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■NPR1同源基因全长cDNA的分离与表达分析
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作者 曾志芳 +3 位作者 魏春 杨华丽 佘文琴 陈桂信 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期567-576,共10页
NPR1是水杨酸诱导抗病基因表达的重要调控因子之一,主要作用于水杨酸信号转导途径的上、下游。采用稀释池PCR法,筛选■(Prunus salicina var. cordata)叶片全长均一化cDNA文库,分离■叶片NPR1同源基因的全长cDNA;用不同浓度的水杨酸喷... NPR1是水杨酸诱导抗病基因表达的重要调控因子之一,主要作用于水杨酸信号转导途径的上、下游。采用稀释池PCR法,筛选■(Prunus salicina var. cordata)叶片全长均一化cDNA文库,分离■叶片NPR1同源基因的全长cDNA;用不同浓度的水杨酸喷施一年生■嫁接苗嫩叶,采用荧光定量PCR技术检测所获得的NPR1同源基因的表达量差异。试验结果表明,共获得了4个NPR1同源基因的全长cDNA,分别命名为PsNPR1、PsNPR3.1、PsNPR3.2和PsNPR3.3,其长度分别为2 442、1 827、2 244和2 615 bp,其ORF长度分别为1 788、1 770、1 767和1 782 bp,分别编码596、590、589和594个氨基酸的蛋白质;氨基酸序列比对结果表明,■这4个NPR1同源基因的编码区均含有BTB/POZ和ANK两个保守域及核定位信号(NLS);PsNPR1与拟南芥的AtNPR1和At NPR2聚为一簇,PsNPR3.1、PsNPR3.2和PsNPR3.3与拟南芥的AtNPR3和At NPR4聚为另一簇。PsNPR1在喷施1.0 mmol·L-1水杨酸的叶片中表达量最高;PsNPR1、PsNPR3.1、PsNPR3.2在响应1.0 mmol·L-1水杨酸诱导过程中表达量持续上升,30h表达量最高,之后呈下降趋势,因此,水杨酸诱导抗病基因高表达的最佳处理浓度为1.0 mmol·L-1,最佳响应时间为30 h。 展开更多
关键词 水杨酸 NPR1
夜香树花期荧光定量PCR内参基因的筛选 预览
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作者 刘涛 熊青 +4 位作者 许颖妍 吕恃衡 佘文琴 陈桂信 《植物科学学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期534-542,共9页
为筛选夜香树(Cestrum nocturnum L.)香气释放、生物钟等相关基因表达研究适用的内参基因,本研究采用夜香树盛花期叶片和花为实验材料,利用同源克隆和RACE技术,获得了夜香树6种经典的内参基因序列,分别为:Actb7、EF-1A、GAPDH、TUA、... 为筛选夜香树(Cestrum nocturnum L.)香气释放、生物钟等相关基因表达研究适用的内参基因,本研究采用夜香树盛花期叶片和花为实验材料,利用同源克隆和RACE技术,获得了夜香树6种经典的内参基因序列,分别为:Actb7、EF-1A、GAPDH、TUA、TUB2、UBQ;采用荧光定量PCR方法对18s rRNA和这6个内参基因的表达模式进行了分析,并通过Bestkeeper、ge Norm、Norm Finder 3种程序分析了内参基因的稳定性。结果表明,在花中,Actb7表达最稳定;在叶片中,EF-1A和UBQ的表达比较稳定;在2种组织中,EF-1A的表达相对稳定。3组稳定性分析中,ge Norm程序确定的最佳内参基因数目均为2,最佳内参基因组合均为Actb7/EF-1A。本研究通过对稳定内参基因的筛选,以期为准确检测夜香树盛花期花瓣节律运动、香气释放、生物钟变化等相关基因的表达研究奠定基础。 展开更多
关键词 夜香树 内参基因 荧光定量PCR
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‘红肉蜜柚’CmMYB330基因的分离与表达分析 预览 被引量:2
