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环介导等温扩增技术检测化妆品中铜绿假单胞菌的研究 预览
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作者 文霞 刘静霞 +2 位作者 张淑瑶 杨秀茳 谢小保 《工业微生物》 CAS 2018年第5期37-41,共5页
本文建立了环介导等温扩增技术(Loop—mediatedisothermalamplification,LAMP)快速检测化妆品中铜绿假单胞菌的方法。采用铜绿假单胞菌外膜蛋白opd基因保守序列引物,评价检测铜绿假单胞菌灵敏度和特异性,并与普通PCR相比,检测人... 本文建立了环介导等温扩增技术(Loop—mediatedisothermalamplification,LAMP)快速检测化妆品中铜绿假单胞菌的方法。采用铜绿假单胞菌外膜蛋白opd基因保守序列引物,评价检测铜绿假单胞菌灵敏度和特异性,并与普通PCR相比,检测人工污染样品中的铜绿假单胞菌。结果显示,LAMP检测铜绿假单胞菌的灵敏度为62.5pg/μL,而且特异性高,人工污染样品中的检出限为10^2cfu/mL,比PCR检测灵敏度高10倍。该方法具有灵敏度高、特异性好、操作简便、耗时短,可用于化妆品中铜绿假单胞菌的快速检测。 展开更多
关键词 化妆品 环介导等温扩增技术 铜绿假单胞菌
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假单胞菌脂肪酶对牛油脂的水解 预览
2
作者 Kosu.,Y. 胡铁民 《应用微生物》 1989年第1期 47-48,共2页
关键词 假单胞菌 脂肪酶 牛油脂水解
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三株假单胞菌低温噬菌体生物学特性比较研究 预览 被引量:1
3
作者 李明源 王继莲 +2 位作者 任羽 季秀玲 古丽巴哈尔·萨吾提 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期123-130,共8页
对分离自东帕米尔高原喀拉库勒湖和云南明永冰川的3株假单胞菌(Pseudomonas)低温噬菌体Muztag BP1、Muztag BP2和MYBP2A-15的生物学特征开展研究。以双层平板法培养噬菌体,观察噬菌斑特征,采用透射电镜观察经磷钨酸负染的噬菌体颗粒形... 对分离自东帕米尔高原喀拉库勒湖和云南明永冰川的3株假单胞菌(Pseudomonas)低温噬菌体Muztag BP1、Muztag BP2和MYBP2A-15的生物学特征开展研究。以双层平板法培养噬菌体,观察噬菌斑特征,采用透射电镜观察经磷钨酸负染的噬菌体颗粒形态,比较分析了3株噬菌体的增殖温度、热稳定性、p H稳定性、化学试剂敏感性及一步生长曲线等特性。结果表明,3株噬菌体宿主虽然同属假单胞菌,但形态及生物学特征明显不同。3株噬菌体均属头尾型结构,其中Muztag BP1、MYBP2A-15头部呈正多面体对称,直径约68 nm和74 nm,具收缩尾,长度分别约130 nm、160 nm,初步鉴定为肌尾噬菌体科(Myoviridae);Muztag BP2头部直径约82 nm,尾管细长,约640 nm,归属为长尾噬菌体科(Siphoviridae);3株噬菌体均具热不稳定性,对紫外有一定耐受性;Muztag BP1对氯仿、异丙醇和乙醚极其敏感,推断其核衣壳外含有脂膜包被,Muztag BP2和MYBP2A-15对氯仿、异丙醇和乙醚不敏感,其核衣壳外无脂质成分;一步生长曲线显示3株噬菌体的潜伏期、裂解期和裂解量各异。 展开更多
关键词 喀拉库勒湖 假单胞菌 低温噬菌体
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类产碱假单胞菌耐热碱性脂肪酶基因的克隆 预览 被引量:7
4
作者 翁丽星 胡志浩 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期 434-437,共4页
将类产碱假单胞菌总DNA经Sau3Ai7部分酶解后的35-50kbDNA片段与经BamHI线性化及CIAP处理过的粘粒pIJ285连接,以大肠杆菌LE392为受体,构建类产碱假单胞菌的基因文库。通过三丁酸甘油酯平板和... 将类产碱假单胞菌总DNA经Sau3Ai7部分酶解后的35-50kbDNA片段与经BamHI线性化及CIAP处理过的粘粒pIJ285连接,以大肠杆菌LE392为受体,构建类产碱假单胞菌的基因文库。通过三丁酸甘油酯平板和橄榄油平板法检测克隆子,获得一株具有耐热性脂肪酶活性的菌株LE392,随后将PHZ1401上的外源DNA片段进行亚克隆。从而获得了具有脂肪酶活性的菌株HB101和HB101,它们分别携 展开更多
