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副流感病毒5型CC-14株辅助质粒的构建及鉴定
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作者 高菽蔓 靳红亮 +2 位作者 马嫄 严妍 扈荣良 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第6期588-591,共4页
目的构建副流感病毒5型(parainfluenza virus 5,PIV5)CC-14株核衣壳蛋白(nucleoprotein,NP)、磷蛋白(phosphoprotein,P)和聚合酶蛋白(large protein,L)基因真核表达质粒,并在MDCK细胞中表达,为该病毒反向遗传系统的建立奠定基... 目的构建副流感病毒5型(parainfluenza virus 5,PIV5)CC-14株核衣壳蛋白(nucleoprotein,NP)、磷蛋白(phosphoprotein,P)和聚合酶蛋白(large protein,L)基因真核表达质粒,并在MDCK细胞中表达,为该病毒反向遗传系统的建立奠定基础。方法根据PIV5 CC-14株全基因组中的NP、P和L基因分别设计特异性引物,经RT-PCR扩增得到NP、P和L基因,酶切后分别连接至pc DNA3.1+真核表达载体(或p MD18-T)上,构建辅助质粒pc DNA3.1-NP、pc DNA3.1-P和pc DNA3.1-L,转染MDCK细胞,RT-PCR检测NP、P和DL基因的转录情况。结果经双酶切及测序鉴定证明辅助质粒pc DNA3.1-NP、pc DNA3.1-P和pc DNA3.1-L构建正确,3个质粒转染MDCK细胞后,经RT-PCR分别可扩增得到NP、P和DL基因片段。结论成功构建了PIV5 CC-14株pc DNA3.1-NP、pc DNA3.1-P和pc DNA3.1-L辅助质粒,且均可在MDCK细胞中有效转录,为该病毒反向遗传系统的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 副流感病毒5型 核衣壳蛋白 磷蛋白 聚合酶蛋白 辅助质粒 MDCK细胞
重组腺病毒AdE-SH2-Caspase8-HA-GFP对耐伊马替尼的K562/G01细胞增殖的影响
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作者 王林 罗秋平 +5 位作者 黄峥兰 李会 刘张玲 祖白玲 冯文莉 向华 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1328-1333,共6页
研究表达融合蛋白SH2-Caspase8的重组腺病毒 AdE-SH2-Caspase8-HA-GFP1对耐伊马替尼的BCR/ABL阳性的慢性粒细胞白血病(CML)K562/G01细胞增殖的影响。荧光显微镜观察病毒感染效率,Westernblot检测融合蛋白的表达情况,MTT和细胞计... 研究表达融合蛋白SH2-Caspase8的重组腺病毒 AdE-SH2-Caspase8-HA-GFP1对耐伊马替尼的BCR/ABL阳性的慢性粒细胞白血病(CML)K562/G01细胞增殖的影响。荧光显微镜观察病毒感染效率,Westernblot检测融合蛋白的表达情况,MTT和细胞计数检测细胞的生长情况,流式细胞仪分析细胞增殖周期,甲基纤维素克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力。结果显示,荧光显微镜观察病毒感染效率高,Westemblot能检测到目的蛋白的表达,MTT和细胞计数检测可见,与对照组相比 AdE-SH2-Caspase8-HA-GFP1能显著抑制细胞的生长;流式周期检测发现, AdE-SH2-Caspase8-HA-GFP1P组G1期细胞比例增加,S期和G2期细胞比例减少;克隆形成实验可见, AdE-SH2-Caspase8-HA-GFP1能显著抑制细胞克隆的形成。综上所述,重组腺病毒 AdE-SH2-Caspase8-HA-GFP1表达的SH2-Caspase8融合蛋白能明显抑制耐伊马替尼的K562/G01细胞的增殖。 展开更多
关键词 细胞增殖 慢性粒细胞白血病 BCR ABL SH2结构域 CASPASE8 K562 G01细胞
SOE-PCR二步法构建shRNA干扰质粒 预览
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作者 范晶晶 郑秋闿 《实验室研究与探索》 CAS 北大核心 2013年第9期19-23,共5页
通过拼接重叠延伸PCR(SOE-PCR)二步法成功地建立了一种方便的shRNA干扰质粒的构建方法.将目的基因——半胱亚磺酸脱羧酶(CSD)特异性的shRNA序列用SOE-PCR二步法插入到pEGFP-HI-shRNA质粒中,经菌液PCR、酶切、测序鉴定,证明pEGFP-H1-... 通过拼接重叠延伸PCR(SOE-PCR)二步法成功地建立了一种方便的shRNA干扰质粒的构建方法.将目的基因——半胱亚磺酸脱羧酶(CSD)特异性的shRNA序列用SOE-PCR二步法插入到pEGFP-HI-shRNA质粒中,经菌液PCR、酶切、测序鉴定,证明pEGFP-H1-CSD shRNA干扰质粒与预期结果一致,可以用于细胞转染和RNA干扰实验.采用本方法能快速、高效构建RNA干扰质粒,为研究基因功能提供帮助. 展开更多
