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陈山红心杉无性系主要经济性状遗传变异和无性系选择 预览
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作者 凌高潮 何贵平 +3 位作者 徐金良 郑文华 邹土春 赵敏 《南方林业科学》 2019年第5期4-7,共4页
通过对陈山红心杉无性系主要经济性状遗传变异研究,了解各性状遗传变异规律和性状间的遗传相关关系,选出速生优质陈山红心杉无性系应用于生产。以浙江省开化县林场的7年生陈山红心杉无性系(24个无性系,2个对照)试验林为研究对象,开展了... 通过对陈山红心杉无性系主要经济性状遗传变异研究,了解各性状遗传变异规律和性状间的遗传相关关系,选出速生优质陈山红心杉无性系应用于生产。以浙江省开化县林场的7年生陈山红心杉无性系(24个无性系,2个对照)试验林为研究对象,开展了树高、胸径、材积和木材密度4个主要经济性状的测定和分析,并采用指数选择法进行了优良无性系选择。结果表明:4个主要经济性状在无性系间达极显著差异水平(P<0.001),且有较高重复力,而材积有较高的遗传变异系数;3个生长性状间的遗传相关均为密切正相关,3个生长性状与木材密度间则表现不一,树高与木材密度为弱度遗传正相关,胸径和材积与木材密度间为极弱度遗传负相关。应用材积和木材密度两个性状,采用选择指数初选出5个优良无性系,它们的材积和木材密度比试验群体平均值分别高出了30.06%和4.89%,与两个试验对照平均值相比,木材密度提高了5.73%,但材积则下降了6.11%;而其中的H11无性系材积和木材密度均较高,比两个试验对照平均值分别高出了35.15%和9.67%,可在当地及相似地区推广应用。 展开更多
关键词 陈山红心杉 无性系 主要经济性状 遗传相关 无性系选择
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<i>In Situ</i>Clonal Propagation of Stevia (<i>Stevia rebaudiana</i>, Bertoni) Using Hormones 预览
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作者 Elmer V. Galo 《美国植物学期刊(英文)》 2019年第10期1789-1796,共8页
The sweet taste of Stevia leaves makes it a potential substitute for table sugar which can be used to sweeten foods and beverages. However, the limited planting materials become a constrained to large production;hence... The sweet taste of Stevia leaves makes it a potential substitute for table sugar which can be used to sweeten foods and beverages. However, the limited planting materials become a constrained to large production;hence the experiment aims to investigate the different part and methods of propagation for stevia specifically use of different rooting hormones. The experiment was laid out in 3 × 4 factorial arranged in Randomized Complete Block Design. It consists of 3 types of cutting (shoot tips, intermediate stem and basal stem part) and four kinds of commercial hormones (miracle gro, rootech gel, NAA and control). Results showed that the highest percentage survival of stevia was obtained from shoot tips (93.92%) which differed statistically from those intermediate (91.00%) and basal stem cuttings (85.51%). On the other hand, basal stem cutting significantly has the lowest percent survival. Results revealed that shoot tip cuttings treated with Rootech Gel developed roots early (6.92 days), with most number of roots (13.70), longer roots (3.33 cm), and 96.38% survival. 展开更多
