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《国际肝胆胰疾病杂志:英文版》 SCIE CAS 2003年第4期553-556,共4页
【正】 OBJECTIVE: To assess a sensitive and specific technique for detecting serum HBV DNA with an HBVDNA probe labelled directly by alkaline phosphatase (AlkPhos Direc probe).METHODS: AlkPhos Direc probe was prepare... 【正】 OBJECTIVE: To assess a sensitive and specific technique for detecting serum HBV DNA with an HBVDNA probe labelled directly by alkaline phosphatase (AlkPhos Direc probe).METHODS: AlkPhos Direc probe was prepared with purified HBV DNA labelled directly by alkalinephosphatase. The probe, and chemiluminescent substrate CDP-star for AP were used in hybridizationassay. HBV DNA was detected by autoradiography on a film. The results of 80 samples were comparedbetween the chemiluminescent dot blot hybridization assay with the AlkPhos Direc probe and another assaywith the digoxigenin-labelled HBV DNA probe. The correlation of seventy-sample results of fluorescentquantitative HBV DNA PCR assay and dot blot hybridization assay with the AlkPhos Direc probe wasanalysed.RESULTS: The sensitivity of the AlkPhos Direc probe was 10 pg at least. The coincidence of theAlkPhos Direc probe was 100% compared with that of the digoxigenin-labelled HBV DNA probe. Acorrelation coefficient of HBV DNA quantitative results between fluorescent quantitative HBV DNA PCRassay and dot blot hybridization assay with the AlkPhos Direc probe was 0.98 (P【0.01).CONCLUSIONS: The method detecting HBV DNA in serum with the HBV DNA AlkPhos Direc probe issensitive and specific. The results of the two assays with the AlkPhos Direc probe or with thedigoxigenin-labelled HBV DNA probe are completely coincident. The correlation of HBV DNAquantitative results between fluorescent QPCR assay and dot blot hybridization assay with the AlkPhosDirec probe is satisfactory. 展开更多
关键词 ALKALINE PHOSPHATASE LABEL HEPATITIS B nucleic acid
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乙肝病毒核心区与“a”决定簇嵌合基因的体外表达及抗原性分析 预览 被引量:2