关键词 SOE-PCR SHRNA RNA干扰 半胱亚磺酸脱羧酶
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MicroRNAs are implicated in the initiation and progression of gastric cancer
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作者 Song Jianning Bai Zhigang Zhang Zhongtao 《中华医学杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2014年第3期554-559,共6页
关键词 microRNA 胃癌 miRNA 调控基因表达 致癌基因 遗传异质性 生物标记物 微RNA
人膜补体调节蛋白MCP、CD59在稳定转染的细胞中的共表达及功能研究 预览
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作者 刘辉 徐莉 李文鑫 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期 1159-1164,共6页
采取内核糖体进入位点(IRES)策略构建含人的膜补体调节蛋白基因MCP和CD59的cDNA的双顺反子真核表达载体pcDNA3-MCPIRESCD59,以磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞,用G418筛选阳性克隆,并研究MCP和CD59双基因在稳定细胞系中的共表达及保护... 采取内核糖体进入位点(IRES)策略构建含人的膜补体调节蛋白基因MCP和CD59的cDNA的双顺反子真核表达载体pcDNA3-MCPIRESCD59,以磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞,用G418筛选阳性克隆,并研究MCP和CD59双基因在稳定细胞系中的共表达及保护功能。PCR实验结果显示双基因稳定整合在异源细胞NIH3T3的染色体上,RT-PER及Western印迹实验分别从RNA水平和蛋白质水平证实了人补体调节蛋白分子MCP和CD59在细胞系中皆获得同步表达。检测连续传代30次的NIH3T3 pcDNA3-MCPIRESCD59,结果表明人MCP和CD59基因仍稳定整合在细胞基因组中,并未随着传代而丢失,为稳定的转双基因细胞系。补体依赖的细胞毒反应表明,peDNA3-MCPIRESCD59转染细胞由于MCP和CD59的共表达获得了高于MCP或CD59单一表达时所提供的保护功效,能更好地抑制人补体依赖的细胞毒作用的发生,保护宿主细胞免受人补体的攻击。以上结果表明,所构建的双基因重组表达载体实现了不同人补体调节蛋白基因高效转移和高水平共表达,在克服超急性排斥反应的基因治疗中有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 补体调节蛋白 内核糖体进入位点 共表达 超急性排斥反应
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大鼠神经球蛋白基因的克隆及其真核表达载体构建 预览 被引量:2
6
作者 朱继 唐文渊 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期 144-146,共3页
目的克隆Wistar大鼠神经球蛋白(nteuroglobulin,NGB)基因并构建其真核表达载体,为进一步研究其功能奠定基础。方法从雄性Wistar大鼠脑组织中提取总RNA,经逆转录FCR得到cDNA,测序并利用BLAST工具对比证明该基因序列正确后,亚克隆... 目的克隆Wistar大鼠神经球蛋白(nteuroglobulin,NGB)基因并构建其真核表达载体,为进一步研究其功能奠定基础。方法从雄性Wistar大鼠脑组织中提取总RNA,经逆转录FCR得到cDNA,测序并利用BLAST工具对比证明该基因序列正确后,亚克隆人pCDNA3.1(+)载体中,并通过双酶切和测序确定序列和阅读框正确。结果克隆了Wistar大鼠的神经球蛋白基因,有4个碱基发生了突变;成功构建了真核表达载体。结论Wistar大鼠脑组织中有NGB表达,成功克隆了该基因并构建了其真核表达载体。 展开更多
关键词 神经球蛋白基因 脑组织 克隆 表达载体
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基因治疗的病毒载体系统 预览 被引量:10
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作者 张婵  邵艳军  《生物技术》 CAS CSCD 2007年第1期 90-93,共4页
病毒载体是基因治疗中应用最为广泛的载体系统.该文就RNA病毒载体、DNA病毒载体和杂合病毒载体的生物学特性、基因组特点以及其在基因治疗中的优缺点进行综述,并对病毒载体系统的发展前景进行了展望.