关键词 CLONE In SITU Propagation
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肾蕨LEAFY基因和启动子的克隆及序列分析
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作者 阚诗卓 徐琪 +4 位作者 赵芮 王琦 伍冉 李映 鄢波 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第14期4623-4630,共8页
以孢子植物肾蕨叶片为材料,采用RT-PCR、RACE和Tail-PCR相结合的方法克隆得到肾蕨LEAFY(简写为LFY)基因的完整片段,该基因DNA全长为1912bp,包含3个外显子和2个内含子序列,有一个1170bp的完整开放阅读框,编码389个氨基酸。经过对该基因... 以孢子植物肾蕨叶片为材料,采用RT-PCR、RACE和Tail-PCR相结合的方法克隆得到肾蕨LEAFY(简写为LFY)基因的完整片段,该基因DNA全长为1912bp,包含3个外显子和2个内含子序列,有一个1170bp的完整开放阅读框,编码389个氨基酸。经过对该基因片段的核苷酸序列分析表明,与荚果蕨的LFY基因在结构上有高度的相似性,同源率高达94%。通过Tail-PCR技术克隆得到1521bp的肾蕨LFY基因的启动子序列。用PlantCARE在线启动子预测工具分析表明:该序列含有启动子的特定结构,如TATAbox,CAAT-box等,还有一些其它的调控元件。本研究以肾蕨为材料,通过对肾蕨LFY基因的克隆,为探讨LFY基因在不开花植物的原始功能奠定基础,进一步阐释了LFY基因的结构和功能。 展开更多
关键词 肾蕨(Nephrolepis auriculata) LFY基因 启动子 克隆
发菜1,4-α-葡聚糖分支酶(GBE)的基因克隆及其对干旱胁迫的响应
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作者 李晓旭 丁苗苗 +6 位作者 王猛 严奉坤 张筝 梁文裕 徐婷婷 王俊 王玲霞 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2019年第19期6305-6313,共9页
由glgB基因编码的1,4-α-葡聚糖分支酶(GBE)是催化调控α(1-6)糖苷键分支合成的关键酶。本研究从发菜中克隆获得1,4-α-葡聚糖分支酶glgB基因全长2 292 bp(GeenBank登录号:KX679395),编码763个氨基酸。原核表达得到88.6 kD的glgB基因外... 由glgB基因编码的1,4-α-葡聚糖分支酶(GBE)是催化调控α(1-6)糖苷键分支合成的关键酶。本研究从发菜中克隆获得1,4-α-葡聚糖分支酶glgB基因全长2 292 bp(GeenBank登录号:KX679395),编码763个氨基酸。原核表达得到88.6 kD的glgB基因外源蛋白,MALDI-TOF-TOF/MS质谱分析表明外源蛋白为GBE。发菜glgB与点形念珠藻的glgB序列相似性为94%,氨基酸序列相似性为97%;GBE在第747位的甘氨酸疏水性最强,第168位的组氨酸亲水性最强;Thr有15个磷酸化位点,Tyr有12个磷酸化位点、Ser有27个磷酸化位点;GBE二级结构及三级结构由α螺旋、β折叠、随机卷曲和β转角构成。发菜glgB在干旱胁迫下转录水平的表达量逐渐增加,GBE含量增加,糖原合成酶活性和糖原含量均先增加后降低。研究结果为认识glgB基因信息和发菜响应干旱胁迫的糖原代谢和调控机制提供了依据。 展开更多
关键词 发菜(Nostoc flagelliforme) 1 4-α-葡聚糖分支酶 克隆 干旱胁迫 差异表达
山羊CXCR1基因的克隆及组织表达谱研究
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作者 徐涛 王利 魏勇 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第19期19-24,29,177共8页
为了探究山羊C-X-C趋化因子受体1(C-X-C motif chemokine receptor 1,CXCR1)基因的特点,试验以金堂黑山羊脾脏cDNA为模板克隆了CXCR1基因,借助生物信息学软件及在线软件分析序列,并采用实时荧光定量PCR方法检测CXCR1基因在金堂黑山羊脾... 为了探究山羊C-X-C趋化因子受体1(C-X-C motif chemokine receptor 1,CXCR1)基因的特点,试验以金堂黑山羊脾脏cDNA为模板克隆了CXCR1基因,借助生物信息学软件及在线软件分析序列,并采用实时荧光定量PCR方法检测CXCR1基因在金堂黑山羊脾脏、肺脏、肌肉、心脏和肠的5个组织中的相对表达量。结果表明:克隆得到的CXCR1基因序列全长为1 140 bp,完整CDS编码区长1 107 bp,共编码368个氨基酸;所得氨基酸序列与牛进行比对,两者同源性为96.8%;编码蛋白为带正电荷、具有疏水性的稳定蛋白;有7个跨膜结构和32个磷酸化位点,无信号肽;二级结构中α-螺旋比例最高,为54.35%;获得的三级结构模型与人的CXCR1蛋白(PDB:2lnl.1.A)同源性最高,为81.49%;氨基酸比对结果与系统进化树结果相近,金堂黑山羊与牛的亲缘关系最近;CXCR1基因主要表达于肌肉和心脏。说明CXCR1基因可能在山羊肌肉发育相关的信号通路中发挥作用。 展开更多