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作者 杨华丽 +4 位作者 吕恃衡 徐世荣 余磊 潘腾飞 潘东明 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期268-278,共11页
【目的】分析‘红肉蜜柚’果实汁胞粒化相关的MYB转录因子基因特征与表达模式,探讨MYB转录因子在蜜柚汁胞木质素代谢过程中的作用机制,为研究蜜柚汁胞粒化发生机制提供借鉴。【方法】以‘红肉蜜柚’果实汁胞为试材,参考甜橙MYB全基因组... 【目的】分析‘红肉蜜柚’果实汁胞粒化相关的MYB转录因子基因特征与表达模式,探讨MYB转录因子在蜜柚汁胞木质素代谢过程中的作用机制,为研究蜜柚汁胞粒化发生机制提供借鉴。【方法】以‘红肉蜜柚’果实汁胞为试材,参考甜橙MYB全基因组分析,利用生物信息学分析和PCR技术克隆Cm MYB330的编码区序列及其5’端调控序列,并对序列进行生物信息学分析。利用实时荧光定量PCR技术对Cm MYB330在‘红肉蜜柚’果实汁胞不同发育时期和不同部位的表达情况进行分析。利用农杆菌介导法将Cm MYB330与GFP的融合表达载体注射转化到烟草叶片中进行亚细胞定位分析。利用酵母双杂交系统对Cm MYB330进行转录激活活性分析。【结果】Cm MYB330的编码区序列长度为942 bp,编码313个氨基酸,预测为核定位蛋白,为典型的R2R3 MYB转录因子。Cm MYB330与甜橙Cs1g19400.1、Am MYB330等亲缘关系近,都属于R2R3 MYB第4亚组。Cm MYB330的5’端调控序列为起始密码子上游-1 748 bp序列,预测该序列含有TATA-box、CAAT-box 2个启动子核心元件,3个MBS,1个AC-I,1个5UTR Py-rich stretch,还有大量激素(如赤霉素、乙烯、水杨酸等)响应元件。Cm MYB330表达量在‘红肉蜜柚’果实汁胞发育过程中有起伏,但总体呈现上升趋势,表达量在花后208 d达到最大,之后开始下降。在转化p-super1300-Cm MYB330-GFP的烟草叶片细胞核中检测到绿色荧光信号,与预测结果一致,说明Cm MYB330定位在细胞核中。在Y2H Gold酵母中,Cm MYB330表现为没有转录激活活性。【结论】克隆了‘红肉蜜柚’MYB转录因子Cm MYB330编码区序列及其5’端调控序列,Cm MYB330属于R2R3 MYB第4亚组,与汁胞粒化相关,为核定位蛋白,同时分析了其在‘红肉蜜柚’果实汁胞发育过程中的表达水平,总体呈上升趋势。为进一步研究Cm MYB330与蜜柚汁胞粒化的关系奠定了基础。 展开更多
关键词 '红肉蜜柚’ 转录因子 CmMYB330 5’端调控序列 表达分析
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WRKY同源基因的分离与表达分析 预览
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作者 刘涛 +4 位作者 杨华丽 许颖妍 徐意瑾 潘东明 陈桂信 《西北植物学报》 CSCD 北大核心 2017年第8期1493-1499,共7页
以(Prunus salicina Lindli.var cordataJ.Y.Zhang et al.)为试验材料,采用稀释池PCR法,筛选叶片全长均一化cDNA文库,获得了WRKY同源基因的12个全长cDNA分别命名为PsWRKY7、PsWRKY14、PsWRKY20、PsWRKY21、PsWRKY22、PsWRKY29、... 以(Prunus salicina Lindli.var cordataJ.Y.Zhang et al.)为试验材料,采用稀释池PCR法,筛选叶片全长均一化cDNA文库,获得了WRKY同源基因的12个全长cDNA分别命名为PsWRKY7、PsWRKY14、PsWRKY20、PsWRKY21、PsWRKY22、PsWRKY29、PsWRKY31、PsWRKY32、PsWRKY33、PsWRKY40、PsWRKY46和PsWRKY75,长度分别为1 517、1 798、2 098、1 177、1 242、1 396、2 135、1 760、2 113、1 047、1 258和700bp,ORF长度分别为1 095、1 572、1 764、1 068、1 071、1 002、1 944、1 602、1 770、963、1 077和672bp,分别编码364、523、587、355、357、333、647、533、589、320、358、223个氨基酸。荧光定量结果显示,12个WRKY同源基因在1.0mmol/L水杨酸处理后,所获得的PsWRKY表达量均显著上调,表明WRKY基因可能是水杨酸诱导防御反应的重要调控因子。 展开更多
