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布鲁菌分子标记菌壳株的构建与鉴定
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作者 卜昭阳 钱晶 +8 位作者 梁佳茗 王莉 屈海龙 王晓旭 杨艳玲 王秀然 广 郎需龙 王兴龙 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1533-1539,共7页
旨在构建一种安全、高效的犬布鲁菌分子标记疫苗株。本试验将温控裂解部件(TLC)插入布鲁菌自杀质粒pBK-CMV-SacB-ΔB0419中,构建温控裂解型自杀质粒pBK-CMV-SacB-ΔB0419-TLC;通过电转化方式转入犬布鲁菌RM6/66感受态中,经卡那抗性和蔗... 旨在构建一种安全、高效的犬布鲁菌分子标记疫苗株。本试验将温控裂解部件(TLC)插入布鲁菌自杀质粒pBK-CMV-SacB-ΔB0419中,构建温控裂解型自杀质粒pBK-CMV-SacB-ΔB0419-TLC;通过电转化方式转入犬布鲁菌RM6/66感受态中,经卡那抗性和蔗糖培养基的正、负向筛选,将TLC片段定点插入布鲁菌B0419基因中,获得犬布鲁菌分子标记菌壳株。采用PCR法对连续30代次的菌株进行鉴定,结果显示裂解E基因和靶向插入位点区域(B0419基因)并未出现丢失和回复突变现象,表明该菌壳株具有良好的遗传稳定性。该菌壳株在培养至D600值为0.6时,经42℃诱导60 h后,可获得裂解率达100%的犬布鲁菌菌壳;经超薄切片和染色处理后,在透射电镜观察下可见形态完整的空心结构,其内容物明显减少。本试验结合细菌菌壳技术与同源重组技术,成功构建了具有分子标记特征的犬布鲁菌菌壳株,为新型布鲁菌疫苗的研制提供策略。 展开更多
关键词 犬布鲁菌 分子标记 细菌菌壳 同源重组 候选疫苗
一种大肠杆菌噬菌体新裂解酶的表达与活性检测 被引量:4
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作者 吕萌 王爽 +3 位作者 广 冯新 顾敬敏 雷连成 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期211-215,220共6页
前期分离得到1株具有较强裂解能力的大肠杆菌噬菌体vB_EcoM-ep3。测序后发现,噬菌体vB_EcoM?ep3的裂解酶基因在大肠杆菌噬菌体中尚未报道,能够编码一种新的裂解酶,并与绿脓杆菌噬菌体裂解酶具有很高同源性。为了探讨该裂解酶对大... 前期分离得到1株具有较强裂解能力的大肠杆菌噬菌体vB_EcoM-ep3。测序后发现,噬菌体vB_EcoM?ep3的裂解酶基因在大肠杆菌噬菌体中尚未报道,能够编码一种新的裂解酶,并与绿脓杆菌噬菌体裂解酶具有很高同源性。为了探讨该裂解酶对大肠杆菌和绿脓杆菌的裂解活性,克隆了vB_EcoM-ep3的裂解酶基因,经原核表达和纯化,体外评价了Lysep3裂解活性。结果表明:克隆裂解酶基因Lysep3长为492 bp;表达蛋白分子质量为17.7 ku;裂解酶单独作用时,对大肠杆菌和绿脓杆菌均不能裂解,但是能够显著抑制生长;与柠檬酸配合使用(0.5 mg/mL终浓度的Lysep3和0.5 mmol/L终浓度的柠檬酸),对大肠杆菌和绿脓杆菌均表现出较好的裂解能力,作用从2~24 h持续有效,细菌数量分别下降7.2倍和17.3倍。该结果表明,vB_EcoM?ep3的裂解酶不但在基因序列上与绿脓杆菌存在进化关系,在功能上也具有相关性。该研究为解析裂解酶结构与功能的关系提供了一个良好的例证,同时有助于裂解酶的广谱性改造。 展开更多
关键词 噬菌体裂解酶 大肠杆菌 绿脓杆菌 原核表达
应用VirB12蛋白建立检测牛布鲁菌血清抗体的方法 被引量:1
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作者 王冲 孙勇 +6 位作者 戚帅 宋砚泽 田武林 崔敏 薛雨佳 张西臣 广 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期400-403,共4页
从牛布鲁菌基因组中克隆出VirB12基因,以pET-28α(+)为模板构建VirB12原核表达载体pET-V12,pET-V12在E.coli BL21(DE3)中表达重组VirB12蛋白。经Western-blotting分析,表明重组的VirB12蛋白具有免疫原性。以纯化的VirB12蛋白为抗原... 从牛布鲁菌基因组中克隆出VirB12基因,以pET-28α(+)为模板构建VirB12原核表达载体pET-V12,pET-V12在E.coli BL21(DE3)中表达重组VirB12蛋白。经Western-blotting分析,表明重组的VirB12蛋白具有免疫原性。以纯化的VirB12蛋白为抗原,建立了间接ELISA检测牛布鲁菌抗体的方法。经对300份牛血清样品间接ELISA与虎红平板试验(RBPT)检测结果的比较,该方法的敏感性为89%,特异性为98.3%,准确度为92.7%。 展开更多