关键词 CXCR1基因 PCR扩增 金堂黑山羊 克隆 生物信息学分析 组织表达
基于测序技术的海南地方猪TLR4基因多态性分析
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作者 张艳 刘海隆 +1 位作者 王文秀 黄丽丽 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第19期25-29,178共6页
为了了解海南地方猪TLR4基因的多态性,试验采用PCR技术对五指山猪、临高猪和屯昌猪的TLR4基因组序列进行了克隆、测序,应用DNAStar和BioEdit软件分析其序列,SMART、SOPMA、SWISS-MODEL在线软件分析TLR4蛋白的结构,并预测二级结构和三级... 为了了解海南地方猪TLR4基因的多态性,试验采用PCR技术对五指山猪、临高猪和屯昌猪的TLR4基因组序列进行了克隆、测序,应用DNAStar和BioEdit软件分析其序列,SMART、SOPMA、SWISS-MODEL在线软件分析TLR4蛋白的结构,并预测二级结构和三级结构。结果表明:获得的三个品种海南地方猪TLR4基因DNA序列全长均为10 435 bp,其中编码区长2 526 bp,编码841个氨基酸。三个品种猪TLR4基因序列种内比对时,五指山猪在种内有1个核苷酸位点存在多态性;屯昌猪在种内有6个核苷酸位点存在多态性,2处位于编码区;临高猪在种内有3个核苷酸位点存在多态性,1处位于编码区。三个品种猪TLR4基因序列种间比对时,有27个核苷酸位点存在多态性,其中2个为错义突变,导致氨基酸改变。三个品种猪的TLR4基因序列的同源性在99.8%~99.9%之间,高度保守。海南猪TLR4基因在7 209位点的G→T突变和7 781位点的G→A位点突变引起了TLR4蛋白二级结构和三级结构发生改变。说明海南地方猪TLR4基因存在多态性,并且其多态性引起的结构改变可能使TLR4基因功能发生变化。 展开更多
关键词 海南地方猪 TLR4 基因多态性 基因测序 克隆 蛋白质结构
Molecular characterization, expression and function analysis of eukaryotic translation initiation factor (eIF1A) in Mangifera indica 预览
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作者 LI Li-shu LUO Cong +4 位作者 AN Zhen-yu LIU Zhao-liang DONG Long YU Hai-xia HE Xin-hua 《农业科学学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第11期2505-2513,共9页
Eukaryotic translation initiation factor 1A(eIF1A)functions as an important regulatory factor of protein synthesis and plays a crucial role in responses to abiotic stresses in plants.However,little is known about the ... Eukaryotic translation initiation factor 1A(eIF1A)functions as an important regulatory factor of protein synthesis and plays a crucial role in responses to abiotic stresses in plants.However,little is known about the eIF1A gene involved in fruit development and stress response of mango.In this study,the MieIF1A-b gene was isolated from Mangifera indica,and contains a 435-bp open reading frame,which encodes a putative protein of 144 amino acids(GenBank accession number:KP676599).The predicted MieIF1A-b protein had a molecular weight of 16.39 kDa with a pI of 4.6.Sequence homology analysis showed that MieIF1A-b shared high homology with Elaeis guineensis,Manihot esculenta,and Populus trichocarpa,with 96 and 95%identity,respectively.Quantitative reverse transcriptative PCR(qRT-PCR)analyses indicated that MieIF1A-b was expressed in all tested tissues,and had the