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菊花CmTPS1like基因的克隆及表达特性 预览
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作者 王威姣 李菲 +5 位作者 张皖皖 王银杰 宋爱萍 陈发棣 陈素梅 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期58-64,共7页
[目的]本文旨在克隆菊花β-石竹烯合成酶同源基因(CmTPS 1like)并探讨其参与蚜虫取食和茉莉酸甲酯(MeJA)处理应答表达的机制。[方法]以菊花‘神马’为试验材料,采用高保真PCR及染色体位移法分别克隆CmTPS 1like基因全长及上游启动子序列... [目的]本文旨在克隆菊花β-石竹烯合成酶同源基因(CmTPS 1like)并探讨其参与蚜虫取食和茉莉酸甲酯(MeJA)处理应答表达的机制。[方法]以菊花‘神马’为试验材料,采用高保真PCR及染色体位移法分别克隆CmTPS 1like基因全长及上游启动子序列,并采用RT-qPCR分析CmTPS 1like基因的组织特异性表达以及响应蚜虫取食和MeJA处理的表达模式。[结果]CmTPS 1like基因开放阅读框(ORF)共有1644个碱基,编码548个氨基酸,且与菊科植物野菊同源性最高(95.26%)。CmTPS 1like基因上游启动子区包括2个MeJA响应元件、5个MYC结合元件、2个MYB结合元件、5个光响应元件等。CmTPS 1like基因在茎中表达量最高,叶和根中表达量次之,花中表达量最低。蚜虫取食12和24 h后,菊花叶片中CmTPS 1like基因的表达水平上调。随着MeJA处理时间的增加(3~24 h),CmTPS 1like基因被持续诱导表达。[结论]CmTPS 1like基因在菊花‘神马’茎中表达量最高,其表达受蚜虫取食和MeJA处理的影响。 展开更多
关键词 菊花 CmTPS 1like基因 蚜虫 茉莉酸甲酯(MeJA)
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菊花CmGATA12基因促进开花的分子机制 预览
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作者 吴怀远 赵楠 +3 位作者 王艺光 刘伟鑫 陈发棣 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期657-664,共8页
[目的]本文旨在探究菊花CmGATA12基因的功能,分析其表达特征,并转入拟南芥中对其功能进行初步研究。[方法]从菊花品种‘清露’中克隆获得CmGATA12全长序列,与其他物种进行同源性比对分析,同时利用实时荧光定量PCR分析CmGATA12在菊花不... [目的]本文旨在探究菊花CmGATA12基因的功能,分析其表达特征,并转入拟南芥中对其功能进行初步研究。[方法]从菊花品种‘清露’中克隆获得CmGATA12全长序列,与其他物种进行同源性比对分析,同时利用实时荧光定量PCR分析CmGATA12在菊花不同组织中的表达变化;将CmGATA12基因转入拟南芥中,观察其对拟南芥开花时间和莲座叶片数的影响,并分析CmGATA12转基因拟南芥中相关开花基因的表达变化。[结果]CmGATA12与拟南芥GATA家族的AtGATA13和AtGATA8的遗传距离最近。组织定量分析表明CmGATA12在菊花的茎中表达量最高,在芽中表达量最低。亚细胞定位和转录活性试验表明,CmGATA12定位在细胞核和细胞膜并且具有转录激活活性。统计CmGATA12转基因拟南芥植株的开花时间和莲座叶片数发现,CmGATA12转基因拟南芥植株的开花时间均提前于野生型拟南芥植株,开花时的莲座叶片数均低于野生型拟南芥植株。CmGATA12转基因拟南芥植株相关开花基因的表达中,促进开花的基因AtSPL5和AtGI在CmGATA12转基因植株中较野生型拟南芥中的表达量上调,抑制开花的基因AtSVP、AtFRI、AtTOE1和AtTOE2在CmGATA12转基因植株中较野生型表达量下调。[结论]本研究克隆得到的菊花CmGATA12基因,具有促进拟南芥开花的功能。 展开更多
关键词 菊花 花期调控 转录因子 CmGATA12基因
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菊花CmPAL基因的克隆及表达分析 预览
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作者 安聪 张一 +5 位作者 张皖皖 张婷 陈发棣 房伟民 陈素梅 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期73-80,共8页