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作者 李磊 田拥军 +1 位作者 张振华 杨东亮 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第4期 216-219,共4页
目的 评价乙肝病毒核心区与“a”决定簇嵌合基因表达产物的抗原性。方法 应用基因工程技术将编码截短的乙型肝炎病毒核心抗原的主要免疫显性区替换为表面抗原“a”决定簇的基因片段,将嵌合基因装入原核表达载体pRESET-B内,在体外进行... 目的 评价乙肝病毒核心区与“a”决定簇嵌合基因表达产物的抗原性。方法 应用基因工程技术将编码截短的乙型肝炎病毒核心抗原的主要免疫显性区替换为表面抗原“a”决定簇的基因片段,将嵌合基因装入原核表达载体pRESET-B内,在体外进行诱导表达,纯化目的蛋白并检测其抗原性。同时将嵌合基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3内,瞬时转染BHK细胞并采用间接免疫荧光法检测融合蛋白表达情况。结果 诱导并纯化得到了分子量为28ku的蛋白,经检测证实该蛋白具有一定的HBsAg抗原性和较弱的HBcAg抗原性。真核表达质粒可在BHK细胞内表达,可检出良好的HBsAg抗原性及较弱的HBcAg抗原性。结论 该嵌合质粒表达产物具有良好的HBsAg抗原性及较弱的HBcAg抗原性。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 基因融合 治疗性疫苗
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PCR方法用于我国A组轮状病毒的分型研究 预览 被引量:45
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作者 方肇寅 秦树民 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期 316-321,共6页
A组轮病毒(RV)是婴幼儿秋冬季病毒性腹泻的最主要病原。当RV感染时,组成病毒外壳的两个蛋白VP7和VP4都能刺激机体产生中和抗体。本文采用套式PCR方法对我国河北、河南1989-1990年141份RV阳性便样进行了... A组轮病毒(RV)是婴幼儿秋冬季病毒性腹泻的最主要病原。当RV感染时,组成病毒外壳的两个蛋白VP7和VP4都能刺激机体产生中和抗体。本文采用套式PCR方法对我国河北、河南1989-1990年141份RV阳性便样进行了分型研究。便样悬液中的病毒经硫氰酸胍裂解,玻璃珠吸附、洗脱,提取RNA。分别选择编码VP7和VP4基因的高保守序列设计引物,先经逆转录cDNAPCR一次放大后,再分别选择基因内不同血清型的特征序列设计一组分型引物,与另一端的保守序列引物配对,经PCR二次放大,从放大产物的特征分子量大小,区别RV样品的不同血清型。结果表明,河北、河南两省流行的RV以(G1、P1)型为主,其次为(G2、P2)型,个别为(C3、P1)型和(G4、P1)型,未发现其它P型毒株。G型PCR分型与McAbELA分型结果比较,符合率为97.7%。毒株G型和P型的关系与文献报道的一些规律相比,符合率为97.1%。个别毒株型别特殊,与RNAPAGE结果亦不能对应,有待进一步研究。本实验结果对研制轮状病毒疫苗有重要的指导意义。 展开更多
关键词 轮状病毒 血清型 聚合酶链反应
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抗—HBe阳性慢性乙型肝炎病毒感染:病毒前C变异与病变活动 被引量:59
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作者 骆抗先 张智 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期 189-191,共3页
抗-HBe(+)的慢性活动性肝炎51例,以聚合酶链反应检出HBV DNA48例(94.1%)。对6例以反应产物直接序列分析,发现前Cnt83发生G→A(A83)点突变,使密码28由于TGG变异为终止密码TAG而不能编... 抗-HBe(+)的慢性活动性肝炎51例,以聚合酶链反应检出HBV DNA48例(94.1%)。对6例以反应产物直接序列分析,发现前Cnt83发生G→A(A83)点突变,使密码28由于TGG变异为终止密码TAG而不能编码HBeAg。以抗-HBe(+)的慢性无症状HBV携带者30例为对照,仅12例(40%)检出弱HBV,DNA带。5例序列分析未发现A83变异。结果提示:变异病毒逃避免疫清除而继续活跃复 展开更多
关键词 序列分析 病毒变异 乙型肝炎病毒
应用逆转录聚合酶链反应鉴定脊髓灰质炎病毒 被引量:2
