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猪重要病毒性病原多重PCR检测方法建立及应用 预览
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作者 王朋冲 姜艳芬 +5 位作者 周宏超 李春燕 李鑫鑫 罗丽华 冯秀 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第6期41-46,共6页
本试验针对当前对养猪业危害严重的猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV),分别建立了检测CSFV和PRRSV的双重RT-PCR方法和检测PCV2、 PRV及PPV的多重PCR方法。所建... 本试验针对当前对养猪业危害严重的猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV),分别建立了检测CSFV和PRRSV的双重RT-PCR方法和检测PCV2、 PRV及PPV的多重PCR方法。所建立的方法对 CSFV、PRRSV、PCV2、PRV和 PPV核酸的检出量分别为 7.5 pg/Μl、14.2 pg/Μl、6.9 pg/Μl、9.2 pg/Μl 和 8.6 pg/Μl。应用建立的方法分别对陕西省的陕南、陕北、关中等地区部分猪场采集的118份血清进行病毒检测。5种病毒的检出率分别是,CSFV为 4.23%(5/118),PRRSV为 22.01%(26/118),PCV2 为15.25%(18/118),PRV为 22.88%(27/118),从血清样品中未检测到 PPV。本研究建立的检测RNA 病毒双重RT-PCR和Dna 病毒的多重PCR方法,为猪主要病毒其快速检测提供了可选择方法。 展开更多
关键词 病毒 检测 双重 RT-PCR 多重 PCR
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检测猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性和经典毒株可视化RT-LAMP方法的建立
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作者 王凯 杨飞 +7 位作者 罗丽华 王韦华 李鑫鑫 周宏超 范志新 田昊伦 冯全文 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1660-1666,1673共8页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是目前影响养猪业的重要病毒之一,国内PRRSV是以美洲型为主,根据致病性的强弱又可分为高致病性(HP)和经典性PRRSV毒株,高致病性PRRSV是引起国内2006... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是目前影响养猪业的重要病毒之一,国内PRRSV是以美洲型为主,根据致病性的强弱又可分为高致病性(HP)和经典性PRRSV毒株,高致病性PRRSV是引起国内2006年'猪高热病'的主要病原。PRRSV属于条件性致病病毒,对PRRSV感染猪和发病猪的准确、快速检测是采取有效措施的前提和依据。环介导等温扩增技术(LAMP)是一种敏感、快速、操作相对简便的核酸扩增技术,整个反应在单一温度下进行,反应结果可以通过肉眼观察,在动物病原检测方面应用较多。本试验通过GenBank获得了HP-PRRSV和经典PRRSV分离株序列,选择2种毒株共同的保守基因区段,设计了用于检测PRRSV的RT-LAMP引物。通过对反应体系、反应温度、特异性、敏感性等优化,建立了检测PRRSV的RT-LAMP方法。建立的方法总体系为25μL,外引物终浓度为0.20μmol/L、内引物终浓度为1.60μmol/L,63.0℃恒温作用1 h,给反应产物中加入1μL SYBR GreenⅠ,阳性结果呈绿色,紫外光下可见荧光,阴性结果呈橙色,紫外光下无荧光。方法对PRRSV RNA的最低检测质量浓度为9.44×10-5 mg/L。用建立的方法对临床送检的19份猪样品(血清和组织)进行检测,与国标(GB/T 27517-2011)的HP-PRRSV和PRRSV双重RT-PCR检测方法进行对比,双重RT-PCR方法检测出6份阳性,RT-LAMP方法检测出8份阳性。本试验建立了检测PRRSV经典毒株和高致病毒株的RT-LAMP方法,为PRRSV的检测提供了可选择的方法。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 逆转录环介导等温核酸扩增 病毒检测
