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哺乳动物精原干细胞体外分离培养研究进展 预览 被引量:2
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作者 刘丹 夏娟 +1 位作者 刘欢欢 余树民 《四川动物》 CSCD 北大核心 2014年第2期315-320,共6页
精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)作为成体干细胞的一种,具有高度自我更新和分化潜能。近几年研究发现,SSCs的体外培养是表观遗传基础研究、精子发生机制深入探索以及治疗雄性不育的基础条件。本文根据国内外SSCs相关... 精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)作为成体干细胞的一种,具有高度自我更新和分化潜能。近几年研究发现,SSCs的体外培养是表观遗传基础研究、精子发生机制深入探索以及治疗雄性不育的基础条件。本文根据国内外SSCs相关研究,对哺乳动物SSCs的生物学特性、体外分离培养和鉴定等作一综述,以期为哺乳动物SSCs和其他干细胞的长期体外培养以及建系提供一定的借鉴。 展开更多
关键词 精原干细胞 生物学特性 体外培养
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两种底物上培养的人脐带静脉内皮细胞的形态观察与比较 预览 被引量:3
2
作者 曹宁川 赵薇 杨向红 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2007年第2期 251-252,共2页
血管内皮细胞位于整个循环系统的内表面,具有多种生理功能,其结构和功能的改变与多种疾病的发生有关,如肿瘤扩散、心血管疾病、免疫疾病等。因此分离血管内皮细胞并进行体外培养具有重要意义。自1963年Marayama首次报道了人脐带静脉... 血管内皮细胞位于整个循环系统的内表面,具有多种生理功能,其结构和功能的改变与多种疾病的发生有关,如肿瘤扩散、心血管疾病、免疫疾病等。因此分离血管内皮细胞并进行体外培养具有重要意义。自1963年Marayama首次报道了人脐带静脉内皮细胞的培养方法以来,内皮细胞培养技术不断改进,本研究采用本实验室改进的Jaffe氏培养法,着重观察不同底物对内皮细胞生长的影响,为深人研究血管新生的分子机制及抗肿瘤治疗策略提供实验依据。 展开更多
关键词 内皮细胞 体外培养 明胶 MATRIGEL
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高增殖潜能造血祖细胞体外培养研究进展 预览
3
作者 李跃 李崇渔 《国外医学:输血及血液学分册》 CAS 北大核心 1990年第1期 3-5,共3页
<正> 1982年,Nakahata等学者在鼠的CFU-Mix(Colony-forming units-Mixed,多向性克隆形成单位)体外培养中,发现一种原始母细胞集落.产生这种集落的细胞被称为BL-CFC(blast colony-forming cells,母细胞集落形成细胞).现多数学者称... <正> 1982年,Nakahata等学者在鼠的CFU-Mix(Colony-forming units-Mixed,多向性克隆形成单位)体外培养中,发现一种原始母细胞集落.产生这种集落的细胞被称为BL-CFC(blast colony-forming cells,母细胞集落形成细胞).现多数学者称之为CFUHPP(High proliferative potential,高增殖潜能克隆形成单位).从此揭开了对CFU-HPP研究的序幕.更多还原 展开更多
关键词 造血祖细胞 培养 组织培养
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人类输卵管上皮细胞培养 预览 被引量:2
4
作者 钟瑜 张春雪 《暨南大学学报:自然科学与医学版》 CAS CSCD 1996年第1期 86-90,共5页
从16例妇女的正常输卵管标本中获取壶腹部上皮细胞建立体外培养并传代,通过倒置显微镜和相差显微镜观察细胞形态及生长状况,所有标本的细胞均可在培养的6 ̄9d形成融合的单层细胞,并可传代4 ̄6次,每次历时5 ̄7d,最长的培... 从16例妇女的正常输卵管标本中获取壶腹部上皮细胞建立体外培养并传代,通过倒置显微镜和相差显微镜观察细胞形态及生长状况,所有标本的细胞均可在培养的6 ̄9d形成融合的单层细胞,并可传代4 ̄6次,每次历时5 ̄7d,最长的培养可维持35d,与提供标本的妇女的月经周期及年龄关系不大。 展开更多