关键词 牛布鲁菌 VirB12蛋白 原核表达 间接ELISA
牛种布鲁菌VirB12蛋白的原核表达及纯化 被引量:1
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作者 唐峰 广 +2 位作者 唐雨顺 刘永华 李冰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第8期1130-1133,共4页
目的原核表达并纯化牛种布鲁菌(Brucella)VirB12蛋白。方法利用PCR法从牛种布鲁菌基因组中扩增VirB12基因,插入pET-30a(+)载体,构建重组表达质粒pETV12,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经组氨酸结合树脂... 目的原核表达并纯化牛种布鲁菌(Brucella)VirB12蛋白。方法利用PCR法从牛种布鲁菌基因组中扩增VirB12基因,插入pET-30a(+)载体,构建重组表达质粒pETV12,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经组氨酸结合树脂柱纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果重组表达质粒pETV12经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约22 000,纯化的重组蛋白纯度达94%,可被布鲁菌免疫兔血清特异性识别。结论原核表达并纯化了牛种布鲁菌VirB12蛋白,为进一步研究VirB12蛋白的结构、功能及相关疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 布鲁菌 VirB12基因 原核细胞 基因表达
引发仔猪水样腹泻的多重耐药、高致病性大肠埃希菌的分离与鉴定 预览 被引量:5
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作者 薛雨佳 于大勇 +2 位作者 崔敏 吕岩 广 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期204-208,共5页
近来,长春地区多个养猪场发生高致病性、高死亡率的仔猪水样腹泻,腹泻仔猪经多种药物反复治疗,均无疗效。试验从发病仔猪肠壁内膜分离到2株大肠埃希菌(Escherichia coli),经鉴定,分离菌株为多耐药、高致病性菌株。将分离株进行生化试... 近来,长春地区多个养猪场发生高致病性、高死亡率的仔猪水样腹泻,腹泻仔猪经多种药物反复治疗,均无疗效。试验从发病仔猪肠壁内膜分离到2株大肠埃希菌(Escherichia coli),经鉴定,分离菌株为多耐药、高致病性菌株。将分离株进行生化试验及其16S rRNA序列的克隆、测序,并与GenBank中的序列进行对比,结果显示,分离菌株16S rRNA与GenBank登录的大肠埃希菌序列同源性达99%。动物回归试验结果显示,该大肠埃希菌能引起仔猪水样腹泻。药敏试验结果显示,常用治疗大肠杆菌病的药物如庆大霉素、氧氟沙星、环丙沙星等均对其无效。 展开更多
关键词 大肠杆菌 16S RRNA 药敏试验 分离鉴定 水样腹泻
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牛型结核分枝杆菌MPT64蛋白的原核表达及纯化
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作者 谭为 聂映 +4 位作者 吴仁彪 程黎庆 广 张西臣 张瑞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第9期1054-1056,1060共4页