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作者 孔健 徐爱强 +2 位作者 董春明 刘萍 迮文远 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第11期 694-695,共2页
应用逆转录聚合酶链反应鉴定脊髓灰质炎病毒孔健,徐爱强,董春明,刘萍,迮文远为了排除急性驰缓性麻痹(AFP)病例中的非脊髓灰质炎病例,提高诊断脊髓灰质炎病例的正确性和及时性,我们(应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)... 应用逆转录聚合酶链反应鉴定脊髓灰质炎病毒孔健,徐爱强,董春明,刘萍,迮文远为了排除急性驰缓性麻痹(AFP)病例中的非脊髓灰质炎病例,提高诊断脊髓灰质炎病例的正确性和及时性,我们(应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定脊髓灰质炎病毒(简称PV)的灵... 展开更多
关键词 聚合酶链反应 脊髓灰质炎病毒 逆转录
乙肝病毒反义DNA的合成 预览 被引量:1
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作者 陈常庆 陈波 +4 位作者 徐金旺 吴祥甫 何丽芳 袁正宏 闻玉梅 《高技术通讯》 CAS CSCD 1995年第12期 38-42,共5页
为了深入研究反义DNA对乙肝病毒的抑制作用,设计合成了针对乙肝病毒基因不同功能区域的反义片段20个,无关序列4个,长度为15聚到18聚,分为无修饰反义DNA、反义DNA-多聚赖氨酸共阶连接物、部分硫代和全硫代反义DN... 为了深入研究反义DNA对乙肝病毒的抑制作用,设计合成了针对乙肝病毒基因不同功能区域的反义片段20个,无关序列4个,长度为15聚到18聚,分为无修饰反义DNA、反义DNA-多聚赖氨酸共阶连接物、部分硫代和全硫代反义DNA四种。合成反应是在ABI381型DNA合成仪上以1μmol或10μmol的规模进行的。但在计算机程序上作了一些修改以适应于部分硫代和全硫代DNA合成。抑制实验的结果表明,所有合成的反 展开更多
关键词 反义DNA 乙肝病毒 DNA 合成
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PCR检测泪液中乙肝病毒DNA 预览
7
作者 孙殿兴 耿云琴 +3 位作者 王法印 孙晓燕 胡荣 王升启 《眼科新进展》 CAS 北大核心 1995年第4期 52-53,共2页
PCR检测泪液中乙肝病毒DNA白求恩国际和平医院孙殿兴,耿云琴,王法印,孙晓燕,胡荣军事医学科学院王升启虽泪液中已检出乙肝病毒表面抗原(HBSAg)的存在l’],但(HBSAg)是乙肝病毒(HBV)核衣壳,也发现血液... PCR检测泪液中乙肝病毒DNA白求恩国际和平医院孙殿兴,耿云琴,王法印,孙晓燕,胡荣军事医学科学院王升启虽泪液中已检出乙肝病毒表面抗原(HBSAg)的存在l’],但(HBSAg)是乙肝病毒(HBV)核衣壳,也发现血液或体液中存在游离的非感染性HBSA... 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 DNA 泪液 聚合酶链反应
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ChM-I同源蛋白-Tenomodulin的表达与作用 预览
8
作者 郄淑燕 岳寿伟 潘博 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期 873-874,共2页
软骨调节素-I(chondromodulin-I,ChM-I)是近年来新发现的一种软骨源性生长因子,也是一种血管生成抑制剂。研究已证实,ClaM-I在软骨的无血管区高度表达,调节软骨的生长、分化及退变:ChM-I在其他软骨样组织,如视网膜、软骨终板等... 软骨调节素-I(chondromodulin-I,ChM-I)是近年来新发现的一种软骨源性生长因子,也是一种血管生成抑制剂。研究已证实,ClaM-I在软骨的无血管区高度表达,调节软骨的生长、分化及退变:ChM-I在其他软骨样组织,如视网膜、软骨终板等也特异性表达,在维持组织的正常生理功能中发挥重要的作用。近来有研究者报道了一种与ChM-I同源的新的蛋白质Tenomodulin(TeM),也称为ChM-IL或tendint。TeM在肌腱、韧带等缺乏血管的组织中高度表达,有关TeM结构、表达及作用的研究正逐渐兴起。 展开更多
关键词 同源蛋白 血管生成抑制剂 软骨调节素 正常生理功能 生长因子 特异性表达 无血管区 软骨终板 TeM 骨源性
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16SrDNA序列分析在嗜尸性蝇类鉴定中的应用 预览 被引量:12
