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肝豆汤对Wilson病模型铜负荷大鼠肝脏Wnt/β-catenin信号通路的调控作用 被引量:2
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作者 耿昊 李海 +6 位作者 徐陈陈 董健 陈燕 韩咏竹 韩永升 杨任民 程楠 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期75-81,共7页
目的:探讨肝豆汤对铜负荷大鼠肝脏中分泌型糖蛋白(Wnt)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的调控作用及机制。方法:SD大鼠115只随机分为正常组(20只)、造模组。造模组予以1g·kg^-1·d^-1的硫酸铜饲料及0.02mL·g^-1·d... 目的:探讨肝豆汤对铜负荷大鼠肝脏中分泌型糖蛋白(Wnt)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的调控作用及机制。方法:SD大鼠115只随机分为正常组(20只)、造模组。造模组予以1g·kg^-1·d^-1的硫酸铜饲料及0.02mL·g^-1·d^-1的0.185%硫酸铜溶液连续喂养12周;造模成功大鼠随机分为模型组(45只),肝豆汤组(25只)和青霉胺(PCA)组(25只);模型组、肝豆汤组和PCA组分别予以0.02mL·g^-1·d^-1生理盐水,0.4g·kg^-1·d^-1的中药肝豆汤和0.09g·kg^-1·d^-1青霉胺灌胃,连续4周,末次灌胃后取各组大鼠肝脏组织检测:电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)检测各组大鼠肝铜含量;苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠肝脏组织病理改变,免疫组织化学法检测肝脏组织氧化应激相关蛋白的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝组织中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平。结果:ICP-AES法结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肝脏铜含量显著升高(P<0.01);肝豆汤可降低铜负荷大鼠肝脏铜含量(P<0.05),PCA可显著降低模型组大鼠肝脏铜含量(P<0.01);HE染色结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肝脏组织镜下可见肝细胞大小不一、排列紊乱,部分肝索丧失;肝豆汤组和PCA组细胞损伤程度较模型组明显降低;免疫组化结果显示:肝豆汤和PCA可显著降低模型组8-羟基脱氧鸟苷(8-Hydroxyguanosine),硝基酪氨酸(Nitrotyrosine)蛋白表达量(P<0.01);Western blot结果显示,肝豆汤和PCA可使铜负荷大鼠肝脏内Wnt通路相关蛋白β-连环蛋白(β-catenin),磷酸化糖原合成激酶3β(glycogen synthase kinase-3,p-GSK3β),原癌基因(cellular myelocytomatosis oncogene,c-Myc)蛋白表达量显著增加(P<0.01)。结论:肝豆汤可通过促进过量铜排出减轻高铜诱导的肝脏损伤,并通过激活肝脏Wnt/β-catenin信号通路促进损伤的肝组织代偿性自愈以达到减轻高铜诱导氧化应激损伤的治疗效果。 展开更多
关键词 WILSON病 肝豆汤 分泌型糖蛋白(Wnt)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路 肝脏损伤
均匀线性设计筛选Wilson病模型TX小鼠肾保护效应的实验研究 预览
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作者 赵静 董健 +2 位作者 韩咏竹 程楠 胡文彬 《西部中医药》 2019年第1期8-13,共6页
目的:筛选对于TX小鼠肾脏起保护作用的效应中药方剂肝豆汤。方法:按照均匀设计法6因素11水平制备实验中药;采用原子吸收法、Western blot法检测不同药物组方对TX小鼠肾脏组织微量元素铜(Gu)、铁(Fe)、锌(Zn)及组织蛋白B淋巴细胞瘤-2(B-c... 目的:筛选对于TX小鼠肾脏起保护作用的效应中药方剂肝豆汤。方法:按照均匀设计法6因素11水平制备实验中药;采用原子吸收法、Western blot法检测不同药物组方对TX小鼠肾脏组织微量元素铜(Gu)、铁(Fe)、锌(Zn)及组织蛋白B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cysteinyl aspartate-specific proproteases-3,Caspase-3)表达的影响,运用SPSS 17.0软件进行多元回归分析并筛选对TX小鼠肾脏起保护作用的效应中药。