目的原核表达并纯化牛型结核分枝杆菌MPT64蛋白。方法以牛型结核分枝杆菌Vallee株全基因组DNA为模板,PCR扩增MPT64基因,克隆至pET-28a(+)载体,构建重组原核表达质粒pET-MPT64,转化至E.coli BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。表达产物经SD... 目的原核表达并纯化牛型结核分枝杆菌MPT64蛋白。方法以牛型结核分枝杆菌Vallee株全基因组DNA为模板,PCR扩增MPT64基因,克隆至pET-28a(+)载体,构建重组原核表达质粒pET-MPT64,转化至E.coli BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE鉴定后,用Ni-NTA亲和层析纯化,Western blot鉴定纯化蛋白。结果获得的MPT64基因测序结果与GenBank中登录的MPT64基因核苷酸序列同源性为100%;重组表达质粒pET-MPT64经酶切鉴定表明构建正确;表达的重组MPT64蛋白相对分子质量约为26 000,主要以可溶性形式表达,表达量约占全菌总蛋白的11%;纯化的重组MPT64蛋白纯度达93%,可与抗结核牛血清发生特异性反应。结论 成功原核表达并纯化了牛型结核分枝杆菌MPT64蛋白,其可作为诊断抗原用于新型牛结核病的检测。 展开更多
关键词 牛型结核分枝杆菌 MPT64蛋白 原核细胞 基因表达 纯化
几例新型仔猪腹泻的诊治 预览 被引量:5
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作者 聂映 谭为 +7 位作者 周磊 程黎庆 张志敏 高华义 王晓岑 张瑞 魏立宾 广 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第8期201-204,共4页
试验旨在对近来多省份流行的仔猪腹泻病原菌进行分离及鉴定,并研究其防治方法。通过临床症状观察、病理解剖、病原菌分离、镜检、菌落形态观察、生化鉴定、动物试验等方法对该病进行综合研究。从多个发病养殖场的腹泻仔猪病变部位分离... 试验旨在对近来多省份流行的仔猪腹泻病原菌进行分离及鉴定,并研究其防治方法。通过临床症状观察、病理解剖、病原菌分离、镜检、菌落形态观察、生化鉴定、动物试验等方法对该病进行综合研究。从多个发病养殖场的腹泻仔猪病变部位分离到一株魏氏梭菌,并探索了其防治方法。结果表明,当前发生的严重仔猪腹泻与感染魏氏梭菌密切相关,采用治疗魏氏梭菌病的方法对该病进行治疗及利用灭活自场疫苗对其预防效果均明显。 展开更多
关键词 猪魏氏梭菌 仔猪腹泻 魏氏梭菌鉴定
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依托实验教学中心充分发挥班主任作用 预览 被引量:2
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作者 董怀智 广 +1 位作者 邢沈阳 梅娜 《实验室研究与探索》 CAS 北大核心 2011年第9期 117-120,共4页
大学生创新能力的培养已成为高校育人工程的核心内容之一,也是近几年实验教学中心教学改革的热点。大学生班主任(辅导员)在服务育人这方面有着得天独厚的师资条件与校内管理资源,如果能充分发挥他们在大学生创新能力培养方面的作用... 大学生创新能力的培养已成为高校育人工程的核心内容之一,也是近几年实验教学中心教学改革的热点。大学生班主任(辅导员)在服务育人这方面有着得天独厚的师资条件与校内管理资源,如果能充分发挥他们在大学生创新能力培养方面的作用,将会为大学生创新能力培养提供更好的帮助。主要结合在校实践,研究了班主任与实验教学中心共同培养大学生创新能力的工作思路与办法,探讨了班主任(辅导员)在培养大学生科学素质和创新能力的过程用,对于提升我国高校现行体制下的创新人才培养质量具有很重要的实践参考价值。 展开更多
关键词 实验教学中心 班主任 辅导员 创新人才培养
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四环素及β-内酰胺耐药性基因芯片的制作及优化 预览
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作者 路浩 王兴龙 +5 位作者 李晓艳 郎需龙 王瑞红 张付贤 广 李研东 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期 148-151,I0003,共5页
目的优化四环素及D-内酰胺耐药性基因芯片制作和杂交条件。方法设置多组实验,逐一改变影响寡核苷酸在玻片表面固定及芯片杂交效率的实验条件,从中优化出芯片实验的最佳条件。结果得出的最佳条件是:探针以30pmol/μL的终浓度溶于50... 目的优化四环素及D-内酰胺耐药性基因芯片制作和杂交条件。方法设置多组实验,逐一改变影响寡核苷酸在玻片表面固定及芯片杂交效率的实验条件,从中优化出芯片实验的最佳条件。结果得出的最佳条件是:探针以30pmol/μL的终浓度溶于50%二甲基亚砜中,在温度为20℃、湿度70%的条件下点制在基片上;荧光探针纯化后使用2×杂交液在42℃湿盒中杂交5h。结论优化出了耐药基因芯片制作和杂交的最佳条件,总结出芯片制作优化的方法。 展开更多
