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豆茶决明冲剂含药血清对3T3-L1前脂肪细胞分化的抑制作用 被引量:1
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作者 李慧玲 刘天竹 +2 位作者 王丹 关云霞 张秋华 《中药药理与临床》 CSCD 北大核心 2018年第1期89-92,共4页
目的:探讨豆茶决明冲剂含药血清对前脂肪细胞增殖和分化的影响及其机制。方法:制备豆茶决明冲剂含药血清,培养3T3-L1前脂肪细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测豆茶决明冲剂含药血清(5%、10%、20%)对3T3-L1前脂肪细胞增殖过程的影响;... 目的:探讨豆茶决明冲剂含药血清对前脂肪细胞增殖和分化的影响及其机制。方法:制备豆茶决明冲剂含药血清,培养3T3-L1前脂肪细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测豆茶决明冲剂含药血清(5%、10%、20%)对3T3-L1前脂肪细胞增殖过程的影响;采用油红O脂肪染色观察及评价细胞分化情况;异丙醇萃取法、甘油三酯(TG)试剂盒检测分析不同浓度豆茶决明冲剂含药血清对3T3-L1前脂肪细胞分化过程中脂质合成的影响;采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测关键转录因子CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPβ、C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)mRNA表达水平;采用Western blot法检测关键转录因子C/EBPβ、C/EBPα、PPARγ蛋白表达水平。结果:与对照组(Control)相比,0.9g/kg豆茶决明冲剂含药血清(5%、10%、20%)对3T3-L1前脂肪细胞增殖无显著性影响;采用"鸡尾酒法"成功诱导前脂肪细胞成脂分化为成熟脂肪细胞,豆茶决明冲剂含药血清(5%、10%、20%)干预前脂肪细胞,分化后胞浆中脂滴数量显著性降低。脂滴中TG含量显著性下降,C/EBPβ、C/EBPα、PPARγmRNA和蛋白表达显著性降低。结论:豆茶决明冲剂含药血清对3T3-L1前脂肪细胞分化有抑制作用,其分子机制可能与下调PPARγ、C/EBPα和C/EBPβmRNA和蛋白表达相关。 展开更多
关键词 豆茶决明 3T3-L1前脂肪细胞 过氧化物酶体增殖物活化受体Γ 含药血清
组合性细胞因子与钙离子载体诱导急性髓系白血病细胞向树突状细胞分化中的作用 预览 被引量:1
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作者 吴军 单桂秋 +3 位作者 杨德懋 肖扬 王捷 王晓怀 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2006年第25期 66-69,共4页
目的:探讨钙离子载体能否诱导急性髓系白血病细胞分化为树突状细胞及其抗肿瘤免疫。方法:选择2004-01/09解放军广州军区广州总医院血液科住院的初诊或复发的急性髓系白血病患者7例。分离急性髓系白血病患者的急性髓系白血病细胞,在... 目的:探讨钙离子载体能否诱导急性髓系白血病细胞分化为树突状细胞及其抗肿瘤免疫。方法:选择2004-01/09解放军广州军区广州总医院血液科住院的初诊或复发的急性髓系白血病患者7例。分离急性髓系白血病患者的急性髓系白血病细胞,在体外给予钙离子载体100μg/L培养3-5d(钙离子载体组),或1000U/mL重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、1000U/mL白细胞介素4和500U/mL肿瘤坏死因子α培养7-10d(组合细胞因子组)。通过细胞形态的观察及细胞免疫表型的检测鉴定树突状细胞,用同种异体混合淋巴细胞实验及细胞毒实验检测树突状细胞的功能。结果:①形态学观察和免疫表型变化:钙离子载体组及组合细胞因子组诱导急性髓系白血病细胞均可获得具有典型树突状细胞形态及免疫表型的成熟树突状细胞,但钙离子载体组诱导的树突状细胞表面CD80,CD86,CD83,CD40,CD54等分子的表达较组合细胞因子组明显增高。②混合淋巴细胞反应和胞毒性T淋巴细胞活性:钙离子载体组所诱导的急性髓系白血病细胞刺激同种异体混合淋巴细胞反应的能力及激发细胞毒性T淋巴细胞的活力比组合细胞因子组强。结论:钙离子载体能高效诱导急性髓系白血病细胞分化成树突状细胞,比组合细胞因子诱导分化的树突状细胞功能更强。 展开更多
