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IGF-1基因转染对脂肪间充质干细胞活性的影响及机制研究
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作者 王菲 蔡晓庆 +3 位作者 史亮 陈效安 王益 马凌 《现代生物医学进展》 CAS 2016年第12期2241-2244,2253共5页
目的:探讨携带IGF-1基因慢病毒转染脂肪间充质干细胞(ADMSCs)的可行性,对其引起的细胞凋亡机制做出初步研究,并讨论其与PI3K/Akt通路的关系。方法:分离培养ADMSCs,利用脂质体将携带IGF-1基因的慢病毒载体转染入ADMSCs。实验分为Blan... 目的:探讨携带IGF-1基因慢病毒转染脂肪间充质干细胞(ADMSCs)的可行性,对其引起的细胞凋亡机制做出初步研究,并讨论其与PI3K/Akt通路的关系。方法:分离培养ADMSCs,利用脂质体将携带IGF-1基因的慢病毒载体转染入ADMSCs。实验分为Blank组,Lv-non和Lv-IGF-1三组,转染后用MTT法测定各组细胞的生长情况并绘制生长曲线,流式细胞术测定各组细胞凋亡,Western blot测定各组中IGF-1、Akt、p-Akt及凋亡相关蛋白的表达。结果:成功分离、培养了大鼠脂肪间充质干细胞;携带IGF-1慢病毒载体转染ADMSCs后,流式细胞术检测发现Lv-non和Blank组凋亡率明显高于Lv-IGF-1组(P〈0.05)。同时发现Lv-IGF-1组中促凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9蛋白和Bax的表达水平显著下调(P〈0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2显著上调(P〈0.01)。MTT法结果显示Lv-IGF-1能促进细胞生长,在5到6天时显著高于其他两组(P〈0.05)。通过检测PI3K/Akt通路发现,Lv-IGF-1组PI3K和p-Akt水平显著高于Blank和Lv-non组(P〈0.05),通路被激活。结论:携带IGF-1基因慢病毒载体成功转染ADMSCs。在ADMSCs中过表达IGF-1蛋白可以促进细胞生长,同时抑制细胞凋亡,其机制可能与PI3K/Akt通路蛋白磷酸化相关。 展开更多
关键词 脂肪间充质干细胞 慢病毒载体 IGF-1基因 PI3K/AKT通路
细菌内同源重组法构建靶向Survivin的腺病毒载体的研究
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作者 陈竞 高砚春 +2 位作者 蔡燕 李金穗 郭冬梅 《现代生物医学进展》 CAS 2016年第17期3253-3255,3275共4页
目的:研究细菌内同源重组法构建靶向Survivin的腺病毒载体及其体外扩增表达。方法:将survivin基因克隆至穿梭质粒载体中,特异性酶切后回收、连接、转化,构建负载survivin片段的重组腺病毒载体。提取重组病毒基因酶切鉴定后,包装成病毒... 目的:研究细菌内同源重组法构建靶向Survivin的腺病毒载体及其体外扩增表达。方法:将survivin基因克隆至穿梭质粒载体中,特异性酶切后回收、连接、转化,构建负载survivin片段的重组腺病毒载体。提取重组病毒基因酶切鉴定后,包装成病毒,并扩增到所需滴度。行Western blotting鉴定,观察重组腺病毒载体在真核细胞的表达。结果:(1)重组穿梭质粒的Mlu I酶切鉴定结果显示,酶切结果均与相应的载体及目的片段的大小相符合,基因测序结果基本一致。(2)凝胶电泳产生了两条大约15 kb和8.5kb的片段,由图2可知重组腺病毒质粒酶切充分完全,且回收率较高。(3)重组腺病毒载体转染AD293细胞24 h后已出现细胞病变效应,病变细胞细胞核变大。(4)D260/OD280的值为1.92,表明重组腺病毒纯度较高。(5)AD293细胞病毒上清中有能与抗Survivin单抗反应的蛋白,其相对分子质量与理论值相吻合,阴性对照组无对应条带出现。结论:本方法成功构建表达了含Survivin的重组腺病毒载体,为进一步进行Survivin基因功能的研究提供了实验基础和理论支持。 展开更多
关键词 细菌内同源重组法 SURVIVIN 腺病毒载体
前列腺癌研究模型的进展:从转基因小鼠到肿瘤异种移植模型
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《科技成果管理与研究》 2016年第6期F0004-F0004,共1页
