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水稻AGPase小亚基基因的克隆测序及种质间遗传分化的研究 预览
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作者 赵颖 朱高倩 +2 位作者 孙朝华 金寿林 谭学林 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期559-567,共9页
淀粉是构成和影响水稻产量和品质的最主要因素;ADP-葡萄糖焦磷酸化酶似GPase)基因是影响淀粉合成的关键酶基因之一。本研究用编码AGPase小亚基基因似GPsma)序列的特异引物(序列为F:5'-TACGCTATGCTCTTGAAAC-3’;R:5'-TATCTTCCCA... 淀粉是构成和影响水稻产量和品质的最主要因素;ADP-葡萄糖焦磷酸化酶似GPase)基因是影响淀粉合成的关键酶基因之一。本研究用编码AGPase小亚基基因似GPsma)序列的特异引物(序列为F:5'-TACGCTATGCTCTTGAAAC-3’;R:5'-TATCTTCCCAGTAACCATCA-3')对普通野生稻(元江)、粳稻(榆密15)、籼稻(93—11)及籼粳交品系(南34)进行PCR扩增、克隆、测序和序列对比。又用该引物对来源于13个国家的15份AA基因组和5份CCDD基因组的共20份野生稻及205份包括40份籼稻和165份粳稻的云南地方品种和改良品种(系)进行PCR检测。在以上4个不同类型水稻材料该引物上扩增出184bp和215bp的2个片段均为AGPase小亚基基因的序列。在该序列的109bp处,元江普通野生稻和榆密15为T,而93—11和南34为C;籼粳交品系南34在121~151bp区间缺失31个碱基。所有的225份供试材料可分为3类。第一类具有215bp大小的条带,包括了全部的野生稻材料和196份籼粳材料。其中籼稻数占籼稻样本总数的95%,籼稻地方品种占籼稻地方品种总数的75%;粳稻数占粳稻样本总数的83.6%,粳稻地方品种占粳稻地方品种总数的60%。第二类具有184bp的条带,包括28个籼粳材料。第三类同时具有215bp和184bp的片段,此类只有1个父母本具不同片段的滇型杂交粳稻品种。结果表明AGPsma序列在野生稻中可能尚未出现分化,但在籼稻、粳稻和地方老品种及改良品种中都出现了遗传分化。 展开更多
关键词 ADP-葡萄糖焦磷酸化酶 A GPsma 栽培稻 野生稻 遗传分化
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1种有应用前景的猪瘟病毒多表位重组疫苗的研制 预览
2
作者 Tian H 董晓云(摘译) 吴艳(校) 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第2期263-263,共1页
猪瘟(CSF)是一种高度传染性疾病,常导致病猪死亡,由黄病毒科瘟病毒属的猪瘟病毒(CSFV)引起。安全有效的CSF疫苗的开发是控制CSF大流行的关键,本研究介绍了1种串联重复多表位重组疫苗,可保护猪免受CSFV的侵害。其组成为包含有2拷... 猪瘟(CSF)是一种高度传染性疾病,常导致病猪死亡,由黄病毒科瘟病毒属的猪瘟病毒(CSFV)引起。安全有效的CSF疫苗的开发是控制CSF大流行的关键,本研究介绍了1种串联重复多表位重组疫苗,可保护猪免受CSFV的侵害。其组成为包含有2拷贝E2糖蛋白的693707、241—276和770-781氨基酸残基及2拷贝非结构蛋白NS2-3的1446--1460氨基酸残基。在攻毒试验中,所有接种中国疫苗株(C株)的猪均被充分保护;而连续接种3次多表位重组疫苗后3/5的猪被保护(通过临床症状和病毒血症进行确诊)。结果表明,带有CSFV主要抗原表位的多表位重组疫苗可诱导产生高水平的特异性抗体,并在一定程度上具有和C疫苗株相似的保护能力。 展开更多
关键词 猪瘟病毒(CSFV) 抗原表位 B和T细胞表位 多表位
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山区猪瘟免疫问题及防控建议 预览 被引量:1
3
作者 邓家林 《农业开发与装备》 2014年第3期146-146,共1页
猪瘟是猪瘟病毒引起的高度接触性传染病,发病率和死亡率都很高,严重威胁生猪养殖生产工作的顺利开展。本文结合工作经验,就山区猪瘟免疫中出现的问题进行论述,在此基础上提出了几点防控建议,仅供借鉴参考。
关键词 猪瘟病毒 防控 免疫 山区 接触性传染病 生产工作 生猪养殖 工作经验
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家庭养殖场种草养羊最优饲养模式研究 预览
4
作者 王俊贤 张勃 《畜牧兽医杂志》 2016年第4期82-83,87共3页