关键词 白血病 单核细胞 急性 细胞因子类 离子载体 树突细胞
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人血小板源性生长因子B基因的体外扩增以及克隆和鉴定 预览 被引量:2
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作者 罗文娟 王传富 +2 位作者 吕振华 刘湘萍 隋爱华 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2006年第25期 80-82,共3页
目的:自行构建人血小板源性生长因子B(PDGF-B)真核表达载体,为人血小板源性生长因子B基因转染真核细胞的实验研究及基因治疗奠定基础。方法:实验于2002-01/2005-01在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。①根据GeIlbank的人血... 目的:自行构建人血小板源性生长因子B(PDGF-B)真核表达载体,为人血小板源性生长因子B基因转染真核细胞的实验研究及基因治疗奠定基础。方法:实验于2002-01/2005-01在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。①根据GeIlbank的人血小板源性生长因子B的全长基因序列,设计合成一对附加BamHⅠ,XhoⅠ两个限制性内切酶酶切位点的特异性引物。②采用反转录聚合酶链反应从人胎盘mRNA中扩增出人血小板源性生长因子B基因片段,将其插入真核表达载体PcDNA4构建成重组真核表达载体PcDNA4/PDGF-B。⑧经测序鉴定后,再用双酶切和聚合酶链反应对插入片段进行分析和验证。结果:反转录-聚合酶链反应产物经琼脂糖电泳结果显示在预期位置有相对分子质量为725bp的特异性扩增带。②序列分析、双酶切和聚合酶链反应结果证实插入片段序列正确。结论:成功扩增出完整的人血小板源性生长因子B基因,构建了基因重组真核表达载体PcDNA4/PDGF-B。为人及动物细胞的转基因研究,在基因水平改变其遗传性状打下基础。 展开更多
关键词 血小板源性生长因子 基因 序列分析
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自撑式石墨烯水凝胶诱导人脂肪干细胞成骨分化的体外研究 预览 被引量:4
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作者 吕成奇 陆家瑜 +1 位作者 于佳 邹德荣 《口腔医学》 CAS 2014年第7期486-491,共6页
目的 通过体外实验评价本课题组制备的自撑式石墨烯水凝胶(self-sustaining graphene hydrogel,SGH)的骨诱导性能。方法 (1)将人脂肪干细胞(hADSC)接种于SGH和玻片表面,采用荧光显微镜图像计数检测ADSC在材料表面粘附能力;通过扫... 目的 通过体外实验评价本课题组制备的自撑式石墨烯水凝胶(self-sustaining graphene hydrogel,SGH)的骨诱导性能。方法 (1)将人脂肪干细胞(hADSC)接种于SGH和玻片表面,采用荧光显微镜图像计数检测ADSC在材料表面粘附能力;通过扫描电镜观察材料本身的表征及细胞在SGH表面生长的形态;(2)SGH组加入普通培养液作为实验组,玻片组加入成骨培养基作为诱导组,玻片组加入普通培养液作为对照;通过实时定量荧光PCR、ALP活性检测和茜素红半定量测定钙沉积评价各组hADSC的分化及成骨能力。结果 hADSC能以等同于在玻片表面的粘附效率和正常的形态在SGH表面生长。实验组细胞在不同时间点成骨相关基因的表达水平、ALP活性以及钙盐沉积量均显著高于对照组而略低于诱导组(P〈0.05)。结论 自撑式石墨烯水凝胶作为一种生物相容性材料,具有较强的诱导人脂肪干细胞成骨分化的能力。 展开更多
关键词 自撑式石墨烯水凝胶 人脂肪干细胞 成骨分化
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不同冻融条件对同种异体面神经许旺细胞活性的影响 预览 被引量:3
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作者 高志强 程勇泉 +5 位作者 冯国栋 查洋 亓放 姜鸿 吕威 沈鹏 《中华耳科学杂志》 CSCD 2008年第3期 253-259,共7页
