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人黑素瘤相关抗原D4原核表达条件的优化 预览
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作者 邓芸婷 顾永耀 +6 位作者 蔡丹昭 罗育 高精洧 李霞琼 黄冠文 谢小薰 《广西医科大学学报》 CAS 2019年第7期1050-1055,共6页
目的:探索黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)基因工程菌原核诱导表达的最佳条件,以提高目的蛋白产量。方法:设置不同宿主菌(DH5α、TB1、Rosetta)、诱导时机(重组菌分别培养0.5~3h后进行诱导)、诱导剂IPTG浓度(0.1~0.9mmol/L)和诱导时间(1~8h)... 目的:探索黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)基因工程菌原核诱导表达的最佳条件,以提高目的蛋白产量。方法:设置不同宿主菌(DH5α、TB1、Rosetta)、诱导时机(重组菌分别培养0.5~3h后进行诱导)、诱导剂IPTG浓度(0.1~0.9mmol/L)和诱导时间(1~8h)等条件,诱导MAGE-D4重组质粒表达,通过SDS-PAGE电泳和ImageJ软件扫描电泳图谱的方法,对目的蛋白的表达量和可溶性进行分析。通过间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法对35例肝癌患者血清MAGE-D4抗体进行检测,分析MAGE-D4融合蛋白的免疫活性。结果:将重组质粒转化至Rosetta(DE3)大肠杆菌,菌液OD600达到0.8时加入IPTG至终浓度0.9mmol/L,37℃诱导培养7h,可有效提高目的蛋白的表达量。可溶性MAGE-D4融合蛋白表达量约占菌体总蛋白的25.5%。肝癌患者血清中MAGE-D4抗体的阳性率为28.57%(10/35),其MAGE-D4抗体平均效价明显高于正常人(P<0.05)。结论:本研究优化了MAGE-D4融合蛋白的原核表达条件,获得了可溶性、具有免疫活性的重组蛋白。 展开更多
关键词 黑素瘤相关抗原D4 原核表达 优化
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医学院校生物化学教学改革反思 预览
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作者 罗育 蔡丹昭 +3 位作者 吴耀生 曾麒燕 蓝秀万 《基础医学教育》 2019年第7期518-520,共3页
生物化学是医学院校中一门重要的基础课程。随着我国教育改革的发展,对该课程的教学提出了新的要求,针对这些要求,文章从教学对象、教学目标、教学内容、教学方法等方面进行了总结与反思,以此提高教学能力,改善教学效果来适应当前教育... 生物化学是医学院校中一门重要的基础课程。随着我国教育改革的发展,对该课程的教学提出了新的要求,针对这些要求,文章从教学对象、教学目标、教学内容、教学方法等方面进行了总结与反思,以此提高教学能力,改善教学效果来适应当前教育教学改革的发展。 展开更多
关键词 生物化学 教学改革 教学反思
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黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)多克隆抗体的制备和应用 被引量:2
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作者 顾永耀 +5 位作者 肖绍文 张庆梅 陈芳 罗彬 付骏 谢小薰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期104-108,共5页
目的制备兔抗人黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)多克隆抗体,鉴定其免疫学特性,并进行初步应用。方法对构建的p MAL-C2/MAGE-D4重组质粒进行原核表达及纯化,获得MBP/MAGE-D4融合蛋白,并以此蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。抗体经蛋白A凝... 目的制备兔抗人黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)多克隆抗体,鉴定其免疫学特性,并进行初步应用。方法对构建的p MAL-C2/MAGE-D4重组质粒进行原核表达及纯化,获得MBP/MAGE-D4融合蛋白,并以此蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。抗体经蛋白A凝胶柱亲和层析法纯化后,通过SDS-PAGE检测其纯度;间接ELISA、Western blot法检测抗体的效价及特异性;免疫组织化学染色法检测肺癌组织中MAGE-D4的表达及定位。结果获得纯度较高的抗MAGE-D4多克隆抗体,ELISA检测抗体的效价为1∶256 000,Western blot法分析显示MAGE-D4多克隆抗体可特异性识别MAGE-D4重组蛋白,免疫组织化学结果表明,该抗体能识别肺癌组织中的内源性MAGE-D4蛋白,表达的阳性率为69.6%(17/23)。结论制备的MAGE-D4多克隆抗体具有较高的特异性和灵敏度。 展开更多