关键词 类产碱假单胞菌 耐热碱性脂肪酶 基因克隆
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假单胞菌质粒ND1.866性质的初步研究 预览 被引量:3
5
作者 温廷益 刘运德 《天津医科大学学报》 1997年第4期 14-16,共3页
通过对假单胞菌质粒ND1.866进行限制性内切酶分析,确定了质粒的分子量为38.10Kb。经EcoR1消化ND1.866产生4个酶切片段,经HindⅢ消化产生6个酶切片段,经SalⅠ消化产生6个酶切片段,经PstⅠ消... 通过对假单胞菌质粒ND1.866进行限制性内切酶分析,确定了质粒的分子量为38.10Kb。经EcoR1消化ND1.866产生4个酶切片段,经HindⅢ消化产生6个酶切片段,经SalⅠ消化产生6个酶切片段,经PstⅠ消化产生11个酶切片段。 展开更多
关键词 弯曲假单胞菌 ND1.866 质粒
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沼泽红假单胞菌染色体的提取 预览 被引量:3
6
作者 孙克非 郑平 《生物技术》 CAS CSCD 2000年第3期 47-48,共2页
关键词 沼泽红假单胞菌 染色体 提取
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荧光假单胞菌与植物病害生物防治 预览 被引量:14
7
作者 杨合同 王少杰 许勃 《山东科学》 CAS 1993年第3期 50-56,共7页
荧光假单胞菌对多种植物病害具有防治作用,它首先在植物根际定殖,然后靠噬铁素对铁离子(Fe~(3+))的竞争和抗生素的拮抗作用抑制病原菌的生长发育,保护植物体免受病菌危害。荧光菌在根际的定殖能力与它同根系分泌物的凝集能力有关,与它... 荧光假单胞菌对多种植物病害具有防治作用,它首先在植物根际定殖,然后靠噬铁素对铁离子(Fe~(3+))的竞争和抗生素的拮抗作用抑制病原菌的生长发育,保护植物体免受病菌危害。荧光菌在根际的定殖能力与它同根系分泌物的凝集能力有关,与它在根表的短期不可逆吸附也有一定关系。荧光菌菌剂研究较多,目前最好的可贮存一年。虽然荧光菌已成功地用于一些病害的生物防治,但仍有许多问题有待解决。 展开更多
关键词 荧光假单胞菌 噬铁素 植物病害
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铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药相关基因的筛选 被引量:4
8
作者 张悦 梁文 +5 位作者 祁婧 宁唤唤 郭俏 陈林 段康民 沈立新 《中国科学:生命科学》 CSCD 北大核心 2014年第11期1159-1167,共9页
为了在基因组水平筛选获得铜绿假单胞菌PAO1对碳青霉烯类抗生素耐药相关基因,本研究通过构建PAO1转座突变体文库、筛选对亚胺培南、美罗培南和比亚培南耐药及敏感突变株;通过随机PCR、核苷酸测序及序列比对的手段,确定了突变体中转座子... 为了在基因组水平筛选获得铜绿假单胞菌PAO1对碳青霉烯类抗生素耐药相关基因,本研究通过构建PAO1转座突变体文库、筛选对亚胺培南、美罗培南和比亚培南耐药及敏感突变株;通过随机PCR、核苷酸测序及序列比对的手段,确定了突变体中转座子的插入位点及其破坏的基因,获得了48个PAO1中对碳青霉烯类抗生素耐药和敏感相关的基因,其中27个基因突变后表现为耐药性增强,21个基因突变后表现为药物敏感性增强.本实验筛选获得的48个基因中有5个与Alvarez-Ortega和Dotsch等人筛选的基因重复.通过对PA0011,PA0667及PA3901进行基因敲除及遗传互补,进一步确证这3个基因均与PAO1对碳青霉烯类的耐药性相关.本次筛选发现了38个新的与碳青霉烯类耐药相关的基因,其中包括13个class4类基因.对这些新基因的进一步研究,不仅有利于全面了解铜绿假单胞菌的耐药机制及其调控网络,而且有利于药物作用靶点的发现,为有效治疗铜绿假单胞菌的感染提供新思路. 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 碳青霉烯类抗生素 碳青霉烯类耐药相关 基因
沼泽红假单胞菌固氮酶活性的调节 预览 被引量:1