结果:本实验筛选出肝豆汤中与肾组织Cu、Zn含量密切相关的效应中药有X6(三七,应取最大值0.009 g入方,P=0.030),X2(姜黄,应取最大值0.059 g入方,P=0.003);本实验未筛选出肝豆汤组方中与TX小鼠肾组织Fe含量相关的效应中药;肝豆汤中与TX小鼠肾组织凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达密切相关的效应中药有X3(黄连,应取最大值0.059 g入方,P=0.008)、X4(泽泻,应取最大值0.072g入方,P=0.014)、X5(金钱草,应取最大值0.072 g入方,P=0.008)、X6(三七,应取最大值0.009 g入方,P=0.014)。结论:肝豆汤肾保护效应中药最佳配伍及剂量配比为:黄连0.059 g、姜黄0.059 g、金钱草0.072 g、泽泻0.072 g、三七0.009 g,大黄未进入上述指标回归方程。中药肝豆汤中黄连、姜黄、金钱草、泽泻、三七通过调节微量元素铜锌代谢及调控凋亡蛋白多靶点发挥对TX小鼠肾脏的保护作用,大黄对于TX小鼠的肾脏保护作用尚有待证实。 展开更多
关键词 WILSON病 均匀设计 肾保护 肝豆汤 TX小鼠
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基于Cer通路探讨肝豆汤对Wilson病模型高铜诱导海马神经元细胞损伤的保护作用 被引量:2
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作者 徐陈陈 董健 +2 位作者 王训 韩咏竹 程楠 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期56-60,共5页
目的:探讨肝豆汤调控海马神经元内神经酰胺(Cer)信号通路的分子靶点并观察其相应的调控机制。方法:本实验采用海马神经元HT-22细胞,分为正常组,模型组,10%,15%及20%肝豆汤组5个组,模型组为硫酸铜(CuSO4)孵育HT-22细胞所得,正常组加入空... 目的:探讨肝豆汤调控海马神经元内神经酰胺(Cer)信号通路的分子靶点并观察其相应的调控机制。方法:本实验采用海马神经元HT-22细胞,分为正常组,模型组,10%,15%及20%肝豆汤组5个组,模型组为硫酸铜(CuSO4)孵育HT-22细胞所得,正常组加入空白含药血清,10%,15%及20%肝豆汤组分别加含不同体积分数(10%,15%,20%)肝豆汤兔血清的培养基培养。噻唑蓝(MTT)比色法检测不同剂量CuSO4作用不同时间点对HT-22细胞生长和增殖的影响;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)释放量的变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Cer信号通路相关蛋白表达情况。结果:MTT结果显示CuSO4在一定时间和浓度范围内对HT-22细胞生长和增殖有明显抑制作用;流式细胞仪检测发现,与正常组比较,模型组ROS荧光强度显著增加(P<0.01),肝豆汤组较模型组可显著降低细胞内ROS的释放量(P<0.01)。Western blot检测结果显示与模型组比较,肝豆汤组可明显降低细胞内酸性鞘磷脂水解酶(ASM),Cer,p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK),细胞色素C(Cyt C),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:高铜可诱导HT-22细胞内线粒体氧化应激并引起Cer信号通路失活,从而诱导海马神经元损伤的发生。肝豆汤可能通过促进过量铜排出而抑制细胞内ASM,Cer,p38 MAPK,Cyt C,Caspase-9,Caspase-3蛋白的表达,从而减轻高铜对海马神经元的损伤作用。肝豆汤可通过减少脑内铜含量,进而调控Cer信号通路达到减轻高铜诱导海马神经元损伤的治疗效果。 展开更多
关键词 WILSON病 肝豆汤 Cer信号通路 HT-22细胞
肝豆汤对Wilson病模型高铜诱导的SH-SY5Y细胞自噬效应的影响及其作用机制 被引量:1
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作者 黄雅楠 董健 +2 位作者 徐陈陈 程楠 韩咏竹 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期61-67,共7页
目的:研究肝豆汤对高铜诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞自噬效应的影响及其作用机制,为中医药防治脑型Wilson病(Wilson disease,WD)提供新的治疗靶点和研究思路。方法:噻唑蓝(MTT)比色法筛选硫酸铜(CuSO4)造模浓度(0,100,200,400,800... 目的:研究肝豆汤对高铜诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞自噬效应的影响及其作用机制,为中医药防治脑型Wilson病(Wilson disease,WD)提供新的治疗靶点和研究思路。方法:噻唑蓝(MTT)比色法筛选硫酸铜(CuSO4)造模浓度(0,100,200,400,800,1600μmol·L^-1)及时间;MTT比色法筛选含药血清浓度(5%,10%,15%,20%)及时间;乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞LDH漏出率;流式细胞法检测细胞内活性氧(ROS)的含量;荧光染料JC-1检测细胞线粒体膜电位;流式细胞仪对自噬进行定量分析。