[目的]本文旨在克隆菊花中苯丙氨酸解氨酶基因(PAL),并探讨其在不同组织的表达特性以及在胁迫和激素处理下的响应模式。[方法]以菊花‘神马’为试验材料,依据其转录组数据库信息,克隆CmPAL全长,并利用生物信息学方法对其进行分析。利用... [目的]本文旨在克隆菊花中苯丙氨酸解氨酶基因(PAL),并探讨其在不同组织的表达特性以及在胁迫和激素处理下的响应模式。[方法]以菊花‘神马’为试验材料,依据其转录组数据库信息,克隆CmPAL全长,并利用生物信息学方法对其进行分析。利用荧光定量PCR检测该基因在不同组织中的相对表达量,在蚜虫和干旱胁迫以及不同激素处理下的表达变化。[结果]CmPAL基因开放阅读框(ORF)全长2154bp,编码氨基酸717个,理论等电点(pI)为5.75,预测蛋白相对分子质量为77.73×10^3。系统进化分析表明该基因编码的蛋白与黄花蒿和泡黄金菊的PAL亲缘关系最近,同源性分别为97.94%和91.88%,具有较高的保守性。CmPAL在菊花根中表达量最高,管状花中次之。蚜虫胁迫和茉莉酸甲酯(MeJA)可诱导CmPAL基因的表达,水杨酸(SA)、独角金内酯类似物GR24则抑制CmPAL的表达。干旱胁迫3h处理组CmPAL基因表达量高于对照组。[结论]菊花‘神马’CmPAL基因在菊花的根中表达量最高,并受蚜虫和MeJA诱导,受SA和独角金内酯类似物GR24抑制,表明该基因可能参与多种胁迫防御反应和激素应答。 展开更多
关键词 菊花 CmPAL基因 基因表达 胁迫 植物激素
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菊花扦插生根能力的量化评价
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作者 孙炜 于瑞宁 +3 位作者 张飞 陈发棣 房伟民 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期540-548,共9页
测定了51个菊花品种插穗扦插12 d后的根数、平均根长、根粗、最长根长、根表面积、根投影面积和平均单根根尖数,对这7个形态指标进行相关性和主成分分析,采用隶属函数法对扦插苗的生根能力进行综合评价。结果表明:不同菊花品种的根数、... 测定了51个菊花品种插穗扦插12 d后的根数、平均根长、根粗、最长根长、根表面积、根投影面积和平均单根根尖数,对这7个形态指标进行相关性和主成分分析,采用隶属函数法对扦插苗的生根能力进行综合评价。结果表明:不同菊花品种的根数、平均根长、平均单根根尖数和最长根长的差异较大,但平均根粗、根表面积和根投影面积差异较小。主成分分析将7个单项指标转换成2个相互独立的因子,累积贡献率为84.01%。隶属函数法计算扦插苗生根能力的综合指标值、隶属函数值和综合得分后发现,综合得分值主要集中在0.20~0.40之间,共有23个品种,占总数的45.1%;综合得分值≥0.40的5个品种均为盆栽小菊,其中最大的‘钟山云歌’为0.88,生根能力最强;综合得分值≤0.10共10个品种,其中6个为传统秋菊,最小的‘国华由季’和‘国华八十祝’仅为0.03,生根能力最弱。 展开更多
关键词 菊花 插穗 生根 主成分分析 隶属函数法 量化评价
切花菊3个品种的飞燕草素苷合成能力分析
5
作者 于凯丽 吴慧莹 +5 位作者 曲爱爱 王艺光 房伟民 陈发棣 陈素梅 《园艺学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期2045-2051,共7页
为了评价不同切花菊品种花瓣飞燕草素苷合成能力,以3个粉色系切花菊品种为材料,采用飞燕草素前体二氢杨梅素2 mg·mL^-1溶液对花瓣进行离体添加培养,建立菊花飞燕草素苷超高效液相UPLC分析技术,并用于菊花花瓣中飞燕草素苷的鉴定。... 为了评价不同切花菊品种花瓣飞燕草素苷合成能力,以3个粉色系切花菊品种为材料,采用飞燕草素前体二氢杨梅素2 mg·mL^-1溶液对花瓣进行离体添加培养,建立菊花飞燕草素苷超高效液相UPLC分析技术,并用于菊花花瓣中飞燕草素苷的鉴定。结果表明,菊花花青苷可采用0.1mol·L^-1盐酸甲醇及同体积的10%甲酸水提取,0.22μm膜过滤。通过洗脱条件的优化可在9 min内实现飞燕草素苷与其他花青苷的分离,当飞燕草素在2.5-40 mg·L^-1范围内时与色谱峰面积具有良好的线性关系,相关系数为0.997。3个粉色系菊花品种均具有催化二氢杨梅素合成飞燕草素的能力,且飞燕草素含量均在220μg·g^-1 FW以上,表明3个品种均可作为蓝色花色转基因候选品种。 展开更多
关键词 菊花 二氢杨梅素 飞燕草素苷 超高效液相 蓝色花色
乙烯调控植物耐涝机制的研究进展 预览 被引量:1
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作者 陈发棣 陈素梅 +3 位作者 宋爱萍 赵楠 苏江硕 《南京农业大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期203-208,共6页
