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非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗株的构建和免疫保护特性 被引量:1
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作者 张艳艳 陈腾 +35 位作者 张静远 齐宇 缪发明 薄宗义 王立冬 郭晓宇 周鑫韬 杨金梅 王晓虎 高玉龙 汪春雨 米立娟 孙雪霏 冯娜 杨金金 王承宇 万忠海 李记平 孟轲音 田多 李楠 王述超 王颖 张菲 张锦霞 蒋依倩 刘晔 张守峰 张中洋 钱莺娟 朱鸿飞 高玉伟 陈鸿军 李金祥 扈荣良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1421-1427,共7页
以我国首例非洲猪瘟疫情中分离的流行毒株(SY18)为亲本株构建了多基因家族(MGF)基因和CD2v基因缺失的非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗候选株,针对基因缺失株的安全性和免疫保护效果进行了特性研究。结果显示,MGF和CD2v双基因缺失株(ASFV SY18... 以我国首例非洲猪瘟疫情中分离的流行毒株(SY18)为亲本株构建了多基因家族(MGF)基因和CD2v基因缺失的非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗候选株,针对基因缺失株的安全性和免疫保护效果进行了特性研究。结果显示,MGF和CD2v双基因缺失株(ASFV SY18ΔMGF/ΔCD2v)对猪安全,接种猪能够100%抵抗亲本强毒株SY18株的攻击,对照猪全部死亡;说明该毒株可作为非洲猪瘟疫苗候选株。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 基因缺失 MGF基因 CD2v基因 疫苗候选株 安全性 免疫保护
非洲猪瘟流行病学及其在中国扩散的因素分析 被引量:5
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作者 张睿 黄旖童 +4 位作者 JUNG Yong-Sam 许家荣 钱莺娟 戴建君 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期512-522,共11页
非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染家猪和野猪引起的一种高度传染性和致死性疫病。2018年8月1日,国家外来动物疫病中心接到辽宁省沈阳市发生疑似ASF病例的报告,经官方确认后于201... 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染家猪和野猪引起的一种高度传染性和致死性疫病。2018年8月1日,国家外来动物疫病中心接到辽宁省沈阳市发生疑似ASF病例的报告,经官方确认后于2018年8月3日向世界动物卫生组织(OIE)通报为我国首例非洲猪瘟。截至2019年4月22日,中国已相继暴发了129起ASF疫情,共计扑杀102万头猪。由于尚无针对ASF的有效疫苗,其传播媒介广泛分布及复杂的相互作用使得防控局势变得更为严峻。扑杀猪群和切断病毒的传播路径是目前减缓疫情传播的主要手段。因此,对ASF流行病学特点及其扩散因素的深刻理解,有助于病毒扩散模型的建立和进一步防控措施的实施。 展开更多
关键词 非洲猪瘟(ASF) 非洲猪瘟病毒(ASFV) 流行病学 扩散因素 产业链
马立克病病毒致瘤蛋白Meq转录调节鸡p21基因的表达 被引量:1
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作者 连雪 +3 位作者 杨莎莎 张旭 JUNG Yong-Sam 钱莺娟 《畜牧与兽医》 北大核心 2018年第5期84-88,共5页
为研究马立克病病毒(Marek's disease virus,MDV)致瘤蛋白Meq对细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21表达的调节作用,采用RTPCR、Western blot方法检测Meq蛋白表达在鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEF)中对p21 mRNA和... 为研究马立克病病毒(Marek's disease virus,MDV)致瘤蛋白Meq对细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21表达的调节作用,采用RTPCR、Western blot方法检测Meq蛋白表达在鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEF)中对p21 mRNA和蛋白水平的影响。然后,构建p21启动子的荧光素酶报告载体,检测Meq蛋白对p21的启动子活性的影响。最后,分别用MDV Md5强毒株和CVI988/Rispens疫苗毒株感染CEF细胞,利用Western blot检测MDV感染后p21蛋白水平的变化。结果:过表达Meq上调p21的mRNA和蛋白表达水平,Meq能够激活p21基因启动子活性,MDV感染细胞中p21蛋白的表达水平也有明显升高。这些发现为了解Meq在MDV感染中的作用机理奠定了基础。 展开更多
关键词 MDV Meq致瘤蛋白 P21基因
鸡源p53单克隆抗体的制备和鉴定 预览
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作者 李雪琪 陈鸿军 +5 位作者 连雪 孙海伟 孙雯 JUNG Yong-Sam 钱莺娟 《中国动物传染病学报》 北大核心 2018年第3期72-77,共6页