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝激酶B1(LKB1),腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK),自噬微管相关蛋白轻链3A/B(LC3A/B),哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR),unc-51样激酶1(ULK1),磷酸化ULK(p-ULK),磷酸化AMPK(p-AMPK)蛋白的表达。结果:MTT结果显示,CuSO4对细胞的损伤呈现一定的量效和时效关系(P<0.01),随着CuSO4作用浓度及时间的增加,细胞存活率呈现下降趋势;10%含肝豆汤兔血清可显著抑制CuSO4诱导的细胞死亡(P<0.01)。LDH释放实验显示,与正常组比较,CuSO4作用细胞后LDH漏出率显著增加(P<0.01),与模型组比较,含肝豆汤兔血清明显降低CuSO4损伤细胞的LDH漏出率(P<0.05)。DCFH-DA荧光染色显示,与正常组比较,CuSO4可显著增加细胞内ROS生成(P<0.01),与模型组比较,含肝豆汤兔血清可显著抑制CuSO4诱导的细胞内ROS产生(P<0.01)。JC-1染色结果显示,与正常组比较,CuSO4诱导细胞线粒体膜电位Δψm显著降低(P<0.01),与模型组比较,含肝豆汤兔血清明显抑制CuSO4诱导的线粒体膜电位降低Δψm(P<0.05)。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组细胞内LKB1,AMPK,LC3A/B,ULK1及p-AMPK蛋白的表达显著增加,mTOR及p-ULK蛋白的表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,含肝豆汤兔血清组LKB1,AMPK,LC3A/B,ULK1及p-AMPK蛋白表达显著降低,mTOR及p-ULK蛋白表达显著增加(P<0.01)。结论:高铜可通过诱导细胞内线粒体氧化应激,� 展开更多
关键词 肝豆汤 WILSON病 自噬 肝激酶B1(LKB1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路 氧化应激
“醒脑开窍”针刺法对缺血性脑卒中大鼠行为学的影响 预览 被引量:1
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作者 石永光 董健 +3 位作者 周晟 张亮亮 喻绪恩 韩永升 《云南中医学院学报》 2018年第4期25-28,共4页
目的探讨“醒脑开窍”针刺法对缺血性脑卒中大鼠行为学影响,为针刺治疗缺血性脑卒中提供理论依据。方法将80只SD大鼠随机分为电针组、电针对照组、模型组、假手术组,每组20只。采用热凝闭法制造大鼠大脑中动脉闭塞模型。电针刺激在造模... 目的探讨“醒脑开窍”针刺法对缺血性脑卒中大鼠行为学影响,为针刺治疗缺血性脑卒中提供理论依据。方法将80只SD大鼠随机分为电针组、电针对照组、模型组、假手术组,每组20只。采用热凝闭法制造大鼠大脑中动脉闭塞模型。电针刺激在造模成功24h内进行,采取“醒脑开窍”法,电针组取穴水沟、百会和双侧内关、三阴交,电针30min/次,1次/d,每7d为1疗程(连续针刺6d,后休息1d),共14d。余各组抓取、固定方法参数等同电针组,但不针刺。各组的大鼠在7d、14d随机各取10只进行神经功能评估、Barnes记忆分析及滚筒掉落时间观察记忆及运动功能。结果电针后,Barnes记忆持续时间较模型组显著延长(P<0.001),进入隐藏区的潜伏期较模型组显著缩短(P<0.001),滚筒掉落时间较模型组明显延长(P<0.001)。结论“醒脑开窍”针刺的方法能改善缺血性脑卒中大鼠记忆、运动功能等行为学。Barnes记忆分析系统及滚筒掉落时间可客观地反映大鼠记忆及运动功能的变化,对于电针对大鼠行为学实验研究有重要意义。 展开更多
关键词 “醒脑开窍”针刺法 缺血性脑卒中 行为学 Barnes记忆分析系统
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中药肝豆汤含药血清对Wilson病模型TX小鼠肝细胞内ATP7b蛋白亚细胞定位和功能表达的影响 被引量:2
6
作者 徐陈陈 董健 +2 位作者 程楠 韩咏竹 王训 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期250-253,共4页
目的:观察肝豆汤调控TX小鼠肝细胞内铜转运通路的分子靶点,研究其调控机制。方法:免疫荧光双标记经激光共聚焦显微镜观察由含肝豆汤兔血清孵育后TX小鼠肝细胞内ATP7b蛋白的亚细胞定位变化。结果:ATP7b蛋白在DL小鼠肝细胞内定位于反... 目的:观察肝豆汤调控TX小鼠肝细胞内铜转运通路的分子靶点,研究其调控机制。方法:免疫荧光双标记经激光共聚焦显微镜观察由含肝豆汤兔血清孵育后TX小鼠肝细胞内ATP7b蛋白的亚细胞定位变化。结果:ATP7b蛋白在DL小鼠肝细胞内定位于反面高尔基体管网状结构(TGN),位于高铜环境中则转运至顶端膜区,去除高铜环境则重新定位于TGN;ATP7b蛋白在TX小鼠肝细胞内不能定位于TGN及顶端膜区域,去除高铜环境也不能促使ATP7b蛋白重新定位于TGN。中药肝豆汤可促使ATP7b蛋白逐步重新定位于TGN。结论:肝豆汤可以通过诱导ATP7b蛋白重新定位于TGN,进而发挥细胞内排铜作用,改善Wilson病的临床症状。 展开更多