家庭养殖场是定西市为贯彻落实中央1号文件精神,推进现代畜牧业经营体系创新,结合实际而提出的对全市羊产业发展具有明显示范带动作用的经营主体。为探讨家庭养殖场种草养羊的最优饲养模式,本试验就“玉米粉+秸秆”、“配合饲料+秸秆... 家庭养殖场是定西市为贯彻落实中央1号文件精神,推进现代畜牧业经营体系创新,结合实际而提出的对全市羊产业发展具有明显示范带动作用的经营主体。为探讨家庭养殖场种草养羊的最优饲养模式,本试验就“玉米粉+秸秆”、“配合饲料+秸秆”、“配合饲料+苜蓿+秸秆”、“配合饲料+苜蓿+青贮+秸秆”等4种饲喂模式进行了饲喂效果的对比试验。结果表明:“配合饲料+苜蓿+青贮+秸秆”组比“玉米粉+秸秆”组母羊繁殖成活率提高44.05%,羔羊3月龄、6月龄体重分别提高了36.31%和47.46%,经济效益提高2~3倍。 展开更多
关键词 家庭养殖场 种草养羊 饲养模式
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Characterization of the Antigenicity and Immunogenicity of the Escherichia Coil Produced RNase Domain of the Classical Swine Fever Virus Glycoprotein Eras
5
作者 戚昀 刘连池 +1 位作者 王骥 陈应华 《清华大学学报:自然科学英文版》 EI CAS 2009年第4期512-518,共7页
Erns is a highly glycosylated envelope protein of classical swine fever virus (CSFV) with RNase activity. Erns can induce neutralizing antibodies and provide immune protection against CSFV infection. In this study, th... Erns is a highly glycosylated envelope protein of classical swine fever virus (CSFV) with RNase activity. Erns can induce neutralizing antibodies and provide immune protection against CSFV infection. In this study, the RNase domain of the Erns was produced in Escherichia coli. Its reactivity with CSFV-positive sera and its ability to induce antibodies and to provide protective immunity were then investigated. The serological tests showed that the prokaryotically expressed RNase domain of the Erns retained its antigenicity and induced high titers of humoral responses. However, only partial protection and a limited amount of neutralizing antibodies were demonstrated by an in vitro neutralization test and an immunization/challenge test. The results suggest that other essential factors rather than simply enhancing the immunogenicity of Erns should be taken into consideration when Erns is enrolled as one of the components of a candidate vaccine. 展开更多
关键词 病毒糖蛋白 猪瘟病毒 免疫原性 酶特性 抗原性 大肠杆菌 线圈 环境管理体系
表达猪瘟病毒E2蛋白的复制型水疱性口炎假病毒的拯救 预览
6
作者 陈景艳 李文雯 钱永华 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第9期 7-10,共4页
为拯救囊膜表面携带有猪瘟病毒E2蛋白的复制型水疱性口炎假病毒,共转染分别表达水疱性口炎病毒核衣壳蛋白、磷蛋白、聚合酶蛋白以及携带有猪瘟病毒E2基因的复制型水疱性口炎病毒载体于BHK-21细胞中。采用Western blot、间接ELISA以及体... 为拯救囊膜表面携带有猪瘟病毒E2蛋白的复制型水疱性口炎假病毒,共转染分别表达水疱性口炎病毒核衣壳蛋白、磷蛋白、聚合酶蛋白以及携带有猪瘟病毒E2基因的复制型水疱性口炎病毒载体于BHK-21细胞中。采用Western blot、间接ELISA以及体外微量中和试验检测和鉴定拯救的假病毒。结果显示,E2蛋白成功地在BHK-21细胞中表达,假病毒VSV/CSFV-E2免疫的Balb/c小鼠血清中有高滴度的抗E2抗体,假病毒诱导产生的抗体在体外可以有效的阻断猪瘟病毒囊膜蛋白E1和E2蛋白假型的病毒HIV-luc/CSFV-E1&E2对PK-15细胞的感染。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 水疱性口炎病毒 假型病毒