9
作者 孙晓明 蔡继峰 +5 位作者 应斌武 方月琴 云利兵 袁万安 高山 侯一平 《法医学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期 36-38,共3页
目的通过mtDNA上16S rDNA中551bp基因序列分析,解决依据COⅠ和COⅡ上278bp和635bp基因序列难以鉴别丝光绿蝇、铜绿蝇种类的难题,为法医学嗜尸性苍蝇种类的鉴别提供依据。方法随机采集放置在呼和浩特及成都地区室外草地家兔尸体上的铜... 目的通过mtDNA上16S rDNA中551bp基因序列分析,解决依据COⅠ和COⅡ上278bp和635bp基因序列难以鉴别丝光绿蝇、铜绿蝇种类的难题,为法医学嗜尸性苍蝇种类的鉴别提供依据。方法随机采集放置在呼和浩特及成都地区室外草地家兔尸体上的铜绿蝇和丝光绿蝇,对其mtDNA上16S rDNA中551bp基因序列进行分析、比对,构建系统发育树。结果通过对嗜尸性蝇类mtDNA上16S rDNA的551bp基因序列分析可以对丝光绿蝇和铜绿蝇进行鉴别。结论16SrDNA上551bp基因序列分析是对嗜尸性蝇类(尤其是铜绿蝇和丝光绿蝇)进行种类鉴定的有效方法,是对依据COI和COU序列分析方法鉴别嗜尸性苍蝇种类的重要补充。 展开更多
关键词 嗜尸性蝇类 种类鉴定 线粒体 16S RDNA 法医学
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我国眼病理学研究的热点和整体发展方向 被引量:2
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作者 何伟 《中华眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期723-724,共2页
近年来,随着细胞生物学和分子生物学的发展以及与病理学之间的相互渗透,传统病理学被注入了新的生机.眼科病理学领域的学术热点主要集中在糖尿病相关眼病、干眼症、AMD、眼部肿瘤等.结合目前的研究热点,本文着重阐述我国眼病理学领域的... 近年来,随着细胞生物学和分子生物学的发展以及与病理学之间的相互渗透,传统病理学被注入了新的生机.眼科病理学领域的学术热点主要集中在糖尿病相关眼病、干眼症、AMD、眼部肿瘤等.结合目前的研究热点,本文着重阐述我国眼病理学领域的发展方向. 展开更多
关键词 糖尿病并发症 干眼综合征 黄斑变性 眼肿瘤
吉林省2012年柯萨奇病毒A组16型基因亲缘关系及氨基酸位点变异分析 被引量:1
11
作者 沈博 魏雷雷 +7 位作者 王爽 曹凤瑞 程涛 田鑫 单元春 李可维 周剑惠 范明 《中国疫苗和免疫》 CAS 2014年第6期538-541,共4页
目的了解吉林省2012年手足口病(Hand,Foot and Mouth Disease;HFMD)来源的柯萨奇病毒A组16型(Coxsackie Virus Group A Type 16,CVA16)基因亲缘关系及氨基酸位点的变异情况。方法收集吉林省2012年73例HFMD临床标本,病毒分离后对其... 目的了解吉林省2012年手足口病(Hand,Foot and Mouth Disease;HFMD)来源的柯萨奇病毒A组16型(Coxsackie Virus Group A Type 16,CVA16)基因亲缘关系及氨基酸位点的变异情况。方法收集吉林省2012年73例HFMD临床标本,病毒分离后对其中22株的VP1编码区部分核苷酸进行序列测定和分析。结果 22株CVA16中,12株为B1a基因亚型,10株为B1b基因亚型,12株B1a基因亚型氨基酸同源性为95.0%-97.8%,10株B1b基因亚型氨基酸同源性为94.3%-97.0%;有8株在第23位氨基酸位点发生了亮氨酸(Leucine,L)→蛋氨酸(Methionine,M)的变异,其余14株在该氨基酸位点均为L。结论 CVA16为吉林省HFMD的主要病原体之一,毒株间的同源性较高,均属于B基因群,在系统进化树上分别属于两个进化分支。 展开更多
关键词 手足口病 柯萨奇病毒A组16型 VP1编码区 基因特征
聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗血清丙氨酸转氨酶异常慢性丙型肝炎的临床疗效 预览 被引量:1
12
作者 潘剑 袁春蓓 +3 位作者 王松 俞海英 郭银燕 丁巧云 《肝脏》 2014年第5期342-343,共2页