目的探索一种可简单准确地调控离体面神经许旺细胞(SchwannCells,SC)活性的方法并观察含不同活性SC的面神经在同种异体移植中的效果。方法(1)将动物分为新鲜神经组(F组)、冻融一次组(FTⅠ组)和冻融五次组(FTⅤ组),定量测定冻... 目的探索一种可简单准确地调控离体面神经许旺细胞(SchwannCells,SC)活性的方法并观察含不同活性SC的面神经在同种异体移植中的效果。方法(1)将动物分为新鲜神经组(F组)、冻融一次组(FTⅠ组)和冻融五次组(FTⅤ组),定量测定冻融法对面神经SC活性的影响,每组3条面神经用钙黄绿素-乙酰羟甲基酯(Calcein-AM)染色,以共聚焦显微镜测定荧光强度,反映SC活性。(2)每组9只大鼠接受单侧同种异体面神经移植,术后2、4、8周各取3只大鼠的面神经移植物中段行髓鞘锇酸染色,观察轴突再生情况。结果平均荧光强度:F组为140.93±17.55/μm^2,FTⅠ组56.99±7.10/μm^2,FTⅤ组28.46±4.11/μm^2;术后第8周F组、FTⅠ组和FTⅤ组中段的轴突计数分别为225±41、357±76和303±51;术后第8周,FTⅠ组神经新生轴突分布较FTⅤ组和F组更为均匀,髓鞘厚度和轴突横截面积更大,髓鞘更为成熟。结论快速冻融法可以有效和准确地调控面神经SC的活性,冻融一次可以将神经SC活性降低到新鲜面神经的40%,而反复冻融五次可降低到20%;调控SC的数目可能影响同种异体面神经移植的效果。 展开更多
关键词 面神经 许旺细胞 活性 钙黄绿素-乙酰羟甲基酯 同种异体神经移植
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皮肤创伤修复的研究现状及前景 预览 被引量:2
6
作者 刘靖祎 叶茂昌 《口腔医学》 CAS 2010年第9期561-563,共3页
临床上对皮肤损伤后的修复要求不断提高,现有的方法已无法满足患者的需要,导致了多种修复方式的出现。随着组织工程皮肤及表皮干细胞等研究不断深入,促进了皮肤损伤修复领域的发展及延伸。现就这一领域的研究现状及前景作一综述。
关键词 皮肤损伤 创面愈合 组织工程皮肤
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重编程肝癌细胞系Huh7为多潜能干细胞样细胞
7
作者 张建 高海霞 +5 位作者 范丽 金华君 张敬磊 李林芳 刘韬 钱其军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期 603-607,共5页
目的重编程肝癌细胞系Huh7细胞为多潜能干细胞。方法包装携带有Oct4、Sox2、Nanog、Lin28基因的慢病毒,将包装好的病毒共感染Huh7细胞,诱导多潜能干细胞样克隆细胞。采用碱性磷酸酶染色、免疫荧光、实时定量RT-PCR等方法对诱导出的细胞... 目的重编程肝癌细胞系Huh7细胞为多潜能干细胞。方法包装携带有Oct4、Sox2、Nanog、Lin28基因的慢病毒,将包装好的病毒共感染Huh7细胞,诱导多潜能干细胞样克隆细胞。采用碱性磷酸酶染色、免疫荧光、实时定量RT-PCR等方法对诱导出的细胞进行鉴定,并采用畸胎瘤实验鉴定细胞的分化潜能。结果 Huh7细胞被重编程为多潜能干细胞样细胞(命名为iHuh7),碱性磷酸酶染色呈阳性,免疫荧光实验证明其表达多潜能因子Oct4和TRA-1-60,实时定量RT-PCR实验证明其高水平表达内源性的多潜能相关基因及干细胞特异的microRNAs,体内分化实验结果表明iHuh7可以形成畸胎瘤。结论通过携带4种多潜能基因Oct4、Sox2、Nanog、Lin28的慢病毒介导的重编程,Huh7细胞可以被诱导为多潜能干细胞样细胞。 展开更多
关键词 肝细胞癌 诱导多潜能干细胞 慢病毒 重编程
脂质体介导胰岛素样生长因子-1基因修饰骨髓间充质干细胞成软骨分化 预览 被引量:6
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作者 付勤 宫树一 +1 位作者 杨礼庆 贾长青 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期 694-698,共5页
目的脂质体介导IGF-1目的基因转染骨髓间充质干细胞(MSCS),并研究对MSCS成软骨分化的特异性细胞外基质的影响。方法以密度梯度离心结合全骨髓培养法获得纯化骨髓间充质干细胞(MSCs),经流式细胞仪检测,细胞表面标志CD29和CD44表... 目的脂质体介导IGF-1目的基因转染骨髓间充质干细胞(MSCS),并研究对MSCS成软骨分化的特异性细胞外基质的影响。方法以密度梯度离心结合全骨髓培养法获得纯化骨髓间充质干细胞(MSCs),经流式细胞仪检测,细胞表面标志CD29和CD44表达阳性,但是CD14和CD45表达阴性。采用脂质体介导法将重组真核表达质粒pcDNA3.1-IGF-1转染MSCs,对转染后骨髓间充质干细胞的Ⅱ型胶原(ColⅡ)的表达行Western blot检测。结果获得纯度较高的兔骨髓间充质干细胞(MSCs);脂质体为介导将全长兔IGF-1目的基因导入MSCs,Western blot鉴定转染成功,转染后的MSCs较未转染MSCs成软骨分化特异性细胞外基质ColⅡ、蛋白表达明显增强。结论以脂质体介导法可以将IGF-1目的基因转染骨髓间充质干细胞,转染后成软骨分化的特异性细胞外基质增多。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 基因转染 细胞外基质