关键词 黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4) 多克隆抗体 肿瘤相关抗原
马尔尼菲青霉基于pkuB基因缺失的高效基因打靶系统构建 被引量:2
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作者 卢姗 蓝秀万 +6 位作者 陶玉婷 王超 梁晓乐 梁莹 黄勇奇 何志义 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期754-762,共9页
马尔尼菲青霉是温度依赖双相性条件性致病真菌,可感染免疫缺陷人群,区域流行于东南亚和我国南方。马尔尼菲青霉已成为研究真菌双相形态转换和病原-宿主相互作用分子机制的模式系统。功能基因组学研究为深入探讨马尔尼菲青霉双相转换和... 马尔尼菲青霉是温度依赖双相性条件性致病真菌,可感染免疫缺陷人群,区域流行于东南亚和我国南方。马尔尼菲青霉已成为研究真菌双相形态转换和病原-宿主相互作用分子机制的模式系统。功能基因组学研究为深入探讨马尔尼菲青霉双相转换和致病分子机制提供了线索,大量的候选基因功能需要高通量的基因修饰方法验证。在许多真菌中已建立基于阻断DNA非同源重组修复途径提高基因打靶效率的实验研究模型。本文报道在马尔尼菲青霉中通过缺失马尔尼菲青霉非同源重组修复途径的关键组分PKUB同源基因pkuB构建了一个高效基因打靶系统。结果表明,以pkuB基因缺失菌株(△pkuB)为出发菌株能降低外源DNA片段的非同源末端连接重组的概率而显著提高基因打靶效率,pkuB基因缺失不影响菌落形态和双相转换能力。高效基因打靶分子遗传实验模型的建立为大规模进行马尔尼菲青霉基因功能研究提供了有力的工具。 展开更多
关键词 马尔尼菲青霉 pkuB 基因打靶 同源重组 非同源重组末端链接
马尔尼菲青霉菌内源启动子驱动的苯菌灵抗性基因盒构建及其应用 被引量:2
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作者 卢姗 毛从政 +7 位作者 陶玉婷 黄勇奇 梁莹 梁晓乐 吴谦 何志义 蓝秀万 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期253-259,共7页
马尔尼菲青霉菌是一种区域性流行于东南亚及中国南部地区的条件致病性温度依赖性双相型病原真菌,它能对免疫功能低下者造成致命的全身性感染,25℃时呈现菌丝状生长,而在37℃或在宿主体内为酵母相生长。为深入研究马尔尼菲青霉菌致病性... 马尔尼菲青霉菌是一种区域性流行于东南亚及中国南部地区的条件致病性温度依赖性双相型病原真菌,它能对免疫功能低下者造成致命的全身性感染,25℃时呈现菌丝状生长,而在37℃或在宿主体内为酵母相生长。为深入研究马尔尼菲青霉菌致病性和双相转化的分子机制,原有的遗传转化筛选标记基因已不能满足研究需要。为此,我们通过用马尔尼菲青霉菌微管蛋白β亚基基因启动子替换粗脉孢菌苯菌灵抗性基因的启动子,构建了一个苯菌灵抗性基因盒,并成功地将其运用于马尔尼菲青霉菌的遗传转化研究中。 展开更多
关键词 马尔尼菲青霉菌 苯菌灵抗性基因盒 遗传转化
分子医学教学实验室开放管理模式的实践与探索 预览 被引量:2
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作者 晁耐霞 王启辉 +4 位作者 胡振华 蔡丹昭 蓝秀万 吴耀生 《基础医学教育》 2013年第12期1080-1081,共2页
实验室的开放是实验室管理发展的必然趋势,开放管理模式的建设是实验开放良好运转的基础。文章以广西医科大学基础医学院分子医学教学实验室开放管理模式的建设实践出发,从开放内容、实验室管理规章制度、具有实时监控功能的实验室管... 实验室的开放是实验室管理发展的必然趋势,开放管理模式的建设是实验开放良好运转的基础。文章以广西医科大学基础医学院分子医学教学实验室开放管理模式的建设实践出发,从开放内容、实验室管理规章制度、具有实时监控功能的实验室管理系统平台和实验队伍四个方面探讨实验室的开放管理模式的构建。 展开更多