关键词 输卵管 壶腹部 上皮细胞 细胞培养
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三元场对体外培养细胞增殖及衰老死亡的影响 预览
5
作者 刘友清 傅京亮 《人天科学研究》 1997年第3期 21-23,共3页
采用细胞的传代培养,从细胞水平探索元极堂内三元场对体外培养细胞NKM,Wg3-h的形态,增殖和衰老死亡的影响,实验结果表明:放在元极深圳内三元场处理的癌细胞存活率随处理时间的延长而下降,死亡率上升,显示元极堂内三元场... 采用细胞的传代培养,从细胞水平探索元极堂内三元场对体外培养细胞NKM,Wg3-h的形态,增殖和衰老死亡的影响,实验结果表明:放在元极深圳内三元场处理的癌细胞存活率随处理时间的延长而下降,死亡率上升,显示元极堂内三元场有促进癌细胞衰亡的作用。 展开更多
关键词 三元场 细胞培养 体外培养 传代培养 衰老 死亡
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成人静脉内皮细胞单次传代大规模体外培养 预览 被引量:9
6
作者 何红兵 潘玉先 《第一军医大学学报》 CSCD 1995年第3期 198-201,共4页
用胶原酶消化成人静脉,总数:25.9±6.72×10 ̄3个细胞。获取9.12±4.3×10 ̄3个细胞/cm ̄2,活细胞率为99%。以2.39±0.43×10 ̄3个细胞/cm ̄2的接种密度将其接... 用胶原酶消化成人静脉,总数:25.9±6.72×10 ̄3个细胞。获取9.12±4.3×10 ̄3个细胞/cm ̄2,活细胞率为99%。以2.39±0.43×10 ̄3个细胞/cm ̄2的接种密度将其接种到一次性塑料培养皿中进行原代培养。待细胞进入增殖平台期后(生长时间为:7.25±0.5d),以1:26比例将原代细胞进行传代培养。经8±0.82d培养后,细胞接触仰制形成。整个体外培养扩增时间为:15±1.4d,血管内皮细胞数增加了333±40倍。经荧光标记第Ⅷ因子相关抗原单克隆抗体和透射电镜观察证实:199%以上的原代及传代细胞为血管内皮细胞。扩增后的血管内皮细胞染色体2n=46条,未发现异倍体细胞。在原代和传代细胞的条件培养液内t-PA和VWF含量相差无统计学意义。 展开更多
关键词 静脉 内皮细胞 体外培养
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灵芝多糖对肺癌患者血清淋巴细胞活化的抑制作用 预览 被引量:5
7
作者 胡云才 孙立新 +7 位作者 陆洁 段昕所 李雪飞 杨宁 兰天飞 于淑萍 陈丽莉 蒋苗苗 《中国中西医结合急救杂志》 CAS 北大核心 2012年第5期300-303,共4页
目的 研究灵芝多糖对肺癌患者血清淋巴细胞活化抑制的作用.方法 将含有终浓度为0、0.2、 0.8、3.2、12.8 mg/L 灵芝多糖的肺癌患者血清与肺癌患者的淋巴细胞进行体外培养,以健康人血清代替肺癌患者 血清为对照。采用四甲基偶氮唑盐(... 目的 研究灵芝多糖对肺癌患者血清淋巴细胞活化抑制的作用.方法 将含有终浓度为0、0.2、 0.8、3.2、12.8 mg/L 灵芝多糖的肺癌患者血清与肺癌患者的淋巴细胞进行体外培养,以健康人血清代替肺癌患者 血清为对照。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测淋巴细胞的增殖活性,用流式细胞仪检测淋巴细胞CD69 的表达。结果 在肺癌患者血清作用下,植物血凝素(PHA)诱导的淋巴细胞增殖活性〔吸光度(A )值〕和CD69 阳性表达率以未加灵芝多糖的肺癌血清组最低,健康对照组最高。与健康对照组比较,未加灵芝多糖的肺癌血 清组淋巴细胞增殖活性(0.654±0.029 比1.213±0.106)、CD69 阳性率〔(33.04±16.76)% 比(74.18±12.16)%〕均 明显降低(均P <0.01)。不同浓度的灵芝多糖均可使淋巴细胞增殖活性和CD69 阳性率有所升高,且随浓度增 大升高更明显。与未加灵芝多糖的肺癌血清组比较,浓度为0.2、0.8、3.2、12.8 mg/L 灵芝多糖组的淋巴细胞增殖 活性均明显升高(分别为0.759±0.053、0.865±0.091、0.935±0.062、1.080±0.097,均P <0.01);浓度为3.2 mg/L、 12.8 mg/L 灵芝多糖组CD69 阳性率均明显增加〔分别为(56.97±15.43)%、(67.82±10.85)%,均P <0.01〕,浓度 为0.2 mg/L、0.8 mg/L 灵芝多糖组无明显变化(均P >0.05),其中浓度为12.8 mg/L 灵芝多糖组CD69 阳性率已 接近健康对照组,差异无统计学意义(P >0.05). 结论 灵芝多糖具有拮抗肺癌患者血清抑制淋巴细胞活化 的作用. 展开更多