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利用原子力显微镜峰值力定量测量模式分析人间充质干细胞早期分化的力学表型 被引量:1
9
作者 刘知晓 张金金 +3 位作者 王鑫艳 陈峰 胡钧 吕军鸿 《第二军医大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第10期1261-1266,共6页
目的建立通过力学表型来灵敏反映人间充质干细胞分化早期微小力学性质变化的技术。方法使用基于原子力显微镜峰值力定量纳米力学作图(peak force quantitative nanomechanical mapping,PF QNM)技术,测量在不同浓度氯化锂诱导下人间充质... 目的建立通过力学表型来灵敏反映人间充质干细胞分化早期微小力学性质变化的技术。方法使用基于原子力显微镜峰值力定量纳米力学作图(peak force quantitative nanomechanical mapping,PF QNM)技术,测量在不同浓度氯化锂诱导下人间充质干细胞的力学变化过程。结果4 mmol/L和30 mmol/L氯化锂处理干细胞48 h后其纳米力谱就有显著的差异;但要到72 h之后,平均杨氏模量才能区分不同浓度氯化锂处理所导致的差别。结论纳米力谱比平均杨氏模量更能反映干细胞分化早期的力学性质变化。基于纳米力谱的力学表型可以作为物理生物学标记来鉴定干细胞的早期分化。 展开更多
关键词 间质干细胞 力学表型 纳米力谱 细胞分化
骨髓间充质干细胞的分离鉴定及向血管内皮细胞诱导分化过程中microRNA126的表达
10
作者 吴弘 徐晓晶 +3 位作者 吴峰 储国俊 赵仙先 秦永文 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1350-1354,共5页
目的建立分离大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)及将其定向诱导分化为血管内皮细胞(endothelialcells,EDCs)的方法,并通过观察microRNAl26的表达规律初步探索其在定向分化中的调控作用。方法通过反复贴壁及人工... 目的建立分离大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)及将其定向诱导分化为血管内皮细胞(endothelialcells,EDCs)的方法,并通过观察microRNAl26的表达规律初步探索其在定向分化中的调控作用。方法通过反复贴壁及人工分选方法进行大鼠骨髓MSCs的体外分离纯化及扩增,运用免疫荧光法检测MSCs中CD34、CDl05和CD73的表达。应用MEF诱导分化培养液将MSCs定向诱导分化为EDCs,采用qRT—PCR法检测细胞诱导分化过程不同时间点EDCs特征基因CD34、血管内皮钙黏蛋白(VE—cadherin)及调控小RNA分子microRNAl26的表达。结果经分离纯化的骨髓MSCsCD34呈阴性表达,CDl05呈强阳性表达,CD73呈阳性表达,证实骨髓MSCs分离成功,且细胞均一性较好,占细胞总数的90%以上。MSCs定向诱导为EDCs早期分化过程中,在诱导前期第1~4天,VE-cadherin和CD34基因呈阴性表达;第5~6天VE-cadherin和CD34表达显著;第7~9天,VE-cadherin呈持续阳性表达,而CD34于第7天下降,第8~9天又呈阳性表达。microRNAl26在分化过程中的表达趋势与CD34一致。结论成功建立了骨髓MSCs的分离方法及定向诱导分化为EDCs的方法;microRNAl26在MSCs向EDCs的定向分化过程中可能起一定的调控作用。 展开更多
关键词 骨髓 间充质干细胞 内皮细胞 细胞分化 microRNA126
电穿孔法转染人原代成纤维细胞条件的优化 被引量:3
11
作者 张放 周载鑫 +2 位作者 张丹丹 房贺 刘善荣 《第二军医大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第10期1311-1314,共4页