关键词 实验室开放 开放模式 实践与探索
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人体代谢与疾病课程教学案例的设计及应用 预览 被引量:2
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作者 吴耀生 +6 位作者 蔡丹昭 晁耐霞 凌敏 黄勇奇 林文珍 赵瑞强 罗育 《基础医学教育》 2013年第3期230-233,共4页
在医学教育国际标准“本土化”的背景下,进行课程整合,将传统的生物化学课程中与人体代谢有关的部分内容,结合临床问题,设计人体代谢与疾病整合课程,为这门整合课程设计ffn,~教学案例,从而为开展PBL、CBL、TBL等模式的教学提供相... 在医学教育国际标准“本土化”的背景下,进行课程整合,将传统的生物化学课程中与人体代谢有关的部分内容,结合临床问题,设计人体代谢与疾病整合课程,为这门整合课程设计ffn,~教学案例,从而为开展PBL、CBL、TBL等模式的教学提供相应的素材。 展开更多
关键词 人体代谢与疾病 整合课程 教学案例
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胸膜外孤立性纤维性肿瘤44例临床病理特征分析 预览 被引量:1
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作者 顾永耀 +1 位作者 曾晶晶 党裔武 《现代肿瘤医学》 CAS 2012年第8期1628-1630,共3页
目的:探讨胸膜外孤立性纤维性肿瘤(extrapleuralsolitaryfibroustumor,ESFT)的临床病理特征、鉴别诊断及预后。方法:对44例ESFT病例行病理学观察及免疫组化染色,结合临床及随访资料进行分析。结果:良性35例,恶性9例。ESFT组织... 目的:探讨胸膜外孤立性纤维性肿瘤(extrapleuralsolitaryfibroustumor,ESFT)的临床病理特征、鉴别诊断及预后。方法:对44例ESFT病例行病理学观察及免疫组化染色,结合临床及随访资料进行分析。结果:良性35例,恶性9例。ESFT组织学形态多样,典型者见梭形细胞呈无模式(patternless)排列,伴有粗大瘢痕样的胶原及血管外皮瘤样结构。免疫组化染色Vimentin、CD34、Bcl-2、CD99、SMA阳性率分别为100%、93%、79%、67%和6%,Desmin、S-100、CD17、Calretinin及EMA均为阴性。随访33例,3例局部复发,无死亡及远处转移。结论:临床病理特征和免疫组化表型有助于ESFT诊断及鉴别诊断。对ESFT患者有必要进行术后长期随访。 展开更多
关键词 孤立性纤维性肿瘤 免疫组化 鉴别诊断
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肝癌相关抗原SMP30重组基因的构建、表达及分子伴侣共表达系统的探索 预览 被引量:2
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作者 黄朋 范升龙 +2 位作者 凌敏 周素芳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期 170-175,共6页
旨在通过应用基因工程的方法构建、表达和纯化肝癌相关抗原SMP30,研究共表达分子伴侣提高基因工程蛋白表达的可溶性及效率。PCR扩增SMP30 cDNA序列,用基因工程技术构建重组表达质粒,转化E.coliBL21(DE3)pLysS宿主菌。表达蛋白经Ni-NT... 旨在通过应用基因工程的方法构建、表达和纯化肝癌相关抗原SMP30,研究共表达分子伴侣提高基因工程蛋白表达的可溶性及效率。PCR扩增SMP30 cDNA序列,用基因工程技术构建重组表达质粒,转化E.coliBL21(DE3)pLysS宿主菌。表达蛋白经Ni-NTA亲和柱纯化获得HIS-SMP30融合蛋白;分别将4种表达不同分子伴侣的质粒(pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pTf16)转入E.coliBL21(DE3)中;然后再将重组质粒转入含有分子伴侣质粒的细胞中,进行分子伴侣与重组质粒的共表达,SDS-PAGE检测目的蛋白的表达量与可溶性分析。经优化表达条件后,目的蛋白以包涵体形式表达,目的蛋白占总蛋白的60%以上;纯化后纯度高达95%以上;诱导共表达后,目的蛋白在上清含量极少,不到总表达目的蛋白的10%。成功构建出高效表达的SMP30重组质粒;加入到诱导表达体系中的4种分子伴侣质粒不能有效的促进可溶性蛋白的表达,pTf16共表达系统能增加目的蛋白表达量。 展开更多
关键词 SMP30 基因工程 表达与纯化 分子伴侣质粒 共表达