非洲猪瘟的流行概况及防控策略 被引量:3
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作者 王凯 范志新 +4 位作者 田昊伦 孙颖 冯全文 周宏超 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1027-1034,共8页
非洲猪瘟(ASF)由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起家猪和野猪的一种高度接触性、致死性传染病,本病发病过程短,发病率和死亡率最高可达100%。目前,针对ASF的防控既无有效的疫苗,也无有效的治疗方法,一旦发生只能全群扑杀。我国生猪的养殖量约占... 非洲猪瘟(ASF)由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起家猪和野猪的一种高度接触性、致死性传染病,本病发病过程短,发病率和死亡率最高可达100%。目前,针对ASF的防控既无有效的疫苗,也无有效的治疗方法,一旦发生只能全群扑杀。我国生猪的养殖量约占全球的1/2,ASF疫情的蔓延将对我国生猪养殖造成重大危害,防控和根除ASF刻不容缓。由于对ASF的流行特点、传播途径、感染机制等的研究还不深入,对本病的防控还缺少更加有效的措施,还有待做全面深入的研究。本研究通过介绍ASF的流行概况、传染源、扩散途径、以及国外防控ASF的主要措施,分析其失败与成功的原因,借鉴其制定的根除计划及采取的防控措施,以期为我国ASF的防控提供参考。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 流行概况 防控策略 中国
端粒酶基因转染猪气管黏膜上皮细胞增殖特性的研究
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作者 汤智慧 王津津 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第11期92-96,182共6页
为了研究外源性端粒酶(hTERT)基因导入后对原代培养猪气管黏膜上皮细胞(STECs)增殖活性的影响,试验将外源性hTERT基因转染至原代分离培养的STECs中,以脂质体法用重组质粒pCI-neo-hTERT转染STECs;通过倒置显微镜观察细胞形态,间接免疫荧... 为了研究外源性端粒酶(hTERT)基因导入后对原代培养猪气管黏膜上皮细胞(STECs)增殖活性的影响,试验将外源性hTERT基因转染至原代分离培养的STECs中,以脂质体法用重组质粒pCI-neo-hTERT转染STECs;通过倒置显微镜观察细胞形态,间接免疫荧光法鉴定8型角蛋白的上皮源性;用PCR和Western-blot法检测转染后STECs中hTERT基因的表达情况;用MTT法和流式细胞仪分别检测转染细胞的活力和增殖周期。结果表明:脂质体和质粒体积比会影响转染效率,当二者比例为1∶3时,转染效率最佳;转染细胞经PCR扩增得到大小为461bp的片段,Western-blot检测得到大小为125 ku的条带;转染后的细胞仍然符合上皮源性细胞的生长特点;细胞活力曲线显示,在接种后的第3~5天细胞增殖速度最快;细胞周期测定显示,转染细胞的细胞核型为2倍体,S期细胞达到48.35%。说明原代培养的STECs转染外源性hTERT基因后,细胞增殖活性增高,并保持了基本的细胞生物学特征,有进一步建立稳定传代细胞系的可能。 展开更多
关键词 猪气管黏膜上皮细胞 原代培养 HTERT 转染 增殖特性 上皮源性
腹泻仔猪肠道菌群的ERIC-PCR指纹图谱分析 预览
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作者 张振仓 杨二帅 +1 位作者 罗艳 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2019年第1期31-38,共8页