目的通过优化电穿孔转染条件,探讨影响人原代成纤维细胞电转染效率和转染后细胞存活率的因素,筛选出人原代成纤维细胞的最佳电转染条件。方法通过改变脉冲电压、脉冲次数和质粒浓度等条件,将含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的质粒pEGF... 目的通过优化电穿孔转染条件,探讨影响人原代成纤维细胞电转染效率和转染后细胞存活率的因素,筛选出人原代成纤维细胞的最佳电转染条件。方法通过改变脉冲电压、脉冲次数和质粒浓度等条件,将含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的质粒pEGFPN1电穿孔转染入人原代成纤维细胞。利用锥虫蓝染色检测细胞存活情况,采用流式细胞术检测转染24h后的转染效率。结果在低电压模式下,脉冲电压320V、质粒浓度为20μg/mL、脉冲1次时,人原代成纤维细胞的电转染效果最理想,转染效率达到(42.53±0.63)%,细胞存活率为(74.30±3.01)%。结论优化了人原代成纤维细胞的电转染条件,在保证细胞较高存活率的前提下提高了人原代成纤维细胞的电转染效率,为后续基因功能的研究打下基础。 展开更多
关键词 电穿孔 成纤维细胞 细胞存活 转染效率 脉冲
烧伤血清对3T3-L1前脂肪细胞增殖活性和成脂分化能力的影响
12
作者 庄淑波 柴家科 +5 位作者 郁永辉 段红杰 刘玲英 樊军 侯玉森 王一贺 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期763-767,共5页
目的通过观察大鼠烧伤血清对3T3-L1前脂肪细胞增殖活性和成脂分化能力的影响,探索烧伤对脂肪代谢的影响。方法选择成年雄性SD大鼠48只,随机分为假伤组及烧伤1、4、7、14、21d组,每组8只。各烧伤组大鼠背部制备30%总体表面积的Ⅲ度... 目的通过观察大鼠烧伤血清对3T3-L1前脂肪细胞增殖活性和成脂分化能力的影响,探索烧伤对脂肪代谢的影响。方法选择成年雄性SD大鼠48只,随机分为假伤组及烧伤1、4、7、14、21d组,每组8只。各烧伤组大鼠背部制备30%总体表面积的Ⅲ度烫伤模型,分别于对应时间点收集血清;假伤组不作处理,取血清作为正常对照。采用各组血清培养3T3-L1前脂肪细胞,MTT法检测细胞增殖活性,选择增殖能力最低组血清作为后续刺激血清。取3T3-L1前脂肪细胞分别采用假伤血清(A组)、烧伤血清(B组)、假伤血清成脂诱导(C组)、烧伤血清成脂诱导(D组)培养。倒置显微镜下观察细胞生长情况,诱导培养7d后行油红0染色,进行脂肪细胞计数并测量吸光度(A)值,实时定量PCR及Westernblot检测过氧化物酶体增殖物激活受体1,(preoxisomeproliferator-activatedreceptorγ,PPAR-γ)和脂蛋白脂酶(1ipoproteinlipase,LPL)基因及蛋白表达。结果MTT检测示,与其余各组比较,烧伤4、7d组细胞增殖能力显著降低(P〈0.05),其中7d组最低(P〈0.05),取烧伤7d组大鼠血清作为后续刺激血清。倒置显微镜观察示,培养后A、B组细胞形态无明显变化;诱导培养后C、D组细胞呈脂肪细胞样变,其中C组最显著。油红O染色示,C组细胞染色呈阳性,D组为弱阳性,余均为阴性;脂肪细胞计数以及彳值比较示,A组高于B组、C组高于D组,差异均有统计学意义(P〈0.05)。实时定量PCR及Westernblot检测示,B组PPAR-γ基因相对表达量明显低于A组(P〈0.05),但LPL基因相对表达量差异无统计学意义(P〉0.05);PPAR以LPL蛋白表达量比较差异无统计学意义(P〉0.05)。D组PPAR-γ、LPL基因及蛋白表达量均显著优于c组(P〈0.05)。结论大鼠烧伤7d血清可致3T3-L1前脂肪细胞成脂分化能力下降。 展开更多
关键词 烧伤血清 3T3-Ll前脂肪细胞 成脂分化 大鼠
大鼠颏舌肌成肌细胞的分离和鉴定 预览
13
作者 丁王辉 陈小燕 +1 位作者 李文 施洁珺 《口腔医学》 CAS 2015年第7期521-524,共4页
目的建立大鼠颏舌肌成肌细胞体外培养方法,观察成肌细胞生物学特性。方法取新生3 d内SD大鼠,机械法分离颏舌肌组织,应用胶原酶、胰蛋白酶两步消化法获得成肌细胞,差速贴壁法纯化细胞,细胞计数法绘制生长曲线,α-sarcomeric actin免疫细... 目的建立大鼠颏舌肌成肌细胞体外培养方法,观察成肌细胞生物学特性。方法取新生3 d内SD大鼠,机械法分离颏舌肌组织,应用胶原酶、胰蛋白酶两步消化法获得成肌细胞,差速贴壁法纯化细胞,细胞计数法绘制生长曲线,α-sarcomeric actin免疫细胞化学鉴定细胞来源。结果成功获得大鼠颏舌肌成肌细胞,超过90%的细胞α-sarcomeric actin染色阳性,证明其为骨骼肌细胞来源。体外培养的成肌细胞呈现良好的增殖和分化能力,在生长培养基中细胞的倍增时间为4~5d,高密度时细胞相互接触融合形成肌管。结论消化法与差速贴壁法结合能够获得足量、纯净的颏舌肌成肌细胞,所得细胞增殖力强,能表达骨骼肌特异性蛋白。 展开更多