关键词 肝豆汤 TX小鼠 WILSON病 ATP7b蛋白 反面高尔基体管网状结构 免疫荧光双标记
CuSO4对HepG2细胞相关炎症指标的影响 预览
7
作者 张亮亮 董健 +5 位作者 徐陈陈 赵静 汪世靖 程楠 王训 韩咏竹 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第1期62-66,共5页
目的 观察CuSO4对肝细胞癌(HCC)细胞株HepG2细胞核因子-κB(NF-κB)等相关炎症指标的影响。方法 用含不同浓度CuSO4的RPMI-1640培养液孵育HepG2细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测其对细胞增殖的抑制作用;Westernblot法检测不同... 目的 观察CuSO4对肝细胞癌(HCC)细胞株HepG2细胞核因子-κB(NF-κB)等相关炎症指标的影响。方法 用含不同浓度CuSO4的RPMI-1640培养液孵育HepG2细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测其对细胞增殖的抑制作用;Westernblot法检测不同浓度的CuSO4对HepG2细胞炎症指标NF-κBp65、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-6(IL-6)和γ干扰素(IFN-γ)等表达水平的影响。结果 CuSO4在一定浓度范围内可抑制HepG2细胞的增殖;CuSO4呈一定浓度依赖性地下调HepG2细胞中NF-κB、IFN-γ和IL-5蛋白的表达,上调IL-1β、IL-4和IL-6蛋白的表达。结论 CuSO4能抑制HepG2细胞的增殖,并可通过下调NF-κBp65、IFN-γ和IL-5蛋白的表达并上调IL-1β、IL-4和IL-6蛋白的表达来抑制HepG2细胞的炎症反应。 展开更多
关键词 CUSO4 HEPG2细胞 肝细胞癌 炎症 核因子-ΚB
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肝豆汤改良方对Wilson's病模型TX乳鼠神经元内Cyt C/Caspase信号通路的分子调控机制 被引量:5
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作者 徐陈陈 董健 +2 位作者 程楠 韩咏竹 王训 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期143-148,共6页
目的:探讨肝豆汤改良方调控TX乳鼠神经元内细胞色素C(Cyt C)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)信号通路的分子靶点并观察其相应的调控机制。方法:本实验乳鼠神经元通过原代方法分离培养所得,分为正常组、模型组、肝豆汤改良方组... 目的:探讨肝豆汤改良方调控TX乳鼠神经元内细胞色素C(Cyt C)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)信号通路的分子靶点并观察其相应的调控机制。方法:本实验乳鼠神经元通过原代方法分离培养所得,分为正常组、模型组、肝豆汤改良方组、丁苯酞组,正常组为正常DL乳鼠神经元,用完全培养基培养,模型组为TX乳鼠神经元,用10%空白兔血清培养,肝豆汤改良方组为TX乳鼠神经元,加入含体积浓度(5%,10%,15%,20%)肝豆汤改良方兔血清的培养基继续培养,丁苯酞组为TX乳鼠神经元,用10%含丁苯酞兔血清培养。采用原子吸收分光光度法检测不同浓度含肝豆汤改良方兔血清作用24 h后,对TX乳鼠神经元内微量元素的影响;流式细胞仪检测经肝豆汤改良方兔血清作用后活性氧(ROS)释放量的变化;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测经含肝豆汤改良方兔血清作用后Cyt C,Caspase-9,Caspase-3蛋白的表达。结果:与模型组比较,含肝豆汤改良方兔血清可显著降低TX乳鼠神经元内铜、铁含量,增加锌含量(P〈0.01)。流式细胞仪检测发现,含肝豆汤改良方兔血清较模型组可显著降低TX乳鼠神经元内ROS的释放量(P〈0.01)。Western blot检测结果显示与模型组比较,含肝豆汤改良方兔血清可显著降低TX乳鼠神经元内Cyt C,Caspase-9,Caspase-3蛋白表达(P〈0.01)。结论:肝豆汤改良方可能是通过促进过量铜排出而抑制神经元内Cyt C,Caspase-9,Caspase-3表达,从而减轻高铜对神经元的损伤作用。肝豆汤改良方可通过减少脑内铜含量,进而调控Cyt C/Caspase信号通路达到减轻高铜诱导的神经元损伤的治疗效果。 展开更多
关键词 WILSON病 肝豆汤改良方 CYT C/Caspase信号通路 神经元
自噬在神经元轴突与树突变性中的作用 预览
9
作者 黄雅楠 董健 +1 位作者 程楠 韩咏竹 《中国实用神经疾病杂志》 2017年第7期87-89,共3页