highest expression level in fruit 80 d after flowering.The expression of MieIF1A-b was obviously regulated by NaCl and H2O2 treatments in leaves.Functional analysis indicated that the overexpression of MieIF1A-b in transgenic Arabidopsis thaliana enhanced the growth,phenotype and salinity tolerance compared with wild-type(WT)plants.The results indicated that MieIF1A-b may be correlated with the control of fruit development and salt adaptation,and it was a candidate gene for abiotic stress in mango. 展开更多
关键词 MANGIFERA INDICA MieIF1A-b GENE GENE CLONE EXPRESSION functional analysis
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龙脑樟Actin基因的克隆与序列分析 预览
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作者 张君诚 许晓颖 +1 位作者 邹函卓 杨琳 《三明学院学报》 2019年第4期13-16,共4页
利用同源克隆的方法设计特异性引物,从龙脑樟中获得一个333bp的基因片段,编码110个氨基酸。该片段的蛋白分子量为12.37ku,理论等电点为5.03,平均疏水性(GRAVY)为-0.312,α螺旋、β片层和无规则卷曲的比例分别为40.04%、10.09%和45.87%... 利用同源克隆的方法设计特异性引物,从龙脑樟中获得一个333bp的基因片段,编码110个氨基酸。该片段的蛋白分子量为12.37ku,理论等电点为5.03,平均疏水性(GRAVY)为-0.312,α螺旋、β片层和无规则卷曲的比例分别为40.04%、10.09%和45.87%。同源比对和进化树分析结果都表明,龙脑樟Actin基因与香樟、山鸡椒的Actin基因具有较高的同源性。龙脑樟Actin基因片段的克隆,为深入研究该基因的表达调控及龙脑樟遗传与进化关系提供理论基础。 展开更多
关键词 龙脑樟 ACTIN基因 克隆 序列分析
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家蝇天蚕素Cec4的原核表达与纯化
9
作者 彭建 刘巍巍 +3 位作者 吴兆颖 杨燕琴 尚小丽 吴建伟 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第2期182-185,共4页
目的构建家蝇天蚕素(Cecropin)Cec4原核表达质粒,表达及纯化Cec4蛋白。方法从家蝇cDNA文库中筛选家蝇天蚕素基因Cec4,设计并合成特异性引物,PCR扩增Cec4基因,连接克隆载体后转入DH5α感受态细胞,通过重组子鉴定及测序完成目的基因的克... 目的构建家蝇天蚕素(Cecropin)Cec4原核表达质粒,表达及纯化Cec4蛋白。方法从家蝇cDNA文库中筛选家蝇天蚕素基因Cec4,设计并合成特异性引物,PCR扩增Cec4基因,连接克隆载体后转入DH5α感受态细胞,通过重组子鉴定及测序完成目的基因的克隆。用限制性内切酶BamHI和HindⅢ双酶切目的基因和质粒,构建GST表达载体pGEX 4T-1-Cec4,转化到大肠埃希菌BL-21中,利用IPTG诱导表达重组Cec4蛋白,经亲和层析纯化后进行SDS-PAGE电泳分析。结果 PCR扩增获得的Cec4基因全长为192 bp,连接到表达载体pGEX 4T-1获得重组质粒pGEX 4T-1-Cec4,转化大肠埃希菌BL-21后经30℃、0.6 mmol/L的IPTG诱导18 h,表达相对分子质量约为26×10~3上清表达的融合蛋白,亲和层析纯化后的蛋白浓度为0.117 mg/ml。结论成功构建重组质粒pGEX 4T-1-Cec4并表达和纯化获得Cec4蛋白,为其进一步研究奠定了实验基础。 展开更多
关键词 家蝇 CEC4 克隆 原核表达
枫香无性系采穗圃建设技术 预览
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作者 汪韩成 周谋文 +1 位作者 胡文杰 胡兴宜 《湖北林业科技》 2019年第3期81-82,共2页
基于实际生产需要,本文总结了枫香无性系采穗圃营建技术,能为生产实践方便快捷地提供大量的优质穗条,旨在解决大量获取枫香穗条不易、穗条质量不佳、繁殖系数低等问题,以提高枫香优良无性系的使用效率。
关键词 枫香 无性系 采穗圃 穗条
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光倒刺鲃mc5r基因的克隆及对饥饿的响应 预览
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作者 周惠强 陈凯棱 +3 位作者 舒琥 杨扬 钟东明 张明清 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期99-106,共8页