随着全球气候变暖和极端天气的频发,涝害已成为农业的主要自然灾害之一,造成严重的经济损失。为了适应涝渍环境,植物通过乙烯等信号物质调控涝渍胁迫应答。本文从涝渍胁迫下乙烯的合成、乙烯信号转导途径关键基因及调控机制、乙烯信号... 随着全球气候变暖和极端天气的频发,涝害已成为农业的主要自然灾害之一,造成严重的经济损失。为了适应涝渍环境,植物通过乙烯等信号物质调控涝渍胁迫应答。本文从涝渍胁迫下乙烯的合成、乙烯信号转导途径关键基因及调控机制、乙烯信号介导的耐涝形态适应机制、乙烯信号与低氧信号交互对话等方面阐述了乙烯调控植物的耐涝机制,并提出了今后的研究方向,以期为植物涝害应对及耐涝新品种选育提供理论指导。 展开更多
关键词 涝渍 乙烯 低氧 信号转导 非生物胁迫
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花序开放程度、栽培温度和贮藏条件对菊花品种‘钟山金阳’花粉萌发的影响 预览
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作者 蔡依凡 滕年军 +4 位作者 陈发棣 管志勇 陈素梅 房伟民 《植物资源与环境学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期56-64,共9页
采用离体培养法和杂交实验法,以菊花品种‘钟山金阳’(Chrysanthemum morifolium‘Zhongshanjinyang’)为实验材料,比较了不同的花序开放程度(花序开放天数和散粉阶段)、栽培温度和贮藏条件对其花粉萌发的影响。离体培养结果表明:... 采用离体培养法和杂交实验法,以菊花品种‘钟山金阳’(Chrysanthemum morifolium‘Zhongshanjinyang’)为实验材料,比较了不同的花序开放程度(花序开放天数和散粉阶段)、栽培温度和贮藏条件对其花粉萌发的影响。离体培养结果表明:在花序开放的第2至第7天花粉萌发率为22.6%~17.3%,第9天为7.7%,第11天仅为2.8%;在散粉的第1阶段(第1和第2轮管状花散粉)和第2阶段(第3和第4轮管状花散粉)花粉萌发率分别为19.5%和17.8%,第3阶段(全部管状花散粉)花粉萌发率仅为9.4%,表明随花序的开放和散粉阶段的延续,花粉萌发率均呈逐渐降低的趋势。在昼/夜温度5℃/0℃、10℃/5℃、15℃/10℃、20℃/15℃、25℃/20℃和30℃/25℃条件下栽培一定时间,其花粉萌发率和花粉管长度均有明显差异;其中,10℃/5℃栽培组培养4.0 h的花粉萌发率最高(23.0%),而30℃/25℃栽培组培养0.5 h的花粉萌发率最低(1.2%);15℃/10℃和20℃/15℃栽培组培养4.0 h的花粉管长度较长(分别为144.4和146.1μm),而30℃/25℃栽培组培养0.5 h的花粉管长度最短(38.3μm)。在不同贮藏温度下[4℃、-20℃和室温(约25℃)],新鲜和干燥花粉的萌发率均随贮藏时间的延长逐渐下降,但降幅存在明显差异;其中,新鲜花粉贮藏12 d后花粉萌发率从21.4%降至5.0%以下,干燥花粉贮藏26 d后花粉萌发率降至5.0%以下;总体上看,干燥花粉的萌发率和贮藏时间均高于新鲜花粉,以-20℃条件下贮藏的干燥花粉萌发率最高且可贮藏至50 d以内。杂交实验结果显示:用不同栽培温度下的品种‘钟山金阳’的花粉对品种‘钟山粉碟’(‘Zhongshanfendie’)进行人工授粉,在柱头上花粉萌发数差异明显;其中,10℃/5℃栽培组的花粉萌发数最多(55.5),30℃/25℃栽培组的花粉萌发数最少(8.8),且二者间差异显著(P〈0.05)。综合分析结果表明:花序开放天数、� 展开更多
关键词 菊花品种'钟山金阳’ 散粉阶段 栽培温度 贮藏条件 花粉萌发率
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茶、药兼用菊新品系选育 被引量:1
8
作者 冯晓燕 房伟民 +2 位作者 陈发棣 管志勇 《中药材》 北大核心 2017年第2期258-263,共6页
目的:选育茶、药兼用的早花高产型菊花新品系。方法:对经田间初选的茶用菊杂交后代株系的干花进行感官品质评价,进而对其有效成分进行测定,并采用模糊综合评价法对所筛选的杂交后代进行综合分析评价。结果:不同杂交后代各指标有较为... 目的:选育茶、药兼用的早花高产型菊花新品系。方法:对经田间初选的茶用菊杂交后代株系的干花进行感官品质评价,进而对其有效成分进行测定,并采用模糊综合评价法对所筛选的杂交后代进行综合分析评价。结果:不同杂交后代各指标有较为明显的差别,以田间性状花期及亩产量、感官品质及化学成分各指标为评价要素,建立了模糊综合评价法模型;构建四组不同权重的模型对结果进行计算分析,发现品种CH1-21、CH1-9、CH1-18及CH7-3的总体得分相对较高,数值都在各项平均值以上,在综合评价中具有较明显的优势,入选为茶、药兼用的早花高产型菊花新品系。结论:通过模糊综合评价法进行评价分析,筛选出了4个茶、药兼用的早花高产型菊花新品系。 展开更多