自噬通过形成自噬小体,对细胞内一些错误折叠的蛋白质和受损的细胞器降解,以保持细胞内环境的动态稳定。神经细胞内蛋白质的异常堆积是大多数神经变性病最常见的病态产物。神经元树突和轴突是神经元胞体的延伸及形成突触的基础,对细胞... 自噬通过形成自噬小体,对细胞内一些错误折叠的蛋白质和受损的细胞器降解,以保持细胞内环境的动态稳定。神经细胞内蛋白质的异常堆积是大多数神经变性病最常见的病态产物。神经元树突和轴突是神经元胞体的延伸及形成突触的基础,对细胞的信号传导起关键作用。神经元轴突和树突变性常出现在神经变性病的早期,对内外环境的变化十分敏感,而自噬是清除神经变性病中异常蛋白质的关键途径,对保持内环境稳态有不可替代作用。因此,通过激活神经元自噬可以缓解神经元树突与轴突变性。本文将从自噬在轴突与树突中的合成与转运,自噬对轴突与树突变性的调控作用以及自噬与突触形成的相关性等方面阐述自噬在神经元轴突与树突变性中的作用。 展开更多
关键词 自噬 轴突 树突 神经变性病
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外翻肠囊法研究肝豆汤醇提物主要成分的肠吸收特征 被引量:2
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作者 刘艺 程梅梅 +1 位作者 董健 周安 《中国中药杂志》 CSCD 北大核心 2017年第13期2571-2576,共6页
为了探究复方肝豆汤醇提物中主要化学成分的肠吸收特性,该文采用大鼠外翻肠囊模型,选择肝豆汤醇提物中盐酸小檗碱、槲皮素、山柰素、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素6种主要成分作为考察对象,评价各成分在不同肠段的吸收特征。结果表明,肝... 为了探究复方肝豆汤醇提物中主要化学成分的肠吸收特性,该文采用大鼠外翻肠囊模型,选择肝豆汤醇提物中盐酸小檗碱、槲皮素、山柰素、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素6种主要成分作为考察对象,评价各成分在不同肠段的吸收特征。结果表明,肝豆汤醇提物中6种成分均可进入肠囊,在高、中、低3种不同质量浓度的肝豆汤醇提物中,盐酸小檗碱、槲皮素、山柰素3种成分在不同肠段的吸收均为线性吸收,符合零级吸收速率,且在空肠与回肠中吸收速率常数K_a随着剂量增加均增加(P〈0.05),符合被动吸收;而大黄酸在空肠和回肠中的K_a随着剂量增加并无显著性差异,符合主动转运。大黄酚和芦荟大黄素2种成分在肠段中吸收均较差。提示肠囊对肝豆汤醇提物中药物成分吸收具有选择性,各成分在肠囊中的吸收特征并不完全相同。 展开更多
关键词 肝豆汤醇提物 多组分 外翻肠囊法 吸收速率常数
α-硫辛酸联合青霉胺对TX乳鼠神经元P38MAPK通路的调控作用研究 预览
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作者 徐陈陈 董健 +2 位作者 程楠 王训 喻绪恩 《中国神经精神疾病杂志》 CSCD 北大核心 2017年第8期490-495,共6页
目的研究α-硫辛酸(alpha-lipoic acid,ALA)联合青霉胺(Penicillamine,PCA)对Wilson病(Wilson disease,WD)模型TX乳鼠神经元P38 MAPK通路的调控机制。方法本实验乳鼠神经元通过原代方法分离培养所得,分为正常对照组、模型组、ALA... 目的研究α-硫辛酸(alpha-lipoic acid,ALA)联合青霉胺(Penicillamine,PCA)对Wilson病(Wilson disease,WD)模型TX乳鼠神经元P38 MAPK通路的调控机制。方法本实验乳鼠神经元通过原代方法分离培养所得,分为正常对照组、模型组、ALA组、PCA组及联合组。采用流式细胞仪检测药物治疗前后活性氧释放量及JC-I荧光强度的变化;Western blot法检测经药物作用后P38丝裂原活化蛋白激酶、细胞色素C、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3蛋白的表达。结果经流式细胞仪检测结果可知ALA、PCA及联合用药均能减少神经元内ROS释放量且其MFI分别为59.29±1.22、53.19±1.34及52.46±1.23,增进JC-1的荧光强度(P〈0.01),且同ALA组和PCA组比,联合组ROS释放量明显降低,JC-1的荧光强度显著增强。Western blot检测发现与正常组相比,模型组乳鼠神经元内P38MAPK,Cyt C,Caspase 9,Caspase 3蛋白含量显著增加(P〈0.01);与模型组相比,LA组、PCA组及联合组乳鼠神经元内P38 MAPK,Cyt C,Caspase 9,Caspase 3蛋白表达水平明显下降;联合组P38 MAPK,Cyt C,Caspase 9,Caspase 3蛋白含量较LA组及PCA组减少。结论 ALA联合PCA可促进铜排出,降低高铜诱导的线粒体损伤,降低高铜神经毒性,延缓神经元凋亡,改善WD神经系统损伤症状。 展开更多
关键词 细胞凋亡 WILSON病 氧化应激 神经毒性
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铁死亡与神经变性疾病的研究进展 预览 被引量:3
12
作者 李海 董健 程楠 《中国实用神经疾病杂志》 2017年第20期113-116,共4页
铁是人体必需的一种金属微量元素,在体内参与DNA、RNA和蛋白质的生物合成,并作为多种关键酶或辅酶的重要因子,参与亚铁血红素和神经鞘磷脂的合成,对维持神经系统的正常结构和功能起重要作用。由于金属铁离子具有较强的氧化作用,各... 铁是人体必需的一种金属微量元素,在体内参与DNA、RNA和蛋白质的生物合成,并作为多种关键酶或辅酶的重要因子,参与亚铁血红素和神经鞘磷脂的合成,对维持神经系统的正常结构和功能起重要作用。由于金属铁离子具有较强的氧化作用,各种原因所致的脑内铁的蓄积可产生过量的过氧化物和氧自由基,引起脂质过氧化反应、DNA链断裂以及蛋白质功能紊乱,并最终导致神经元变性、死亡。 展开更多