目的:观察慢性丙型肝炎患者体内血清丙氨酸转氨酶(ALT)水平对聚乙二醇干扰素(PegIFNα-2a)联合利巴韦林(RBV)治疗丙型肝炎疗效的影响。方法68例慢性丙型肝炎患者按照血清 ALT 水平分为2组,ALT 异常组(A 组)36例,ALT 正常组... 目的:观察慢性丙型肝炎患者体内血清丙氨酸转氨酶(ALT)水平对聚乙二醇干扰素(PegIFNα-2a)联合利巴韦林(RBV)治疗丙型肝炎疗效的影响。方法68例慢性丙型肝炎患者按照血清 ALT 水平分为2组,ALT 异常组(A 组)36例,ALT 正常组(B 组)32例,均按体质量给予 PegIFNα-2a 联合 RBV 治疗,疗程为48周,比较2组治疗后丙型肝炎病毒转阴率及干扰素应答率。结果 A 组患者治疗后丙型肝炎病毒转阴率为93.8%,持久病毒学应答率为86.7%;B 组患者治疗后丙型肝炎病毒转阴率为94.4%,持久病毒学应答率为88.2%。两组患者 HCV RNA 应答率差异无统计学意义(P >0.05)。结论PegIFNα-2a 联合 RBV 对 ALT 正常及异常的慢性丙型肝炎患者均有较好疗效,血清 ALT 水平不影响干扰素治疗慢性丙型肝炎的疗效。 展开更多
关键词 丙型肝炎 丙氨酸转氨酶 抗病毒
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中蜂囊状幼虫病毒VP1基因的优化表达及其免疫原性分析 被引量:2
13
作者 张皓淳 宋立先 +4 位作者 万红霞 马鸣潇 曲祖乙 费东亮 钟义 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第5期468-474,共7页
目的原核表达优化的中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)的VP1基因,并分析其免疫原性。方法根据大肠埃希菌密码子偏爱性对野生型CSBV VP1(wt VP1)基因进行优化(opti VP1),将基因wt VP1和opti VP1分别克隆至p GEX-6P-1... 目的原核表达优化的中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)的VP1基因,并分析其免疫原性。方法根据大肠埃希菌密码子偏爱性对野生型CSBV VP1(wt VP1)基因进行优化(opti VP1),将基因wt VP1和opti VP1分别克隆至p GEX-6P-1原核表达系统,构建原核表达质粒p GEX-6P-wt VP1和p GEX-6P-opti VP1,分别转化E.coli BL21,经IPTG诱导表达,并对诱导温度、IPTG终浓度及诱导时间进行优化,诱导蛋白经Western blot鉴定;重组蛋白经GSH-琼脂糖凝胶层析纯化;分别用PBS、纯化的GST标签蛋白、纯化的重组蛋白及CSBV纯化病毒免疫小鼠,经间接ELISA法检验各组小鼠的血清抗体效价。结果优化后的VP1基因序列降低了密码子影响指数,提高了密码子适应指数;质粒p GEX-6P-wt VP1和p GEX-6P-opti VP1经鉴定证明构建正确;最佳诱导表达条件为:IPTG终浓度0.8 mmol/L,30℃,220 r/min诱导8 h;诱导表达蛋白占菌体总蛋白百分比由wt VP1菌株(5.49±0.30)%提高至opti VP1菌株(59.7±0.51)%,纯化后纯度可达0.5 mg/ml;兔抗GST标签抗体及兔抗CSBV血清均与优化后的重组蛋白发生特异性反应;重组蛋白组小鼠二免后可产生较高水平抗体,明显高于PBS组和GST标签蛋白组(P〈0.05)。结论通过密码子优化实现了CSBV结构基因VP1的高效表达,表达蛋白可诱导小鼠机体产生特异性抗体,具有良好的免疫原性,为探讨CSBV感染的分子发病机制和制备抗CSBV病毒的多克隆抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 中蜂囊状幼虫病毒 VP1结构蛋白 原核表达 免疫原性
加热蛋白溶菌酶能杀灭诺如病毒
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《中华生物医学工程杂志》 2015年第1期80-80,共1页
据新华报道,日本东京海洋大学的一个研究小组日前宣布,在实验中发现,加热处理鸡蛋蛋白含有的溶菌酶,能灭活诺如病毒。这是由于溶菌酶能破坏包裹诺如病毒基因的外壳。 诺如病毒会引发急性肠胃炎和食物中毒。这种病毒具有强大的感染... 据新华报道,日本东京海洋大学的一个研究小组日前宣布,在实验中发现,加热处理鸡蛋蛋白含有的溶菌酶,能灭活诺如病毒。这是由于溶菌酶能破坏包裹诺如病毒基因的外壳。 诺如病毒会引发急性肠胃炎和食物中毒。这种病毒具有强大的感染力,只要有10~100个病毒体进入人体,就会导致感染,目前还没有有效的抗病毒剂。 展开更多
关键词 诺如病毒 鸡蛋蛋白 加热处理 溶菌酶 杀灭 急性肠胃炎 病毒基因 食物中毒
parC检测在解脲支原体基因分型中的临床应用 被引量:5