9
作者 张军 张肇铭 《山西大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 1994年第2期 205-208,共4页
本文研究了沼泽红假单胞菌谷氨酰胺合成(简称GS)对其固氮酶活性的调节。外源氨的加入迅速抑制固氮酶活性,同时GS被高度腺苷酰化,随着氨的消耗,固氮酶活性逐渐恢复,GS腺苷酰化程度也逐渐降低。GS专一的不可逆抑制剂甲硫氨... 本文研究了沼泽红假单胞菌谷氨酰胺合成(简称GS)对其固氮酶活性的调节。外源氨的加入迅速抑制固氮酶活性,同时GS被高度腺苷酰化,随着氨的消耗,固氮酶活性逐渐恢复,GS腺苷酰化程度也逐渐降低。GS专一的不可逆抑制剂甲硫氨酸亚砜亚胺(简称MSX)可以解除氨和谷氨酰胺对固氮酶的抑制作用。 展开更多
关键词 红假单胞菌 固氮酶 GS
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嗜硫红假单胞菌产氢机理的研究及与荚膜红假单胞菌的比较 预览
10
作者 彭玉麟 《太阳能学报》 EI CAS CSCD 北大核心 1989年第1期 43-48,共6页
研究了嗜硫红假单胞菌(Rhodobacter Sulfidophilus)的氢酶、固氮酶活力与产氢机理,并与荚膜红假单胞菌(Rhodobacter capsulatus)进行了比较。认为氢酶活力不是影响其产氢能力的主要因素,由于不同时期氢酶活力与固氮酶活力的变化,导致了... 研究了嗜硫红假单胞菌(Rhodobacter Sulfidophilus)的氢酶、固氮酶活力与产氢机理,并与荚膜红假单胞菌(Rhodobacter capsulatus)进行了比较。认为氢酶活力不是影响其产氢能力的主要因素,由于不同时期氢酶活力与固氮酶活力的变化,导致了嗜硫红假单胞菌在对数生长期末期才开始产氢。 展开更多
关键词 嗜硫红 荚膜红 假单胞菌 产氢机理
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一株[艹屈]高效降解菌的分离鉴定及其降解特性 被引量:8
11
作者 唐玉斌 孙常宇 +1 位作者 陈芳艳 郁昉 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期593-597,共5页
以多环芳烃[艹屈](Chrysene)为选择培养基的碳源,从焦化污泥中筛选出-株[艹屈]的高效降解菌SQ-1,SQ-1可在以[艹屈]为唯一碳源的无机盐培养基中生长,经过电镜形态学观察、生理生化和16SrDNA序列分析,并基于16SrDNA序列结果,构建... 以多环芳烃[艹屈](Chrysene)为选择培养基的碳源,从焦化污泥中筛选出-株[艹屈]的高效降解菌SQ-1,SQ-1可在以[艹屈]为唯一碳源的无机盐培养基中生长,经过电镜形态学观察、生理生化和16SrDNA序列分析,并基于16SrDNA序列结果,构建了该菌株的系统发育树。最终确定菌株SQ-1为木糖氧化无色杆菌(Achromobacter xylosoxidans)。又考察了[艹屈]的初始浓度、投菌量、pH值对SQ-1菌株降解[艹屈]效果的影响,确定了最佳降解条件。结果表明,该菌对水中[艹屈]具有良好的降解特性,在[艹屈]浓度为40mg/L、接种量10%(v/v3、pH7.℃0-7.5、温度30条件下,接种5d后对[艹屈]的降解效率达到80%以上。 展开更多
关键词 [艹屈]降解菌 16S RDNA 系统发育分析 降解特性
基于16S rRNA和rpoB基因的分子系统发育分析在铜绿假单胞菌鉴定中的应用 预览 被引量:5
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作者 何艳霞 向诗非 +6 位作者 李浇 何金蕾 张俊荣 袁冬梅 秦翰霄 陈达丽 陈建平 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第4期27-35,共9页
为对比16S rRNA和rpo B基因分子系统发育分析与传统表型分类法对铜绿假单胞菌的鉴定,评估16S rRNA和rpo B基因序列分析在铜绿假单胞菌鉴定中的应用,用表型分类方法对临床自动微生物鉴定系统鉴定为铜绿假单胞菌的23株分离株进行再鉴定,PC... 为对比16S rRNA和rpo B基因分子系统发育分析与传统表型分类法对铜绿假单胞菌的鉴定,评估16S rRNA和rpo B基因序列分析在铜绿假单胞菌鉴定中的应用,用表型分类方法对临床自动微生物鉴定系统鉴定为铜绿假单胞菌的23株分离株进行再鉴定,PCR扩增23株分离株16S rRNA和rpo B基因片段,并测序进行系统发育分析。结果表明,表型再鉴定结果与自动微生物鉴定系统鉴定结果一致。基于两个基因的系统发育分析均显示分离株p22与不动杆菌属序列聚为一枝,其余22株分离株与铜绿假单胞菌序列聚为一枝。因此p22应鉴定为不动杆菌,16S rRNA和rpo B基因序列分析均能准确鉴定铜绿假单胞菌并能较好建立假单胞菌属内种间关系。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 16S RRNA RPOB