关键词 铁死亡 阿尔茨海默病 帕金森病 亨廷顿病 FRIEDREICH共济失调
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肝豆汤改良方对TX小鼠脑组织ASM、Cer及p38 MAPK mRNA和蛋白表达的影响 被引量:1
13
作者 徐陈陈 董健 +4 位作者 陈雪燕 王训 程楠 韩咏竹 胡文彬 《中华中医药杂志》 CSCD 北大核心 2017年第11期5049-5055,共7页
目的:探讨肝豆汤改良方(MGDD)对TX小鼠脑组织酸性鞘磷脂水解酶(ASM)、神经酰胺(Cer)及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)m RNA和蛋白表达的影响。方法:将140只TX小鼠随机分成1、3、5月龄模型组,3、5月龄MGDD组及3、5月龄丁苯酞组... 目的:探讨肝豆汤改良方(MGDD)对TX小鼠脑组织酸性鞘磷脂水解酶(ASM)、神经酰胺(Cer)及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)m RNA和蛋白表达的影响。方法:将140只TX小鼠随机分成1、3、5月龄模型组,3、5月龄MGDD组及3、5月龄丁苯酞组,每组20只,同时选用相同月龄60只DL小鼠分别为1、3、5月龄正常对照组,每组20只,饲养环境及喂食食物相同,均从入组时开始给药,MGDD治疗组按24.5g·kg-1·d-1灌胃,丁苯酞组给以丁苯酞混悬液0.156g·kg-1·d-1灌胃,正常对照组及模型组灌胃100m L·kg-1·d-1 0.9%氯化钠溶液,1次/d,收集处理标本,采用RT-PCR、免疫组织化学法及Western blot技术检测脑组织内ASM、Cer及p38 MAPK m RNA及蛋白表达水平。结果:模型组小鼠脑组织ASM、Cer及p38 MAPK mRNA及蛋白表达程度伴随着月龄的增加,表达有增多趋势,MGDD治疗组较模型组可显著降低小鼠脑内ASM、Cer及p38 MAPK mRNA及蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),且随着疗程的延长,抑制更加显著。结论:MGDD可能通过下调小鼠脑组织神经酰胺信号通路中ASM、Cer、p38 MAPK mRNA及蛋白的表达水平,改善铜负荷引起的神经元损伤。 展开更多
关键词 WILSON病 TX小鼠 神经酰胺通路 酸性鞘磷脂水解酶 神经酰胺 p38丝裂原活化蛋白激酶 肝豆汤改良方
高铜对于肝细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响 预览 被引量:2
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作者 黄雅楠 李海 +2 位作者 董健 程楠 韩咏竹 《中国神经精神疾病杂志》 CSCD 北大核心 2017年第11期646-650,共5页
目的研究高铜对于Wnt/β-catenin信号通路及氧化应激的影响。方法不同剂量的CuSO4培养BRL-3A细胞;用MTT法检测不同剂量CuSO。作用不同时间点对BRL-3A细胞生长和增殖的影响;用流式细胞仪检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化... 目的研究高铜对于Wnt/β-catenin信号通路及氧化应激的影响。方法不同剂量的CuSO4培养BRL-3A细胞;用MTT法检测不同剂量CuSO。作用不同时间点对BRL-3A细胞生长和增殖的影响;用流式细胞仪检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化;用酶标仪检测丙二醛的含量和超氧化物歧化酶的活性;WesternBlot法检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达情况。结果①MTT实验结果显示CuSO4在一定时间和浓度下对BRL-3A细胞生长和增殖有明显抑制作用(P〈0.01);②流式细胞仪检测实验结果显示CuSO4可诱导BRL-3A细胞内产生大量的活性氧和显著降低线粒体膜电位(P〈0.01);③酶标仪检测实验结果显示CuSO4可诱导MDA含量上升和SOD活性降低(P〈0.05);④Western Blot法检测实验结果显示CuSO4可显著降低BRL-3A细胞内总蛋白β—catenin、β-Ser9-GSK-3β的表达(P〈0.01),增加细胞内总蛋白GSK-3β、DKKl、Dishevelled3的表达,以及降低细胞核内蛋白p-(S33+S37)-β—catenin、c—Myc的表达(P〈0.01)。结论高铜能诱导肝细胞内线粒体氧化应激并且引起Wnt/β-catenin信号通路失活,从而诱导肝细胞损伤的发生。 展开更多
关键词 WILSON病 WNT/Β-CATENIN信号通路 高铜 氧化应激 肝细胞损伤
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肝豆汤对Wilson病模型TX小鼠肝细胞内铜代谢通路的分子调控机制 被引量:7