江苏南通大学医学院基础医学研究室“核受体与肿瘤研究实验室”课题负责人(PI)江明教授,通过组建“核受体与肿瘤研究实验室”,专注于核受体与前列腺癌干/祖细胞分化、自噬和凋亡、糖和脂肪代谢、组织再生和癌变与转移等分子机制的... 江苏南通大学医学院基础医学研究室“核受体与肿瘤研究实验室”课题负责人(PI)江明教授,通过组建“核受体与肿瘤研究实验室”,专注于核受体与前列腺癌干/祖细胞分化、自噬和凋亡、糖和脂肪代谢、组织再生和癌变与转移等分子机制的功能性研究,在前列腺癌核受体研究领域取得了重要进展。 展开更多
关键词 前列腺癌 转基因小鼠 异种移植 肿瘤 模型 核受体 基础医学 细胞分化
CHO细胞表达系统研究进展 预览 被引量:2
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作者 郑惠惠 江洪 《生物技术进展》 2016年第4期239-243,共5页
CHO细胞表达系统是目前重组糖蛋白生产的首选系统。随着无血清悬浮培养技术、基因工程技术和大规模培养技术的应用和不断发展,CHO细胞表达系统已经成为生物技术药物最重要的表达或生产系统,并被广泛应用于抗体、重组蛋白药物和疫苗等产... CHO细胞表达系统是目前重组糖蛋白生产的首选系统。随着无血清悬浮培养技术、基因工程技术和大规模培养技术的应用和不断发展,CHO细胞表达系统已经成为生物技术药物最重要的表达或生产系统,并被广泛应用于抗体、重组蛋白药物和疫苗等产品的研发和生产中。近年来,针对CHO细胞表达系统在某些重组蛋白的表达和大规模生产中存在的不足,研究者们通过利用基因工程技术手段,结合重组蛋白表达机制的研究成果,为优化和应用CHO细胞表达系统做出了不懈努力。从培养基的优化、高产重组CHO细胞株的构建、大规模培养三个方面综述了CHO细胞表达系统的最近研究进展,以期为CHO细胞表达系统的研究与应用提供参考。 展开更多
关键词 CHO细胞培养 细胞改造 重组抗原表达
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转变间皮的房间由肿瘤导致了的老鼠腹的生长 factor-/Smad 信号小径上的 ligustrazine nanoparticles nano 水花的效果坏死因素 --
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作者 颜帅 杨斓 +4 位作者 乐音子 李文林 曾莉 乐进 毛春芹 《中国结合医学杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2016年第8期629-634,共6页
目的将在转变间皮的细胞(RPMC ) 由肿瘤坏死因素(TNF-) 导致了的老鼠腹的生长因素(TGF-)/Smad 信号蛋白质上学习 ligustrazine nanoparticles nano 水花(LNNS ) 的效果,和在腹的洞的 LNNS 的反粘附机制。方法老鼠腹的主要文化和再次培... 目的将在转变间皮的细胞(RPMC ) 由肿瘤坏死因素(TNF-) 导致了的老鼠腹的生长因素(TGF-)/Smad 信号蛋白质上学习 ligustrazine nanoparticles nano 水花(LNNS ) 的效果,和在腹的洞的 LNNS 的反粘附机制。方法老鼠腹的主要文化和再次培养间皮的房间(RPMC ) 被胰岛素消化方法在 vitro 处理。第三代是为实验的 identifified 并且把组划分了成 5:一个空白的组:没有处理的 RPMC;一个控制组:与 TNF- 刺激的 RPMC;RPMC 由一个低剂量的 LNNS 组(2.5 mg/L ) 对待;RPMC 由一个中等剂量的 LNNS 组(5 mg/L ) 对待;并且 RPMC 由一个高剂量的 LNNS 组(10 mg/L ) 对待。反向的抄写聚合酶链反应被使用测试 fifibronectin 的表示,骨胶原我(COL-I ) , TGF- mRNA,和到测试的西方的污点方法 Smad 蛋白质 RPMC 的 7 表示。结果与空白的组,在 fifibronectin (FN ) 的 signifificant 举起, COL-I 和 TGF- 相比, RPMC 的 mRNA 表示在控制组被观察(P < 0.05 ) 。与控制组相比, LNNS 以一种 concentrationdependent 方式压制了 FN, COL-I 和 TGF- mRNA 的表达式(P < 0.05 ) 。