关键词 茶用菊 药用菊 模糊综合评价法 新品系
菊花Cm14-3-3υ基因的克隆及表达分析 预览
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作者 曹沛沛 毛雅超 +4 位作者 刘涛 陈发棣 房伟民 陈素梅 《南京农业大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期820-826,共7页
[目的]本文旨在克隆菊花‘神马’Cm14-3-3υ基因,并初步分析其表达特征,为其功能研究奠定基础。[方法]从菊花‘优香’转录组库中获得编码拟南芥同源基因14-3-3υ序列信息,根据NCBI比对确定基因的cDNA全长并进行克隆,再利用生物信息学方... [目的]本文旨在克隆菊花‘神马’Cm14-3-3υ基因,并初步分析其表达特征,为其功能研究奠定基础。[方法]从菊花‘优香’转录组库中获得编码拟南芥同源基因14-3-3υ序列信息,根据NCBI比对确定基因的cDNA全长并进行克隆,再利用生物信息学方法对该蛋白的功能和活性位点进行预测,同时利用实时定量PCR分析了在非生物胁迫条件下该基因的表达变化。[结果]Cm14-3-3υ的ORF序列长774 bp,编码257个氨基酸;亚细胞定位表明Cm14-3-3υ定位在细胞质和细胞核;生物信息学分析表明该蛋白有19个Ser、7个Thr和7个Tyr潜在的磷酸化位点,在N-端有5个蛋白结合区;表达模式分析显示,Cm14-3-3υ基因在根、茎、叶、花中均有表达,且受脱落酸(ABA)、茉莉酸甲酯(Me JA)、盐和冷胁迫的诱导表达。[结论]本文克隆得到菊花Cm14-3-3υ基因,表达模式分析表明其受ABA、Me JA、盐和冷胁迫诱导表达。 展开更多
关键词 菊花 Cm14-3-3υ基因 蛋白结构 胁迫 基因表达
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标准切花菊杂交群体侧枝侧蕾性状的杂种优势和遗传分析 预览
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作者 何臻 赵凤 +5 位作者 张飞 陈发棣 管志勇 陈素梅 房伟民 《植物资源与环境学报》 CSCD 北大核心 2017年第1期1-9,共9页
以标准切花菊〔flendranthema morifolium ( Ramat.) Tzvel.〕品种‘优香’(‘ Yuuka ’)为母本、品种‘ 神马’ (‘Jinba’) 为父本进行杂交, 对杂交F,代群体的单株侧枝平均长度、 单株侧枝数、 单株侧枝数与单株叶节数的比值 (... 以标准切花菊〔flendranthema morifolium ( Ramat.) Tzvel.〕品种‘优香’(‘ Yuuka ’)为母本、品种‘ 神马’ (‘Jinba’) 为父本进行杂交, 对杂交F,代群体的单株侧枝平均长度、 单株侧枝数、 单株侧枝数与单株叶节数的比值 (R1 )、 主蕾直径与侧蕾直径的比值( R2 )、 单株侧蕾数以及主蕾与侧蕾间距离6 个性状进行杂种优势和相关性分 析, 并利用主基因+多基因混合遗传模型检测这些性状的主基因效应.结果显示:杂交F ,代群体6 个侧枝侧蕾性 状的变异系数为23. 78%~ 50.65 %, 且侧枝性状的变异系数总体上高于侧蕾性状;各性状的频次均呈现连续性的正 态分布趋势, 说明这些性状可能属于多基因控制的数量性状.杂交F,代群体的6 个侧枝侧蕾性状均在0.01水平 上表现出显著的中亲优势, 表明各性状均存在显著的杂种优势.6 个性状中, 单株侧枝平均长度的中亲值最大 (62.30 mm), R1的中亲值最小( 0 .26) ;单株侧枝平均长度、 R 2和主蕾与侧蕾间距离的中亲优势均为正值, 单株侧 枝数、 单株侧蕾数和R1的中亲优势均为负值.6 个性状的中亲优势率为- 53 . 7 4% ~ 31.28 %, 其中, 单株侧枝数的 中亲优势率最小, 而主蕾与侧蕾间距离的中亲优势率最大.相关性分析结果显示:单株侧枝平均长度和单株侧枝 数均与R 1 呈极显著正相关, 并与R2 和单株侧蕾数呈极显著负相关; R2 与侧蕾数也呈极显著正相关, 且二者均与 主蕾与侧蕾间距离呈极显著正相关.混合遗传分析结果显示:单株侧枝平均长度、 R1、 R2 和单株侧蕾数均受2 对 主基因控制, 符合B- 1 模型, 主基因表现为“加性- 显性- 上位性”, 这 4 个性状的遗传率分别为77. 0 7 % 、 96. 7 2 %、 64. 38%和53. 07%;单株侧枝数也受2 对主基因控制, 符合B - 2 模型, 主基因表现为“加性- 显性”, 该性状的遗传率 为74. 38 %, 表明这5 展开更多
关键词 标准切花菊 侧枝侧蕾性状 表型变异 杂种优势 混合遗传模型 遗传分析