通过同源克隆和染色体步移对光倒刺鲃(Spinibarbus hollandi)黑素皮质素受体-5 (melanocortin receptor-5,mc5r)基因进行了克隆,应用生物信息学方法对mc5r 基因序列和推测的氨基酸序列进行分析,采用荧光定量PCR 技术研究其mRNA 的组织... 通过同源克隆和染色体步移对光倒刺鲃(Spinibarbus hollandi)黑素皮质素受体-5 (melanocortin receptor-5,mc5r)基因进行了克隆,应用生物信息学方法对mc5r 基因序列和推测的氨基酸序列进行分析,采用荧光定量PCR 技术研究其mRNA 的组织分布、日周期变化以及饥饿再投喂的表达情况。结果表明mc5r 基因长度为1 947 bp,含有1 个987 bp 的外显子,编码329 个氨基酸。通过序列同源比对及系统发育进化分析,光倒刺鲃mc5r 的氨基酸序列与鲤(Cyprinus carpio)、犀角金线鲅(Sinocyclocheilus rhinocerous)的mc5r 同源性达到98%。光倒刺鲃mc5r 在大脑中显著表达,在间脑、心脏的表达量次之,在中脑、小脑表达量较少,在肾脏、胃、肌肉、脾、肠、性腺、肝脏、延脑、眼中微量表达。光倒刺鲃mc5r mRNA 的日周期表达量随昼夜节律而变化,饥饿再投喂实验发现饥饿再投喂组鱼其脑中表达量会显著升高,随后会有下降趋势,表明mc5r 可能与光倒刺鲃的摄食调控有关。 展开更多
关键词 光倒刺鲃 黑素皮质素受体-5 克隆 日周期表达 饥饿响应
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玉米ZmTOC1a、ZmTOC1b基因的克隆、表达及亚细胞定位分析 预览
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作者 蔡云婷 贾力 拓昊苑 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2019年第4期24-31,共8页
拟南芥TOC1基因在拟南芥中与2个MYB类蛋白基因LHY(Late elongated hypocotyl)、CCA1(Circadian clock associated1)组成中央振荡器,通过光周期调节途径调控拟南芥对光照的响应。为了揭示玉米中央振荡器中重要基因ZmTOC1a与ZmTOC1b的生... 拟南芥TOC1基因在拟南芥中与2个MYB类蛋白基因LHY(Late elongated hypocotyl)、CCA1(Circadian clock associated1)组成中央振荡器,通过光周期调节途径调控拟南芥对光照的响应。为了揭示玉米中央振荡器中重要基因ZmTOC1a与ZmTOC1b的生物学功能,通过同源搜索找到玉米中的2个同源基因ZmTOC1a与ZmTOC1b,并通过同源克隆得到了这2个基因的序列,进而对这2个基因进行组织表达分析和编码蛋白的亚细胞定位。结果表明,通过同源克隆得到ZmTOC1a的开放阅读框的总长度为1236bp,共编码411个氨基酸;ZmTOC1b的开放阅读框的全长为1554bp,共编码517个氨基酸。通过ProtPARAM进行基因编码蛋白质的理化性质分析,ZmTOC1a与ZmTOC1b均为酸性蛋白。NetPhos 3.1 Server预测结果显示,ZmTOC1a存在46个潜在磷酸化位点,其中丝氨酸36个,苏氨酸8个,酪氨酸2个;ZmTOC1b共存在53个潜在磷酸化位点,丝氨酸38个,苏氨酸12个,酪氨酸3个。在玉米中选取11个不同的组织进行qRT-PCR分析,结果表明,ZmTOC1a及ZmTOC1b分别在胚根以及胚芽鞘中高表达。通过构建目的蛋白与GFP融合的表达载体并注射烟草,发现ZmTOC1a及ZmTOC1b表达蛋白主要集中在细胞核中。综上所述,玉米TOC1基因可能与拟南芥TOC1基因作用一致,在玉米的生物钟调节中起到了重要的作用。 展开更多
关键词 玉米 ZmTOC1a ZmTOC1b 克隆 组织表达分析 亚细胞定位
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天山雪莲SikFBP1基因的抗寒性研究 预览
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作者 彭业军 成凤凤 +4 位作者 何亚玲 刘珊珊 刘兆书 王爱英 祝建波 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期14-21,共8页
在植物体内,FBPase酶是卡尔文循环内一个不可缺少的酶,在干旱、高温、盐碱等非生物胁迫中FBPase同样起着重要的作用。本试验从典型的耐极端低温的植物天山雪莲(Saussurea involucrata Kar.ER Kir.)中克隆了一段FBPase序列,命名为SikFBP1... 在植物体内,FBPase酶是卡尔文循环内一个不可缺少的酶,在干旱、高温、盐碱等非生物胁迫中FBPase同样起着重要的作用。本试验从典型的耐极端低温的植物天山雪莲(Saussurea involucrata Kar.ER Kir.)中克隆了一段FBPase序列,命名为SikFBP1,同时也克隆出了一段SBPase序列命名为SikSBP。实时荧光定量显示2个基因对寒冷胁迫都做出了响应,为验证其抗寒性功能分别转入了烟草中。通过RT-PCR验证获得转化植株,低温胁迫下,通过丙二醛(MDA)含量、相对电子渗透率(REL)、过超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、PSⅡ最大光化学效率(Fv/Fm)及光合效率(Pn)的测量,发现转SikFBP1基因株系与转SikSBP基因株系在光合效率上提高较为微弱,但在耐寒性方面得到了一定的提高,为FBPase的功能研究提供一定参考。 展开更多