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纤溶酶产生菌—藤黄微球菌的筛选、鉴定及纤溶酶基因的克隆 预览 被引量:14
13
作者 肖璐 张仁怀 张义正 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期 1443-1449,共7页
通过血粉培养基富集、纤维蛋白培养基筛选,从自然环境中分离到一株纤溶酶产生菌,命名为ML909。利用传统细菌分类鉴定方法对其形态和生理生化特征进行了研究,发现其与藤黄微球菌的特征相符,16SrDNA序列分析的结果也表明它与藤黄微球菌的1... 通过血粉培养基富集、纤维蛋白培养基筛选,从自然环境中分离到一株纤溶酶产生菌,命名为ML909。利用传统细菌分类鉴定方法对其形态和生理生化特征进行了研究,发现其与藤黄微球菌的特征相符,16SrDNA序列分析的结果也表明它与藤黄微球菌的16SrDNA序列的同源性高达99%,因此该菌在系统分类学上属于微球菌属(Micrococcus Cohn)藤黄微球菌(Micrococcus luteus)。通过PCR方法对其纤溶酶的编码区序列进行了克隆和序列分析,基因登录GenBank,登录号为EU232121。 展开更多
关键词 纤溶酶 基因克隆 16SrDNA 藤黄微球菌
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78株铜绿假单胞菌耐药分析 预览 被引量:1
14
作者 范柳青 吴敏 程红革 《右江民族医学院学报》 2007年第2期 261-262,共2页
目的了解铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)临床分离株的耐药现状,指导临床合理使用抗生素。方法采用美国德灵公司Microscan Autoscan-4鉴定仪进行菌株鉴定及药敏试验,并进行统计分析。结果78株铜绿假单胞菌对抗生素前5位... 目的了解铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)临床分离株的耐药现状,指导临床合理使用抗生素。方法采用美国德灵公司Microscan Autoscan-4鉴定仪进行菌株鉴定及药敏试验,并进行统计分析。结果78株铜绿假单胞菌对抗生素前5位的耐药率分别为头孢曲松66.67%、头孢噻肟52.56%、氨曲南23.08%、哌拉西林他唑巴坦16.67%、头孢吡肟15.38%。其中5株粘液型铜绿假单胞菌除对上述抗生素高度敏感,同时对复方新诺明、氨苄青霉素、氨苄青霉素/舒巴坦、头孢呋辛均敏感。检出1株全耐药菌株。结论铜绿假单胞菌对碳青霉烯类、氨基糖苷类、喹诺酮类、脲基青霉素及其β-内酰胺酶抑制复合剂保持较低的耐药率。要加强对粘液型和多重耐药性铜绿假单胞菌的耐药监测和研究,合理选择抗菌药物。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 微生物敏感性试验 抗药性 细菌
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油松菌根促生细菌——荧光假单胞菌的分离与鉴定 预览 被引量:11
15
作者 李守萍 程玉娥 +3 位作者 唐明 陈桂梅 高瑞霞 徐辉 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期 2103-2108,共6页