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菊花高效瞬时转化体系建立及稳定遗传植株再生 预览
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作者 邓叶 阳淑金 +5 位作者 杜新平 董彬 任丽萍 房伟民 陈发棣 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期48-53,共6页
[目的]本试验的目的是通过瞬时转化解决菊花转基因中存在的两大难题:转化效率低和表达水平低。[方法]通过农杆菌注射渗透法将含有GUS基因(编码届一葡糖苷酸酶)的表达载体pORER1-2×35S::GUS转入菊花‘优香’叶片中,进行瞬时... [目的]本试验的目的是通过瞬时转化解决菊花转基因中存在的两大难题:转化效率低和表达水平低。[方法]通过农杆菌注射渗透法将含有GUS基因(编码届一葡糖苷酸酶)的表达载体pORER1-2×35S::GUS转入菊花‘优香’叶片中,进行瞬时表达,并组织培养转化后的叶片,利用GUS化学染色法和RT—PCR进行转化植株鉴定。[结果]菊花‘优香’瞬时表达的转化效率高达76.7%,外源基因(GUS)的表达水平也较理想,尤以第4和第5片完全展开叶(从形态学上端向形态学下端数)表现最佳。经过3~4个月的组织培养和抗性筛选,瞬时转化的‘优香’叶片再生出稳定遗传的转基因株系,转化效率达38.9%。[结论]本试验提供的菊花瞬时表达的方法高效、简单,并能实现稳定遗传。 展开更多
关键词 菊花 农杆菌侵染 瞬时表达 GUS 再生
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菊花不完全双列杂交F1代遗传关系的SRAP分析 被引量:1
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作者 吴洋洋 仰小东 +8 位作者 杨信程 徐婷婷 管志勇 薛建平 陈素梅 房伟民 陈发棣 张飞 《园艺学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期1116-1124,共9页
利用SRAP分子标记研究了6个切花菊品种及其2×4不完全双列杂交(NCⅡ)的38个F1代单株的遗传关系。结果表明,17对SRAP引物组合共获得229条带,其中多态性条带127条,平均每个引物获得7.5个多态性条带,多态性比率为56.0%,说明切花菊亲... 利用SRAP分子标记研究了6个切花菊品种及其2×4不完全双列杂交(NCⅡ)的38个F1代单株的遗传关系。结果表明,17对SRAP引物组合共获得229条带,其中多态性条带127条,平均每个引物获得7.5个多态性条带,多态性比率为56.0%,说明切花菊亲本品种及其杂交后代的分子多样性适中。6个亲本品种之间的Nei’s遗传距离介于0.11~0.25之间,平均为0.19,说明亲本品种之间的亲缘关系较近。亲本和杂交后代的遗传相似系数分别介于0.42~0.72和0.40~0.85之间,杂交后代遗传相似系数的中位数(0.61)高于亲本品种(0.55),说明杂交产生了一些变异株系,但是总的遗传基础有变窄或同质化趋势。基于遗传相似系数,UPGMA聚类将亲本和杂交后代划分为两大类,聚类结果与母本和杂交组合类型相符,说明SRAP分子标记可有效用于鉴定菊花不同杂交组合后代。 展开更多
关键词 菊花 杂交后代 不完全双列杂交 遗传相似性 分子鉴定 SRAP标记
AtCPL1调控拟南芥开花的机制 被引量:1
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作者 亓钰莹 展妍丽 +2 位作者 王萃铂 陈发棣 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期9-15,共7页
RNA聚合酶II CTD磷酸化酶1(CPL1)作为影响RNA聚合酶II磷酸化水平的重要因子,在植物逆境响应、离子吸收以及成花诱导等生命过程中扮演重要角色。为深入探究CPL1参与植物开花时间调控的作用机制,以拟南芥(Arabidopsis thaliana)At CPL... RNA聚合酶II CTD磷酸化酶1(CPL1)作为影响RNA聚合酶II磷酸化水平的重要因子,在植物逆境响应、离子吸收以及成花诱导等生命过程中扮演重要角色。为深入探究CPL1参与植物开花时间调控的作用机制,以拟南芥(Arabidopsis thaliana)At CPL1突变体cpl1-3和fry2-1为研究材料,观察了长日照条件下突变体与野生型的开花时间,并利用荧光定量PCR技术对突变体中开花相关基因的表达情况进行了检测。结果表明:在长日照条件下,突变体cpl1-3和fry2-1抽薹时的莲座叶数目均显著多于野生型,且表现出明显的开花时间延迟现象;荧光定量PCR分析显示,突变体cpl1-3和fry2-1中开花抑制因子mi R156a、TOEs和SMZ基因的表达量较野生型显著升高,而开花促进因子FT、FD、CO和mi R172基因的表达量则显著降低。由此推测,At CPL1通过调控mi R156和mi R172的表达水平进而影响下游开花相关基因TOEs、SMZ、FT、FD及CO等的表达,从而实现对拟南芥开花时间的调控。 展开更多