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作者 刘璐 季育华 +4 位作者 赵缜 赵芳 曹国君 向茯芝 张伟红 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期 843-846,共4页
目的根据parC基因序列差异建立一种解脲支原体基因分型方法,以实现其两个生物型Uu(Ureaplasma urealyticum)和up(Ureaplasma parvum)的快速鉴定,便于临床常规应用。方法依据解脲支原体14个血清型标准株parC基因序列,设计可区分... 目的根据parC基因序列差异建立一种解脲支原体基因分型方法,以实现其两个生物型Uu(Ureaplasma urealyticum)和up(Ureaplasma parvum)的快速鉴定,便于临床常规应用。方法依据解脲支原体14个血清型标准株parC基因序列,设计可区分观和印的特异性引物与和探针;通过检测serovarl和serovat4标准株、50份解脲支原体临床分离株(Uu12株,Up38株),7种阴道常见分离菌以鉴定该方法的特异性;留取70例性病门诊非淋球菌性泌尿生殖道炎症患者和71例妇科正常体检者的标本,分别进行解脲支原体培养和基因分型鉴定,以比较两种方法的敏感性,并应用统计学分析Uu、Up在性病和正常人群中分布的差异。结果应用parC基因分型法成功将serovarl标准株、serovat4标准株、Uu和Up临床分离株鉴别,Uu、Up两生物群之间以及7种阴道常见菌均未出现非特异性扩增;基因分型方法的敏感性显著高于培养法(P〈O.05);在70例性病门诊患者中,Uu和Up的检出率分别为8.57%和61.40%,两者混合感染为24.30%;在7l例妇科体检人群中魄和唧检出率分别为7.04%和67.60%,两者混合感染为8.45%,性病门诊病人中解脲支原体感染率显著高于体检人群(P〈O.05),Uu和Up单纯感染在两群体中的分布差异无统计学意义(P〉O.05),而混合感染在性病门诊病人中显著增加(P〈O.05)。结论解脲支原体在性病患者中的感染率显著高于健康体检者,且混合感染在性病患者中明显增加,而Uu和Up单纯感染在两人群中分布差异无统计学意义,因此解脲支原体的致病可能与其不同基因型的混合感染有关。 展开更多
关键词 解脲支原体 基因分型 PARC
肠道腺病毒分离分型法通过鉴定 预览
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《医学信息》 1997年第2期4-5,共2页
肠道腺病毒分离分型法通过鉴定福州铁路分局卫生防疫部门应用酶切图谱分析技术对肠道腺病毒40、41型分型鉴定法,最近通过中国预防科学院和上海铁道医学院联合组织的鉴定,专家认为这是基础医学的一项突破。肠道腺病毒40、41... 肠道腺病毒分离分型法通过鉴定福州铁路分局卫生防疫部门应用酶切图谱分析技术对肠道腺病毒40、41型分型鉴定法,最近通过中国预防科学院和上海铁道医学院联合组织的鉴定,专家认为这是基础医学的一项突破。肠道腺病毒40、41型是婴幼儿急性腹泻的主要病因之一,由... 展开更多
关键词 肠道腺病毒 分型法 婴幼儿急性腹泻 铁路分局 防疫部门 暴发流行 临床观察 酶切图谱 基础医学 鉴定法
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甘谷县2009年手足口病流行病学特征分析
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作者 牛金虎 《中国疫苗和免疫》 CAS 2012年第4期301-301,共1页
为了解甘谷县手足口病(Hand,FootamdMouthDisease,HFMD)流行病学特征,现将2009年HFMD疫情资料分析如下。
关键词 手足口病 流行病学特征 分析
肠道病毒71型在Vero细胞中培养条件的优化 被引量:2
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作者 陈丽 江元翔 +2 位作者 夏德镇 杨志建 张高峡 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第1期105-108,共4页
目的优化肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)在Vero细胞中的培养条件。方法分别采用吸附法和直接接种法将EV71接种于Vero细胞中进行增殖,检测病毒滴度;选择最佳接种方法接种病毒,考察血清浓度、收毒方式、病毒接种量(MOI)和收毒时... 目的优化肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)在Vero细胞中的培养条件。方法分别采用吸附法和直接接种法将EV71接种于Vero细胞中进行增殖,检测病毒滴度;选择最佳接种方法接种病毒,考察血清浓度、收毒方式、病毒接种量(MOI)和收毒时间对病毒滴度的影响。结果将MOI为0.02~0.2的病毒直接接种于不含血清的培养基中,培养60 h,胞外收毒,可获得较高的病毒滴度。结论优化了EV71在Vero细胞中的培养条件,为EV71的大规模培养及其疫苗研发奠定了基础。 展开更多