RPMC 的蛋白质是的 Smad7 的表示随 LNNS 剂量的增加由 TNF- 刺激下面调整、起来调整(P < 0.05 ) 。结论 TNF- 可以在 RPMC 生存能力导致变化,导致腹损害。LNNS 能颠倒 fifibrosis 的正式就职相关 cytokine FN, COL-I 和 TGF- ,起来调整由在 RPMC 的 TNF- 的 Smad7 的表示,因此由修理间皮的房间稀释腹损害。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子-α 转化生长因子-β 间皮细胞 纳米颗粒 喷雾效果 诱导型 信号通路 川芎嗪
塔什库尔干羊Fec~B多胎基因的检测研究
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作者 夏永强 盛明明 +1 位作者 党乐 麦麦提·库尔班 《黑龙江畜牧兽医:下半月》 北大核心 2016年第5期73-75,共3页
为了加强对塔什库尔干羊基础核心群选择的准确性,从而加快对塔什库尔干羊多胎新类型的建立,试验通过BMPR-IB分子标记技术对塔什库尔干羊进行FecB基因检测,对检测有多胎基因的母羊产羔情况进行统计。结果表明:塔什库尔干羊存在多胎基因... 为了加强对塔什库尔干羊基础核心群选择的准确性,从而加快对塔什库尔干羊多胎新类型的建立,试验通过BMPR-IB分子标记技术对塔什库尔干羊进行FecB基因检测,对检测有多胎基因的母羊产羔情况进行统计。结果表明:塔什库尔干羊存在多胎基因,但与产羔数呈弱相关,相关系数R=0.324。 展开更多
关键词 FecB多胎基因 塔什库尔干羊 分子标记技术 繁殖性状 检测
山羊PMEL基因生物信息学分析 预览 被引量:1
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作者 李丽莎 李祥龙 毛艳朋 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第8期47-50,共4页
基于生物基因组学数据库,对山羊PMSL基因进行生物信息学分析,为研究该基因的功能提供依据.根据GenBank中山羊PMEL基因编码蛋白序列(GenBank登录号:XP_005680442.1),利用ExPASy数据库中的ProtParam、ProtScale程序分别预测理化性质、... 基于生物基因组学数据库,对山羊PMSL基因进行生物信息学分析,为研究该基因的功能提供依据.根据GenBank中山羊PMEL基因编码蛋白序列(GenBank登录号:XP_005680442.1),利用ExPASy数据库中的ProtParam、ProtScale程序分别预测理化性质、疏水性;利用CBS Prediction Servers数据库中的SignalP、TMHMM 、Protfun程序分别预测信号肽、跨膜区及其功能;利用Predict Protein、PSORT ⅡPrediction、Motif Scan软件分别预测二级结构、亚细胞定位、功能位点,并对不同物种基因构建系统发育树.结果表明:山羊PMEL基因共编码685个氨基酸,属可溶性不稳定蛋白,无信号肽,在接近肽链的C-端存在1个跨膜区;二级结构以无规卷曲为主,该蛋白主要在内质网中发挥运输、结合、信号转导作用;不同物种PMSi基因的系统进化情况与生物进化过程中的动物学分类相符.山羊PMSL基因编码蛋白在生物进化中具有较强保守性,该基因结构和功能的分析为山羊PMEL基因遗传特性的进一步研究奠定了基础. 展开更多
关键词 PMEL 山羊 生物信息
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玉米磷转运蛋白基因ZmPht3;1的克隆和功能分析
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作者 吴珊 林丹 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期65-71,共7页