【目的】分析腹泻仔猪周围环境菌群变化规律,为仔猪腹泻的诊断和治疗提供支持。【方法】采集健康对照和腹泻仔猪粪便、口腔以及产床和母猪乳头等样品,采用ERIC-PCR技术分析其菌群结构特征,并对粪便样品中的细菌进行分离和鉴定。【结果... 【目的】分析腹泻仔猪周围环境菌群变化规律,为仔猪腹泻的诊断和治疗提供支持。【方法】采集健康对照和腹泻仔猪粪便、口腔以及产床和母猪乳头等样品,采用ERIC-PCR技术分析其菌群结构特征,并对粪便样品中的细菌进行分离和鉴定。【结果】对照组4类样品细菌ERIC-PCR指纹图谱十分相似,腹泻组各类样品之间电泳条带差异较大,出现了异常亮度的电泳条带,与对照组优势条带位置不同,其中口腔和母猪乳头部位电泳条带数显著低于对照组(P<0.05),菌群多样性指数降低,优势度指数升高。从粪便样品中分离出2株可疑菌株b1和b2,细菌染色和生化试验初步证明分离株b1和b2分别符合大肠杆菌和奇异变形杆菌的特征;利用ERIC-PCR技术分析分离株b1和b2的指纹图谱,发现分离优势细菌的ERIC-PCR指纹图谱包含于粪便样品的ERIC-PCR图谱中,证明样品的ERIC-PCR指纹图谱能够反映出优势菌群的特征;测序结果显示,分离株b1与大肠杆菌基因组同源性为99%,分离株b2与奇异变形杆菌基因组同源性为98%。【结论】腹泻仔猪周围环境菌群发生明显变化,ERIC-PCR技术可以快速、准确地监测和诊断菌群结构的变化,有助于细菌性仔猪腹泻的诊断和治疗。 展开更多
关键词 仔猪腹泻 肠道菌群 ERIC-PCR 指纹图谱
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屠宰生猪肺脏健康状况评估及主要病原的检测 被引量:1
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作者 冯全文 冯秀 +9 位作者 田昊伦 王凯 李鑫鑫 范志新 罗丽华 孙颖 姜艳芬 张彦明 周宏超 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第4期104-110,共7页
肺部感染引发的不同程度的肺脏病变在屠宰生猪的宰后检验中常有发现。本试验对某规模化生猪养殖企业屠宰生猪连续10周采集肺脏,每次取约300份肺脏,共3 000份肺脏进行健康评价,并每次选择8份病变肺脏(共80份)进行猪呼吸道疾病常见病原的... 肺部感染引发的不同程度的肺脏病变在屠宰生猪的宰后检验中常有发现。本试验对某规模化生猪养殖企业屠宰生猪连续10周采集肺脏,每次取约300份肺脏,共3 000份肺脏进行健康评价,并每次选择8份病变肺脏(共80份)进行猪呼吸道疾病常见病原的核酸检测,通过分析可能引起屠宰生猪肺部感染的病原,以期为生猪的疾病防控、动物产品安全评估提供基础资料和参考。结果显示,3 000份肺脏中评估为健康的有1 822份,占60.7%(1 822/3 000);病变肺脏有1 178份,占39.3%(1 178/3 000);病变类型主要为炎症、肉变。80份病变肺脏中猪圆环病毒2型(PCV2)核酸阳性有16份,副猪嗜血杆菌(HPS)阳性有39份,猪链球菌(SS)阳性有36份,猪肺炎支原体(Mhp)阳性有4份;PCV2与Mhp、HPS、SS混合阳性率分别占到PCV2阳性数量的12.5%、56.25%、81.25%;未检测到猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪流感病毒(SIV)、巴氏杆菌(Pm)和猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)等病原。本次评估结果表明,屠宰生猪肺脏病变比例较高,引起肺脏发生病变的呼吸道病原主要为HPS、SS、Mhp和PCV2,且以和PCV2的混合感染居多。 展开更多
关键词 屠宰生猪 肺脏评分 呼吸道疾病 病原
猪圆环病毒2型ORF3蛋白的原核表达及抗体检测ELISA方法的建立 预览
7
作者 李鑫鑫 张广芳 +2 位作者 吕其壮 张彦明 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第7期13-17,共5页
通过外源表达PCV2 ORF3蛋白,为ORF3蛋白的抗体制备和检测提供基础材料。根据PCV2的ORF3基因序列设计特异性引物,克隆ORF3全基因,构建重组原核表达质粒,转入大肠埃希菌进行表达,将纯化的蛋白包被ELISA板,建立ORF3抗体检测ELISA方法。结... 通过外源表达PCV2 ORF3蛋白,为ORF3蛋白的抗体制备和检测提供基础材料。根据PCV2的ORF3基因序列设计特异性引物,克隆ORF3全基因,构建重组原核表达质粒,转入大肠埃希菌进行表达,将纯化的蛋白包被ELISA板,建立ORF3抗体检测ELISA方法。结果表明,获得了重组pGEX-6p-1-ORF3原核表达质粒,最佳表达条件为37℃,225 r/min,IPTG 1.0 mmol/L诱导5 h;建立的ELISA检测方法可以检测PCV2阳性血清,与猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清无交叉反应。本试验为ORF3抗体制备提供了基础材料,也为PCV2抗体检测提供了可选择方法。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 ORF3蛋白 原核表达 间接ELISA 抗体检测