关键词 灵芝多糖 肺癌 淋巴细胞 增殖 CD69
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牦牛输卵管上皮细胞和卵泡颗粒细胞的培养 预览 被引量:4
8
作者 郭宪 阎萍 +2 位作者 许保增 曾玉峰 裴杰 《动物医学进展》 CSCD 2007年第8期 29-32,共4页
分离培养牦牛输卵管上皮细胞和卵泡颗粒细胞的目的是克服体外受精中早期胚胎发育阻断,建立有利于牦牛早期胚胎体外发育的共培养体系。采集牦牛输卵管上皮细胞进行原代及传代培养,同时从卵泡液中获取颗粒细胞进行原代培养,培养过程中观察... 分离培养牦牛输卵管上皮细胞和卵泡颗粒细胞的目的是克服体外受精中早期胚胎发育阻断,建立有利于牦牛早期胚胎体外发育的共培养体系。采集牦牛输卵管上皮细胞进行原代及传代培养,同时从卵泡液中获取颗粒细胞进行原代培养,培养过程中观察2种细胞的生长方式和形态特点。输卵管上皮细胞贴壁生长时,呈多边形,且呈单层成簇生长。培养144 h~216 h,可形成细胞单层。颗粒细胞贴壁生长时,呈现聚集生长特性,贴壁细胞形状不规则,呈放射状。培养72 h~96 h,形成颗粒细胞单层。 展开更多
关键词 牦牛 输卵管上皮细胞 卵泡颗粒细胞 培养
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小鼠心肌细胞系FMC84的建立及其生物学特性研究 预览
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作者 陈奕权 王炳锟 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1992年第6期 439-442,共4页
本文用常规组织培养技术及差速贴壁分离法传代培养细胞,建立小白鼠心肌细胞系,经电镜观察得以证实.同时,对培养细胞的某些生物学特性作了初步观察.
关键词 心肌细胞 组织培养 生物特性
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人脐带华通胶间充质干细胞的分离培养及标记方法研究 预览 被引量:1
10
作者 韩华 李洁 +1 位作者 薛改 张俊勤 《医疗卫生装备》 CAS 2016年第12期28-31,共4页
目的 :探讨从人脐带华通胶中分离培养间充质干细胞的方法,并对细胞进行标记,为细胞移植奠定基础。方法:采用组织块贴壁法分离培养人脐带华通胶间充质干细胞并进行传代,观察细胞的形态学特征,测定细胞生长曲线,通过流式细胞仪检测细胞... 目的 :探讨从人脐带华通胶中分离培养间充质干细胞的方法,并对细胞进行标记,为细胞移植奠定基础。方法:采用组织块贴壁法分离培养人脐带华通胶间充质干细胞并进行传代,观察细胞的形态学特征,测定细胞生长曲线,通过流式细胞仪检测细胞免疫表型;用荧光染料PKH26对获取的细胞进行体外标记,观察标记细胞形态并记录其生长曲线。结果:组织块贴壁法可以成功地从人脐带华通胶中培养出间充质干细胞,并且在连续增殖传代过程中细胞形态未发生明显变化,细胞生长曲线相似;细胞能够高表达基质细胞抗原(CD29、CD90、CD44、CD105),而低表达造血干细胞抗原(CD34、CD45)和白细胞相关抗原(HLA-DR);PKH26可以标记脐带间充质干细胞,显示红色荧光,且标记细胞形态良好,与未标记细胞的生长曲线相似。结论:组织块贴壁法是一种简便有效的分离脐带间充质干细胞的方法;应用PKH26体外标记细胞成功率高、技术稳定。 展开更多
关键词 脐带华通胶 间充质干细胞 细胞培养 细胞标记 细胞移植
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新生小鼠心肌干细胞与心肌细胞共培养诱导分化试验 预览 被引量:5
11