为了探讨菌根促生细菌荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)与菌根真菌的互作关系,本实验从油松菌根上分离得到36株在紫外灯下产荧光的细菌菌株,以荧光假单胞菌9702作为标准菌株,对分离菌株进行显微观察、生物学鉴定和16S rDNA序列... 为了探讨菌根促生细菌荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)与菌根真菌的互作关系,本实验从油松菌根上分离得到36株在紫外灯下产荧光的细菌菌株,以荧光假单胞菌9702作为标准菌株,对分离菌株进行显微观察、生物学鉴定和16S rDNA序列分析,结果确定HDY-8、HDY-9、HDY-20、HDY-35共4株菌株为荧光假单胞菌,并分别命名为P.fluorescensHDY-8、P.fluorescensHDY-9、P.fluorescens HDY-20、P.fluorescens HDY-35。用这4株细菌菌株分别与外生菌根真菌(ECMF)粘盖牛肝菌(Suillus bovinus)、褐环粘盖牛肝菌(Suillus luteus)和褐黄牛肝菌(Boletus luridus)进行纯培养互作研究。结果表明,只有P.fluorescensHDY-20对3种外生菌根真菌有不同程度的促生作用,并对S.luteus促进效果最好,S.bovinus次之,B.luridus最差;P.fluorescensHDY-20促进S.bovinus、S.luteus和B.luridus菌丝生长的最佳浓度分别为2.4... 展开更多
关键词 菌根 菌根促生细菌 荧光假单胞菌 细菌鉴定
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一株新型高产PHB假单胞菌SCH17的分离和特征分析 被引量:6
16
作者 戴君 高毅 +3 位作者 刘洋 徐德聪 程香 彭惠 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期635-640,共6页
通过丁醇富集筛选,从土壤样品中筛选到一株菌株SCH17。经过生理特性和16S rRNA分析,鉴定菌株SCH17属于假单胞菌属。透射电镜显示该菌细胞内聚集了大量颗粒状物质,经过氯仿抽提和核磁共振分析,确认这些颗粒物质是聚β-羟基丁酸(PHB)。... 通过丁醇富集筛选,从土壤样品中筛选到一株菌株SCH17。经过生理特性和16S rRNA分析,鉴定菌株SCH17属于假单胞菌属。透射电镜显示该菌细胞内聚集了大量颗粒状物质,经过氯仿抽提和核磁共振分析,确认这些颗粒物质是聚β-羟基丁酸(PHB)。通过对碳源和氮源的优化,得到最佳积累PHB的碳源是果糖,氮源是蛋白胨。在该培养基中仅需发酵14 h,菌体干重和PHB含量均达到最大,分别为3.52 g/L和2.69 g/L,PHB含量高达细胞干重的76%。 展开更多
关键词 聚β-羟基丁酸(PHB) 假单胞菌 核磁共振 发酵
抗福美双假单胞菌株的NTG化学诱变及分子探针鉴定
17
作者 陈荣基 唐东阶 《广西农业大学学报》 CSCD 1996年第1期 53-58,共6页
利用微生物的抗药性筛选抗福美双的假单胞菌株T46,然后通过亚硝基胍(NTG)化学诱变获得了对福美双敏感的三株突变株T46N10、T46N7和T46N17。利用这三个突变株作受体,通过基因克隆的方法筛选到了可使三个突变... 利用微生物的抗药性筛选抗福美双的假单胞菌株T46,然后通过亚硝基胍(NTG)化学诱变获得了对福美双敏感的三株突变株T46N10、T46N7和T46N17。利用这三个突变株作受体,通过基因克隆的方法筛选到了可使三个突变株恢复抗性的克隆,抗性基因分别被定位在7kb、2.5kb和20kb的EcoRI片段上。将这三个克隆分别用^32P标记后制成分子探针,然后分别与三个突变菌株的总DNA进行DNA-DNA分 展开更多
关键词 假单胞菌 化学诱变 探针 福美双
交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)DY3菌株产内切葡聚糖酶的性质研究及基因克隆 预览 被引量:15
18
作者 熊鹏钧 文建军 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期 233-237,共5页
从深海样品ES0109中分离到一株具有高内切葡聚糖酶活力的细菌DY3, 16SrDNA序列分析表明该菌与交替假单胞菌属(Pseudoalteromonas sp.)的Pseudoalteromonas citrea和Pseudoalteromonas elyakovii的同源性为99%.PCR扩增DY3的内切葡聚糖酶... 从深海样品ES0109中分离到一株具有高内切葡聚糖酶活力的细菌DY3, 16SrDNA序列分析表明该菌与交替假单胞菌属(Pseudoalteromonas sp.)的Pseudoalteromonas citrea和Pseudoalteromonas elyakovii的同源性为99%.PCR扩增DY3的内切葡聚糖酶基因celX全长1479bp,编码一个492AA的蛋白质.酶的氨基酸序列分析表明CelX与Pseudoalteromonas haloplanktis的内切葡聚糖酶CelG有95%的相似性,包括一个糖基水解酶家族5的催化结构域,一个连接序列和位于C端的的CBM5结构域.对酶性质的初步研究发现,CelX的最适温度为40 ℃,酶的最适pH在6~7之间. 展开更多