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动物性食品中磺胺类药物残留检测方法研究进展
8
作者 杨杰程 刘丁溪 +1 位作者 周宏超 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第6期134-139,共6页
磺胺类药物是一类人工合成广谱抗菌药物,因为其疗效好且价格相对低廉,在动物养殖和疾病防治中应用较为广泛。但这类药物在使用后易以原型排出,且大剂量、长时间使用时会造成其在动物产品中的残留,对人的健康和环境造成危害。对动物性食... 磺胺类药物是一类人工合成广谱抗菌药物,因为其疗效好且价格相对低廉,在动物养殖和疾病防治中应用较为广泛。但这类药物在使用后易以原型排出,且大剂量、长时间使用时会造成其在动物产品中的残留,对人的健康和环境造成危害。对动物性食品中磺胺类药物残留的检测是保证产品食用安全和减少环境污染的重要措施。磺胺类药物由于种类多、使用广泛、在不同动物性产品中的残留情况也不相同,在对其残留进行检测时,应选择合适方法对样品进行处理和检测。本文介绍了样品前处理的常用方法,如液液萃取等传统方法和固相萃取法、固相微萃取法以及基质固相分散法等的原理、优缺点等。对动物性食品中磺胺类药物的检测,应用较多的是高效液相色谱法、毛细管电泳法放射免疫法、免疫传感器发和酶联免疫法等,可使实现对产品中药物残留的定性和定量检测,但是也存在需要专门仪器、检测时间相对较长的问题;快速检测方法最常用的就是胶体金免疫层析方法,可以实现对中多种磺胺类药物的快速和定性的检测,是食品种抗菌药物检测技术研究的一个发展方向。通过对动物性食品中抗微生物残留进行初步筛查,确定为阳性的样品在进行实验室的定量检测,是保证产品安全、可操作的基本程序。研究高通量、敏感、快速、操作简便的动物性食品中磺胺类药物残留检测技术,也是一个重要方面。 展开更多
关键词 动物性食品 磺胺类药物 残留 样品处理 检测
猪瘟病毒RT-LAMP检测方法的建立及初步应用 预览
9
作者 王韦华 刘桂梅 +1 位作者 吴奇强 《中国动物检疫》 CAS 2019年第7期68-75,共8页
为建立猪瘟病毒(CSFV)可视化逆转录环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)快速检测方法,从GenBank下载不同基因亚型CSFV分离株全基因序列,通过引物设计,RT-LAMP反应体系优化,建立了检测CSFV的RT-LAMP方法。该方法特异性和敏感性好,对CSFVcDNA最... 为建立猪瘟病毒(CSFV)可视化逆转录环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)快速检测方法,从GenBank下载不同基因亚型CSFV分离株全基因序列,通过引物设计,RT-LAMP反应体系优化,建立了检测CSFV的RT-LAMP方法。该方法特异性和敏感性好,对CSFVcDNA最低检测限量为1.0×10^-7ng/μL,不能检测到非目标病毒核酸。对临床送检的100份疑似CSFV感染样品进行检测,检出13份CSFV阳性,其中10份和RT-PCR检测结果一致,另外3份的RT-PCR检测结果呈阴性,同时对比发现RT-LAMP方法的敏感性比常规RT-PCR方法高100倍。本研究为CSFV检测提供了可供选择的方法。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 RT-PCR 反转录-环介导等温扩增 临床样品检测
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屠宰生猪副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药物敏感性分析 预览
10
作者 田昊伦 冯秀 +8 位作者 王凯 冯全文 李鑫鑫 范志新 罗丽华 孙颖 周宏超 张彦明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第7期2151-2158,共8页
