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西瓜噬酸菌鞭毛基因flgM的功能分析
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作者 杨丙烨 方平 蔡学清 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期504-515,共12页
西瓜(Citrullus lanatus)细菌性果斑病(bacterial fruit blotch, BFB)是世界范围内的检疫性病害,该病害的病原菌为西瓜噬酸菌(Acidovorax citrulli, Ac),自发现以来给西瓜种植业造成严重的经济损失,为了有效控制其危害,需要弄清该病菌... 西瓜(Citrullus lanatus)细菌性果斑病(bacterial fruit blotch, BFB)是世界范围内的检疫性病害,该病害的病原菌为西瓜噬酸菌(Acidovorax citrulli, Ac),自发现以来给西瓜种植业造成严重的经济损失,为了有效控制其危害,需要弄清该病菌的致病机制。细菌的鞭毛是细菌的运动器官之一,在细菌的侵染过程中也起着重要的作用。在多种不同细菌中已经证实,反σ因子flgM是调控鞭毛基因转录的必要因子,但是其在西瓜噬酸菌中的功能仍然未知,本研究旨在探讨该基因在鞭毛形成和致病性等生物学特性中的作用。根据同源重组的原理,借助自杀质粒p K8mobsacB,构建flgM基因缺失突变菌株,并对其鞭毛的形态特征、致病性、致敏性、游动性、群体感应、菌膜形成、生长速率及细菌颤泳性等生物学特性进行测定;以谷胱酰胺合成酶基因(glutathiamide synthetase gene, glnA)为参照基因,采用qRT-PCR方法,比较野生菌株、敲除菌株和互补菌株部分鞭毛蛋白基因flhD、fliE、fliC、flgK、flgA、fliS、fliD和fliA的表达量差异。结果表明,通过庆大霉素(gentamicin, Gm)抗性基因Gm筛选和PCR验证,成功地构建了西瓜噬酸菌鞭毛蛋白基因flgM的缺失突变菌株FJAc01-flgM及其互补菌株FJAc01-flgMhb,并对所得菌株的生物学特性进行观察,结果显示,与野生菌株相比,基因flgM缺失后不形成鞭毛、菌株的游动能力和菌膜形成能力均减弱、生长速率显著加快、对西瓜果实和西瓜苗的致病力明显减弱;基因互补后恢复了鞭毛的形成能力、游动性和菌膜形成能力、菌株的生长能力和对西瓜果实和西瓜苗的致病力也基本得到恢复,如针刺接种西瓜果实和喷雾接种西瓜苗后5 d,野生菌株处理的病情指数分别为74.67和26.39,基因缺失突变体处理的病情指数分别为46.00和2.78,而互补菌株处理的病情指数分别为63.85和20.83;光学显微镜下,可观察到在肉汁胨培养� 展开更多
关键词 西瓜噬酸菌 鞭毛 flgM基因 游动性 致病性
小学科学教学中自制简易磁力计的研究与应用 预览
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作者 方平 《小学科学:教师》 2018年第1期17-18,共2页
在教科版小学科学三年级下册教材中,有一个关于磁铁的单元,其中第3课讲的是“磁铁的两极”,这节课的教学目标之一是要让学生知道磁铁上磁力最强的部分叫磁极。为此,教材安排了“研究磁铁什么地方磁力大”的实验活动,通过在条形磁铁上取... 在教科版小学科学三年级下册教材中,有一个关于磁铁的单元,其中第3课讲的是“磁铁的两极”,这节课的教学目标之一是要让学生知道磁铁上磁力最强的部分叫磁极。为此,教材安排了“研究磁铁什么地方磁力大”的实验活动,通过在条形磁铁上取五个不同部位分别悬挂回形针,记录每个部位所能吸住回形针的最多个数,从而比较出磁铁上什么部位磁力最强,进而认识磁极这一概念。 展开更多
关键词 小学科学 条形磁铁 磁力计 实验活动 偏转角 制作活动 实验手段 探究欲望 平均耗时 实验方法
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繁殖青枯菌噬菌体无毒菌株的筛选及应用 预览
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作者 林志坚 夏志辉 +3 位作者 顾钢 周挺 方平 蔡学清 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期906-913,共8页
利用噬菌体防治植物细菌性病害,关键技术是噬菌体的扩大繁殖,利用宿主菌繁殖,应用时存在一定的风险。本研究通过继代培养筛选致病性丧失的青枯菌菌株作为青枯菌噬菌体扩繁的宿主,结果表明,通过对野生青枯菌株RSsw326连续超过20代的培养... 利用噬菌体防治植物细菌性病害,关键技术是噬菌体的扩大繁殖,利用宿主菌繁殖,应用时存在一定的风险。本研究通过继代培养筛选致病性丧失的青枯菌菌株作为青枯菌噬菌体扩繁的宿主,结果表明,通过对野生青枯菌株RSsw326连续超过20代的培养,获得了一株菌落圆形、游动性弱的变异菌株;再通过刺叶、注射和伤根等方法接种烟苗,30d后无萎蔫症状出现,将该菌株命名为RSsw326—2;测试表明,该菌株对青枯病菌没有拮抗作用,可被从福建不同烟区分离纯化的8株噬菌体裂解。利用菌株RSsw326—2作为宿主,进行青枯菌噬菌体的扩大繁殖,培养36h,效价可达10^10PFU/mL。将无毒菌株RSsw326—2+噬菌体的共培养液刺叶、伤根和不伤根接种烟苗,35d后均无症状出现,而将毒性菌株RSsw326+噬菌体的共培养液刺叶接种后14d、伤根接种后28d发病率都为100%,不伤根接种烟苗35d,发病率为66.7%。无毒菌株RSsw326—2+噬菌体的共培养液对盆栽烟苗防病试验结果表明,发病时间推迟8d,并且在接种后21d时对烟草青枯病的防效达74.1%,显著高于对照组。本研究采用继代培养筛选获得的无毒菌株作为噬菌体扩大繁殖的宿主,为今后研制噬菌体制剂的生产提供了参考。 展开更多