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在《代谢异常与疾病》课程中开展PBL与CBL的教学研究 预览 被引量:3
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作者 凌敏 吴耀生 +2 位作者 赵瑞强 罗育 《西北医学教育》 2012年第3期550-551,579共3页
在《代谢异常与疾病》课程中实施PBL与CBL的教学实践,开展"以学生为中心"和"自主学习"为主要内容的教育方式,探索有利于培养学生创新性思维和终身学习能力的多元化教学方法。
关键词 代谢异常与疾病 PBL CBL 教学法
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癌睾丸抗原OY-TES-1在脑胶质瘤中的表达及其抗体血清学分析 预览 被引量:3
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作者 李希圣 严峻 +6 位作者 罗彬 范蓉 林永达 罗昱 肖绍文 谢小薰 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期 671-674,共4页
背景与目的:胶质瘤是最常见的原发性恶性脑肿瘤,预后差,生存率低。近年来,以利用癌睾丸(cancer-testis,CT)抗原作为靶抗原行肿瘤免疫治疗已成为研究的热点,而OY-TES-1是CT抗原家族中的一员。本研究拟了解OY-TES-1在脑胶质瘤中的mRNA... 背景与目的:胶质瘤是最常见的原发性恶性脑肿瘤,预后差,生存率低。近年来,以利用癌睾丸(cancer-testis,CT)抗原作为靶抗原行肿瘤免疫治疗已成为研究的热点,而OY-TES-1是CT抗原家族中的一员。本研究拟了解OY-TES-1在脑胶质瘤中的mRNA表达及其抗体出现情况,探讨将OY-TES-1应用于肿瘤免疫治疗及辅助诊断的可能性。方法:收集51例脑胶质瘤患者肿瘤组织标本及配套血清,107例健康人血清。通过RT-PCR,从mRNA水平研究OY-TES-1在脑胶质瘤组织中的表达;用酶联免疫吸附分析技术(enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA)检测患者及健康人血清OY-TES-1抗体;同时对OY-TES-1 mRNA的表达及血清抗体出现的临床意义做初步分析。结果:在脑胶质瘤患者中OY-TES-1 mRNA阳性率为80.4%(41/51),血清OY-TES-1抗体阳性率为15.7%(8/51),健康人血清则为阴性。OY-TES-1 mRNA的表达和血清抗体的出现均与脑胶质瘤患者的年龄、性别、病理分级、肿瘤大小等临床指标无关。结论:OY-TES-1在脑胶质瘤中存在较高的表达,并能引起部分患者的体液免疫反应,有望作为胶质瘤免疫治疗的靶抗原。 展开更多
关键词 OY-TES-1 胶质瘤 免疫治疗
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孤立性纤维性肿瘤48例临床病理特征分析 预览 被引量:5
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作者 顾永耀 +1 位作者 曾晶晶 党裔武 《当代医学》 2011年第20期 20-22,共3页
目的探讨孤立性纤维性肿瘤(solitary fibrous tumor,SFT)的临床病理特征、鉴别诊断及预后。方法对48例SFT病例行病理学观察及免疫组化染色,结合临床及随访资料进行分析。结果发生于胸膜4例,胸膜外44例。良性38例,恶性10例。组织学形... 目的探讨孤立性纤维性肿瘤(solitary fibrous tumor,SFT)的临床病理特征、鉴别诊断及预后。方法对48例SFT病例行病理学观察及免疫组化染色,结合临床及随访资料进行分析。结果发生于胸膜4例,胸膜外44例。良性38例,恶性10例。组织学形态多样,典型者见梭形细胞呈无模式(patternless)排列,伴有粗大瘢痕样的胶原及血管外皮瘤样结构。免疫组化染色Vimentin、CD34、Bcl-2、CD99、SMA阳性率分别为100%、94%、79%、67%和5%,Desmin、S-100、CD117、Calretinin及EMA均为阴性。随访36例,33例无瘤生存,3例复发。结论 SFT可发生于全身各处,临床病理特征和免疫组化表型有助于诊断及鉴别诊断。组织学形态并不能完全准确地反映生物学行为,有必要对患者进行术后长期随访。 展开更多
关键词 孤立性纤维性肿瘤 免疫组化 鉴别诊断
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钙结合蛋白S100A13在肝癌组织中的表达及其临床意义 被引量:4