作者 欧念文 陆东风 +1 位作者 杨镇军 胡德喜 《血栓与止血学》 2010年第1期 5-9,共5页
目的了解心肌条件培养液有无诱导心肌干细胞(cardiacstemcells,CSCs)分化为心肌细胞的作用,CSCs与心肌细胞接触能否影响CSCs向心肌分化。方法用免疫磁珠分选原代CSCs,得到纯化的c—Kit+CSC。分3组培养:条件液组用心肌条件培养液... 目的了解心肌条件培养液有无诱导心肌干细胞(cardiacstemcells,CSCs)分化为心肌细胞的作用,CSCs与心肌细胞接触能否影响CSCs向心肌分化。方法用免疫磁珠分选原代CSCs,得到纯化的c—Kit+CSC。分3组培养:条件液组用心肌条件培养液诱导CSCs21d,混合组分别用PKH26或DAPI标记CSCs后与心肌细胞混合培养8d,空白组无干预培养21d,观察CSCs形态变化。各组完成培养后,用免疫组化法鉴定肌钙蛋白Troponin-T和缝隙连接蛋白connexin43表达。结果心肌条件培养液不能有效诱导CSCs表达心肌细胞特异蛋白Troponin—T和connexin43,未见自发搏动细胞。CSCs与心肌细胞接触后,两者同步搏动。CSCs可表达Troponin—T和eonnexin43。结论心肌条件培养液无诱导CSCs向心肌细胞分化的作用,心肌细胞与CSCs接触能有效诱导CSCs向心肌细胞分化。 展开更多
关键词 心肌干细胞 共培养 诱导
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以小鼠骨髓间充质干细胞为饲养层分离培养胚胎干细胞的研究 预览 被引量:1
12
作者 杨恕玲 单守明 何生虎 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第1期 370-373,共4页
为了探求一种更简单有效地分离培养昆明小鼠胚胎干细胞的饲养层培养体系,实验中收集3.5天的昆明小鼠胚胎,接种于小鼠骨髓间充质干细胞的饲养层培养体系,来分离培养胚胎干细胞。结果在骨髓间充质干细胞的饲养层培养体系上,获得了典型的E... 为了探求一种更简单有效地分离培养昆明小鼠胚胎干细胞的饲养层培养体系,实验中收集3.5天的昆明小鼠胚胎,接种于小鼠骨髓间充质干细胞的饲养层培养体系,来分离培养胚胎干细胞。结果在骨髓间充质干细胞的饲养层培养体系上,获得了典型的ES细胞样集落,经碱性磷酸酶染色呈阳性,且具有分化的潜能。实验结果表明,小鼠骨髓间充质干细胞可以作为饲养层来分离培养ES细胞,并且能保持ES细胞的体外未分化状态。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 胚胎干细胞 细胞培养
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人骨髓细胞体外长期培养的建立 预览
13
作者 顾小锋 马伟吟 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 1995年第5期 253-256,共4页
观察了由髂后上棘、胫骨穿刺抽吸的骨髓液及胸骨手术时刮取的骨髓液,以及在培养过程中不同时间用Ficoll-Hypaque(FH)分离骨髓单个核细胞(MNC)等因素对人骨髓细胞体外长期培养(Long-term human ... 观察了由髂后上棘、胫骨穿刺抽吸的骨髓液及胸骨手术时刮取的骨髓液,以及在培养过程中不同时间用Ficoll-Hypaque(FH)分离骨髓单个核细胞(MNC)等因素对人骨髓细胞体外长期培养(Long-term human bone marrow culture,LTHBMC)的影响。结果显示;由刮取的骨髓液建立的培养,其基质层细胞生长、培养上清液中非粘附细胞及粒单细胞集落形成单位数目均优于抽吸者。原因 展开更多
关键词 骨髓细胞 细胞培养 培养方法 骨髓单核细胞
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突触后致密蛋白95(PSD95)和突触小泡蛋白在神经元成熟过程中的分布 被引量:3
14
作者 柴继侠 王元元 +5 位作者 李徽徽 贺文欣 邹维艳 周艳梅 胡小冬 柴强 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1619-1622,共4页