Pht3(phosphate transporter 3)磷转运子家族属于一类低亲和力磷转运蛋白,在调节植株体内磷素的动态平衡中发挥重要作用。为了初步探讨玉米中Zm Pht3;1基因的结构特征及其磷饥饿的响应机制,利用同源克隆的方法从耐低磷玉米自交系Mo17... Pht3(phosphate transporter 3)磷转运子家族属于一类低亲和力磷转运蛋白,在调节植株体内磷素的动态平衡中发挥重要作用。为了初步探讨玉米中Zm Pht3;1基因的结构特征及其磷饥饿的响应机制,利用同源克隆的方法从耐低磷玉米自交系Mo17中分离得到Zm Pht3;1基因,并运用实时荧光定量PCR和亚细胞定位的方法对其进行深入研究。结果表明,Zm Pht3;1的编码区全长1 101 bp,编码366个氨基酸,含有典型的线粒体转运家族(mitochondrial carrier family,MCF)结构特征与6个疏水跨膜结构。荧光定量PCR分析表明,该基因在两个极端材料的根系与叶片中均有表达,而表达模式差异显著,在耐低磷玉米自交系Mo17的根系和叶片中表现为缺磷胁迫前期的一般性反应和后期的特异性反应。转化烟草的亚细胞定位结果显示,Zm Pht3;1主要分布于细胞膜上,可能是一个双亲和转运体,在玉米响应磷饥饿胁迫过程中发挥重要的适应性调节作用。 展开更多
关键词 玉米 磷转运蛋白 基因表达 亚细胞定位
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人类寿命有上限吗 预览
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《共产党员(河北)》 2017年第1期48-48,共1页
随着医学的发展,人类寿命是不断延长,还是存在一个天然极限?为了调查人类寿命到底有没有天然极限,美国纽约爱因斯坦医学院遗传学家扬·维吉领导的研究小组对“人类死亡率数据库”进行了分析,这个数据库的数据覆盖38个国家。
关键词 人类寿命 上限 遗传学家 爱因斯坦 数据库 医学院 死亡率 极限
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Rce1 expression in renal cell carcinoma and its regulatory effect on 786-O cell apoptosis through endoplasmic reticulum stress
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作者 Jianjun Li Delin Wang +10 位作者 Junnan Liu Yunlang Qin Liangliang Huang Qiangfeng Zeng Maolin Xiao Jie Hu Qixin Yang Jiang He Li Mai Ying Li Wujiang Liu 《生物化学与生物物理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2017年第3期254-261,共8页
(Rce1 ) 地岬和 a-factor-converting 酶 1 位于 endoplasmic 蜂窝胃(嗯) 并且被认为为绝大多数 CAAX 蛋白质处理的 endoproteolytic 负责。Endoplasmic 蜂窝胃应力(ERS ) 在肾的房间癌(RCC ) 起一个重要作用;然而,在 RCC 的 Rce1 的... (Rce1 ) 地岬和 a-factor-converting 酶 1 位于 endoplasmic 蜂窝胃(嗯) 并且被认为为绝大多数 CAAX 蛋白质处理的 endoproteolytic 负责。Endoplasmic 蜂窝胃应力(ERS ) 在肾的房间癌(RCC ) 起一个重要作用;然而,在 RCC 的 Rce1 的表示和角色广泛地没被学习。我们试图在 RCC 786-O 房间在嗯导致 apoptosis 在 RCC 纸巾和它的分子的机制调查 Rce1 的表示。我们首先使用了检测在肾的癌纸巾和 paracancerous 纸巾的 Rce1 表示的西方的弄污,量的反向的 transcriptase 聚合酶链反应,和 immunohistochemistry。Rce1 表示是在 RCC 的 upregulated,这被发现纸巾,和它的积极表示水平强烈与 clinicopathologic 特征被联系。下次,我们在人的胚胎的肾房间线 HEK293 和人的肾的癌房间线 786-O 检测了 Rce1 的表示, ACHN,和 A498。Rce1 的更高的表示在人的肾的癌房间线被发现,特别在 786-O 房间。在 786-O 房间的 Rce1 击倒增加的 apoptosis 和禁止的增长(P 展开更多
关键词 内质网应激 细胞凋亡 癌组织 肾细胞 调控作用 逆转录-聚合酶链反应 HEK293 细胞增殖
拟除虫菊酯类农药单链可变区抗体的制备、鉴定及其特异性分析