关键词 AtCPL1 拟南芥 开花 调控途径
荷花R2R3-MYB转录因子NnMYB4对拟南芥木质素合成的影响 预览 被引量:3
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作者 李针针 刘兆磊 +2 位作者 陈发棣 陈素梅 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期932-938,共7页
[目的]本文旨在研究荷花R2R3-MYB转录因子Nn MYB4的功能,探讨其在木质素合成过程中的作用。[方法]利用RT-PCR技术从荷花品种‘黑龙江红莲’中克隆得到1个MYB转录因子基因c DNA全长开放阅读框(ORF),命名为Nn MYB4。采用实时荧光定量PCR... [目的]本文旨在研究荷花R2R3-MYB转录因子Nn MYB4的功能,探讨其在木质素合成过程中的作用。[方法]利用RT-PCR技术从荷花品种‘黑龙江红莲’中克隆得到1个MYB转录因子基因c DNA全长开放阅读框(ORF),命名为Nn MYB4。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法分析Nn MYB4在荷花不同组织中的表达情况。构建p MDC43-Nn MYB4过表达载体转化拟南芥,采用乙酰溴法测定转基因植株的木质素含量,通过qRT-PCR技术对木质素合成关键酶基因的表达进行分析。[结果]Nn MYB4基因ORF全长726 bp,编码241个氨基酸,属于R2R3-MYB转录因子G4亚组,与拟南芥At MYB4亲缘关系较近。组织定量结果表明,Nn MYB4基因在荷花根、茎、叶柄、叶中均有表达,且在幼叶中表达量相对最高,在剑叶中最低。与野生型拟南芥相比,转Nn MYB4拟南芥植株花序茎变矮,花期延迟,茎木质部染色面积较小、染色程度变浅,木质素含量显著降低。过表达Nn MYB4分析结果显示,转基因拟南芥At C3H、At4CL1、At F5H、At COMT1等木质素合成关键酶基因的表达量显著下调。[结论]荷花Nn MYB4可能是木质素合成途径中的一个负调控因子,对植物木质素合成具有负调控作用。 展开更多
关键词 荷花 R2R3-MYB RT-PCR 木质素 调控
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菊花优异种质资源挖掘与种质创新研究 被引量:2
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作者 陈发棣 陈素梅 +7 位作者 房伟民 张飞 滕年军 管惠毳 王海滨 宋爱萍 赵爽 《中国科学基金》 CSSCI CSCD 北大核心 2016年第2期112-115,共4页
菊花是我国十大传统名花和世界四大切花之一,观赏和经济价值极高。我国是栽培菊花的起源中心,然而我国菊花遗传育种研究却十分滞后,原有商业品种约90%为荷兰、日本引进品种。因菊花遗传基础狭窄及地域气候差异,已有引进品种和我国... 菊花是我国十大传统名花和世界四大切花之一,观赏和经济价值极高。我国是栽培菊花的起源中心,然而我国菊花遗传育种研究却十分滞后,原有商业品种约90%为荷兰、日本引进品种。因菊花遗传基础狭窄及地域气候差异,已有引进品种和我国原有自主品种的抗蚜虫性、耐低/高温性均较差, 展开更多
关键词 菊花 种质资源 优异基因 远缘杂交 分子改良
菊花不同时期各组织器官石蜡切片制作条件的优化 预览 被引量:2
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作者 刘涛 任莉萍 +10 位作者 曹沛沛 陈发棣 房伟民 陈素梅 管志勇 腾年军 张飞 赵爽 王海滨 宋爱萍 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期739-746,共8页