关键词 基因治疗 RNA病毒载体 DNA病毒载体 杂合病毒载体
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一种可药物筛选及体内检测的新型慢病毒基因治疗载体的构建 预览
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作者 许辰煜 顾颖 +7 位作者 侯汪衡 程通 张涛 阙玉琼 高双全 张军 韩家淮 夏宁邵 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期 256-261,共6页
为实现基因治疗过程中的有效药物筛选及体内检测,首次利用核糖体内部进入位点(IREs)构建了同时携带O6-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶(MGMT)的突变型P140K基因和荧光素霉(Luciferase)基因的慢病毒载体pBobi-MIL。RT-PCR、免疫荧光、... 为实现基因治疗过程中的有效药物筛选及体内检测,首次利用核糖体内部进入位点(IREs)构建了同时携带O6-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶(MGMT)的突变型P140K基因和荧光素霉(Luciferase)基因的慢病毒载体pBobi-MIL。RT-PCR、免疫荧光、药物筛选克隆形成及化学发光检测等实验结果表明感染重组慢病毒L-MIL的细胞能同时表达MGMT及Luciferase。构建成功的新型慢病毒载体为今后的基因治疗奠定了基础,也为慢病毒滴度的确定提供了一种新的可能。 展开更多
关键词 基因治疗 慢病毒载体 体内检测 MGMT LUCIFERASE
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甲病毒作为基因工程载体的研究进展 预览
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作者 严家新 《国外医学:微生物学分册》 1998年第2期 5-7,11,共4页
披盖病毒科的甲病毒用作基因工程载体有许多特殊的优点,在疫苗制备和基因治疗方面有巨大的应用潜力。最近已证明该系统可用于阻断虫媒病毒的传播,从而开辟了一个全新的研究领域。该系统可能特别适用于制备高效而安全的核酸疫苗。
关键词 甲病毒 基因工程载体 研究进展 分子生物学
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靶向HBs基因的shRNA表达载体的构建及其抑制HepG2.2.15表达HBVsAg的作用 预览 被引量:1
10
作者 杨尚君 王亚平 +1 位作者 唐恩洁 张国元 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期 75-78,82,共5页
探索用PGenesil-1(Pg)构建的靶向乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因的shRNA表达载体PGenesil-1-HBs(简称Pgs),对体外培养HepG2.2.15细胞中的HBV基因及其抗原表达的抑制作用。设计、合成靶向HBVS区的3对DNA序列,分别插入PGenesil-1... 探索用PGenesil-1(Pg)构建的靶向乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因的shRNA表达载体PGenesil-1-HBs(简称Pgs),对体外培养HepG2.2.15细胞中的HBV基因及其抗原表达的抑制作用。设计、合成靶向HBVS区的3对DNA序列,分别插入PGenesil-1中构建3个siRNA表达载体Pgs1、Pgs2、Pgs3,经限制性内切酶,DNA序列测定等技术鉴定确认。筛选并确定最佳细胞接种量及重组质粒转染量后,分别或按不同组合转染HepG-2.2.15细胞,48h后采用半定量RT-PCR检测HBVsmRNA转录水平,免疫细胞化学技术检测HBsAg表达水平,MEIA分别检测细胞裂解液和培养上清中HBsAg和HBeAg的表达水平。结果表明,HBV真核表达载体Pgs1、Pgs2、Pgs3均能不同程度地抑制HepG2.2.15细胞中的HBsAg、HBeAg合成和HBs-mRNA转录。成功构建的HBV真核表达载体Pgs1、Pgs2、Pgs3,其中PgS3能显著抑制HBsAg表达(P〈0.01)。多种表达载体联合对抗原表达的抑制作用效率不同。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 小发夹结构RNA RNA干扰 乙型肝炎病毒表面抗原