关键词 天山雪莲 烟草 SikFBP1 SikSBP 克隆 耐寒性 光合效率
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山羊CPT1A基因的克隆表达及肌内脂肪含量的相关性分析 预览
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作者 梁计峻 林亚秋 +2 位作者 俞雨阳 王永 朱江江 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2019年第5期231-238,共8页
旨在获得山羊肉毒碱棕榈酰基转移酶Ⅰ肝脏亚型CPT1A(Carnitine palmitoyltransferase 1A,CPT1A)基因序列,分析其生物学特征,阐明其组织及细胞分化时序表达规律,同时揭示CPT1A基因在背最长肌、股二头肌、臂三头肌中与肌内脂肪含量(IMF)... 旨在获得山羊肉毒碱棕榈酰基转移酶Ⅰ肝脏亚型CPT1A(Carnitine palmitoyltransferase 1A,CPT1A)基因序列,分析其生物学特征,阐明其组织及细胞分化时序表达规律,同时揭示CPT1A基因在背最长肌、股二头肌、臂三头肌中与肌内脂肪含量(IMF)的关系。选取7只1周岁健康简州大耳羊为试验动物,屠宰后迅速采集心、肝、脾、肺、肾、背最长肌、股二头肌、臂三头肌、皮下脂肪和腹间脂肪组织样品,利用TRIzol法提取总RNA。采用RT-PCR法克隆山羊CPT1A基因,进行生物信息学分析。利用实时荧光定量PCR技术检测CPT1A基因在不同组织中的表达水平以及CPT1A在山羊前体脂肪细胞分化过程中的时序表达。使用皮尔逊相关系数进行CPT1A基因表达量与IMF含量相关性分析。通过克隆得到CPT1A基因序列(MH345735)为2 380 bp,包含CDS全长2 319 bp,5′UTR 38 bp和3′UTR 23 bp,编码773个氨基酸。组织表达结果显示,CPT1A在简州大耳羊肝脏和肾脏中的表达水平极显著高于其他组织(P<0.01)。细胞时序表达定量结果显示,CPT1A在诱导分化0~5 d逐渐升高,在第5天表达量最高(P<0.01),5~9 d逐渐下降。CPTA基因表达量与IMF含量相关性分析结果显示,CPT1A基因表达量与各肌肉组织肌内脂肪含量均显著正相关。结果表明,CPT1A可能在肌内脂肪沉积过程中具有重要调控作用,为进一步研究CPT1A调控山羊脂质代谢的机理研究提供参考。 展开更多
关键词 山羊 CPT1A基因 克隆 组织表达 肌内脂肪
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黄瓜microRNA171的克隆与功能分析
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作者 朱早兵 虞夏清 +5 位作者 翟于菲 王盼乔 赵勤政 李季 娄群峰 陈劲枫 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期864-876,共13页
为了解microRNA171(miR171)对黄瓜的调控作用,从华北型黄瓜‘北京截头’中克隆了Csa-miR171家族的4个miRNA前体序列Csa-miR171a、Csa-miR171b、Csa-miR171c、Csa-miR171d,对前体序列进行比对与进化分析,预测成熟序列的靶基因并进一步开... 为了解microRNA171(miR171)对黄瓜的调控作用,从华北型黄瓜‘北京截头’中克隆了Csa-miR171家族的4个miRNA前体序列Csa-miR171a、Csa-miR171b、Csa-miR171c、Csa-miR171d,对前体序列进行比对与进化分析,预测成熟序列的靶基因并进一步开展了拟南芥遗传转化功能研究。结果表明,4个前体共剪切出两种成熟序列Csa-miR171a和Csa-miR171b,系统进化显示,Csa-miR171a、Csa-miR171b、Csa-miR171c、Csa-miR171d分别与甜瓜Cme-miR171e、Cme-miR171c、Cme-miR171a、Cme-miR171b同源性最近,与拟南芥、水稻、番茄等较远;Csa-miR171a、Csa-miR171b成熟序列主要靶向GRAS转录因子蛋白家族基因,拟南芥中过表达Csa-miR171a前体改变了叶片形态、颜色、抽薹时间、根、果实、花器官形态等多个表型性状。 展开更多
关键词 黄瓜 microRNA171 克隆 靶基因预测 转基因
来源于豆豉的枯草芽孢杆菌MX-6所产纳豆激酶的稳定性研究 预览
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作者 满丽莉 向殿军 《中国调味品》 CAS 北大核心 2019年第7期25-28,33共5页