[目的]根据菊花不同时期各组织器官特性,设计试验对石蜡切片制作条件进行优化,旨在筛选针对特定组织的节省时间和成本且效果最佳的石蜡切片制作条件。[方法]取不同时期菊花根、茎、叶、花等样品,采用常规石蜡切片制作方法并结合试验过... [目的]根据菊花不同时期各组织器官特性,设计试验对石蜡切片制作条件进行优化,旨在筛选针对特定组织的节省时间和成本且效果最佳的石蜡切片制作条件。[方法]取不同时期菊花根、茎、叶、花等样品,采用常规石蜡切片制作方法并结合试验过程中总结的固绿快速染色法,设计不同的渗蜡时间、切片厚度及染色方法,对各组织器官进行石蜡切片制作,经显微拍照后筛选出各组织最适石蜡切片的制作条件。[结果]经筛选发现,在渗蜡时间方面,渗蜡充分幼根需5 d,老根6 d,幼茎6 d,老茎7 d,叶片4 d,花芽5 d,舌状花4 d。在切片厚度方面,最适切片厚度幼根为16μm,老根20μm,幼茎12μm,老茎12μm,叶片25μm,花芽10μm,舌状花16μm。在染色方法的选择方面,幼根经番红-固绿双重染色后效果最佳,老根则首选番红-固绿双重染色法或番红单染法;幼茎和老茎同样首选番红-固绿双重染色法或番红单染法;叶片、花芽及舌状花以操作最为简单的固绿快速染色法为首选。[结论]试验针对菊花不同时期各组织器官所筛选的最优石蜡切片制作条件,能够最大限度地节省时间和成本,并能达到试验观察所需的最优效果。 展开更多
关键词 菊花 石蜡切片 固绿快速染色法
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菊花转录因子CmMYB59的克隆与表达特性分析 预览 被引量:5
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作者 王萃铂 张瓒 +3 位作者 张晓雪 展妍丽 亓钰莹 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期63-69,共7页
[目的]研究菊花转录因子Cm MYB59的功能,阐释其对冷胁迫的影响。[方法]以菊花品种‘神马’为试验材料,采用RACE和RT-PCR技术克隆得到一个MYB转录因子的c DNA全长及其可变剪切;采用实时荧光定量PCR法研究了CmMYB59在不同组织器官及低温... [目的]研究菊花转录因子Cm MYB59的功能,阐释其对冷胁迫的影响。[方法]以菊花品种‘神马’为试验材料,采用RACE和RT-PCR技术克隆得到一个MYB转录因子的c DNA全长及其可变剪切;采用实时荧光定量PCR法研究了CmMYB59在不同组织器官及低温胁迫下的表达,通过酵母单杂交验证了其转录激活的活性,同时通过洋葱表皮细胞瞬时表达系统进行亚细胞定位。[结果]该基因全长904 bp,开放阅读框为768 bp,编码255个氨基酸,蛋白质相对分子质量为61.99×103。生物信息学分析表明,此基因为典型的R2R3型MYB转录因子,具有保守的结构域和调控基序,因与拟南芥的AtMYB59同源性较高,故命名为Cm MYB59。亚细胞定位表明Cm MYB59蛋白在细胞核上表达。酵母转录激活活性试验表明Cm MYB59具有转录激活活性。荧光定量PCR分析其表达模式,发现Cm MYB59在根中表达量最高,茎、叶中次之,茎尖和花器官中最低;Cm MYB59对低温胁迫有响应。[结论]初步推测,Cm MYB59可能与细胞分裂相关,参与根的发育过程,与冷胁迫相关。 展开更多
关键词 菊花 MYB转录因子 基因克隆 亚细胞定位 荧光定量PCR 转录激活
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菊花开花抑制基因CmFLC-like1的克隆及表达特性分析 被引量:2
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作者 展妍丽 王萃铂 +2 位作者 亓钰莹 陈发棣 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1347-1355,共9页
为深入研究夏菊的春化机理,利用多聚酶链式反应(PCR)结合5′RACE、3′RACE技术克隆夏菊品种‘优香’[Chrysanthemum morflorium(Ramat.)Kitam.‘Yuuka’]开花抑制基因Cm FLC-like1的c DNA全长序列,获得其全长为945 bp,开放阅读框(... 为深入研究夏菊的春化机理,利用多聚酶链式反应(PCR)结合5′RACE、3′RACE技术克隆夏菊品种‘优香’[Chrysanthemum morflorium(Ramat.)Kitam.‘Yuuka’]开花抑制基因Cm FLC-like1的c DNA全长序列,获得其全长为945 bp,开放阅读框(ORF)为636 bp,编码1条211个氨基酸残基的多肽,且具有典型的MADS结构域。同源性分析表明,Cm FLC-like1与葡萄(Vitis vinifera)Vv FLC和龙眼(Dimocarpus longan)Dl FLC的同源性最高,分别为55%和52%。进化树聚类分析表明,Cm FLC-like1蛋白与拟南芥和核桃的FLC遗传距离最近。亚细胞定位表明,Cm FLC-like1基因定位在核上。在酵母体系中发现Cm FLC-like1没有转录激活活性,拟南芥原生质体转化发现具有转录抑制活性。菊花植株营养生长期不同组织器官的RT-PCR表明Cm FLC-like1在叶片中表达量最高,茎和茎尖中次之,根中最少。低温(4℃)可抑制Cm FLC-like1表达,且处理时间越长,抑制表达越明显。 展开更多