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作者 吴元元 金朵 +1 位作者 付骋宇 祁志军 《食品安全质量检测学报》 CAS 2017年第2期386-393,共8页
目的制备拟除虫菊酯类农药可溶性单链可变区(single-chain fragment variable,scFv)抗体,鉴定其免疫活性并对其特异性进行分析。方法构建表达载体pET28a(+)-scFv和pET42a(+)-scFv并转化BL21(DE3),重组菌经诱导后通过十二烷基... 目的制备拟除虫菊酯类农药可溶性单链可变区(single-chain fragment variable,scFv)抗体,鉴定其免疫活性并对其特异性进行分析。方法构建表达载体pET28a(+)-scFv和pET42a(+)-scFv并转化BL21(DE3),重组菌经诱导后通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定目的蛋白的表达。可溶性融合蛋白scFv/GST经Glutathione Sepharose 4B纯化后用FactorXa切除GST标签获得scFv,然后采用Western blotting法对其进行鉴定。scFv对7种拟除虫菊酯类农药的特异性采用间接竞争酶联免疫法进行分析。结果经0.1mmol/LIPTG诱导后,重组菌BL21(DE3)-p ET28a(+)-scFv和BL21(DE3)-pET42a(+)-scFv表达的目标蛋白分别为包涵体抗体和部分可溶性抗体。经鉴定,可溶性scFv相对分子量约为30k Da,效价为1:25600。同源半抗原Hap1对单链抗体sc Fv的IC50为2.43μg/mL,检出限为0.045μg/mL;scFv抗体对氯菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯均有较高特异性,IC50分别为3.29、4.72和5.55μg/mL。结论本研究成功获得了拟除虫菊酯类农药的可溶性单链可变区抗体,该抗体对3种拟除虫菊酯农药具有很强的特异性,该研究可为拟除虫菊酯类农药多残留免疫分析提供依据。 展开更多
关键词 拟除虫菊酯类农药 单链可变区抗体 多残留免疫分析
Fluorescence characterization of the thermal stability of collagen mimic peptides
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作者 Xiu-Xia Sun Jun Fan +3 位作者 Yan-Nan Hou Shuo Liang Yu-Ping Zhang Jian-Xi Xiao 《中国化学快报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2017年第5期963-967,共5页
三倍的螺旋状的结构的热稳定性在骨胶原生合成,功能和降级起一个关键作用。CD 技术被利用描绘合成骨胶原的热稳定性模仿肽。因为它的便宜乐器学,低操作费用,容易的操作,和高敏感,荧光光谱学广泛地全世界与容易的存取被使用。这里... 三倍的螺旋状的结构的热稳定性在骨胶原生合成,功能和降级起一个关键作用。CD 技术被利用描绘合成骨胶原的热稳定性模仿肽。因为它的便宜乐器学,低操作费用,容易的操作,和高敏感,荧光光谱学广泛地全世界与容易的存取被使用。这里,我们开发了一个其他的荧光方法检测骨胶原的热稳定性模仿肽。我们证明了那荧光光谱学能测量骨胶原的热稳定性在不同情形下面与低集中模仿肽。自我熄灭的试金将极大地帮助的这高度敏感的荧光骨胶原的性质模仿的顺序依赖者的研究肽,和它在决定象骨胶原, collectins, adiponectin,巨噬细胞 scavenger 和 C1q 那样的三倍的螺旋系统的热稳定性的应用程序有大潜力。 展开更多
关键词 荧光光谱法 热稳定性 胶原蛋白 模拟肽 表征 胶原合成 荧光猝灭法 螺旋结构
Cover story
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《生物学前沿:英文版》 CAS CSCD 2017年第3期F0003-F0003,共1页
关键词 肿瘤抑制作用 PTEN 免疫细胞 故事 封面 抑癌基因 代谢组学 调节过程
miR-29b2c重组腺病毒的构建及对胃癌细胞增殖和迁移的影响