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作者 张鹏 黄朋 +8 位作者 郭先文 雷荣娥 岳成思 凌敏 林文珍 蔡丹昭 唐文珏 周素芳 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期206-210,共5页
目的:探索钙结合蛋白S100A13(S100 calcium binding protein A13,S100A13)在肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及其临床意义。方法:收集广西医科大学第一附属医院34例HCC及相应癌旁组织、18例正常肝组织标本,商业购... 目的:探索钙结合蛋白S100A13(S100 calcium binding protein A13,S100A13)在肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及其临床意义。方法:收集广西医科大学第一附属医院34例HCC及相应癌旁组织、18例正常肝组织标本,商业购置197例肝癌及相应癌旁高密度组织芯片。应用原位RT-PCR技术检测HCC组织、癌旁组织、正常肝组织中S100A13 mRNA的表达,使用免疫组织化学技术检测HCC组织、癌旁组织、正常肝组织中S100A13蛋白的表达,并用Image-ProPlus软件分析免疫组织化学光密度值。结果:S100A13 mRNA在HCC、相应癌旁和正常肝组织中表达的阳性率分别为70.21%、51.06%和33.33%;S100A13 mRNA定位主要在胞核,多表达于核膜。S100A13蛋白在HCC、相应癌旁和正常肝组织中表达的阳性率分别为55.84%、38.96%及26.32%,HCC组织中的平均D值最高(0.038±0.051),其次是癌旁组织(0.022±0.034),正常肝组织(0.01±0.009)最低(P〈0.05);S100A13蛋白主要表达于HCC细胞的胞质中,部分细胞核偶见表达,此外在癌旁次生胆小管中及部分炎细胞中也存在高表达。S100A13蛋白在HCC中的表达与患者的性别、年龄及病理分级无关。结论:HCC组织高表达S100A13蛋白,S100A13可能具有作为肝癌治疗靶点的潜力。 展开更多
关键词 S100A13 肝细胞性肝癌(HCC) 原位RT—PCR:免疫组织化学
顶体素结合蛋白真核表达载体的构建及其在肝癌细胞株的表达 被引量:1
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作者 罗彬 云翔 +6 位作者 林永达 肖绍文 闫光华 何少健 陈芳 谢小薰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期 1072-1074,共3页
目的:构建ACRBP真核表达载体,建立稳定表达ACRBP的人肝癌细胞株,为后继研究该基因的功能奠定基础。方法:以pMAL-C2/ACRBP重组质粒作为模板进行PCR,扩增出ACRBP编码区cDNA,并与真核表达载体pEGFP-N1连接,构建pEGFP-N1/ACRBP重组质粒。... 目的:构建ACRBP真核表达载体,建立稳定表达ACRBP的人肝癌细胞株,为后继研究该基因的功能奠定基础。方法:以pMAL-C2/ACRBP重组质粒作为模板进行PCR,扩增出ACRBP编码区cDNA,并与真核表达载体pEGFP-N1连接,构建pEGFP-N1/ACRBP重组质粒。通过Fugene HD将该重组质粒转染至ACRBP表达阴性的肝癌细胞株HepG2,经G418筛选阳性克隆获得稳定转染株。RT-PCR和免疫组织化学方法检测HepG2细胞中ACRBP的表达情况。结果:pEG-FP-N1/ACRBP真核表达载体经测序证实插入序列完全正确;ACRBP基因已经稳定转染至HepG2细胞中并获得表达。结论:成功构建了pEGFP-N1/ACRBP真核表达载体并将其转染HepG2后,能稳定地表达ACRBP。 展开更多
关键词 ACRBP 基因克隆 转染
MAGE-D4a融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定 预览 被引量:3
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作者 肖绍文 +4 位作者 罗彬 蓝秀万 林文珍 林永达 谢小薰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期 432-435,440,共5页