关键词 菊花 春化作用 FLC RT-PCR
弱光下菊花‘清露’的激素水平及相关基因表达 预览 被引量:4
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作者 韩霜 陈素梅 +3 位作者 房伟民 管志勇 陈发棣 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期324-333,共10页
【目的】测量菊花在弱光条件下,出现庇荫症状过程中乙烯生成速率、赤霉素和生长素含量的变化及相关基因表达变化,从激素和基因水平探究庇荫机理。【方法】以菊花‘清露’为试验材料,设置55%光照(对照)和15%光照(弱光处理)。利用气... 【目的】测量菊花在弱光条件下,出现庇荫症状过程中乙烯生成速率、赤霉素和生长素含量的变化及相关基因表达变化,从激素和基因水平探究庇荫机理。【方法】以菊花‘清露’为试验材料,设置55%光照(对照)和15%光照(弱光处理)。利用气相色谱仪Agilent 6890N GC在0、2、4、6和8 d测量乙烯生成速率,利用高效液相色谱仪Agilent HPLC-110在0、2、4、6和8 d测量赤霉素(GA3)和生长素(IAA)含量,以GAPDH为内参基因用荧光定量PCR方法测量0、2、4、6和8 d时PHYA、COP1、PIF4、GAI和IAA1的相对表达量。设置0.5、1.0、2.0和4.0 mmol·L-14个GA3浓度,用适量乙醇溶解,使乙醇终浓度为1%,0 d、4 d时各处理1次,采用地上部喷施;设10、20、50和100μmol·L-14个多效唑(paclobutrazol,PAC)浓度,用适量乙醇溶解,使乙醇终浓度是1%,0 d和4 d时各处理1次,根据结果以2.0 mmol·L-1GA3,50μmol·L-1PAC对植物生长影响显著,分别作为处理浓度。0 d、7 d各喷1次,14 d时取样进行基因表达分析。【结果】15%光照条件下,第2天和第4天时乙烯生成速率显著增加,第4天最显著,比对照增加了2.04倍,第6天以后对照和处理的植株乙烯生成速率差异不显著,15%弱光处理条件下植株地上部乙烯生成速率比55%光照条件增加显著;15%光照条件下,第2、4和6天时叶片赤霉素含量与对照相比显著增加,第6天时出现峰值,达到4 700.56 ng·g-1,比对照高出2.57倍,随后又迅速下降,第8天降到与对照相同的水平;15%光照条件下生长素水平与对照组相比显著下降,随着处理时间的延长,对照组生长素含量呈增加趋势,弱光处理组生长素含量呈下降趋势,第8天时处理组生长素含量为223.95 ng·g-1FW,对照为489.77 ng·g-1FW,对照比处理的生长素含量高出1.12倍。弱光处理第2天时PHYA表达量迅速增加,2—6 d以略小的速度增加,6—8 d保持不变,对照组从第2天开始下降,4—8 d时处理组P 展开更多
关键词 菊花 激素水平 庇荫症状 基因表达
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CaMV35S启动子在菊花中驱动GUS外源基因的表达分析 预览 被引量:2
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作者 阳淑金 宋爱萍 +6 位作者 何深颖 朱晓晨 孙静 高姣姣 王银杰 陈发棣 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期554-559,共6页
[目的]由于CaMV 35S启动子转化菊花存在外源基因表达量低、基因沉默等问题,本研究对35S启动子、2×35S启动子在菊花中驱动GUS外源基因的表达进行了分析,以期为高效菊花转化提供理论指导。[方法]通过设计引物,利用PCR从p CAMBIA1301 ... [目的]由于CaMV 35S启动子转化菊花存在外源基因表达量低、基因沉默等问题,本研究对35S启动子、2×35S启动子在菊花中驱动GUS外源基因的表达进行了分析,以期为高效菊花转化提供理论指导。[方法]通过设计引物,利用PCR从p CAMBIA1301 Vector中克隆了35S启动子、2×35S启动子的序列并插入pORE R2载体中,分别获得了重组载体p ORE R2-35S:GUS和p ORE R2-2×35S:GUS,通过农杆菌介导法将构建的遗传转化载体分别导入切花菊品种‘神马’中。[结果]试验共转化2 296个菊花叶盘,经过筛选共得到16个过量表达的转基因株系。经PCR验证,目标片段已经成功插入转基因株系基因组。荧光定量PCR分析和染色分析显示,在转基因菊花中2×35S比35S启动子表现出驱动GUS基因高量表达的特性。[结论]在选择合适菊花品种的基础上,2×35S比35S启动子可以更加高效地促进基因表达。 展开更多
关键词 菊花 转基因 35S启动子 GUS表达
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