关键词 WRKY 基因 荧光定量 PCR
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夜来香LIS基因的克隆与表达分析
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作者 吕恃衡 杨华丽 +5 位作者 吕科良 刘涛 朱梦珠 潘东明 陈桂信 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2017年第7期2525-2531,共7页
为了研究夜来香生物钟和花香代谢机制,本研究以夜来香花瓣为材料,利用PCR技术,从中获得了夜来香LIS基因的全长cDNA,并命名为CnLIS。生物信息学分析结果表明:该cDNA序列全长为1 800 bp,编码560个氨基酸,其中ORF为1 683 bp,5'UTR为56 b... 为了研究夜来香生物钟和花香代谢机制,本研究以夜来香花瓣为材料,利用PCR技术,从中获得了夜来香LIS基因的全长cDNA,并命名为CnLIS。生物信息学分析结果表明:该cDNA序列全长为1 800 bp,编码560个氨基酸,其中ORF为1 683 bp,5'UTR为56 bp,3'UTR为61 bp;该序列编码的氨基酸序列与软枣猕猴桃、温州蜜柑LIS基因的同源性分别为55%、50%,属于类异戊二烯合成C1超级家族。实时荧光定量PCR分析结果表明,0-12 h CnLIS表达水平较低,16 h后表达量明显上调,20 h表达量达最大,随后表达量急剧下降,其表达量随花瓣开放与闭合呈节律性变化。推测CnLIS可能参与夜来香香气形成,调控花香形成过程,同时,该基因的表达可能受生物钟基因所调控。 展开更多
关键词 夜来香 LIS基因 基因克隆 生物信息学 实时荧光定量PCR
(Prunussalicina)WRKY 33的克隆与表达分析
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作者 曾志芳 +5 位作者 佘文琴 刘涛 杨华丽 吕恃衡 潘东明 陈桂信 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期59-65,共7页
WRKY类转录因子是植物防御反应信号转导的重要组成部分,本研究为了探讨WRKY33基因的功能,以嫩叶为材料,采用RT-PCR和RACE技术相结合的方法,克隆得到WRKY33全长c DNA(命名为Ps WRKY33),对其进行生物信息学分析。以基因组DNA为模板,对该... WRKY类转录因子是植物防御反应信号转导的重要组成部分,本研究为了探讨WRKY33基因的功能,以嫩叶为材料,采用RT-PCR和RACE技术相结合的方法,克隆得到WRKY33全长c DNA(命名为Ps WRKY33),对其进行生物信息学分析。以基因组DNA为模板,对该基因的ORF区域进行PCR扩增,获得WRKY33的g DNA全长。采用荧光定量PCR技术检测该基因在水杨酸处理下的表达模式。试验结果表明:Ps WRKY33 c DNA全长为2 113 bp,开放阅读框长为1 770 bp,编码589个氨基酸;Ps WRKY33蛋白含有两个WRKY保守结构域,与Pm WRKY33蛋白同源性最高。Ps WRKY33基因组全长为2 844 bp,存在3个内含子和4个外显子。荧光定量结果表明:Ps WRKY33在1 mmol/L水杨酸处理后,30 h表达量最高,呈先上升后下降的趋势。研究结果为深入研究WRKY33基因与水杨酸诱导植物抗病性的关系提供一定的参考价值。 展开更多