关键词 基因芯片 制作 优化
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蜡样芽孢杆菌ATCC14579毒力基因plcR缺失株的构建及其一般特性 预览 被引量:3
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作者 吴威 郑经成 +5 位作者 广 王思洮 盛相鹏 胡丹 张阳阳 韩文瑜 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期 658-664,共7页
蜡样芽孢杆菌是土壤中的优势菌,具有作为益生菌的潜在能力,同时它也是条件致病菌,能引起食物中毒等。蜡样芽孢杆菌的多种毒力因子受到多效性调控子(pleiotropic regulator,plcR)的调控,在其条件致病性作用中起着重要作用。真养产碱杆... 蜡样芽孢杆菌是土壤中的优势菌,具有作为益生菌的潜在能力,同时它也是条件致病菌,能引起食物中毒等。蜡样芽孢杆菌的多种毒力因子受到多效性调控子(pleiotropic regulator,plcR)的调控,在其条件致病性作用中起着重要作用。真养产碱杆菌JMP34(Alcaligenes eutrophus)质粒上的2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-dichlorophenoxyacetic acid,2,4-D)单加氧酶(tfdA)基因可以降解2,4-D。本研究利用同源重组技术使tfdA基因置换掉蜡样芽孢杆菌的plcR基因,构建了蜡样芽孢杆菌ATCC14579突变株B.cereus△plcRΩtf-dA,并对其毒性、一般生理生化特性进行分析。研究结果表明,突变株B.cereus△plcRΩtfdA的毒性显著减弱;生理生化实验结果显示突变株与野生株并没有明显区别,且突变株并没有表现出tfdA酶活性。所有的结果表明plcR控制着蜡样芽孢杆菌ATCC14579的致病性,同时剔除plcR并不破坏其酶系统。本研究为今后构建蜡样芽孢杆菌工程菌提供了新的思路和依据。 展开更多
关键词 蜡样芽孢杆菌 plcR基因 tfdA基因 同源重组
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动物科技实验教学中心建设与改革 预览 被引量:5
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作者 成军 李颖 +4 位作者 广 丁雪梅 杨举 范振勤 赵志辉 《实验室研究与探索》 CAS 北大核心 2010年第5期,共4页
以省实验教学示范中心建设为契机,不断更新实验教学观念,以提高综合素质为根本,强化实践能力为重点,培养创新型人才为目标,从中心实验教学理念、师资队伍建设、实验教材编写、实验教学体系构建、中心管理模式与运行机制等方面进行了探... 以省实验教学示范中心建设为契机,不断更新实验教学观念,以提高综合素质为根本,强化实践能力为重点,培养创新型人才为目标,从中心实验教学理念、师资队伍建设、实验教材编写、实验教学体系构建、中心管理模式与运行机制等方面进行了探索与实践。 展开更多
关键词 实验教学中心 队伍建设 教学改革
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牛布鲁菌L7/L12蛋白的原核表达及纯化 被引量:1
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作者 梁晓英 赵娜 +3 位作者 王贤平 郑经成 吴威 广 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第8期762-764,共3页
目的原核表达并纯化牛布鲁菌L7/L12蛋白。方法提取牛布鲁菌S19基因组DNA,PCR法扩增L7/L12基因,经测序正确后,克隆至pET-28a(+)载体,构建重组原核表达质粒pET—L7/L12,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。SDS—PAGE分析... 目的原核表达并纯化牛布鲁菌L7/L12蛋白。方法提取牛布鲁菌S19基因组DNA,PCR法扩增L7/L12基因,经测序正确后,克隆至pET-28a(+)载体,构建重组原核表达质粒pET—L7/L12,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。SDS—PAGE分析目的蛋白的表达形式及表达量,经亲和层析纯化后,Western blot鉴定纯化产物。结果所构建的重组原核表达质粒pET—L7/L12经酶切鉴定表明构建正确。重组蛋白以包涵体形式表达,表达量占全菌总蛋白的33%;纯化的重组蛋白纯度可达94%,可与布鲁菌小鼠免疫血清发生特异反应。结论已成功表达并纯化了牛布鲁菌L7/L12蛋白,为建立高特异性的新型布鲁菌检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 牛布鲁菌 L7/L12蛋白 原核表达 纯化