关键词 颏舌肌 成肌细胞 酶消化法 差速贴壁法 肌管
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猪骨髓来源内皮祖细胞体外培养条件的优化
14
作者 吴建国 罗天航 +4 位作者 中晓军 周虹 薛绪潮 毕建威 方国恩 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期964-969,共6页
目的 优化选择猪骨髓来源内皮祖细胞(endothelial progenitor cell, EPC)体外培养条件,为后续研究奠定基础。方法 从猪髂骨抽取骨髓,利用密度梯度离心法分离得到单个核细胞(MNC),体外培养分化为EPC。在其他培养条件相同的前提下,分... 目的 优化选择猪骨髓来源内皮祖细胞(endothelial progenitor cell, EPC)体外培养条件,为后续研究奠定基础。方法 从猪髂骨抽取骨髓,利用密度梯度离心法分离得到单个核细胞(MNC),体外培养分化为EPC。在其他培养条件相同的前提下,分别比较不同的细胞接种密度(2×103/cm2、5×103/cm2、1×104/cm2、2×104/cm2),不同基础培养液(EGM、M199、DMEM),不同FBS浓度(5%、10%、20%、30%),以及血管内皮细胞生长因子(VEGF)与不同细胞因子/[碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、基质细胞衍生因子(SDF)、胰岛素样生长因子(IGF)和表皮生长因子(EGF)/]组合(VEGF+bFGF、VEGF+SDF、VEGF+bFGF+SDF、VEGF+bFGF+IGF+EGF、VEGF+bFGF+SDF+IGF)对EPC细胞增殖及迁徙功能的影响;采用细胞形态观察、双荧光染色法及免疫细胞化学染色方法对培养的EPC进行鉴定。结果 猪骨髓EPC以1×104/cm2密度接种在盛有M199,并添加10% FBS和VEGF+bFGF+SDF+IGF细胞因子的培养液时,细胞的增殖能力和迁徙率最高。每组细胞经结合Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-ac-LDL)和FITC标记的荆豆凝集素(FITC-UEA-1)双色荧光染色鉴定双阳性率〉76%,免疫细胞化学检测CD133、CD34、KDR均为阳性。结论 通过优化猪骨髓来源EPC的体外培养条件,可使细胞数量增多及功能增强,为后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 内皮祖细胞 细胞培养技术 骨髓
联合单层培养和三维培养的两步法培养软骨细胞 被引量:2
15
作者 郭尚春 袁霆 +4 位作者 芮碧宇 陈欣 孙辉 张长青 曾炳芳 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期970-974,共5页
目的 联合单层培养和三维培养方法,探讨软骨细胞培养的理想方法。方法 第一步先将软骨细胞进行常规单层培养扩增,第二步再将单层培养第4代软骨细胞包裹于海藻酸钠水凝胶中进行三维培养。通过倒置显微镜定期观察软骨细胞的形态变化;应... 目的 联合单层培养和三维培养方法,探讨软骨细胞培养的理想方法。方法 第一步先将软骨细胞进行常规单层培养扩增,第二步再将单层培养第4代软骨细胞包裹于海藻酸钠水凝胶中进行三维培养。通过倒置显微镜定期观察软骨细胞的形态变化;应用锥虫蓝染色和LIVE/DEADR ○ Kit试剂盒检测软骨细胞的活力和细胞增殖;通过组织化学甲苯胺蓝特异性染色检测细胞外基质的形成变化。结果 单层培养3代之前软骨细胞能保持正常的组织学形态,三维培养能使去分化的4代软骨细胞逐渐恢复并持续维持正常的软骨组织表型。单层培养的软骨细胞的4代以前的细胞活力保持在90%左右,第4代以后开始下降;三维培养的软骨细胞活力都保持在90%以上。在细胞增殖率方面,单层培养6代软骨细胞(28 d)总的倍增率是同期三维培养的44倍。单层培养的软骨细胞4代之后,其细胞外基质平均染色强度降低(P〈0.05);三维培养21 d和28 d后的软骨细胞外基质表达强度与7 d时相比升高,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论 先通过单层培养使软骨细胞适宜扩增,然后将其转入水凝胶中三维培养恢复退变的软骨组织表型,可达到既扩增自体软骨细胞数目同时又保持正常组织表型的目的,两步培养法是一种较理想的软骨细胞培养方法。 展开更多