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作者 董健 韩咏竹 程楠 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第24期128-133,共6页
目的:探讨肝豆汤调控毒牛奶(TX)小鼠肝细胞内铜转运通路的分子靶点并观察其相应的调控机制。方法:20只家兔适应性喂养3 d后,随机分为空白组(生理盐水)和肝豆汤组(4.5 g·kg-1·d~(-1)),每日2次ig,连续10 d,制得含药血... 目的:探讨肝豆汤调控毒牛奶(TX)小鼠肝细胞内铜转运通路的分子靶点并观察其相应的调控机制。方法:20只家兔适应性喂养3 d后,随机分为空白组(生理盐水)和肝豆汤组(4.5 g·kg-1·d~(-1)),每日2次ig,连续10 d,制得含药血清;采用2步灌注法分离提取DL,TX小鼠肝细胞,采用原子吸收法检测加含不同百分含量(5%,10%,15%,20%)含肝豆汤兔血清作用24 h后,对TX小鼠肝细胞内微量元素的影响,另设空白组;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测经含肝豆汤兔血清作用后腺嘌呤核苷三磷酸7b(adenosine triphosphate7b,ATP7b),抗氧化蛋白1(anti-oxidant1,ATOX1),铜转运体1(copper transporter1,CTR1),金属巯蛋白(metallothionein,MT),超氧化剂物歧化酶铜伴侣蛋白(copper chaperone of superoxide dismutase,CCS),细胞色素氧化酶17(cytochrome-coxidase17,COX17)蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组TX小鼠肝细胞内铜含量升高,锌含量降低,铁含量升高,ATP7b,ATOX1,CCS,COX17蛋白表达明显降低,CTR1,MT蛋白表达显著升高(P〈0.01);与模型组比较,含肝豆汤兔血清可显著降低TX小鼠肝细胞内铜含量,增加锌含量,降低铁含量(P〈0.05,P〈0.01);Western blot检测结果显示,含肝豆汤兔血清可明显增加ATP7b,ATOX1,CCS,COX17蛋白表达(P〈0.05,P〈0.01),降低CTR1,MT蛋白表达(P〈0.01)。结论:肝豆汤可能是通过调控细胞内铜代谢相关蛋白,上调ATP7b,ATOX1,CCS,COX17蛋白表达,抑制CTR1,MT表达,从而发挥细胞内排铜作用。肝豆汤可通过多靶点、多途径调控铜代谢通路达到降低肝细胞内铜含量的治疗效果。 展开更多
关键词 WILSON病 肝豆汤 TX小鼠 铜代谢通路
均匀设计法优选肝豆汤的效应中药配伍——以TX小鼠神经细胞内Bcl-2、Bax蛋白表达水平及血清和脑组织中铜含量为指标 预览 被引量:1
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作者 汪世靖 赵雯 +5 位作者 陈林 董健 程楠 韩永升 胡文彬 韩咏竹 《安徽中医药大学学报》 CAS 2015年第5期69-74,共6页
目的基于均匀设计法筛选中药复方肝豆汤保护TX小鼠神经细胞的效应中药。方法基于“6因子11水平表”均匀设计法,以神经细胞内Bcl-2、Bax蛋白表达水平及血清和脑组织中铜含量为指标,以TX小鼠为Wilson病动物模型,采用多元逐步回归分析... 目的基于均匀设计法筛选中药复方肝豆汤保护TX小鼠神经细胞的效应中药。方法基于“6因子11水平表”均匀设计法,以神经细胞内Bcl-2、Bax蛋白表达水平及血清和脑组织中铜含量为指标,以TX小鼠为Wilson病动物模型,采用多元逐步回归分析法优选肝豆汤中6种药物(大黄、姜黄、黄连、泽泻、金钱草、三七)的效应中药配伍。采用Western blot法以及等离子质谱法分别测定细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和血清、脑组织铜含量。结果与对照组比较,TX小鼠脑组织中Bcl-2表达水平显著降低(P〈0.05),Bax蛋白表达水平显著升高(P〈0.05),脑组织铜含量显著升高(P〈0.05),血清铜含量显著降低(P〈0.05)。多元逐步回归分析结果显示,姜黄和大黄分别进入血清铜含量及脑组织铜含量的回归方程,黄连和泽泻均进入脑组织Bcl-2和Bax表达水平的回归方程,姜黄和金钱草分别进入神经细胞Bcl-2/Bax的回归方程,三七均未进入上述指标的回归方程。结论肝豆汤中大黄、姜黄、黄连、泽泻、金钱草配伍组合,可通过多靶点保护TX小鼠神经细胞;三七在保护TX小鼠神经细胞过程中未发挥明显效应。 展开更多
关键词 均匀设计法 肝豆汤 效应中药 配伍
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诱导性多能干细胞在神经系统变性疾病中的研究与应用 预览
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作者 董健 程楠 韩咏竹 《医学综述》 2015年第12期2120-2122,共3页