鉴别布鲁菌病自然感染动物与疫苗免疫动物胶体金检测试纸条的研制 预览 被引量:11
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作者 张付贤 李晓艳 +5 位作者 广 唐婕 杨延玲 路浩 郎需龙 王兴龙 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第7期 79-82,共4页
用金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)标记胶体金技术制作金标垫,以亲和层析法纯化的BP26蛋白作为检测抗原(T线),研制胶体金快速检测试纸条。用建立的试纸条检测小鼠布鲁菌感染血清,可成功鉴别牛布鲁菌S19感染和BP26缺失疫苗株YZ-2免疫的小... 用金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)标记胶体金技术制作金标垫,以亲和层析法纯化的BP26蛋白作为检测抗原(T线),研制胶体金快速检测试纸条。用建立的试纸条检测小鼠布鲁菌感染血清,可成功鉴别牛布鲁菌S19感染和BP26缺失疫苗株YZ-2免疫的小鼠。试纸条检测与布鲁菌属同源性较近的几株细菌的阳性血清,结果无交叉反应;试纸条敏感性高于虎红平板凝集试验检测方法,近似于ELISA方法;准确性同于ELISA法,且更为简便快捷。该试纸条具有鉴别布鲁菌病自然感染和疫苗免疫的应用前景。 展开更多
关键词 布鲁菌病 BP26蛋白 胶体金试纸条 鉴别
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单增李斯特氏菌actA基因的克隆及原核表达 预览
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作者 张辉 王兴龙 +5 位作者 王俊霞 李晓艳 卜昭阳 张爱玲 崔丽瑾 广 《畜牧与兽医》 北大核心 2008年第3期 14-17,共4页
利用PCR技术从单增李斯特氏菌中扩增出actA基因,将PCR产物纯化后克隆到pMD 18T simple vector中,成功构建出克隆载体pMD-18T/actA。以BamH I和EcoR I分别双酶切pMD-18T/ActA和表达载体pGEX-3X,将纯化的actA基因亚克隆到表达载体pGEX... 利用PCR技术从单增李斯特氏菌中扩增出actA基因,将PCR产物纯化后克隆到pMD 18T simple vector中,成功构建出克隆载体pMD-18T/actA。以BamH I和EcoR I分别双酶切pMD-18T/ActA和表达载体pGEX-3X,将纯化的actA基因亚克隆到表达载体pGEX-3X。构建的重组表达载体pGEX-3X/ActA转化到E.coli BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE分析,可见约120ku外源蛋白带,Western blot分析表明该蛋白可与单增李斯特氏菌多克隆抗体发生特异性反应。该研究为AetA的生物学特性和功能的研究及诊断试剂的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 单增李斯特氏菌 actA基因 克隆 原核表达
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口蹄疫病毒2B基因绿色荧光蛋白融合表达质粒的构建及表达 预览 被引量:1
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作者 崔丽瑾 王兴龙 +6 位作者 梅英武 任林柱 广 张辉 郎需龙 段小宇 路浩 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第9期 756-758,共3页