关键词 软骨细胞 细胞培养 表型 细胞增殖 海藻酸钠
组织微环境中细胞外囊泡的分离纯化及其理化特征
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作者 黎力 曾韬 +1 位作者 叶誉胜 王越 《第二军医大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第7期726-730,共5页
目的通过对比不同方法抽提的不同组织中的细胞外囊泡的差异和特点,探寻组织中细胞外囊泡的分离纯化方法,为组织微环境中细胞外囊泡的功能和机制研究奠定基础。方法采用胶原酶消化法对肾脏、前列腺、皮肤和胃4种组织进行脱细胞处理,制备... 目的通过对比不同方法抽提的不同组织中的细胞外囊泡的差异和特点,探寻组织中细胞外囊泡的分离纯化方法,为组织微环境中细胞外囊泡的功能和机制研究奠定基础。方法采用胶原酶消化法对肾脏、前列腺、皮肤和胃4种组织进行脱细胞处理,制备细胞外基质悬液,分别采用Qiagen外泌体抽提试剂盒、SBI外泌体抽提试剂盒及超速离心法(UC)抽提细胞外囊泡,然后使用ATS粒度分析仪q Nano技术检测细胞外囊泡的粒径和浓度等。结果采用3种方法对4种组织的细胞外基质悬液进行抽提,均可获得纯化的细胞外囊泡,主要囊泡类型为外泌体。不同组织中细胞外囊泡粒径分布存在一定的差异,但粒径大小差异无统计学意义(P〉0.05)。等质量组织中均以UC抽提得到的细胞外囊泡浓度最高,与另外2种方法相比差异有统计学意义(P〈0.01);不同组织间比较,以前列腺和肾脏获得的细胞外囊泡浓度较高,而胃和皮肤较低,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论不同组织中均以UC抽提得到的细胞外囊泡浓度最高;不同类型组织微环境中存在的细胞外囊泡的浓度有差异。 展开更多
关键词 细胞外囊泡 外泌体 组织微环境 纯化
茶黄素对人骨髓基质干细胞的成骨诱导作用 预览 被引量:1
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作者 尚希福 路玉峰 +5 位作者 张文志 张梅 贺瑞 姚刚 胡飞 曾建学 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第19期 7-9,共3页
目的探讨茶黄素对体外培养人骨髓基质干细胞(BMSCs)的成骨诱导作用及其能力。方法将第二代人BMSCs分为茶黄素组、对照组,茶黄素组加入浓度为10 mmol/L茶黄素,对照组不干预。对比观察两组干预后细胞形态,钙结节、碱性磷酸酶(ALP)、... 目的探讨茶黄素对体外培养人骨髓基质干细胞(BMSCs)的成骨诱导作用及其能力。方法将第二代人BMSCs分为茶黄素组、对照组,茶黄素组加入浓度为10 mmol/L茶黄素,对照组不干预。对比观察两组干预后细胞形态,钙结节、碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原及骨钙素(OCN)免疫组化染色结果,并检测各组4、8、12、16 d各时点ALP、OCN活性。结果茶黄素组钙结节、ALP、Ⅰ型胶原及OCN免疫组化染色均呈阳性,对照组均为阴性;茶黄素组各时点ALP、OCN活性均高于对照组(P均〈0.05)。结论茶黄素可促进人BMSCs向成骨细胞分化。 展开更多
关键词 人骨髓基质干细胞 成骨细胞 诱导 茶黄素 骨钙素
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牙髓干细胞在修复牙槽骨缺损的组织学观察 预览 被引量:5
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作者 吴中明 木合塔尔·霍加 +1 位作者 买布拜木·买买提依明 张晓莉 《石河子大学学报:自然科学版》 CAS 2015年第1期107-111,共5页