关键词 交替假单胞菌 DY3菌株 16SrDNA序列分析 内切葡聚糖酶 基因 纤维素酶 克隆
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沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustris2-8的亚硝酸盐还原酶基因克隆和序列分析 被引量:6
19
作者 陈燕红 程萍 +1 位作者 喻国辉 潘丽晶 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期647-653,共7页
沼泽红假单胞菌2-8具有亚硝酸盐还原能力,根据不同类型亚硝酸盐还原酶保守序列设计引物,通过PCR扩增的方法对2-8菌株的亚硝酸盐还原酶类型进行鉴定,发现该菌株的亚硝酸盐还原酶为Cu型亚硝酸盐还原酶。从2-8菌株基因组中克隆出编码该Cu... 沼泽红假单胞菌2-8具有亚硝酸盐还原能力,根据不同类型亚硝酸盐还原酶保守序列设计引物,通过PCR扩增的方法对2-8菌株的亚硝酸盐还原酶类型进行鉴定,发现该菌株的亚硝酸盐还原酶为Cu型亚硝酸盐还原酶。从2-8菌株基因组中克隆出编码该Cu型亚硝酸盐还原酶的基因(nirK),该基因由1 154个碱基对组成,在GenBank数据库的登录号为GU332847,与沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustris TIE和CGA009的nirK序列相似性为90%。互联网数据库及生物信息学分析工具分析显示,该基因编码的由370个氨基酸残基组成的蛋白是铜型亚硝酸盐还原酶,属于一型多铜氧化酶,pI 6.2,是一种稳定蛋白,定位于膜外或周质;由α螺旋、延伸带、随机卷曲和模糊状态组成;有4个2Fe-2S氧化还原蛋白型铁硫结合结构域和一个4Fe-4S氧化还原蛋白型铁硫结合结构域。经Northern杂交分析显示nirK基因在沼泽红假单胞菌2-8中以单拷贝的形式存在并表达。 展开更多
关键词 沼泽红假单胞菌 亚硝酸盐还原酶 Cu型亚硝酸盐还原酶 基因克隆 生物信息学
筛选脱氮假单胞菌启动子提高维生素B12产量 预览 被引量:1
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作者 王玲玲 夏苗苗 +2 位作者 董会娜 朱蓓薇 张大伟 《生物技术通报》 CSCD 北大核心 2017年第8期159-166,共8页
维生素B_(12)(VB_(12)/钴胺素)具有多种生理学功能,广泛应用于制药、食品等行业。脱氮假单胞菌是维生素B_(12)常用工业菌株之一。通过筛选高表达启动子来过表达VB_(12)合成途径基因,能有效提高菌株的VB_(12)生产能力。通过... 维生素B_(12)(VB_(12)/钴胺素)具有多种生理学功能,广泛应用于制药、食品等行业。脱氮假单胞菌是维生素B_(12)常用工业菌株之一。通过筛选高表达启动子来过表达VB_(12)合成途径基因,能有效提高菌株的VB_(12)生产能力。通过对脱氮假单胞菌中某些编码热激蛋白和分子伴侣基因前含启动子在内的非编码序列用启动子在线预测软件进行分析,选取P_(ibpA)、P_(cbpA)、P_(dnaJ)、P_(htpG)、P_(dnak)、P_(grpE)的非编码区与编码绿色荧光蛋白的GFP报告基因相连,通过酶标仪检测GFP的荧光信号值,对编码热激蛋白和分子伴侣基因前的非编码区所含有的启动子的表达强度进行评估,以获得高表达的启动子对VB_(12)合成途径的基因进行过表达。结果表明,含有启动子P_(dnak)的非编码区,其表达的GFP荧光值最高。进而构建强启动子P_(dnak)与维生素B_(12)合成途径基因cobA的过表达重组菌,发酵数据表明,与对照菌株相比重组菌株维生素B_(12)产量提高21.5 mg/L。筛选高表达启动子用于维生素B_(12)合成途径关键基因的表达,是一种有效的提高维生素B_(12)产量的方法。 展开更多
关键词 脱氮假单胞菌 强启动子 cobA 维生素B12 GIBSON ASSEMBLY
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