为调查屠宰生猪副猪嗜血杆菌(Hps)的隐性感染情况,本研究从陕西省某规模化生猪屠宰场采集80份病变肺脏,应用PCR方法进行Hps核酸检测,无菌取阳性肺脏,通过平板划线分离获得疑似Hps,进一步对分离菌进行形态观察、培养特性分析、卫星现象... 为调查屠宰生猪副猪嗜血杆菌(Hps)的隐性感染情况,本研究从陕西省某规模化生猪屠宰场采集80份病变肺脏,应用PCR方法进行Hps核酸检测,无菌取阳性肺脏,通过平板划线分离获得疑似Hps,进一步对分离菌进行形态观察、培养特性分析、卫星现象观察、生化试验和分离菌核酸片段序列分析,纯化获得Hps分离菌;用药敏纸片法分析Hps分离菌株对常用药物的敏感性。结果显示,从80份病变肺脏中检出39份Hps阳性,阳性率48.75%(39/80);从39份Hps阳性肺脏中分离获得3株疑似Hps,分离菌在显微镜下呈革兰氏阴性、短杆状;在添加有胎牛血清和NAD的TSA平板上生长良好;在金黄色葡萄球菌周围呈现出典型的"卫星现象"生长;能发酵葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、麦芽糖和阿拉伯糖,不发酵甘露醇;PCR扩增序列与Hps同源性在98%以上。药物敏感性试验结果显示,3株分离菌对环丙沙星、恩诺沙星和氟苯尼考等抗菌药物高度敏感,对青霉素、林可霉素和甲氧苄啶等抗菌药物耐药。本研究获得的Hps分离株为疫苗研制提供了基础材料,为生猪养殖场选择敏感药物防控Hps感染提供了参考依据。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌(Hps) 分离鉴定 药物敏感性试验
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动物性食品中抗菌药物残留检测方法研究进展 预览
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作者 刘丁溪 杨杰程 +1 位作者 周宏超 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第7期2183-2192,共10页
抗菌类药物在预防、治疗动物疾病中发挥了重要的作用,但不规范用药、超剂量用药甚至滥用,使动物性食品中抗菌类药物残留问题日益突出,引起人们的广泛关注。对动物性食品中抗菌类药物残留的检测是判定其安全性的重要内容,根据检测的目的... 抗菌类药物在预防、治疗动物疾病中发挥了重要的作用,但不规范用药、超剂量用药甚至滥用,使动物性食品中抗菌类药物残留问题日益突出,引起人们的广泛关注。对动物性食品中抗菌类药物残留的检测是判定其安全性的重要内容,根据检测的目的和需要,可将检测方法分为现场检测和实验室检测。胶体金免疫层析法是目前使用最广的现场检测方法;实验室检测方法众多,又可分为抗菌类药物残留的定性检测法和定量检测法,前者主要包括2,3,5-三苯基氯化四氮唑法(TTC法)、纸片法(PD法)、活性检测法等,后者主要包括高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、超高效液相色谱-质谱联用法、毛细管电泳法、生物传感器法和免疫分析法等,可满足不同检测目的和实验条件的需要。作者对肉、蛋、奶中抗菌类药物残留的现场检测和实验室检测技术进行了总结,为更进一步研究快速、敏感、高通量、成本低廉的食品中抗菌类药物残留检测方法奠定理论基础。 展开更多
关键词 动物性食品 抗菌类药物 残留 检测方法 食品安全
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陕西部分猪场PCV2抗体及病毒检测分析
12
作者 罗丽华 赵紫印 +6 位作者 冯秀 侯玉凤 徐盼盼 吕江漫 周宏超 张振仓 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1245-1249,共5页