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《神经外科学》:微型显微镜可实时活检脑肿瘤
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《现代生物医学进展》 CAS 2009年第21期I0001-I0002,共2页
美国圣约瑟夫医院和医疗中心巴罗神经学研究所的专家新近研制出一种微型手持显微镜,可使肿瘤的位置在手术过程中更容易被识别,从而将脑肿瘤切除手术变得更为精确。该项研究成果发表在最近一期《神经外科学》杂志上。
关键词 脑肿瘤 神经学 显微镜 外科学 微型 活检 实时 手术过程
Down-Modulation of Notchl Expression in Cervical Cancer Is Associated with HPV-Induced Carcinogenesis 预览
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作者 Li Sun Yongmei Song +3 位作者 Tong Tong Lingying Wu Wenhua Zhang Qimin Zhan 《临床肿瘤与癌症研究:英文版》 CAS CSCD 2009年第6期401-405,共5页
关键词 人乳头瘤病毒16型 子宫颈癌 癌变 诱发 调制 MRNA水平 乳头状瘤病毒 PCR检测
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带组氨酸标签的斑马鱼p53真核表达载体的构建及表达鉴定 预览
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作者 赵向忠 刘明 +2 位作者 丁丽丽 吴宁 林秀坤 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期195-198,共4页
构建斑马鱼p53基因的真核表达系统,为下一步p53体内、外功能研究,以及为斑马鱼作为抗肿瘤药物筛选模型的构建和应用奠定基础。采用RT-PCR法从斑马鱼胚胎中扩增获得p53基因编码区,定向克隆到真核表达载pcDNA3.1上,构建真核表达质粒pcDNA3... 构建斑马鱼p53基因的真核表达系统,为下一步p53体内、外功能研究,以及为斑马鱼作为抗肿瘤药物筛选模型的构建和应用奠定基础。采用RT-PCR法从斑马鱼胚胎中扩增获得p53基因编码区,定向克隆到真核表达载pcDNA3.1上,构建真核表达质粒pcDNA3.1/his-p53,在起始密码前加入增强翻译的Kozak序列,并在终止密码前引入组氨酸标签便于检测和纯化,脂质体介导质粒转染HeLa细胞,RT-PCR和Western blotting检测基因表达情况。结果表明,成功构建了斑马鱼p53真核表达载体,RT-PCR扩增出1 100 bp的转录产物,表达产物能被抗his单克隆抗体特异性识别,Western blotting呈现53 kD左右单一条带。斑马鱼p53蛋白在HeLa细胞中成功表达。 展开更多
关键词 P53基因 斑马鱼 真核表达 HELA细胞
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phyA基因的克隆及其新型表达载体的构建 预览 被引量:3
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作者 霍丹群 范守城 +1 位作者 张云茹 侯长军 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2004年第3期 26-30,共5页
直接以黑曲霉菌株F246基因组为模板,对植酸酶基因phyA的成熟肽(分子长度为1 347 bp)进行了PCR扩增,再将PCR产物克隆入pMD 18-T质粒,经DNA测序鉴定正确后,亚克隆入表达载体pET30a+和pMG36e,成功构建了phyA基因2种新型表达载体.植酸酶phy... 直接以黑曲霉菌株F246基因组为模板,对植酸酶基因phyA的成熟肽(分子长度为1 347 bp)进行了PCR扩增,再将PCR产物克隆入pMD 18-T质粒,经DNA测序鉴定正确后,亚克隆入表达载体pET30a+和pMG36e,成功构建了phyA基因2种新型表达载体.植酸酶phyA基因2种新型表达载体的构建,为进一步获得大量、高活性植酸酶以及研究和开发新型微生态制剂打下了基础. 展开更多