关键词 肠道病毒71型 VERO细胞 病毒培养
重组人ADAM15去整合素区域蛋白与人血清白蛋白融合蛋白的表达及其活性 被引量:1
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作者 侯颖 储敏 +3 位作者 杜芳芳 戴惠云 陈蕴 金坚 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第11期1551-1555,共5页
目的在毕赤酵母中表达重组人ADAM15去整合素区域蛋白(recombinant human disintegrin of ADAM15,rhddADAM15)与人血清白蛋白融合蛋白(HSA-rhddADAM15-His),并测定其活性。方法以rhddADAM15基因为模板,PCR扩增rhddADAM15-His基因... 目的在毕赤酵母中表达重组人ADAM15去整合素区域蛋白(recombinant human disintegrin of ADAM15,rhddADAM15)与人血清白蛋白融合蛋白(HSA-rhddADAM15-His),并测定其活性。方法以rhddADAM15基因为模板,PCR扩增rhddADAM15-His基因,克隆入pBluescript—HSA质粒中,经酶切后与pPIC9k载体连接,构建重组表达质粒pPIC9k-HSA-rhddADAM15-His,将重组表达质粒转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达。表达产物经Blue.Sepharose、Ni^2+合层析及DEAE阴离子交换层析纯化,纯化产物经SDS—PAGE和Western blot鉴定后,利用划痕及SRB法检测其活性。结果重组表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确;融合蛋白HSA-rhddADAM15-His相对分子质量约76000,以可溶性分子形式存在于发酵液上清中;纯化的融合蛋白纯度约为75%,可与兔抗rhddADAM15多克隆抗体特异性结合;融合蛋白对小鼠黑色素瘤细胞B16的迁移具有明显的抑制作用,但对其增殖无明显抑制作用。结论成功在毕赤酵母GS115中表达并纯化了HSA-rhddADAM15-His蛋白,为其作用机理的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 ADAM15去整合素区域蛋白 人血清白蛋白 融合蛋白 毕赤酵母 表达
山东省脑膜炎和脑炎病例中埃可病毒6型的基因特征分析 被引量:7
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作者 林小娟 陶泽新 +6 位作者 刘桂芳 王敏 宋立志 王素婷 纪峰 王海岩 徐爱强 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期143-147,共5页
为分析山东省脑膜炎和脑炎病例中埃可病毒6型(Echovirus6,E6)的基因特征,本研究对山东省2007~2012年间采集的脑膜炎和脑炎病例脑脊液标本进行了病毒分离,阳性分离物采用血清学和分子生物学方法鉴定型别,与国内外其他E6进行同源... 为分析山东省脑膜炎和脑炎病例中埃可病毒6型(Echovirus6,E6)的基因特征,本研究对山东省2007~2012年间采集的脑膜炎和脑炎病例脑脊液标本进行了病毒分离,阳性分离物采用血清学和分子生物学方法鉴定型别,与国内外其他E6进行同源性分析,并构建VPl完整编码区系统进化树。本研究共分离到6株E6病毒,同源性分析显示:这6株分离株之间核苷酸和氨基酸同源性分别为78.6%~99.8%和95.5%~100.0%,与原型株(D’Amori)核苷酸和氨基酸同源性分别为为76.9%~78.4%和92.3%~95.1%。系统进化树分析显示:山东省E6分离株可分为A、B、C和D4个基因簇,这6株分离株属于A、B、D3个簇。山东省E6分离株之间存在较大的遗传差异,E6在山东的循环存在不同的传播链。 展开更多
关键词 脑膜炎和脑炎病例 埃可病毒6型 系统进化分析 基因 序列同源性
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