为了解陕西省猪群中猪圆环病毒2型(PCV2)感染及其免疫抗体情况,2016-2017年间,在陕西省7个地区21个猪场采集544份血清样品(其中8个免疫猪场进行PCV2疫苗免疫,采集320份血清样品;13个非免疫猪场未进行PCV2疫苗免疫,采集224份血清样品),... 为了解陕西省猪群中猪圆环病毒2型(PCV2)感染及其免疫抗体情况,2016-2017年间,在陕西省7个地区21个猪场采集544份血清样品(其中8个免疫猪场进行PCV2疫苗免疫,采集320份血清样品;13个非免疫猪场未进行PCV2疫苗免疫,采集224份血清样品),分别通过ELISA方法检测PCV2血清抗体及PCR方法检测PCV2核酸。结果显示,采集的544份血清中PCV2血清抗体平均阳性率为68%(368/544),其中免疫猪场为85%(271/320),非免疫猪场为43%(97/224);PCV2核酸平均阳性率为19%(103/544),其中免疫猪场为10%(32/320),非免疫猪场为32%(71/224)。结果表明,在PCV2疫苗免疫猪场和非免疫猪场均存在PCV2感染情况,疫苗免疫在一定程度上可以减少PCV2的感染,但是并不能完全阻止PCV2的感染。在防控PCV2感染工作中,除了做好生物安全工作以外,疫苗免疫接种是防止病毒感染的有效措施,但还要做好免疫猪抗体检测工作,减少病毒感染,防止猪圆环病毒相关疾病的发生。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 抗体 病毒核酸 检测与分析
食源性生物活性肽免疫调节功能的研究
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作者 王睿晗 黄永震 +5 位作者 王周利 姜艳芬 王晶钰 张彦明 贺花 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期148-152,共5页
生物活性肽通常用来表示生物进行生命活动过程中起到调控作用的化学物质,它在机体内发挥了一系列作用。肽由相应的蛋白质所组成,在化学上通过电解能够获取蛋白水解物质,对免疫系统具有极大的调节作用。最近,因为其制备的原材料易于获取... 生物活性肽通常用来表示生物进行生命活动过程中起到调控作用的化学物质,它在机体内发挥了一系列作用。肽由相应的蛋白质所组成,在化学上通过电解能够获取蛋白水解物质,对免疫系统具有极大的调节作用。最近,因为其制备的原材料易于获取且其效用都非常显著,科学家们纷纷将调查研究的目光锁定其中。本研究对食源性生物活性肽的吸收机制、常见种类、制备方法以及研究现状进行了综述,并对其发展前景进行了展望。 展开更多
关键词 食源性生物活性肽 免疫 研究现状 小鼠 制备 发展前景
PCV2感染猪各组织病毒载量与细胞内质网应激和自噬相关性
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作者 李然 阳玥玲 +4 位作者 吴萌萌 范志新 周宏超 张彦明 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期387-392,共6页
通过对PCV2阳性猪剖检,采集了心脏、肝脏、肾脏、肺脏、肾脏、大脑、肠、胃等组织样品,使用定量PCR(qPCR)对PCV2衣壳蛋白Cap基因、ERS和自噬标志基因进行定量分析。结果显示,肺脏中PCV2载量最高,其次为肝脏和肾脏含有较多病毒,小肠、心... 通过对PCV2阳性猪剖检,采集了心脏、肝脏、肾脏、肺脏、肾脏、大脑、肠、胃等组织样品,使用定量PCR(qPCR)对PCV2衣壳蛋白Cap基因、ERS和自噬标志基因进行定量分析。结果显示,肺脏中PCV2载量最高,其次为肝脏和肾脏含有较多病毒,小肠、心脏与大脑中病毒载量较少,胃内并未检测到PCV2。ERS和自噬在肺脏中发生最多,其次为小肠,再次为肝脏和肾脏,ERS和自噬水平较高,心脏与大脑中仅发生少量ERS与自噬,而在胃中几乎没有发生。通过透射电子显微镜观察心脏、肝脏、肾脏、肺脏、大脑、肠等组织样品。观察结果显示,所有器官中均可观察到PCV2感染,除肺脏内含量较多外其余各组织中差异不大。各组织中均可见不同数量的自噬小体与内质网应激,其中以肺脏内数量最多,其次为肠道,其余各组织中数量差异不大。电镜观察结果与qPCR检测结果一致,肺脏为病毒载量最大的器官同时也是ERS与自噬发生最多的器官,胃中几乎无病毒感染同时也几乎没有ERS与自噬发生。试验结果表明,除了小肠以外的各组织中ERS与自噬发生情况均与PCV2载量成正相关。为深入研究PCV2诱导细胞ERS和自噬的机制提供了新的理论依据。 展开更多
关键词 PCV2 内质网应激 自噬 检测分析
硫酸化朱砂七多糖的制备及药效
15
作者 鲁孟佳 徐越 +3 位作者 周宏超 卿素珠 张为民 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1355-1360,共6页