关键词 植酸酶 克隆 表达载体 黑曲霉 PHYA基因
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人lrg真核表达载体的构建和初步分析 预览 被引量:5
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作者 杜可军 柴玉波 +5 位作者 常文辉 段小红 侯理朝 陈南春 林树新 陈苏民 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2004年第4期 179-182,共4页
目的:在真核细胞中表达人lrg基因.方法:构建野生型人lrg的真核表达载体,体外转染肝癌细胞系HepG2,并进行稳定筛选.用Western Blot、SABC-FITC进行人lrg基因表达的鉴定.结果:成功构建了人lrg的真核表达载体pcDNA3.1(+)/hlrg,Western Blot... 目的:在真核细胞中表达人lrg基因.方法:构建野生型人lrg的真核表达载体,体外转染肝癌细胞系HepG2,并进行稳定筛选.用Western Blot、SABC-FITC进行人lrg基因表达的鉴定.结果:成功构建了人lrg的真核表达载体pcDNA3.1(+)/hlrg,Western Blot和SABC-FITC等实验表明该基因在HepG2中进行了表达.结论:在HepG2中稳定表达了pcDNA3.1(+)/hlrg,为深入探讨人lrg基因的功能奠定了基础. 展开更多
关键词 人lrg基因 真核表达载体构建 HEPG2细胞
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一种新型的可调控性真核表达载体 预览
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作者 岳军明 梅柱中 +2 位作者 乔贵林 阎喜军 殷震 《生物技术通讯》 CAS 1997年第Z1期114-114,共1页
最近Gossen等报道了一种新型的可调控性真核表达载体,其主要特点是在真核启动子的上游融合了四环素操纵子结构,通过控制四环素操纵子的开启(on/off)从而启动转录的开始,使得外源基因获得表达。这种结构在转基因动物及基因治疗上有着... 最近Gossen等报道了一种新型的可调控性真核表达载体,其主要特点是在真核启动子的上游融合了四环素操纵子结构,通过控制四环素操纵子的开启(on/off)从而启动转录的开始,使得外源基因获得表达。这种结构在转基因动物及基因治疗上有着良好的应用前景。 四环素操纵子结构的开启是在四环素衍生物如强力霉素等的作用下,四环素转录激活物 展开更多
关键词 真核表达载体 可调控性 四环素衍生物 人巨细胞病毒 子结构 工程室 基因治疗 启动子 转基因动物 强力霉素
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人促血管生成素-2基因真核表达载体的构建及测序分析 预览
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作者 张建国 步星耀 +1 位作者 周伟 朱贤立 《山东医药》 CAS 北大核心 2005年第30期 14-15,共2页
目的克隆促血管生成素-2(Ang-2)基因,构建携带Ang-2基因的真核表达质粒pcDNA3.1-HA2-Ang-2,鉴定并分析其基因序列.方法从人胎盘组织中提取组织总RNA,用RT-PCR方法扩增出Ang-2基因的全长cDNA,并克隆于含有HA2-标签(tag)的真核表达载体pcD... 目的克隆促血管生成素-2(Ang-2)基因,构建携带Ang-2基因的真核表达质粒pcDNA3.1-HA2-Ang-2,鉴定并分析其基因序列.方法从人胎盘组织中提取组织总RNA,用RT-PCR方法扩增出Ang-2基因的全长cDNA,并克隆于含有HA2-标签(tag)的真核表达载体pcDNA3.1上,酶切鉴定,质粒双向测序鉴定克隆的Ang-2基因.结果扩增出人Ang-2基因的全长cDNA,电泳结果显示扩增的Ang-2 cDNA大小约1.5kb,双酶切鉴定和DNA双向测序证实获得正确的重组质粒pcDNA3.1-HA2-Ang-2.结论正确克隆Ang-2基因,成功构建其真核表达质粒pcDNA3.1-HA2-Ang-2,为进一步深入研究人的肿瘤血管生成机制及抗肿瘤血管生成治疗奠定了坚实的基础. 展开更多
