害之一,对我国辣椒生产造成严重的经济损失.为深入研究辣椒疫霉的致病机制,寻找辣椒疫霉在辣椒体内的互作蛋白,利用SMART同源重组交换技术,在酵母菌株Y187 中构建了被辣椒疫霉侵染不同时期辣椒的cDNA 文库.文库质量评定结果显示cDNA 文库的滴度为1.13×10^6 CFU/mL,文库的库容量为1.7×10^7 CFU,文库的重组率为96%,插入片段平均长度在1Kbp 左右.该文库的构建为研究辣椒疫霉的致病机制、辣椒的抗病机制及寻找药物靶标位点奠定基础. 展开更多
关键词 辣椒疫霉菌 辣椒 酵母双杂交 CDNA文库
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本氏烟PP2A亚基基因的表达模式和克隆
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作者 陈孝仁 黄沈鑫 +3 位作者 张烨 李艳朋 车通 纪兆林 《植物生理学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期1073-1084,共12页
蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)由结构亚基A、催化亚基C和调节亚基B组成,控制生物体内多种生命代谢过程,但目前尚不清楚其在植物抗病中的作用。本研究利用拟南芥、普通烟草、番茄和水稻PP2A的亚基序列,比对分析获得本氏烟... 蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)由结构亚基A、催化亚基C和调节亚基B组成,控制生物体内多种生命代谢过程,但目前尚不清楚其在植物抗病中的作用。本研究利用拟南芥、普通烟草、番茄和水稻PP2A的亚基序列,比对分析获得本氏烟(Nicotiana benthamiana)中对应的亚基序列。利用实时定量RT-PCR技术,分析了6个亚基基因在辣椒疫霉侵染本氏烟阶段(灌根后8、24、72 h)以及2个结构亚基基因在本氏烟不同组织部位(根、茎、叶、花和种子)中的转录水平。结果发现,在病原物侵染时,多数基因均显著上调表达,Nb PP2Ac-4在侵染阶段的表达量显著高于其他基因;2个结构亚基基因(Nb PP2Aa-1和Nb PP2Aa-2)在茎、叶、花和种子中的表达量均显著高于在根部中的表达量。克隆获得本氏烟和辣椒中2个结构亚基基因的全长c DNA序列,它们的二级结构主要为α和η螺旋,含有保守的功能域,与其他植物和人的结构亚基具有很高的同源性。 展开更多
关键词 蛋白磷酸酶2A 植物抗病性 转录水平 功能域 辣椒疫霉
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