目的:构建肿瘤相关抗原MAGE-D4a的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白。方法:PCR法从胶质瘤组织cDNA中扩增MAGE-D4a基因全长编码区,连接入原核表达载体pMAL-c2,筛选、鉴定阳性克隆并测序。将重组质粒转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)诱导表... 目的:构建肿瘤相关抗原MAGE-D4a的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白。方法:PCR法从胶质瘤组织cDNA中扩增MAGE-D4a基因全长编码区,连接入原核表达载体pMAL-c2,筛选、鉴定阳性克隆并测序。将重组质粒转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)诱导表达,表达产物经AmyloseResin亲和层析分离纯化,并且对纯化的融合蛋白进行质谱鉴定。结果:成功扩增了MAGE-D4a基因;重组质粒在Rosetta大肠杆菌中诱导表达出MBP/MAGE-D4a融合蛋白;优化了MAGE-D4a原核表达体系的最适条件;蛋白质谱分析结果显示表达的基因重组蛋白与目的蛋白相符。结论:获得了高效表达、可溶性的MAGE-D4a重组蛋白,为抗体的制备及血清学分析奠定了基础。 展开更多
关键词 黑色素瘤相关抗原-D4a 原核表达 纯化 融合蛋白
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PPI1对人宫颈癌HeLa细胞紫杉醇敏感性的影响 预览
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作者 曾麒燕 曾麟杰 +2 位作者 黄勇奇 张红 《华中科技大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期 489-493,共5页
目的探讨PPI1野生型和活化型突变体的表达对宫颈癌细胞株紫杉醇敏感性的影响。方法建立PPI1野生型和持续活化型突变体稳定表达的HeLa细胞株,用MTT实验、克隆形成实验、流式细胞术等方法观察转染PPI1的HeLa细胞对化疗药紫杉醇的敏感性,通... 目的探讨PPI1野生型和活化型突变体的表达对宫颈癌细胞株紫杉醇敏感性的影响。方法建立PPI1野生型和持续活化型突变体稳定表达的HeLa细胞株,用MTT实验、克隆形成实验、流式细胞术等方法观察转染PPI1的HeLa细胞对化疗药紫杉醇的敏感性,通过Western blot分析凋亡相关蛋白的表达及MAPK信号转导通路的活化情况。结果经紫杉醇处理后,PPI1持续活化型突变体的表达明显抑制HeLa细胞的增殖和克隆形成能力;该组细胞凋亡率及G2/M期细胞所占比例明显升高;Western blot分析表明,该组细胞促凋亡分子Bax的表达、Caspaes-3和Caspaes-8的活化及Bcl-2和p38的磷酸化程度明显增强。结论 PPI1持续活化型突变体的表达可明显增强HeLa细胞对紫杉醇的敏感性,其中涉及到Bax表达和Bcl-2磷酸化增强,Caspaes-3、Caspaes-8的活化增强和p38信号转导通路的活化增强。 展开更多
关键词 Ⅰ型磷酸酶抑制亚基-1 紫杉醇 细胞凋亡 细胞周期 信号转导
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反义寡核苷酸对淋巴瘤细胞Livin基因表达及细胞凋亡的影响 预览 被引量:1
17
作者 顾永耀 +1 位作者 王华 曾晶晶 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第16期2421-2424,共4页
目的分析凋亡抑制蛋白Livin基因的反义寡核苷酸(ASODN)对人淋巴瘤细胞株(Raji)Livin mRNA表达的抑制作用及其对细胞凋亡的影响。方法合成Livin特异性全硫代修饰的ASODN及其对照错义寡核苷酸(MSODN),通过脂质体转染Raji细胞,MTT法... 目的分析凋亡抑制蛋白Livin基因的反义寡核苷酸(ASODN)对人淋巴瘤细胞株(Raji)Livin mRNA表达的抑制作用及其对细胞凋亡的影响。方法合成Livin特异性全硫代修饰的ASODN及其对照错义寡核苷酸(MSODN),通过脂质体转染Raji细胞,MTT法检测细胞的增殖抑制率;RT-PCR法检测转染前后Livin mRNA表达水平的变化;Hoechst染色观察细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果 Livin ASODN能显著抑制Raji细胞的增殖(P〈0.01),并呈现一定的剂量效应关系。0.6μmol/L的ASODN作用Raji细胞48h后,Livin mRNA的表达水平明显下调,细胞出现凋亡的形态学改变,细胞凋亡率为(37.54±2.65)%,与对照组比较,差异有统计学意义(P〈0.01)。结论 Livin ASODN能有效降低Livin mRNA表达水平,抑制Raji细胞增殖,并增强细胞凋亡的敏感性,有望成为淋巴瘤基因治疗的分子靶向。 展开更多