目的探讨突触后致密蛋白95(PSD95)和突触小泡蛋白(SYP)在原代培养不同时间神经元中的表达。方法采用免疫荧光技术检测原代培养3 d(3DIV)、7DIV和14DIV大脑皮层神经元内的PSD95和SYP的表达。结果 PSD95在3DIV时主分布在神经元胞体;... 目的探讨突触后致密蛋白95(PSD95)和突触小泡蛋白(SYP)在原代培养不同时间神经元中的表达。方法采用免疫荧光技术检测原代培养3 d(3DIV)、7DIV和14DIV大脑皮层神经元内的PSD95和SYP的表达。结果 PSD95在3DIV时主分布在神经元胞体;7DIV时分布在胞体、突起末端和分支处;14DIV时分布在胞体和呈斑点状分布在神经元突起上。SYP在3DIV时无明显表达,7DIV时分布在神经元细胞核内,14DIV时分布在细胞核内和呈斑点状分布在突起上。结论随着培养神经元和突触的发育至成熟,PSD95和SYP最初主位于神经元胞体和细胞核内,最终大都呈斑点状密集分布在突起上。表明PSD95和SYP虽产生部位不同,但最终都与突触的形成和成熟密切相关。 展开更多
关键词 突触后致密蛋白95(PSD95) 突触小泡蛋白(synaptophysin) 神经元 突触 细胞培养
一种更适合培养的番茄叶肉原生质体 预览
15
作者 杨华杰 吴定华 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期 121-122,共2页
一种更适合培养的番茄叶肉原生质体杨华杰吴定华(华南农业大学园艺系,广州,510642)AKINDOFMORESUITABLEMESOPHYLLPROTOPLASTFORCULTURINGOFTOMATOSPECIES... 一种更适合培养的番茄叶肉原生质体杨华杰吴定华(华南农业大学园艺系,广州,510642)AKINDOFMORESUITABLEMESOPHYLLPROTOPLASTFORCULTURINGOFTOMATOSPECIESYangHuajieWuDingh... 展开更多
关键词 叶肉原生质体 原生质体产量 番茄 组织培养
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全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞释放血管性血友病因子和6-酮-前列腺素F1α的影响 预览 被引量:4
16
作者 易小民 谭茜 +3 位作者 彭延古 徐爱良 黄莺 靳铁飞 《中国中西医结合急救杂志》 CAS 北大核心 2010年第6期 334-336,共3页
目的 观察全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞(VEC)释放血管性血友病因子(vWF)和6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)的影响,探讨全蝎抗凝作用的机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),选择生长良好的细胞分为空白对照组、... 目的 观察全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞(VEC)释放血管性血友病因子(vWF)和6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)的影响,探讨全蝎抗凝作用的机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),选择生长良好的细胞分为空白对照组、凝血酶组及全蝎纯化液高、中、低剂量组,每组10个复孔.全蝎纯化液高、中、低剂量组加入凝血酶10 kU/L后,分别加入全蝎纯化液24、12、6 mg/L;凝血酶组加入凝血酶10 kU/L;空白对照组加入等量RPMI1640培养液.各组均培养12 h后收集上清液,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中vWF、6-keto-PGF1α的含量.结果 与空白对照组比较,凝血酶组细胞培养上清液中vWF含量显著升高[(17.01±0.54)%比(6.05±0.49)%]、6-keto-PGF1α含量显著降低[(20.40±1.18) ng/L比(35.20±1.37) ng/L,均P<0.01];与凝血酶组比较,全蝎纯化液高、中、低剂量组vWF均显著降低[(7.18±0.44)%、(8.91±0.47)%、(9.81±0.48)%],6-keto-PGF1α含量均显著升高[(30.10±1.50)、(25.50±1.43)、(23.30±1.47) ng/L],差异有统计学意义(均P<0.01).结论 全蝎纯化液能抑制凝血酶诱导HUVEC释放vWF,并对抗凝血酶抑制HUVEC释放6-keto-PGF1α,提示全蝎纯化液对凝血酶诱导的VEC损伤具有保护作用. 展开更多