建立并优选硫酸化朱砂七多糖(sulfated polysaccharide from Polygonum ciliinerve,sPCP)的制备条件,探讨硫酸化修饰对朱砂七多糖(polysaccharide from Polygonum ciliinerve,PCP)药效的影响。本研究应用正交试验筛选氯磺酸-吡啶法制备s... 建立并优选硫酸化朱砂七多糖(sulfated polysaccharide from Polygonum ciliinerve,sPCP)的制备条件,探讨硫酸化修饰对朱砂七多糖(polysaccharide from Polygonum ciliinerve,PCP)药效的影响。本研究应用正交试验筛选氯磺酸-吡啶法制备sPCP的最佳条件,体外试验研究sPCP的抑菌活性,采用CCK-8法结合实时荧光定量PCR(realtime PCR)研究sPCP对猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)在猪睾丸细胞(swine testis,ST)上增殖的抑制作用,并采用ELISA法测定了sPCP对猪外周血细胞因子IL-2和TNF-α含量的影响。试验表明,sPCP最佳制备条件氯磺酸∶吡啶为1∶8,反应温度95℃,反应时间1h,产物硫酸基取代度为4.31;sPCP能抑制大肠埃希菌和志贺菌,效果优于PCP;在安全浓度范围内,sPCP对TGEV在ST细胞上增殖具有显著的抑制作用(P<0.01),能显著提高猪外周血细胞因子IL-2和TNF-α含量(P<0.01),效果均优于PCP(P<0.01)。结果表明,筛选出了sPCP的最佳制备条件,且硫酸化修饰能有效提高PCP的药效。 展开更多
关键词 硫酸化修饰 朱砂七多糖 猪传染性胃肠炎病毒 细胞因子
猪圆环病毒pSCA-Cap-T2A-Rep重组载体的构建及小鼠免疫试验
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作者 赵紫印 罗丽华 +6 位作者 冯秀 姜艳芬 韩国阳 王怡然 张彦明 周宏超 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1058-1063,1112共7页
克隆猪圆环病毒1型(PCV1)的Rep基因和猪圆环病毒2型(PCV2)Cap基因,利用T2A片段进行连接,并插入到载体pSCA,构建pSCA-Cap-T2A-Rep重组质粒。转染PK-15细胞后通过Western blot技术检测目的蛋白的表达。大量提取构建的重组质粒后进行小鼠... 克隆猪圆环病毒1型(PCV1)的Rep基因和猪圆环病毒2型(PCV2)Cap基因,利用T2A片段进行连接,并插入到载体pSCA,构建pSCA-Cap-T2A-Rep重组质粒。转染PK-15细胞后通过Western blot技术检测目的蛋白的表达。大量提取构建的重组质粒后进行小鼠接种试验。56只小鼠随机分为8组,每组7只。第1,2,3组为质粒注射组,注射质粒质量分别为50,100,200μg/只;第4~6组分别为与1~3组注射相同剂量质粒+免疫佐剂对应组;第7组为注射生理盐水对照组;第8组为注射生理盐水+佐剂对照组。首次接种后14 d进行第2次接种,处理方法同第1次。在首次接种后0,14,21,28 d从试验小鼠眼静脉丛采血,ELISA方法检测血清中PCV2 Cap蛋白抗体。结果显示,pSCA-Cap-T2A-Rep重组质粒接种小鼠血清中Cap蛋白特异性抗体在接种后14~28 d均为阳性;质粒+免疫佐剂组比质粒注射组小鼠特异性抗体水平显著升高。结果表明,pSCA-Cap-T2A-Rep重组质粒在试验小鼠中产生有效的特异性抗体,为进一步优化免疫方法、在试验猪上的应用及猪圆环病毒核酸疫苗的研制提供了依据。 展开更多
关键词 猪圆环病毒 CAP蛋白 REP蛋白 动物试验
生物防腐剂ε-聚赖氨酸的研究进展
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作者 齐子琦 秦子晋 +3 位作者 黄永震 张彦明 贺花 《食品工业》 CAS 北大核心 2019年第10期289-293,共5页
聚赖氨酸产生于白色链霉菌的发酵过程中,是一种具有良好抑菌性能的生物代谢产品。在酸性或弱酸性环境中,ε-聚赖氨酸对酵母菌、霉菌、革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌都有一定抑菌效果且水溶性和热稳定性好,没有致畸性和突变性,容易进行生... 聚赖氨酸产生于白色链霉菌的发酵过程中,是一种具有良好抑菌性能的生物代谢产品。在酸性或弱酸性环境中,ε-聚赖氨酸对酵母菌、霉菌、革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌都有一定抑菌效果且水溶性和热稳定性好,没有致畸性和突变性,容易进行生物降解,可广泛应用于食品、医学等领域。介绍了ε-聚赖氨酸的结构、理化性质及抑菌效果和机理,并重点介绍了近年来对于该生物抑菌剂发酵生产、调控技术及抑菌效力影响因素的研究进展,最后介绍了这一新型防腐剂在食品、医学等领域中的应用。 展开更多