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非洲猪瘟病毒p72基因的纳米金探针研究 预览 被引量:5
7
作者 张鑫宇 孙怀昌 +2 位作者 刘文俊 夏晓莉 成大荣 《扬州大学学报:农业与生命科学版》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期 55-58,共4页
对22株发表的非洲猪瘟病毒(ASFV)p72基因序列进行比较,找出其中的高保守性区域,各设计、合成1条与保守区域互补的5′生物素标记及3′烷巯基修饰短链寡核苷酸探针,并将烷巯基修饰的探针吸附到纳米金颗粒上,制备纳米金标记探针。PC... 对22株发表的非洲猪瘟病毒(ASFV)p72基因序列进行比较,找出其中的高保守性区域,各设计、合成1条与保守区域互补的5′生物素标记及3′烷巯基修饰短链寡核苷酸探针,并将烷巯基修饰的探针吸附到纳米金颗粒上,制备纳米金标记探针。PCR扩增出的p72基因中的651 bp保守核酸序列,变性后与上述生物素探针及标记纳米金探针进行杂交,杂交产物加入吸附链霉亲和素的酶标板,利用亲和原理,捕获杂交产物,银染增强法对纳米金标记探针进行信号放大。结果表明:制备的纳米金探针经银染放大后,在酶标板中形成肉眼可见的黑色沉淀,可有效检测扩增出的p72基因,检测核酸浓度达到10fmol·L-1,可用于ASFV快速诊断。 展开更多
关键词 纳米金探针 非洲猪瘟病毒 p72基因 检测 银染增强
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猪瘟呈色化学反应诊断猪瘟的应用及验证 预览 被引量:1
8
作者 马玉臣 张中理 +1 位作者 林森 陈桂华 《吉林畜牧兽医》 2004年第5期 46-47,共2页
猪瘟呈色化学反应诊断猪瘟始于20世纪60年代的前苏联,据资料介绍,该法阳性检出率很高,但取材部位多,检验材料和试剂的用量大,且需时较长.后经我国学者刘占杰等对取材部位、材料和试剂的用量及反应程序都作了进一步改进,改进后的猪瘟呈... 猪瘟呈色化学反应诊断猪瘟始于20世纪60年代的前苏联,据资料介绍,该法阳性检出率很高,但取材部位多,检验材料和试剂的用量大,且需时较长.后经我国学者刘占杰等对取材部位、材料和试剂的用量及反应程序都作了进一步改进,改进后的猪瘟呈色化学反应方法简便,阳性检出率仍高达98.5%. 展开更多
关键词 猪瘟 呈色化学反应 诊断 病理变化 细菌学检查
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非洲猪瘟病毒衣壳蛋白P72在大肠杆菌中的表达 预览 被引量:4
9
作者 李维彬 蒋正军 +5 位作者 王玉炯 许崇波 龚振华 刘俊辉 郭福生 郑增忍 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期 267-270,共4页
利用PCR技术,从含非洲猪瘟(ASFV)P72基因的克隆质粒BBBBPr4中扩增出1.94kb的P72基因.将P72基因和表达栽体pET-30c(+)分别用限制性核酸内切酶Fba Ⅰ/XHoⅠ和BamHⅠ/XHoⅠ进行双酶切,然后在T4DNA连接酶作用下,将P72基因定向... 利用PCR技术,从含非洲猪瘟(ASFV)P72基因的克隆质粒BBBBPr4中扩增出1.94kb的P72基因.将P72基因和表达栽体pET-30c(+)分别用限制性核酸内切酶Fba Ⅰ/XHoⅠ和BamHⅠ/XHoⅠ进行双酶切,然后在T4DNA连接酶作用下,将P72基因定向克隆至栽体pET-30c(+)中相应位点上,并转化至宿主菌BL21(DE3)中,得到了重组菌株BL21(DE3)(pET—ASFvP72)。经PCR鉴定,构建的重组菌株中合有P72基因。重组菌株BL21(DE3)(pET-ASFVP72)经IPTG诱导后,其表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明衣壳蛋白P72基因可以在受体菌中高效表达,达到了菌体总蛋白的34%,表达产物的分子量约为78Ku,并能被ASFV抗体所识别。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 衣壳蛋白P72 表达 大肠杆菌
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猪伪狂犬病病毒GZ-Z1株gE基因原核表达质粒的构建 预览 被引量:1
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作者 曾智勇 周莉 +7 位作者 汤德元 刘志杰 梁海英 李谦 肖超能 王彬 王凤 甘振磊 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2011年第11期 149-152,共4页