关键词 全蝎 凝血酶 血管内皮细胞 血管性血友病因子 6-酮-前列腺素F1Α
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体外培养的人眼小梁细胞的观察 预览
17
作者 彭莉娅 王强 《同济医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第5期 374-376,共3页
自1986年,我们共培养99只人眼的小梁组织,原代培养成活率为18.2%,其中供体年龄小于2岁者成活率22.5%;在24h内取材者为27.3%。共传14~16代,细胞生长呈有限性。成活的小梁细胞在第3~7代生长最快,... 自1986年,我们共培养99只人眼的小梁组织,原代培养成活率为18.2%,其中供体年龄小于2岁者成活率22.5%;在24h内取材者为27.3%。共传14~16代,细胞生长呈有限性。成活的小梁细胞在第3~7代生长最快,细胞形态与活体小梁细胞相似。研究这些细胞将有助于我们了解小梁细胞形态和功能变化的特点。 展开更多
关键词 体外培养 细胞培养 小梁
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小鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及其诱导分化为肺泡上皮细胞 预览 被引量:1
18
作者 陈钦桂 郑海崇 +1 位作者 何婉媚 曾勉 《医学研究生学报》 北大核心 2017年第12期1283-1288,共6页
目的 小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离培养技术门槛高且重复成功率低,一定程度上制约了相关研究的顺利开展。文中尝试优化全骨髓贴壁法分离培养小鼠BMSCs并探索其诱导分化为肺泡上皮细胞的有效方法。方法 采用全骨髓贴壁法培养C57B... 目的 小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离培养技术门槛高且重复成功率低,一定程度上制约了相关研究的顺利开展。文中尝试优化全骨髓贴壁法分离培养小鼠BMSCs并探索其诱导分化为肺泡上皮细胞的有效方法。方法 采用全骨髓贴壁法培养C57BL/6小鼠胫、股骨骨髓内容物,根据克隆状细胞集落大小及数量,动态调整传代时机与比例进行传代培养。取第6代细胞,计数检测细胞增殖能力,流式细胞术检测相关表面标志物,使用小气道上皮细胞培养基(SAEpi CM)进行诱导分化。结果 随着传代次数增加及BMSCs的纯度逐渐提高,第6代细胞增殖速度趋于稳定,流式细胞术分析显示,第6代细胞表达造血干细胞表面标志物CD117的表达率仅为0.008 2%,但高表达骨髓间充质干细胞表面标志物CD29和Sca-1(表达率分别为99.1%和88.5%)。经SAEpi CM培养的BMSCs呈上皮样改变,并表达肺泡细胞的特异表面标志物——肺表面活性物质相关蛋白C。结论 根据克隆状细胞集落大小及数量调整传代时间与比例的全骨髓贴壁培养法可有效分离培养得到小鼠骨髓间充质干细胞,并具有分化为肺泡上皮细胞的潜能。 展开更多
关键词 间充质干细胞 骨髓 细胞分离 原代培养 肺泡上皮细胞
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腺病毒与慢病毒载体对人脂肪间充质干细胞转导效率及基因表达的差异 预览 被引量:2
19
作者 李丹 乔群 +1 位作者 王晓军 钱建平 《中国美容医学》 CAS 2009年第3期 342-345,共4页