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作者 骆爱玲 杜春园 +2 位作者 赵雪梅 梁继超 陈勇 《生物工程学报》 CSCD 北大核心 2017年第7期1136-1144,共9页
构建了miR-29b2c重组腺病毒Ad-miR-29b2c,考察了其对HGC-27、MGC-803胃癌细胞增殖及迁移的抑制作用。采用PCR从基因组扩增miR-29b2c片段,并克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建穿梭质粒pAdT-29b2c,经酶切及测序鉴定。穿梭质粒经Pm... 构建了miR-29b2c重组腺病毒Ad-miR-29b2c,考察了其对HGC-27、MGC-803胃癌细胞增殖及迁移的抑制作用。采用PCR从基因组扩增miR-29b2c片段,并克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建穿梭质粒pAdT-29b2c,经酶切及测序鉴定。穿梭质粒经PmeⅠ线性化后与腺病毒骨架载体共转化BJ5183感受态,产生重组腺病毒质粒Ad-miR-29b2c,再经PacⅠ线性化后转染293A细胞进行包装。重组腺病毒扩增后感染HGC-27细胞,通过MTT及细胞迁移实验观察Ad-miR-29b2c对HGC-27、MGC-803细胞增殖及迁移的影响。采用Western blotting检测Ad-miR-29b2c对HGC-27、MGC-803细胞δ-catenin蛋白表达的影响。酶切、测序及荧光定量PCR结果表明重组腺病毒构建成功,miR-29b及miR-29c在HGC-27细胞过表达。MTT实验表明Ad-miR-29b2c能显著抑制HGC-27、MGC-803细胞增殖。细胞迁移实验表明Ad-miR-29b2c能显著抑制HGC-27、MGC-803细胞迁移。此外,Ad-miR-29b2c能显著降低HGC-27、MGC-803细胞δ-catenin蛋白表达水平。综上所述,构建了miR-29b2c的重组腺病毒,并发现其可以抑制胃癌细胞HGC-27和MGC-803的增殖及迁移,该作用可能与miR-29抑制HGC-27、MGC-803细胞δ-catenin蛋白表达有关。 展开更多
关键词 MIR-29 胃癌 重组腺病毒 基因治疗
文蛤粪卟啉原Ⅲ氧化酶基因克隆及与壳色性状的相关性分析 预览
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作者 詹艳玲 董迎辉 +3 位作者 何琳 阮文斌 高晓艳 林志华 《水产学报》 CSCD 北大核心 2017年第7期1054-1063,共10页
粪卟啉原Ⅲ氧化酶(coproporphyrinogen-III oxidase,CPOX)是卟啉类化合物合成过程中的关键酶,而卟啉是形成机体色素的重要化合物。采用RACE方法克隆获得文蛤粪卟啉原Ⅲ氧化酶基因(MmCPOX)的cDNA序列,该序列全长1490 bp,其中开放阅读... 粪卟啉原Ⅲ氧化酶(coproporphyrinogen-III oxidase,CPOX)是卟啉类化合物合成过程中的关键酶,而卟啉是形成机体色素的重要化合物。采用RACE方法克隆获得文蛤粪卟啉原Ⅲ氧化酶基因(MmCPOX)的cDNA序列,该序列全长1490 bp,其中开放阅读框1173 bp,编码390个氨基酸,预测分子量为12.04 ku,理论等电点为5.05;预测该酶含有跨膜结构域和Coprogen-oxidas结构域;从构建的系统进化树来看,软体动物门的文蛤、加州海兔和太平洋牡蛎首先聚在一起,显示出较近的亲缘关系。qRT-PCR结果显示,MmCPOX基因在文蛤早期发育的各个时期均有表达,但在D形幼虫期以后表达量显著升高;在文蛤成贝的7个组织中,外套膜和血液中表达量显著高于其他组织,表明其与血卟啉合成和壳色卟啉形成相关;在不同壳色文蛤中,红壳文蛤、暗纹文蛤、细纹文蛤的外套膜中表达量显著高于黑斑文蛤和白壳文蛤,表明其参与形成红色和褐色壳色。 展开更多
关键词 文蛤 粪卟啉原Ⅲ氧化酶 壳色 克隆与表达
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连作烤烟根际土壤细菌群落16S rDNA-PCR-DGGE分析 被引量:1
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作者 龚治翔 马晓寒 +5 位作者 任志广 朱金峰 黄元炯 王蒙蒙 陈征 许自成 《中国农业科技导报》 CSCD 北大核心 2018年第2期39-47,共9页