为给猪伪狂犬病病毒的诊断及防治提供科学依据,参考GenBank中猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因序列,设计1对特异性引物,以PRV GZ-Z1株DNA为模板,进行gE基因的PCR扩增,扩增产物与pMD18-T载体连接、鉴定正确后,再亚克隆至pET32a(+)原核表... 为给猪伪狂犬病病毒的诊断及防治提供科学依据,参考GenBank中猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因序列,设计1对特异性引物,以PRV GZ-Z1株DNA为模板,进行gE基因的PCR扩增,扩增产物与pMD18-T载体连接、鉴定正确后,再亚克隆至pET32a(+)原核表达载体中,经鉴定后测序。结果表明:目的片段为PRV gE基因完整开放阅读框,大小1 734bp,编码577个氨基酸,在pET32a(+)载体中位置正确,表明,pET32a-gE原核表达质粒构建成功。该基因与国内外其他18株PRV的gE基因推导氨基酸序列同源性为94.8%~98.6%;与国外分离株属同一个进化分支,遗传关系相对较近;而与国内Fa、Min、GDSH等毒株亲缘关系较远。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 GE基因 克隆 原核表达质粒
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当前困扰猪瘟防治效果的原因及应对措施 预览 被引量:1
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作者 李环 齐艳梅 +1 位作者 曹丽 张峰 《兽医导刊》 2013年第6期46-47,共2页
猪瘟(CSF)俗称“烂肠瘟”,是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种高度接触性传染病,是威胁养猪业的主要传染病之一。它传染性强、流行广泛、发病率和死亡率高,危害大。世界动物卫生组织将其列为A类动物疫病,我国也将其列为一类动物疫病... 猪瘟(CSF)俗称“烂肠瘟”,是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种高度接触性传染病,是威胁养猪业的主要传染病之一。它传染性强、流行广泛、发病率和死亡率高,危害大。世界动物卫生组织将其列为A类动物疫病,我国也将其列为一类动物疫病。但近些年来,由于一些地区养猪户片面追求经济利益,对猪群的饲养管理、疫苗贮存使用和免疫方法程序等环节的忽视,我国猪瘟的免疫失败、猪瘟与其他疫病的混合感染及继发感染不断出现,使得猪瘟疫情在生产中有所反弹, 展开更多
关键词 猪瘟病毒 防治效果 世界动物卫生组织 接触性传染病 原因 动物疫病 经济利益 饲养管理
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一例猪瘟的发病过程及防制措施
12
作者 霍延媛 温志医 王建兵 《榆林科技》 2015年第4期44-44,共1页
猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种急性热性传染病,各种年龄的猪均可发病,一年四季均流行,传染性极强,发病率和死亡率均高。猪瘟的发生具有毁灭性,严重威胁着养猪业的发展。 1.发病情况 神木县麻家塔办事处某养猪场存栏猪76头,2015年9月14... 猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种急性热性传染病,各种年龄的猪均可发病,一年四季均流行,传染性极强,发病率和死亡率均高。猪瘟的发生具有毁灭性,严重威胁着养猪业的发展。 1.发病情况 神木县麻家塔办事处某养猪场存栏猪76头,2015年9月14日免疫注射猪瘟疫苗60头,16头怀孕母猪未防,过了三天即9月17日开始3月龄小猪发病,开始死亡,至2015年9月24日早上9点钟,县疫控中心专业技术人员赶到现场时,共计死亡小猪14头,另有2头猪正在发病。 展开更多
关键词 防制措施 热性传染病 存栏猪 免疫注射 养猪业 专业技术人员 疫控中心 临床症状 紧急免疫 实验室诊断
规模化猪场猪瘟的净化及成效 预览 被引量:3
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作者 吴学敏 王隆柏 +4 位作者 陈如敬 周伦江 吴顺意 修金生 严山 《福建畜牧兽医》 2011年第5期 75-79,共5页
猪瘟是由猪瘟病毒引起的高度接触性传染病,以很强的传染性和高致病率为特征,常给养猪业带来巨大的经济损失。通过采取合理的猪瘟疫苗免疫程序,对猪群进行猪瘟抗体检测,并对抗体不合格种猪进行严格淘汰,建立科学的猪瘟净化方案,在福建省... 猪瘟是由猪瘟病毒引起的高度接触性传染病,以很强的传染性和高致病率为特征,常给养猪业带来巨大的经济损失。通过采取合理的猪瘟疫苗免疫程序,对猪群进行猪瘟抗体检测,并对抗体不合格种猪进行严格淘汰,建立科学的猪瘟净化方案,在福建省各地区若干个规模化猪场实施开展猪瘟净化。结果表明,该猪瘟净化方案可以提高猪群的健康状况水平,创造经济效益,达到猪瘟的净化效果,值得推广使用。 展开更多
关键词 猪瘟 净化 成效