目的构建口蹄疫病毒(FMDV)2B基因绿色荧光蛋白(GFP)融合表达质粒,并在BHK-21细胞中表达。方法RT-PCR扩增O型口蹄疫病毒WFL株的2B基因,克隆入表达载体pEGFP-C1,并进行双酶切、PCR及测序鉴定。将阳性重组质粒转染BHK-21细胞,检测绿色... 目的构建口蹄疫病毒(FMDV)2B基因绿色荧光蛋白(GFP)融合表达质粒,并在BHK-21细胞中表达。方法RT-PCR扩增O型口蹄疫病毒WFL株的2B基因,克隆入表达载体pEGFP-C1,并进行双酶切、PCR及测序鉴定。将阳性重组质粒转染BHK-21细胞,检测绿色荧光蛋白的表达和2B基因转录水平。结果经双酶切及PCR鉴定,目的基因片段大小与预期相符,测序结果与WFL株相应序列一致。荧光显微镜和流式细胞仪均检测到细胞内绿色荧光蛋白的表达,荧光定量PCR检测到细胞内有2B基因的转录。结论已成功构建了FMDV2B基因GFP融合表达质粒,并在BHK-21细胞中获得了表达。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 2B基因 绿色荧光蛋白 融合表达
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新城疫病毒TL1株P、NP、L蛋白基因表达载体的构建及鉴定 预览 被引量:1
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作者 王学理 李晓艳 +5 位作者 关洪玉 任林柱 刘锴 殷小宇 广 王兴龙 《内蒙古民族大学学报:自然科学版》 2007年第4期 417-421,共5页
将新城疫病毒TL1株的P、NP、L基因通过RT-PCR方法从尿囊液中扩增后分别克隆进pGEM-Teasy载体,再分别亚克隆到真核表达载体pCI-neo上,命名为pCI-P、pCI-NP、pCI-L,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确.纯化后的重组质粒单独转染BHK-21细胞,... 将新城疫病毒TL1株的P、NP、L基因通过RT-PCR方法从尿囊液中扩增后分别克隆进pGEM-Teasy载体,再分别亚克隆到真核表达载体pCI-neo上,命名为pCI-P、pCI-NP、pCI-L,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确.纯化后的重组质粒单独转染BHK-21细胞,经间接免疫荧光试验检测到了P、NP、L蛋白的表达.新城疫病毒TL1株的P、NP、L基因的克隆成功,为即将进行的新城疫病毒的反向遗传操作奠定了基础. 展开更多
关键词 新城疫病毒 P、NP、L基因 间接免疫荧光 表达
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新城疫病毒TL1株P基因的克隆及序列分析 预览
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作者 王学理 王兴龙 +3 位作者 李晓艳 任林柱 张辉 广 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2007年第3期 32-34,共3页
根据GenBank登陆的新城疫病毒P基因序列。设计了一对引物。用RT—PCR技术对新城疫病毒内蒙古分离株TL1的P基因进行了扩增。将扩增产物提纯后克隆入pGEM—Teasy载体,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确。测序拼接得出P基因的序列长度为124... 根据GenBank登陆的新城疫病毒P基因序列。设计了一对引物。用RT—PCR技术对新城疫病毒内蒙古分离株TL1的P基因进行了扩增。将扩增产物提纯后克隆入pGEM—Teasy载体,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确。测序拼接得出P基因的序列长度为1248bp,该基因的ORF总长为1188bp。编码395个氨基酸。与GenBank下载的12株参考毒株比较P基因编码区全核苷酸序列和氨基酸序列.发现TL1株与鹅源新城疫NA-1株核苷酸的同源性为99.8%.氨基酸的同源性为99.2%:与鹅源新城疫ZJ1株核苷酸的同源性为96.1%,氨基酸的同源性为95.5%。说明TL1株和与鹅源新城疫NA-1株、ZJ1株的同源性极高。它们三者亲缘关系较近.同属于基因VII型新城疫病毒。而与传统疫苗株LaSota核苷酸的同源性为83.4%.氨基酸的同源性81.8%.说明该毒株相对于经典的NDV在P基因上已发生了较大的变异。 展开更多
关键词 新城疫病毒 P基因 序列分析
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布鲁菌BP26基因的克隆、表达及纯化 预览
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作者 广 王兴龙 +7 位作者 张辉 刘锴 庞盼娇 王学理 高健勇 李晓燕 张付贤 王俊霞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第12期 887-889,共3页