关键词 LIVIN基因 反义寡核苷酸 淋巴瘤 细胞凋亡
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Seminar教学模式在生物化学研究生教学中的初探 预览 被引量:30
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作者 林文珍 蔡丹昭 +4 位作者 吴耀生 曾麒燕 蓝秀万 黄勇奇 《中国高等医学教育》 2010年第8期 8-9,共2页
在2006级、2007级医学研究生的生物化学教学中引入Seminar教学模式,总结教学实施方法和体会,为Seminar教学模式在生物化学教学中的应用提供参考。
关键词 SEMINAR教学模式 生物化学 研究生教学
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Ⅰ型磷酸酶抑制亚基-1对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用 预览 被引量:1
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作者 曾麒燕 黄毓 +2 位作者 曾麟杰 张红 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期 883-888,共6页
PPI1(Inhibitor-1of protein phosphatase 1)是Ⅰ型磷酸酶的抑制亚基之一,其活化依赖于35位苏氨酸蛋白激酶(PKA)的磷酸化而发挥抑制作用。本研究目的在于探讨PPI1持续活化型突变体的表达对人宫颈癌细胞株增殖的影响及其可能的作用... PPI1(Inhibitor-1of protein phosphatase 1)是Ⅰ型磷酸酶的抑制亚基之一,其活化依赖于35位苏氨酸蛋白激酶(PKA)的磷酸化而发挥抑制作用。本研究目的在于探讨PPI1持续活化型突变体的表达对人宫颈癌细胞株增殖的影响及其可能的作用机制。利用PPI1野生型和活化型突变体表达质粒分别转染HeLa细胞,首先通过H3TdR掺入实验、迁移实验观察PPI1基因对HeLa细胞增殖能力的影响,研究结果表明:在活化型突变体表达的HeLa细胞株中,细胞3H掺入量和迁移能力明显受抑。其次通过流式细胞术、Giemsa染色法分析PPI1对HeLa细胞的细胞周期的影响;FACS分析表明HeLa细胞G2/M期比例明显升高;经脱氧胸苷同步化后,该组细胞进入有丝分裂期明显滞后。最后利用Western blot分析PPI1对MAPK信号转导通路的影响,Western blot分析显示该组细胞的ERK磷酸化水平明显下降。研究表明PPI1活化型突变体的表达可抑制人宫颈癌细胞株的增殖,这与其诱导HeLa细胞G2/M期停滞、有丝分裂的进入延缓有关,其中涉及到MAPK信号转导通路的活化受抑制。 展开更多
关键词 Ⅰ型磷酸酶的抑制亚基-1 HELA细胞 增殖 细胞周期 信号转导
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GSTM1基因多态性和烟酒习惯与原发性肝癌易感性的关系 预览 被引量:1
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作者 顾永耀 廖志红 《广西医科大学学报》 CAS 北大核心 2008年第4期 567-568,共2页
目的:探讨Ⅱ相代谢酶谷胱甘肽硫转移酶M1(GSTM1)基因多态性和烟酒习惯及其相互作用与原发性肝癌易感性的关系。方法:采用病例—对照研究和多重PCR技术对广西地区105例肝癌患者及151例健康对照的GSTM1基因型进行检测,并调查研究对象... 目的:探讨Ⅱ相代谢酶谷胱甘肽硫转移酶M1(GSTM1)基因多态性和烟酒习惯及其相互作用与原发性肝癌易感性的关系。方法:采用病例—对照研究和多重PCR技术对广西地区105例肝癌患者及151例健康对照的GSTM1基因型进行检测,并调查研究对象的烟酒习惯。结果:GSTM1缺失基因型频率在病例组与对照组中分别为64.76%和50.99%(P〈0.05);GSTM1缺失基因型的个体中,有吸烟、饮酒习惯者患肝癌的危险性明显升高,OR分别为3.13(95%CI:1.48~6.61)和4.27(95%CI:1.82~10.02)。结论:GSTM1是肝癌的遗传易感因素,GSTM1基因多态和烟酒习惯在肝癌的发生中存在协同作用。 展开更多
关键词 肝癌 谷胱甘肽硫转移酶M1 多态现象 烟酒习惯
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