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猪伪狂犬病毒病与圆环病毒病2型混合感染的诊断 预览 被引量:9
14
作者 刘志杰 李如举 +5 位作者 周莉 曾智勇 汤德元 王彬 甘振磊 王凤 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2011年第11期 153-154,共2页
为诊断贵州省都匀市贵定县某猪场送检病料的感染类型,调查了其流行病学、临床症状和病理剖检特征,并采用复合PCR检测技术对其进行检测。结果表明,该猪场存在猪伪狂犬病毒病与猪圆环病毒病的混合感染。
关键词 猪伪狂犬病毒病 猪圆环病毒病 混合感染 诊断
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猪蓝耳病与猪瘟混合感染的诊断报告 预览 被引量:2
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作者 李树东 《猪业科学》 2015年第9期70-71,共2页
黑龙江省牡丹江市某猪场饲养生产母猪120余头,2015年5月产房哺乳仔猪和保育仔猪开始发病,10~15日龄哺乳仔猪表现为腹泻排黄色水样粪便、发热、食欲废绝、呼吸加快(40~60次/min),呈腹式呼吸,已有5窝感染发病,几乎全部死亡。保... 黑龙江省牡丹江市某猪场饲养生产母猪120余头,2015年5月产房哺乳仔猪和保育仔猪开始发病,10~15日龄哺乳仔猪表现为腹泻排黄色水样粪便、发热、食欲废绝、呼吸加快(40~60次/min),呈腹式呼吸,已有5窝感染发病,几乎全部死亡。保育猪主要表现为消瘦、发热、喘,慢慢陆续发生死亡。母猪最近曾有1窝发生流产、死胎。为了确诊该猪场发病病因,对病死仔猪进行剖检,应用PCR、RT-PCR方法对常见猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪2型圆环病毒(PCV2)进行了检测,对送检的3份猪血清进行抗体检测,细菌的分离鉴定。经检测,病死哺乳仔猪猪瘟病毒和猪蓝耳病病毒均为阳性;保育仔猪蓝耳病阳性;细菌培养分离试验未分离到致病菌。现将有关诊断报告如下。 展开更多
关键词 猪蓝耳病 猪瘟 混合感染 诊断
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酶制剂在生猪健康养殖中的应用 预览 被引量:2
16
作者 李梅 方乾 +1 位作者 李浩 李方舟 《畜牧兽医杂志》 2016年第4期88-90,94共4页
我国作为世界第一生猪养殖大国,生猪养殖在畜牧业中占有举足轻重的地位。随着生猪养殖数量和规模的不断扩大,粪尿排放总量也相应增加。近年来,饲用酶制剂被人们广为认知和接受,并被广泛应用于生猪养殖过程中,在提高饲料利用率和提高生... 我国作为世界第一生猪养殖大国,生猪养殖在畜牧业中占有举足轻重的地位。随着生猪养殖数量和规模的不断扩大,粪尿排放总量也相应增加。近年来,饲用酶制剂被人们广为认知和接受,并被广泛应用于生猪养殖过程中,在提高饲料利用率和提高生猪生产性能方面发挥重要作用。本文介绍了健康养殖和饲用酶制剂发展状况,综述了饲用酶制剂的作用机理、应用现状、限制饲用酶制剂发挥作用的因素等,并就当前的现状及问题提出相应的意见和解决措施,以实现生猪产业的健康发展。 展开更多
关键词 酶制剂 生猪产业 健康养殖 应用效果 影响因素
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陕西及周边地区PRRSV Nsp2与GP5基因变异分析 预览
17
作者 吴旭锦 朱小甫 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2016年第12期1-8,共8页
【目的】了解陕西及周边省份部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2和GP5的变异情况。【方法】采用套式RT-PCR方法,从肝、脾、肺和血清中直接扩增Nsp2、GP5基因并克隆测序,将获得的PRRSV流行毒株序列与GenBank中30个PRRSV参考毒... 【目的】了解陕西及周边省份部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2和GP5的变异情况。【方法】采用套式RT-PCR方法,从肝、脾、肺和血清中直接扩增Nsp2、GP5基因并克隆测序,将获得的PRRSV流行毒株序列与GenBank中30个PRRSV参考毒株进行比对分析,构建进化树。【结果】获得了13株PRRSV的Nsp2基因序列(GenBank登录号KM233849~KM233861)和12株GP5基因序列(GenBank登录号KM233862~KM233873)。基因进化树分析显示所有测定PRRSV流行毒株均属北美洲型。对Nsp2基因序列分析发现,12株PRRSV为氨基酸缺失毒株,1株PRRSV为经典毒株。发现GSXF毒株有可能是一株重组毒株。PRRSV变异株与经典株相比,GP5蛋白中存在多处氨基酸点突变。【结论】陕西猪场PRRSV流行毒株以变异株为主,同时存在经典毒株和重组毒株。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2基因 GP5基因 陕西及周边省份