转录因子p53广泛参与调节机体生理和病理过程,包括生长发育、新陈代谢、免疫应答、肿瘤发生、发展等,但是禽类p53的生物学功能尚不清楚。本研究扩增鸡p53基因并连入p ET-30a原核表达载体,将载体转化至大肠杆菌BL21中,利用IPTG诱导表达p5... 转录因子p53广泛参与调节机体生理和病理过程,包括生长发育、新陈代谢、免疫应答、肿瘤发生、发展等,但是禽类p53的生物学功能尚不清楚。本研究扩增鸡p53基因并连入p ET-30a原核表达载体,将载体转化至大肠杆菌BL21中,利用IPTG诱导表达p53蛋白。经SDS-PAGE分离,收集p53蛋白并免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体。取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,利用免疫印记、间接免疫荧光和酶联免疫吸附法筛选阳性细胞株。共获得6株稳定分泌鸡p53蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1D7、3C4、4D4、4F6、4F7和4H2,均为Ig G亚类,并鉴定了1D7的特异性。本研究成功实现了鸡源p53蛋白的重组表达,制备出特异性较好的抗体,为研究p53在鸡体内的生物学作用奠定了基础。 展开更多
关键词 P53 原核表达 单克隆抗体
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四环素诱导调控DEC1表达的Vero细胞系的构建及鉴定
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作者 郇文彬 明鑫 +3 位作者 洪涛 JUNG Yong-Sam 钱莺娟 《畜牧与兽医》 北大核心 2017年第5期103-108,共6页
为了构建四环素(tetracycline,Tet)诱导的利用Tet-on诱导表达系统调控的Vero-TR母细胞,建立Tet诱导表达或沉默DEC1的Vero细胞系并加以鉴定。试验将表达Tet阻遏蛋白(Tet repressor protein,TetR)的pc DNA6转染至Vero细胞,通过Blastic... 为了构建四环素(tetracycline,Tet)诱导的利用Tet-on诱导表达系统调控的Vero-TR母细胞,建立Tet诱导表达或沉默DEC1的Vero细胞系并加以鉴定。试验将表达Tet阻遏蛋白(Tet repressor protein,TetR)的pc DNA6转染至Vero细胞,通过Blasticidin筛选稳定表达TetR的阳性细胞克隆,即Vero-TetR母细胞系。将克隆有DEC1基因(CDS区的pc DNA4真核表达载体或克隆有特异性靶向DEC1基因的shRNA的p Babe-H1真核表达载体,分别转染至Vero-TR细胞,通过Zeocin或Puromycin筛选诱导表达或沉默DEC1的阳性细胞克隆,命名为Vero-DEC1和VerosiDEC1。利用Western blot检测Vero细胞中Tet诱导表达或沉默DEC1的效果。最后成功构建了Vero-TR、Vero-DEC1和Vero-siDEC1的稳定细胞系,Western blot结果显示DEC1能够在Tet的调控下有效表达或沉默。Vero-TR母细胞系的成功构建为建立其他宿主细胞基因表达或沉默的细胞系提供了重要材料,Vero-DEC1和Vero-siDEC1细胞系的成功构建为研究DEC1在正常或感染等应激情况下的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 Tet诱导调控 细胞系 DEC1 基因表达 基因沉默
鸡细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21单克隆抗体的制备 被引量:1
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作者 李雪琪 连雪 +4 位作者 孙海伟 陈鸿军 JUNG Yong-Sam 钱莺娟 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2017年第6期701-706,共6页
为制备特异性的鸡细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21单克隆抗体(mAb),利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增鸡p21基因,将其克隆入原核表达载体pET-30a中,随后转化进入BL21(DE3)中,利用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经SDS... 为制备特异性的鸡细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21单克隆抗体(mAb),利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增鸡p21基因,将其克隆入原核表达载体pET-30a中,随后转化进入BL21(DE3)中,利用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离。切胶研磨,将收集的鸡p21蛋白腹腔免疫BALB/c小鼠,三免后,选取抗体阳性的小鼠脾与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合并筛选单抗。结果显示,经亚克隆纯化,共筛选获得12株阳性杂交瘤细胞株,即1B12、1E12、1H7、2B5、2C5、2C8、2D8、2F2、3C11、3D6、3G7和4G6。利用间接免疫荧光(IFA)、酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫印迹检测单抗效价。成功制备了特异性鸡p21单抗。这为进一步研究鸡p21生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 P21 单克隆抗体 原核表达
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