关键词 (Prunussalicina Lindli.var cordata J.Y.Zhanget al.) WRKY33 序列分析 表达分析
夜来香SAMT基因的分离与原核表达 预览 被引量:2
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作者 杨华丽 吕恃衡 +4 位作者 郑鸿昌 潘东明 李子真 陈桂信 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2015年第10期1831-1838,共8页
为探究夜来香(Cestrum nocturnum)花香基因SAMT在花香代谢中的调控作用,以花瓣为材料,采用RTPCR和RACE技术相结合,克隆夜来香SAMT基因的全长c DNA。结果表明:该c DNA的序列长度为1 493 bp,编码365个氨基酸,其中包含1 098 bp ORF、130... 为探究夜来香(Cestrum nocturnum)花香基因SAMT在花香代谢中的调控作用,以花瓣为材料,采用RTPCR和RACE技术相结合,克隆夜来香SAMT基因的全长c DNA。结果表明:该c DNA的序列长度为1 493 bp,编码365个氨基酸,其中包含1 098 bp ORF、130 bp 5′UTR和265 bp 3′UTR,将其命名为Cn SAMT;生物信息学分析结果表明:该基因所编码的氨基酸序列与烟草、番茄的同源性分别为98%和98%,属于甲基转移酶-7家族;原核表达结果表明:Cn SAMT的蛋白表达产物约为42 ku,与软件预测的结果大致相同。采用染色体步移技术,克隆夜来香Cn SAMT的5′端调控序列,结果表明:该序列长度为993 bp,且该序列除了含有TATA-box、CAAT-box等启动子核心元件外,还含有光、生长素、脱落酸、热胁迫、缺氧胁迫等外界环境条件响应的顺式作用元件。 展开更多
关键词 夜来香 SAMT基因 原核表达 5′端调控序列
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丹参的提取精制工艺的研究 被引量:2
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作者 《中华中医药学刊》 CAS 2012年第11期2565-2570,共6页
目的:分别研究丹参的醇溶性成分和水溶性成份,以得到纯度较高、得膏率较低的浸膏,提高收率,便于制剂成型。方法:采用正交试验法分别优选出丹参醇溶性有效成分和水溶性有效成分的最佳提取工艺,同时考察了提取次数对提取率的影响,... 目的:分别研究丹参的醇溶性成分和水溶性成份,以得到纯度较高、得膏率较低的浸膏,提高收率,便于制剂成型。方法:采用正交试验法分别优选出丹参醇溶性有效成分和水溶性有效成分的最佳提取工艺,同时考察了提取次数对提取率的影响,并用验证实验证明了该工艺的可行性;采用大孔树脂层析法精制丹参水溶性成分,通过树脂型号的选择、上样液浓度的考察、洗脱剂的优选等层析条件的考察确定了丹参精制的工艺条件。结果:确定丹参的提取精制工艺:丹参药材用6倍量95%乙醇加热回流,提取1h,减压回收溶剂,得稠浸膏减压干燥,粉碎,即得丹参醇溶性提取物;将丹参醇提后药渣用8倍量水煎煮1h,提取液滤过,滤液减压浓缩至约1.5g生药/mL,离心后取上清液作为上样液,通过AB-8大孔树脂至饱和。上样结束后,用去离子水洗脱,至Molish反应呈阴性,停止洗脱。换70%乙醇为洗脱液洗脱,至洗脱液的三氯化铁一铁氰化钾试液反应呈阴性,合并洗脱液,减压回收溶剂,减压干燥,粉碎,即得丹参水溶性提取物。结论:优选的提取精制工艺,可提高药材中有效成分的收率,降低得膏率,便于制剂成型。 展开更多
关键词 丹参 丹参酮ⅡA 丹酚酸B 提取 精制
浅谈高校实验室建设和管理 预览
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作者 《管理观察》 2012年第21期140-140,共1页
高校实验室是大学生进行实践教学活动的重要场所,本文针对高校理化实验室、多媒体实验室、仪器分析实验室的建设与管理进行探索,意在加强整体实验教学水平的提高。
关键词 实验室 高校 建设 管理
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