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我国首次非洲猪瘟疫情的发现和流行分析 被引量:13
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作者 陈腾 张守峰 +7 位作者 周鑫韬 李楠 缪发明 张静远 刘晔 吕宗吉 张国军 扈荣良 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第9期1831-1832,共2页
2018年8月3日,农业农村部根据中国动物卫生与流行病学中心(国家外来动物疫病研究中心)的确认,正式发布了发生在辽宁省沈阳市沈北新区的非洲猪瘟疫情通告。疫情确认之前的2018年7月20日,军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所流行病... 2018年8月3日,农业农村部根据中国动物卫生与流行病学中心(国家外来动物疫病研究中心)的确认,正式发布了发生在辽宁省沈阳市沈北新区的非洲猪瘟疫情通告。疫情确认之前的2018年7月20日,军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所流行病学课题组收到辽宁省沈阳市某技术服务部门送检的病猪脾脏、淋巴结、肾脏等样品和过去一段时间疫情的描述。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 非洲猪瘟病毒 中国
构建猪瘟病毒致细胞病变的PK—15细胞模型 被引量:2
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作者 吴海祥 张楚瑜 +5 位作者 郑从义 王家富 潘兹书 李蕾 曹晟 伊光辉 《科学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期822-826,共5页
猪瘟病毒在离体细胞培养条件下不引起宿主细胞病变, 病毒与宿主细胞之间相互作用的研究一直没有合适的模型. 以猪瘟病毒中国标准强毒石门株为材料, 通过基因工程的手段, 在构建全基因组感染性克隆的基础上, 对全基因组进行部分缺失, 获... 猪瘟病毒在离体细胞培养条件下不引起宿主细胞病变, 病毒与宿主细胞之间相互作用的研究一直没有合适的模型. 以猪瘟病毒中国标准强毒石门株为材料, 通过基因工程的手段, 在构建全基因组感染性克隆的基础上, 对全基因组进行部分缺失, 获得了7.5 kb的亚基因组, 以携带野生型猪瘟病毒的PK-15细胞为宿主, 用亚基因组进行转染, 得到了能够诱导PK-15细胞产生CPE的亚基因组病毒, 检测显示产生CPE的细胞培养物中野生型基因组和亚基因组共同存在. 猪瘟病毒致细胞病变模型的构建, 为进一步研究其致病的分子机制开辟了新的方向. 展开更多
关键词 猪瘟病毒 致细胞病变效应 PK-15细胞模型 基因组感染性克隆 亚基因组 致病机制
猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp4和Nsp12多克隆抗体的制备与鉴定
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作者 田恬 王海 +2 位作者 刘星 王先炜 姜平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期636-640,共5页
为了制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)两种非结构蛋白Nsp4和Nsp12的多克隆抗体,将Nsp4基因和Nsp12基因分别克隆至pET-32a(+)和pGEX-6P-1,并转化至BL21(DE3),用IPTG诱导表达,经过Ni-NTA镍离子亲和层析和包涵体洗液纯化,获得纯化的重组... 为了制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)两种非结构蛋白Nsp4和Nsp12的多克隆抗体,将Nsp4基因和Nsp12基因分别克隆至pET-32a(+)和pGEX-6P-1,并转化至BL21(DE3),用IPTG诱导表达,经过Ni-NTA镍离子亲和层析和包涵体洗液纯化,获得纯化的重组蛋白,然后用它们分别免疫BALB/c小鼠制备抗血清。SDS-PAGE和Western-blot鉴定结果显示,Nsp4和Nsp12分别以可溶性蛋白和包涵体形式表达,大小分别为42ku和44ku,均具有良好的反应原性。Western-blot和IFA结果显示,制备的抗血清均与PRRSV发生特异性反应,ELISA抗体效价均可达1∶32 000。本研究结果为PRRSV Nsp4和Nsp12的生物学功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP4 Nsp12 多克隆抗体
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