目的克隆布鲁氏菌BP26基因,并在大肠杆菌中高效表达及纯化BP26蛋白。方法提取布鲁氏菌基因组DNA,用PCR扩增出BP26基因,并克隆到pMD18-T载体上,测序正确后,再亚克隆至pET-28a(+)载体上,转化到大肠杆菌BL21(DF3)中,用IPrG诱... 目的克隆布鲁氏菌BP26基因,并在大肠杆菌中高效表达及纯化BP26蛋白。方法提取布鲁氏菌基因组DNA,用PCR扩增出BP26基因,并克隆到pMD18-T载体上,测序正确后,再亚克隆至pET-28a(+)载体上,转化到大肠杆菌BL21(DF3)中,用IPrG诱导表达,经组氨酸结合树脂柱纯化,并对纯化后的表达产物进行Westernblot鉴定。结果重组质粒pETBP26经NdeI与sal I酶切后,可见大小分别为5400和700bp的片段,与理论值相符。转化大肠杆菌BL21(DF3)后,37℃诱导4h,经SDS-PAGE分析,高效表达出带有His-tag标签的融合蛋白BP26,纯化后的蛋白纯度达96%,经Westernblot分析,目的蛋白具有抗原特异性。结论已成功克隆了BP26基因,且表达并纯化了布鲁氏菌BP26蛋白。 展开更多
关键词 布鲁菌 BP26蛋白 基因克隆 原核表达 纯化
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新城疫病毒TL1株M基因的克隆和序列分析 预览
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作者 王学理 王兴龙 +5 位作者 李晓艳 刘锴 任林柱 崔丽瑾 广 段小宇 《畜牧与兽医》 北大核心 2007年第5期 8-11,共4页
采用RT-PCR方法扩增了新城疫病毒(NDV)TL1株M基因,将扩增产物提纯后克隆入pGEM-Teasy载体,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确。测序拼接得出M基因的序列长度为1232bp,该基因的ORF总长为1095bp,编码364个氨基酸。与GenBank下载的15... 采用RT-PCR方法扩增了新城疫病毒(NDV)TL1株M基因,将扩增产物提纯后克隆入pGEM-Teasy载体,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确。测序拼接得出M基因的序列长度为1232bp,该基因的ORF总长为1095bp,编码364个氨基酸。与GenBank下载的15株参考毒株M基因比较,核苷酸同源性为85.2%~98.1%,编码的氨基酸同源性为85.8%~98.9%。NDVTL1产生M蛋白分子中有7对碱性氨基酸,5个保守的Cys残基,与鹅源新城疫SF02株、ZJ1株具有类似的特征。这些结果为揭示NDVTL1株的分子生物学背景,阐明NDV种间传播机制奠定了基础。 展开更多
关键词 新城疫病毒 M基因 遗传变异
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布鲁氏菌分子标记、毒力缺失疫苗株△S19-2的构建 预览 被引量:16
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作者 广 王兴龙 +5 位作者 任林柱 刘锴 高建勇 王学理 张辉 李晓燕 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期 690-694,699,共6页
通过构建自杀质粒,用定向同源重组的方法,把改造的萤火虫萤光素酶报告基因Luc NF^+替换布鲁氏菌S19疫苗株Bp26基因部分片段,构建出布鲁氏菌Bp26基因缺失突变株△S19-1。在此基础上,用同样的方法,敲除△S19-1上的毒力基因Bmp18,构建成△... 通过构建自杀质粒,用定向同源重组的方法,把改造的萤火虫萤光素酶报告基因Luc NF^+替换布鲁氏菌S19疫苗株Bp26基因部分片段,构建出布鲁氏菌Bp26基因缺失突变株△S19-1。在此基础上,用同样的方法,敲除△S19-1上的毒力基因Bmp18,构建成△S19-2。用PCR与萤光素酶报告基因在布鲁氏菌中表达的方法进行验证,结果表明Bp26基因与Bmp18基因改造成功,△S19-2具有Bp26基因分子标记、Bmp18毒力基因缺失的特点。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 Bp26 分子标记 Bmp18 毒力缺失 同源重组 自杀质粒 LucNF+ sacB
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