关键词 聚赖氨酸 天然食品防腐剂 抑菌机理 应用
猪呼吸道疾病综合征主要致病菌的分离鉴定 被引量:3
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作者 王一涵 周宏超 +4 位作者 罗丽华 冯秀 赵紫印 邢福珊 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期1893-1900,共8页
对3个猪场的4头呼吸道疾病综合征病猪肺脏(猪场分别编号A、B、C,其中猪场A 1头、猪场B 2头、猪场C 1头)进行猪肺炎支原体(Mhp)、副猪嗜血杆菌(Hps)和猪胸膜肺炎放线杆菌(App)PCR检测,进而进行细菌的分离鉴定和药敏试验。结果显... 对3个猪场的4头呼吸道疾病综合征病猪肺脏(猪场分别编号A、B、C,其中猪场A 1头、猪场B 2头、猪场C 1头)进行猪肺炎支原体(Mhp)、副猪嗜血杆菌(Hps)和猪胸膜肺炎放线杆菌(App)PCR检测,进而进行细菌的分离鉴定和药敏试验。结果显示:4份病料中App和Mhp均为阴性,Hps在猪场A和C的病料中为阴性,猪场B病料中为阳性;在猪场A分离出奇异变形杆菌和猪链球菌各1株;猪场B分离出1株化脓隐秘杆菌、1株嗜麦芽窄食单胞菌和1株奇异变形杆菌;猪场C分离出1株化脓隐秘杆菌和1株奇异变形杆菌。药敏试验结果显示:化脓隐秘杆菌对诺氟沙星、洛美沙星敏感,嗜麦芽窄食单胞菌对恩诺沙星敏感,奇异变形杆菌对诺氟沙星、恩诺沙星敏感,猪链球菌对诺氟沙星、洛美沙星、环丙沙星、氧氟沙星敏感。小鼠致病性试验结果表明:变形奇异杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌和化脓隐秘杆菌均能使小鼠出现一过性精神萎靡;猪链球菌引起试验小鼠全部死亡,具有较强致病力。 展开更多
关键词 猪呼吸道疾病综合征 细菌 分离鉴定 药敏试验
猪瘟综合防控研究进展 预览 被引量:2
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作者 任世斌 赵亮 +1 位作者 林青 《动物医学进展》 北大核心 2018年第9期100-106,共7页
猪瘟是由猪瘟病毒引起的高度传染性、接触性疾病,遍布世界各地,被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的动物传染病,严重危害养猪业。论文就猪瘟病毒对机体免疫功能和凝血功能的损伤抑制,病毒的分子结构,酶联免疫吸附试验、免疫... 猪瘟是由猪瘟病毒引起的高度传染性、接触性疾病,遍布世界各地,被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的动物传染病,严重危害养猪业。论文就猪瘟病毒对机体免疫功能和凝血功能的损伤抑制,病毒的分子结构,酶联免疫吸附试验、免疫胶体金层析和荧光定量PCR等诊断方法,疫苗研究如DNA疫苗、病毒重组载体疫苗及常用免疫方法的最新进展进行综述,以期为猪瘟致病机理和防控的进一步研究提供参考。 展开更多
关键词 猪瘟 猪瘟病毒 致病机理 诊断 免疫防控
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高校实验室实验动物生物安全管理与规范 预览 被引量:1
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作者 贺花 师书玥 +4 位作者 黄永震 姜艳芬 王晶钰 张彦明 《安徽农业科学》 CAS 2018年第31期217-219,共3页
阐述了高校实验室中实验动物存在的生物安全隐患,分析了这些隐患的产生原因及解决对策,并分别从安全管理体系、安全教育、事故应急机制、实验动物废弃物处理等方面提出了实验动物安全管理与防范措施,以期提高师生的安全防范意识,加... 阐述了高校实验室中实验动物存在的生物安全隐患,分析了这些隐患的产生原因及解决对策,并分别从安全管理体系、安全教育、事故应急机制、实验动物废弃物处理等方面提出了实验动物安全管理与防范措施,以期提高师生的安全防范意识,加强高校实验室中实验动物的生物安全管理与规范工作。 展开更多
关键词 实验室 实验动物 生物安全 管理
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