以中国豆豉中筛选到的1株纤溶酶高产菌株——枯草芽孢杆菌MX-6为研究对象,应用聚合酶链式反应(PCR)成功扩增到1473bp的纤溶酶编码基因aprN,系统进化树结果显示该纤溶酶为纳豆激酶。研究了纳豆激酶对热、pH、金属离子、化学物质、抑制剂... 以中国豆豉中筛选到的1株纤溶酶高产菌株——枯草芽孢杆菌MX-6为研究对象,应用聚合酶链式反应(PCR)成功扩增到1473bp的纤溶酶编码基因aprN,系统进化树结果显示该纤溶酶为纳豆激酶。研究了纳豆激酶对热、pH、金属离子、化学物质、抑制剂和变性剂的稳定性及传代稳定性。结果表明:纳豆激酶在-20,4,30~50℃的热稳定性较好,pH在3~11之间酶活性相对稳定,Mg2+、Ca2+对纳豆激酶具有显著的激活作用,K+、Fe2+对纳豆激酶的稳定性基本无影响,而Mn2+、Zn2+、Cu2+、Al3+、Ba2+有显著的抑制作用,Hg2+导致纳豆激酶完全失活,牛血清蛋白、明胶、蛋白胨能够显著提高纳豆激酶的稳定性,丙二醇、海藻酸钠对纳豆激酶的稳定性基本无影响,而乙醇显著降低纳豆激酶的稳定性。PMSF导致纳豆激酶的活性完全丧失,EDAT和DTT对纳豆激酶的活性基本无影响,10mmol/L的SDS显著降低纳豆激酶的稳定性,说明此纳豆激酶是一种丝氨酸蛋白酶,不是金属酶,不含二硫键,且具有良好的传代稳定性。结果显示该酶的稳定性较好,具有开发为溶栓药物的应用价值,有利于纳豆激酶的工业化应用。 展开更多
关键词 纳豆激酶 aprN基因 克隆 枯草芽孢杆菌 稳定性
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凝结芽孢杆菌中耐热木酮糖激酶基因的克隆表达及生信分析 预览
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作者 聂恬 孟未群 +2 位作者 李梦然 张玉明 倪志华 《中国酿造》 CAS 北大核心 2019年第8期142-147,共6页
该研究以凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)IPE22为研究对象,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增获得木酮糖激酶基因Bc-XK,将其与载体pET-30a连接后,在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中进行诱导表达。然后采用镍柱亲和层析纯化重组酶Bc-... 该研究以凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)IPE22为研究对象,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增获得木酮糖激酶基因Bc-XK,将其与载体pET-30a连接后,在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中进行诱导表达。然后采用镍柱亲和层析纯化重组酶Bc-XK,对基因Bc-XK及其编码的蛋白质进行生信分析。结果表明,纯化后重组酶Bc-XK的酶比活力为(20.56±3.31)U/mg,热稳定性好,在60℃保持活力180 min以上,具有很好的工业应用潜力。Bc-XK基因含有一个1 536 bp的开放阅读框,共编码511个氨基酸,其编码的蛋白质为亲水蛋白,等电点(PI)为5.46,分子质量为56.15 kDa,二级结构中α-螺旋、无规卷曲和延伸链含量丰富,3个催化位点分别为天冬氨酸-8、苏氨酸-11、天冬氨酸-239,高度保守。 展开更多
关键词 木酮糖激酶 基因 凝结芽孢杆菌 克隆 表达 纯化 生物信息学分析
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棉花CRVW的克隆与抗黄萎病功能分析 预览
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作者 王秋莹 王伟巧 +6 位作者 张艳 王国宁 吴立强 张桂寅 马峙英 杨君 王省芬 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1858-1869,共12页
【目的】黄萎病(Verticillium wilt)是棉花生产上的重要病害,严重影响棉花的产量和品质。棉花基因组测序工作的完成为抗病基因挖掘提供了重要的信息资源。通过对一个尚未有功能注释的陆地棉基因CRVW(cotton resistance to Verticillium ... 【目的】黄萎病(Verticillium wilt)是棉花生产上的重要病害,严重影响棉花的产量和品质。棉花基因组测序工作的完成为抗病基因挖掘提供了重要的信息资源。通过对一个尚未有功能注释的陆地棉基因CRVW(cotton resistance to Verticillium wilt)进行克隆与抗病功能验证,为棉花基因组信息完善、抗病机制解析和分子育种等方面奠定基础。【方法】根据参考基因组序列设计引物,同源克隆陆地棉(Gossypium hirsutum)农大601(ND601)中CRVW的开放读码框(open reading frame,ORF)。利用在线工具ProtParam预测蛋白氨基酸组成、分子量、理论等电点、不稳定指数和总平均亲水性等性质;应用PSIPRED v3.3预测蛋白二级结构;在线工具ProtComp v. 9.0进行亚细胞定位预测;PlantCARE在线软件分析顺式作用元件。