目的:比较重组腺病毒、慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白对体外培养的人脂肪来源干细胞(hADSCs)的转导效率和外源基因表达差异。方法:原代分离培养hADSCs并鉴定,应用Ad5F35-EGFP及LV—EGFP以MOI=0、25、50、100、200、400、800感... 目的:比较重组腺病毒、慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白对体外培养的人脂肪来源干细胞(hADSCs)的转导效率和外源基因表达差异。方法:原代分离培养hADSCs并鉴定,应用Ad5F35-EGFP及LV—EGFP以MOI=0、25、50、100、200、400、800感染hADSCs,在1、3、7、14、21天应用荧光显微镜、流式细胞仪观察检测表达EGFP细胞阳性率。MTT法检测转导对hADSCs增殖的影响。YonKossa染色、油红O染色检测体外诱导转导EGFP的hADSCs向成骨及成脂方向分化能力。结果:hADSCs细胞表面标记CD31、CD34、CD45、CD106和HLA-DR阴性,CD29、CD44、CD49d、CD105、CD166阳性。荧光显微镜观察Ad5F35-EGFP感染hADSCs后(1~7天)可见EGFP高表达,此后逐渐减弱;LV—EGFP感染hADSCs后21天,仍可见EGFP高表达。流式细胞仪检测Ad5F35-EGFP、LV-EGFP对hADSCs转导效率与MOI值呈正相关。MTT显示Ad5F35-EGFP在高MOI值(800)检测A值与对照组相比差异显著(P〈0.01)。转导EGFP的hADSCs经体外诱导14天可向成骨、成脂方向分化。结论:与腺病毒相比,慢病毒能够更为安全、有效地感染体外培养hADSCs,并长期表达外源基因,是研究基因修饰hADSCs的理想载体。 展开更多
关键词 人脂肪间充质干细胞 基因治疗 腺病毒 慢病毒
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过表达CD59抑制补体对骨髓间充质干细胞的损伤作用 预览 被引量:2
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作者 肖凯 方真华 +3 位作者 高鑫峰 赵晶晶 黄若昆 谢鸣 《医学研究生学报》 北大核心 2017年第12期1289-1294,共6页
目的 骨髓间充质干细胞(BMSCs)在移植过程中如何避免补体系统攻击的研究相对较少。文中主要探讨在自体移植过程中大鼠BMSCs(r BMSCs)表面CD59过表达对补体攻击r BMSCs的影响。方法 分离培养SD大鼠BMSCs,电转化CD59过表达质粒后,分为... 目的 骨髓间充质干细胞(BMSCs)在移植过程中如何避免补体系统攻击的研究相对较少。文中主要探讨在自体移植过程中大鼠BMSCs(r BMSCs)表面CD59过表达对补体攻击r BMSCs的影响。方法 分离培养SD大鼠BMSCs,电转化CD59过表达质粒后,分为r BMSCs空白组(r BMSCs不做任何处理),r BMSCs/CD59组(r BMSCs+CD59过表达质粒)和r BMSCs空载组(r BMSCs+空载质粒)。采用流式细胞仪检测转化后r BMSCs中CD59表达情况。抽取大鼠颈静脉血分离血清,采用自体血清处理DC59过表达后的r BMSCs,分为r BMSCs组(r BMSCs不与血清共孵育)、r BMSCs+ARS组[r BMSCs+大鼠自体血清(ARS)]、r BMSCs+i ARS组[r BMSCs+已灭活的大鼠自体血清(i ARS)]、r BMSCs/CD59+ARS组[r BMSCs/CD59+ARS]和r BMSCs/CD59+i ARS组。检测自体血清中补体对BMSCs的杀伤作用,补体形成情况以及细胞存活情况。结果 与r BMSCs空白组细胞中CD59表达量比较,r BMSCs/CD59组明显升高(50.5%vs 74.9%,P〈0.05)。与r BMSCs+ARS组细胞的凋亡率[(40.3±4.3)%]比较,r BMSCs组[(8.4±1.1)%]、r BMSCs/CD59+ARS组[(19.1±3.1)%]明显降低(P〈0.05)。与r BMSCs+ARS组细胞中膜上补体膜攻击复合物(MAC)积累(99.7%)比较,r BMSCs组(50.1%)、r BMSCs/CD59+ARS组(71.0%)显著下降(P〈0.05)。r BMSCs/CD59组各时期细胞凋亡率显著低于r BMSCs空白组(P〈0.05)。结论 BMSCs CD59过表达可能通过减少补体攻膜复合物的形成,抑制自体移植过程中补体对r BMSCs的杀伤作用。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 补体 自体移植 补体膜攻击复合物
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