神经系统变性疾病为一类缓慢起病、病程呈进行性发展、预后不良的疾病。近年来,神经变性疾病的发病率逐步上升。但是,临床上对于该类疾病还没有十分有效的治疗方法,其发机制也未完全清楚。随着体细胞重编程技术的进步,疾病特异性诱导性... 神经系统变性疾病为一类缓慢起病、病程呈进行性发展、预后不良的疾病。近年来,神经变性疾病的发病率逐步上升。但是,临床上对于该类疾病还没有十分有效的治疗方法,其发机制也未完全清楚。随着体细胞重编程技术的进步,疾病特异性诱导性多能干细胞被逐渐应用于神经变性疾病发病机制、药物筛选及临床治疗方法的研究。然而,体细胞重编程技术尚处于早期级阶段,诱导性多能干细胞存在潜在的致癌风险及产生效率较低等问题,未来研究人员将致力于建立安全、高效、符合临床标准的诱导性多能干细胞。 展开更多
关键词 神经变性疾病 诱导性多能干细胞 体细胞重编程 细胞模型
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柚皮素-铜络合物对Hep-G2细胞增殖与凋亡的影响 预览
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作者 董健 程楠 韩咏竹 《安徽中医药大学学报》 CAS 2014年第6期46-50,共5页
目的 观察柚皮素一铜络合物在体外对人肝癌Hep G2细胞增殖与凋亡的影响,探究其作用机制.方法 将不同浓度柚皮素一铜络合物作用于体外培养的Hep-G2细胞,采用甲基噻唑基四唑法检测细胞生长抑制率;荧光显微镜下观察柚皮素一铜络合物对DAPI... 目的 观察柚皮素一铜络合物在体外对人肝癌Hep G2细胞增殖与凋亡的影响,探究其作用机制.方法 将不同浓度柚皮素一铜络合物作用于体外培养的Hep-G2细胞,采用甲基噻唑基四唑法检测细胞生长抑制率;荧光显微镜下观察柚皮素一铜络合物对DAPI染色的Hep-G2细胞凋亡的影响;应用流式细胞仪检测凋亡率;Western blot法检测细胞中Bcl 2、Bax和Caspase-3蛋白表达的变化.结果 柚皮素一铜络合物可显著地抑制Hep G2细胞增殖,且在一定的范围内呈浓度依赖性.荧光显微镜下观察显示,柚皮素一铜络合物作用的Hep G2细胞出现显著的凋亡特征,呈剂量依赖性地增加细胞凋亡率.柚皮素一铜络合物可上调Hep-G2细胞中Bax、Caspase-3蛋白的表达,抑制Bcl-2蛋白的表达,且呈一定的剂量依赖性.结论 柚皮素一铜络合物可抑制Hep-G2细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与上调Bax、Caspase-3蛋白的表达,抑制Bcl-2蛋白的表达有关. 展开更多
关键词 柚皮素-铜络合物 Hep-G2细胞 细胞凋亡 CASPASE-3 BCL-2 BAX
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中国A股市场泡沫实证研究 预览
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作者 董健 王君丽 《金融经济》 2007年第16期,共2页
引言伴随着2007年国内证券市场A股平均市盈率接近40倍,一场关于中国股市泡沫的大讨论正在掀起。国内A股市场已经存在泡沫已经成为多数经济学家和业内人士的共识,但这一结论主要是依据市盈率这一标准作出的经验性判断,而缺乏更精确的实... 引言伴随着2007年国内证券市场A股平均市盈率接近40倍,一场关于中国股市泡沫的大讨论正在掀起。国内A股市场已经存在泡沫已经成为多数经济学家和业内人士的共识,但这一结论主要是依据市盈率这一标准作出的经验性判断,而缺乏更精确的实证分析。本文试图一方面通过以市盈率为主的泡沫度指标对中国大陆股市进行测算,另一方面引入理性泡沫概念,用计量方法对股市泡沫进行实证研究。一、文献综述目前,国内对股市泡沫的研究主要分为两类:第一类是泡沫度指标的测算。主要采用的指标有:P/E市盈率;股票市值增长率/名义GDP增长率;股票市场价格与真实价值的差额等。这些测度方法比较简便易行,但最大的问题是如何确定基本价值,而这没有一个公认的统一标准,对泡沫临界值的设定完全依赖个人的经验,影响测算的精度,在预测上也有可能产生误导。而且,此类研究只能估计某一年的泡沫情况,无法细分时间段,因此无法反映泡沫的连续性变化。第二类则是引入理论泡沫概念,用计量方法进行实证。如用自相关、偏度和峰度来判断是否存在泡沫。其根据是若股价存在泡沫,则收益或超额收益序列存在厚尾和自相关等特征。国内不少学者也对我国股市泡沫进行了分析和检验,但多数都是定性判断,定量分析的不... 展开更多
关键词 市场泡沫 市盈率 股市泡沫 深证成份指数 上证综指 中国证监会 股票市场 股价指数 上证综合指数 证券市场
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在作文教学中渗透人格教育 预览
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作者 董健 《学语文》 2004年第3期54-54,共1页
作文是心灵的写照,是认识的再现,是感情的流露。有什么样的认识和感情,就有什么样的文章。正如叶圣陶先生所说:“文是心有所思、情有所感而后有所撰作。”文如其人,作文与做人相一致。作文与育人相统一,在作文的过程中育人,在育... 作文是心灵的写照,是认识的再现,是感情的流露。有什么样的认识和感情,就有什么样的文章。正如叶圣陶先生所说:“文是心有所思、情有所感而后有所撰作。”文如其人,作文与做人相一致。作文与育人相统一,在作文的过程中育人,在育人的过程中作文,这便是作文与育人的辨证法。 展开更多
关键词 作文教学 人格教育 中学 语文教学 教学质量
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