构建CRVW与绿色荧光蛋白基因融合表达载体,通过基因枪介导法转化洋葱表皮细胞,观察CRVW的表达位置。利用qRT-PCR检测CRVW在棉花不同组织、黄萎病菌胁迫条件下不同抗、感品种间,以及水杨酸(salicylic acid,SA)诱导处理条件下的表达模式。构建CRVW沉默载体,应用病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术进一步验证该基因在棉花中的抗病功能。检测CRVW沉默后一些与植物抗病调控相关标志基因的表达变化,分析其介导的抗病通路。【结果】从陆地棉品种ND601中克隆到CRVW的ORF,其全长780 bp,编码259个氨基酸残基,分子量约为30.2 kD,理论等电点9.59;蛋白二级结构含69.50%不规则卷曲、17.76%α-螺旋、11.20%延伸链和1.54%β-卷曲。综合生物信息学预测和荧光观察结果,显示CRVW主要存在于植物细胞膜和细胞质。CRVW在棉花根、茎和叶中都有表达,但在根中的表达量最高。CRVW的ORF上游序列(CRVW-P)中包括响应乙烯(ethylene)、SA、生长素(auxin)和脱落酸(abscisic acid)等4种激素信号的顺式作用元件。另外,CRVW-P还包括一些与伤� 展开更多
关键词 棉花 黄萎病 CRVW 克隆 病毒诱导的基因沉默 抗性
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三角帆蚌dPGAM基因的克隆与表达分析 预览
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作者 应晨怡 谢陈南 +5 位作者 张根芳 周淼 许海方 黄芸洁 陈旭旭 杨受保 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1913-1920,共8页
为探究贝类磷酸甘油酸变位酶(PGAM)基因的功能,以紫色和黄色家系三角帆蚌为试验材料,采用RACE-PCR法克隆得到三角帆蚌1个辅因子依赖型磷酸甘油酸变位酶基因(dPGAM)的cDNA序列,命名为HcdPGAM,并对其进行生物信息学和表达特性分析。结果表... 为探究贝类磷酸甘油酸变位酶(PGAM)基因的功能,以紫色和黄色家系三角帆蚌为试验材料,采用RACE-PCR法克隆得到三角帆蚌1个辅因子依赖型磷酸甘油酸变位酶基因(dPGAM)的cDNA序列,命名为HcdPGAM,并对其进行生物信息学和表达特性分析。结果表明,HcdPGAM基因包含1个750 bp的开放阅读框,编码1个含250个氨基酸的假定蛋白,并含有1个保守的组氨酸磷酸酶结构域;HcdPGAM与其他动物PGAM的氨基酸序列均具有较高的相似性(58.8%~82.0%)。实时荧光定量PCR分析显示,HcdPGAM在所检测的紫色蚌和黄色蚌的鳃、外套膜、闭壳肌、消化腺、性腺组织和血淋巴细胞6种组织中均有表达,其中在闭壳肌中的表达量相对较高,且紫色系蚌闭壳肌中的表达水平显著高于黄色系,表明该基因与三角帆蚌的能量代谢与生长发育有关,是贝类分子辅助育种的一种潜在的标记;嗜水气单胞菌诱导可极显著上调HcdPGAM基因的表达水平(24 h和48 h),表明HcdPGAM基因在贝类抗细菌感染的免疫反应相关能量代谢过程中也发挥着重要作用。本研究结果为明确贝类PGAM的功能和筛选三角帆蚌不同颜色家系间的特异性分子标记提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 三角帆蚌 磷酸甘油酸变位酶 克隆 表达
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石柱参人参皂苷合成酶基因的克隆及表达量测定 预览
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作者 王丹丹 冷春玲 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期743-752,共10页
以人参为对照组,采用HPLC法测定5a生石柱参样品中6种人参皂苷(Rb1、Rb2、Rc、Re、Rg1、Rg2)的质量分数,采用实时荧光定量PCR技术对不同生长期人参皂苷合成酶基因(SS、CYP82D47、CYP716A42)的表达量进行比较,以探究石柱参人参皂苷质量分... 以人参为对照组,采用HPLC法测定5a生石柱参样品中6种人参皂苷(Rb1、Rb2、Rc、Re、Rg1、Rg2)的质量分数,采用实时荧光定量PCR技术对不同生长期人参皂苷合成酶基因(SS、CYP82D47、CYP716A42)的表达量进行比较,以探究石柱参人参皂苷质量分数较低的原因;并对石柱参CYP82D47基因进行克隆、测序及生物信息学分析,获得石柱参系统发育树。结果表明:石柱参人参皂苷合成酶基因的表达量在根、茎、叶组织中具有高度相似性,却也具有高度组织差异性,比如SS基因在石柱参根、叶中表达活跃,在茎中表达量有限;CYP82D47基因在石柱参中的表达部位主要是茎、叶组织;而CYP82D47基因在在根、茎、叶组织中表达较活跃,尤其是根、叶中;此外,人参皂苷合成酶基因CYP82D47的表达量相对较低是造成石柱参人参皂苷质量分数较低的原因之一;由系统进化树可见,石柱参与竹节参、西洋参、三七及刺五加的亲缘关系较近,结果与物种进化程度相符合。 展开更多
关键词 石柱参 人参皂苷 克隆 qPCR 基因表达量
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