以不同连作年限烤烟根际土壤为材料,应用PCR-DGGE技术对土壤样品进行细菌菌落分析,以期为烟草连作障碍调控提供理论依据。结果表明:烤烟生育中后期土壤细菌群落比较丰富。不同连作年限植烟土壤大田期细菌种群结构有差别,表现为大多数... 以不同连作年限烤烟根际土壤为材料,应用PCR-DGGE技术对土壤样品进行细菌菌落分析,以期为烟草连作障碍调控提供理论依据。结果表明:烤烟生育中后期土壤细菌群落比较丰富。不同连作年限植烟土壤大田期细菌种群结构有差别,表现为大多数细菌类型是共有的,存在少数特有的细菌类型,轮作土壤的细菌丰度变化较稳定,而连作增加了土壤细菌的丰度,并呈先增加后降低趋势。轮作细菌优势种群在大田期很稳定,而连作土壤的细菌菌群有较大变化,绿弯菌门的暖绳菌科、酸杆菌门和棒状杆菌科的菌群活动对连作土壤的营养代谢有强烈的影响,致病菌增多,不利于烤烟生长发育。不同连作年限对烤烟根际土壤细菌群落有较大影响,烤烟连作后细菌种群结构的变化可能是引发烤烟连作障碍的主要原因之一。 展开更多
关键词 烤烟 连作 根际土壤 细菌群落 PCR-DGGE
利用RNAi研究棉花SSH文库上调表达EST的功能
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作者 尹国 路正营 +3 位作者 李世云 韩永亮 张朝军 李付广 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期71-79,共9页
为了进一步研究棉花体细胞胚胎发生的分子机制,采用RNAi技术,利用棉花生物学国家重点实验室在表达载体p BI121的基础上成功改造的双元表达载体pCRI1210,构建了针对棉花胚性愈伤组织抑制性消减文库中上调表达的4个ESTs干涉载体pCRI210-ES... 为了进一步研究棉花体细胞胚胎发生的分子机制,采用RNAi技术,利用棉花生物学国家重点实验室在表达载体p BI121的基础上成功改造的双元表达载体pCRI1210,构建了针对棉花胚性愈伤组织抑制性消减文库中上调表达的4个ESTs干涉载体pCRI210-EST(EST-418、EST-447、EST-496和EST-653)。以从中棉所24中筛选出的体细胞胚胎分化率较高的株系W10的无菌苗下胚轴切段为受体,利用农杆菌介导法转化pCRI1210-EST干涉载体,浸染后的下胚轴切段在愈伤组织诱导培养基上进行分化。利用半定量RT-PCR技术检测愈伤组织的cDNA。结果表明,转化4个ESTs干涉载体后的胚性愈伤组织中均检测到了载体骨架,证明干涉载体均成功整合进了基因组DNA中,而4个ESTs对应的cDNA的表达量均出现不同程度的下调,不同干涉载体转化的下胚轴出愈率呈现上升和下降2种结果。其中转化EST-418干涉载体的下胚轴出愈率与对照相比有所提高,转化EST-447、EST-496和EST-653干涉载体的下胚轴出愈率与对照相比出现不同程度的下降。因此推断,4个ESTs在愈伤组织分化过程中发挥着不同的作用。其中,EST-418在棉花体细胞胚胎发生过程中起抑制作用,而EST-447、EST-496和EST-653国外品种中在棉花体细胞胚胎发生过程中起促进作用,其结果为分离棉花体细胞胚胎发生相关基因提供了技术和理论支撑。 展开更多
关键词 RNAI SSH EST 愈伤组织
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依托泊苷影响HEK293细胞同源重组修复体系
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作者 黄佩香 陈利俊 +1 位作者 马丽 李莉萍 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期681-688,共8页
抗肿瘤药物疗效的研究多集中在肿瘤细胞,目前针对正常细胞的研究颇少,有必要建立能进行定量分析的同源重组定量修复体系。我们已建立的模型可以探讨肿瘤药物化疗后对HEK293细胞DSBs修复的继发性后果。通过构建含有带I-SceⅠ酶切位点的... 抗肿瘤药物疗效的研究多集中在肿瘤细胞,目前针对正常细胞的研究颇少,有必要建立能进行定量分析的同源重组定量修复体系。我们已建立的模型可以探讨肿瘤药物化疗后对HEK293细胞DSBs修复的继发性后果。通过构建含有带I-SceⅠ酶切位点的同源介导的重组修复底物(homologous direct recombination,HDR),或单链退火修复(single strand annealing,SSA)底物的细胞株,定量检测依托泊苷(etoposide,VP-l6)对同源性重组修复(homologous recombination,HR)通路的影响。