为探索牙髓干细胞(DPSCs)在兔牙槽骨缺损再生修复中的成骨效果,为临床上骨缺损的修复提供一定的理论基础。采用从新西兰幼兔前牙及磨牙牙髓组织中分离DPSCs进行体外培养;16只实验新西兰兔随机分为空白组,实验组两组,在动物下颌无牙区... 为探索牙髓干细胞(DPSCs)在兔牙槽骨缺损再生修复中的成骨效果,为临床上骨缺损的修复提供一定的理论基础。采用从新西兰幼兔前牙及磨牙牙髓组织中分离DPSCs进行体外培养;16只实验新西兰兔随机分为空白组,实验组两组,在动物下颌无牙区牙槽骨人工制备10 mm×4 mm×4 mm骨缺损,其中空白组骨缺损区填入浸有PBS溶液的0.25 g Bio-oss骨粉,实验组加入1×108/L的DPSCs和0.25 g Bio-oss骨粉;于术后第6周同期处死动物,无菌获取牙槽骨组织,制作石蜡切片,HE染色及免疫组化检测骨涎蛋白(BSP)。结果显示:光镜下传代培养的细胞与原代培养的细胞形态基本一样,幼兔牙髓细胞具有体外多次传代增殖能力;术后6周,空白组纤维结缔组织较稀疏,牙槽嵴塌陷,唇舌侧牙槽骨凹陷吸收,HE染色可见少量红细胞,未见明显新骨生成,骨涎蛋白免疫组化成弱阳性表现。实验组牙槽骨缺损区愈合良好,牙槽嵴饱满,可见部分未吸收骨粉颗粒,被新生组织包裹,新生组织与骨缺损周围嵌入良好,上附有部分纤维结缔组织,唇舌侧牙槽骨未见明显凹陷,大部分牙槽嵴宽度及高度与邻牙基本相平,骨缺损区质地较韧,HE染色提示炎性渗出明显吸收,可见新生骨组织,骨缺损区周围有大量成骨细胞,骨小梁较空白组致密,骨涎蛋白免疫组化成强阳性表达,与空白组有明显差异。由此可知,牙髓干细胞有向成骨分化能力,促进牙槽骨缺损的修复。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 骨缺损 修复
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前脂肪细胞与蚕丝支架体外复合培养的实验研究 预览 被引量:7
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作者 谢丽娜 刘秀华 《淮海医药》 CAS 2007年第1期 6-7,54,共3页
目的观察蚕丝对前脂肪细胞吸附作用及蚕丝对前脂肪细胞形态和功能的影响,为脂肪组织工程支架选择提供依据。方法从家蚕蚕茧中抽丝所得的原料蚕丝,经胰蛋白酶消化后与原料蚕丝分别制成三雏支架,将前脂肪细胞制成细胞悬液接种在支架上... 目的观察蚕丝对前脂肪细胞吸附作用及蚕丝对前脂肪细胞形态和功能的影响,为脂肪组织工程支架选择提供依据。方法从家蚕蚕茧中抽丝所得的原料蚕丝,经胰蛋白酶消化后与原料蚕丝分别制成三雏支架,将前脂肪细胞制成细胞悬液接种在支架上,倒置显微镜和扫描电镜观察前脂肪细胞的吸附和生长。结果在消化后的蚕丝三维支架可看见前脂肪细胞1~2d后完全贴壁。培养3~7d细胞生长增殖十分活跃,两周时,蚕丝支架网眼充满前脂肪细胞,扫描电镜见细胞与支架紧密贴附适度伸展并有基质分泌。结论蚕丝对前脂肪细胞具有良好的吸附作用,并能维持前脂肪细胞正常形态和功能,蚕丝是前脂肪细胞立体培养时的天然支架。 展开更多
关键词 3T3-L1前脂肪细胞 细胞培养 蚕丝 组织工程
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利培酮抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化 预览
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作者 张高丽 张弋 +1 位作者 于海川 张新雅 《国际检验医学杂志》 CAS 2016年第15期2108-2109,共2页
目的研究利培酮对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。方法采用经典的激素鸡尾酒法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞,油红O染色观察。向诱导培养基中加入利培酮研究其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。结果用激素鸡尾酒法成功地将3T3-L... 目的研究利培酮对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。方法采用经典的激素鸡尾酒法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞,油红O染色观察。向诱导培养基中加入利培酮研究其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。结果用激素鸡尾酒法成功地将3T3-L1前脂肪细胞诱导为成熟的脂肪细胞。0.1、1、10μmol/L的利培酮均能够抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化。结论利培酮能够抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化。 展开更多
关键词 利培酮 3T3-L1细胞 分化
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