关键词 促血管生长素-2 真核表达 基因序列
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分子生物学
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《中国生物学文摘》 2006年第3期 76-78,共3页
M通道研究进展,平滑肌细胞上的钙库操纵性通道,动态IP3-Ca^2+振荡模型的数值分析,p53对人乳腺癌细胞MCF-7生长及周期相关基因的影响,外源FHIT基因对不同FHIT基因状态肺癌细胞系恶性增殖的影响及其机理的研究,Parkin,Parkin底物和帕金... M通道研究进展,平滑肌细胞上的钙库操纵性通道,动态IP3-Ca^2+振荡模型的数值分析,p53对人乳腺癌细胞MCF-7生长及周期相关基因的影响,外源FHIT基因对不同FHIT基因状态肺癌细胞系恶性增殖的影响及其机理的研究,Parkin,Parkin底物和帕金森病,酵母基因上游序列中潜在的转录正调控位点分析,RTN4-C基因在肝癌组织中的表达及其对SM/MC7721细胞生长和凋亡的影响. 展开更多
关键词 分子生物学 FHIT基因 相关基因 细胞生长 平滑肌细胞 乳腺癌细胞 数值分析 振荡模型 帕金森病 位点分析
小鼠白细胞介素-17及其shRNA重组表达质粒的构建
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作者 万俊丽 李秋 +3 位作者 刘玮 阳海平 崔晶晶 施静 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第11期1556-1560,1566共6页
目的构建小鼠白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)及其shRNA重组表达质粒。方法以小鼠脾脏细胞总RNA为模板,PCR扩增IL—17基因,并亚克隆至质粒pLVX—IRES—ZsGreenl,构建重组表达质粒pLVX.IL-17-IRES-ZsGreenl;设计并合成3对针... 目的构建小鼠白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)及其shRNA重组表达质粒。方法以小鼠脾脏细胞总RNA为模板,PCR扩增IL—17基因,并亚克隆至质粒pLVX—IRES—ZsGreenl,构建重组表达质粒pLVX.IL-17-IRES-ZsGreenl;设计并合成3对针对IL-17基因的shRNA序列和1对阴性对照shRNA序列,分别插入质粒pLVX—shRNA,构建重组干扰质粒pLVX—shRNAl、pLVX.shRNA2、pLVX.shRNA3和阴性对照质粒shRNAC,进行测序;用脂质体法将各重组干扰质粒分别与表达质粒共转染293T细胞,分为空白对照组、过表达组、shRNA1组、shRNA2组、shRNA3组和shRNAC组,经荧光定量PCR和ELISA法分别检测各组细胞中IL-17基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平。结果PCR扩增获得500bp的目的基因,IL—17重组表达质粒及其shRNA重组质粒经酶切及测序鉴定证明构建正确;重组表达质粒转染293T细胞48h后可见绿色荧光表达;过表达组IL-17基因mRNA及蛋白表达水平均明显高于空白对照组(P均〈0.05),shRNA1组、shRNA2组和shRNA3组IL-17基因mRNA和蛋白表达水平均明显低于shRNAC组(P均〈0.05)。结论成功构建了小鼠IL-17基因重组表达质粒及其特异性shRNA表达质粒,并筛选出shRNA1,其对IL-17的表达具有最佳的抑制效应。 展开更多
关键词 白细胞介素-17 短发夹RNA 原发性肾病综合征
Lymph node metastasis in early gastric cancer
20
作者 Chen Rong He Qingsheng +2 位作者 Cui Jianxin Bian Shibo Chen Lin 《中华医学杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2014年第3期560-567,共8页
关键词 淋巴结 胃癌 早期 病理因素 危险因素 EGC 组织学 类型
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