成功构建了可用于定量检测DNA双链断裂(double-strand break,DSBs)诱导的SSA和HDR修复的正常人HEK293细胞应用模型。细胞毒结果证实,与SSA/293对照组对比,VP-16给药组16μmol/L(0.475±0.029 vs 1.000±0.000,P〈0.001)细胞活力明显降低;与HDR/293对照组相比,VP-16给药组16μmol/L(0.458±0.188 vs 1.000±0.000,P〈0.05)细胞活力降低。此外,本研究证实,VP-16抑制SSA修复,VP-16给药组2μmol/L与SSA/293对照组相比(0.575%±0.177%vs 1.352%±0.195%,P〈0.05),修复效率降低;VP-16抑制HDR修复,VP-16给药组1μmol/L与HDR/293对照组修复效率相比(0.305%±0.078%vs.0.635%±0.049%,P〈0.05),修复效率降低。VP-16诱导DNA损伤的同时,抑制HDR修复和SSA修复,修复效率呈现剂量依赖性。本研究结果可为抗肿瘤药物的临床应用提供某些指导。 展开更多
关键词 稳定转染 同源重组修复 单链退火修复 依托泊苷
芽孢杆菌(遗传学及生物工程)会议概述 预览
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作者 罗进贤 《国际学术动态》 1996年第3期 58-59,共2页
关键词 芽孢杆菌 遗传学 生物工程 基因表达 蛋白质
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Quick search of differentially expressed genes of EB virus resulting immortal human B cells by suppression subtractive hybridization 预览 被引量:5
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作者 李茜 朱振宇 《中国临床康复》 CSCD 2003年第5期 872-873,T002,共3页
AIM:To clone and identify genes differentially expressed in the EB virus-transformed human B cell.METHODS:Suppression subtractive hybridization was used to construct the library which contains the differentiately expr... AIM:To clone and identify genes differentially expressed in the EB virus-transformed human B cell.METHODS:Suppression subtractive hybridization was used to construct the library which contains the differentiately expressed cDNAs in EB virus-transformed human B cell .Then the isolated genes were cloned and sequenced and identifed by RT-PCR ,Nucleic acid homology searches were performed using the BLAST program.RESULTS:By this technique,4 differentiately expressed gene cDNA fragments of EB virus-transformed human B cell were obtained .CONCLUSION:SSH is an effective method to isolate differentiately expressed genes. 展开更多
关键词 抑制性消减杂交技术 克隆 EB病毒 人B淋巴细胞永生化 差异性表达基因
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