关键词 无毒青枯菌 噬菌体 致病性 生物防治
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西瓜细菌性果斑病菌鞭毛基因fliS的功能分析 预览 被引量:2
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作者 杨丙烨 付丹 +1 位作者 方平 蔡学清 《中国农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第15期2946-2956,共11页
【目的】西瓜细菌性果斑病由西瓜噬酸菌(Acidovorax citrulli,Ac)引起,是一种严重的世界性病害。细菌的鞭毛通常被认为是细菌的运动器官,在细菌的侵染过程中也起重要作用,已有报道表明这种作用可受鞭毛蛋白基因fliS的调控,目前西瓜细... 【目的】西瓜细菌性果斑病由西瓜噬酸菌(Acidovorax citrulli,Ac)引起,是一种严重的世界性病害。细菌的鞭毛通常被认为是细菌的运动器官,在细菌的侵染过程中也起重要作用,已有报道表明这种作用可受鞭毛蛋白基因fliS的调控,目前西瓜细菌性果斑病菌鞭毛蛋白基因fliS的功能及其调控机理尚不清楚,本研究旨在探讨该基因在鞭毛形成和致病性等生物学特性中的作用。【方法】以果斑病菌野生型致病菌株1号基因组DNA为模板,设计一系列引物,PCR扩增敲除基因fliS的上下游片段,通过回收、酶切、连接、转化等步骤构建敲除载体和互补载体,然后采用三亲杂交法,根据同源重组的原理,构建fliS基因缺失突变菌株及其互补菌株,并对其鞭毛的形态特征、致病性、过敏反应、游动性、群体感应、菌膜、生长速率、菌落形态等生物学特性进行测定;进一步提取细菌总RNA,以谷氨酰胺合成酶基因glnA为参照来校正目标基因的表达量,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法,比较野生菌株、敲除菌株和互补菌株部分鞭毛蛋白基因flh D、fliE、fliC、flgK、flgM、fliD和fliA的表达量差异。【结果】通过抗性基因Gm的筛选和PCR验证,成功构建了果斑病菌鞭毛蛋白基因fliS缺失突变菌株1-fliS及其互补菌株1-fliShb,并对所得菌株的生物学特性和鞭毛进行观察,结果表明,与野生菌株相比,鞭毛蛋白基因缺失突变菌株的游动性、菌膜形成能力减弱,互补后游动性、菌膜形成能力基本恢复;缺失突变菌株对甜瓜、西瓜幼苗以及西瓜果实的致病性降低,互补后对西瓜、甜瓜幼苗及西瓜果实的致病力完全恢复。电镜测试显示,突变菌株鞭毛变短,长度约为野生菌株的1/3—1/4,互补后鞭毛合成能力基本恢复,鞭毛长度约为野生菌的4/5;光学显微镜下,可观察到在NA平板上的野生菌株菌落周围有明显的由细菌颤泳形成的 展开更多
关键词 西瓜果斑病菌(西瓜噬酸菌) 细菌性果斑病 fliS 生物学特性
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“星星每天都在围绕北极星顺时针旋转”吗? 预览
5
作者 方平 《小学科学:教师》 2017年第11期29-30,共2页
本文针对教科版小学科学五年级下册《北极星“不动”的秘密》一课,对星星旋转的方向进行了分析,阐述了观测星星旋转方向的原理和正确方法,指出了教材中所说的“星星每天都在围绕北极星顺时针旋转”这一科学错误。在教科版小学科学五... 本文针对教科版小学科学五年级下册《北极星“不动”的秘密》一课,对星星旋转的方向进行了分析,阐述了观测星星旋转方向的原理和正确方法,指出了教材中所说的“星星每天都在围绕北极星顺时针旋转”这一科学错误。在教科版小学科学五年级下册《北极星“不动”的秘密》(第82页)一课中,有关于星星旋转方向的描述,如图: 展开更多
关键词 旋转方向 北极星 星星 时针 小学科学 五年级 教科版 秘密
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西瓜细菌性果斑病菌基因Aave-3192和Aave-2108的功能研究 预览
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作者 周迎辉 方平 蔡学清 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2016年第7期1325-1331,共7页
从本实验室构建的西瓜细菌性果斑病菌菌株A13的Mini-Tn5转座子突变体库中筛选出2株致病性丧失的突变菌株166和167,亚克隆及测序结果表明,突变株166和167的Tn5插入位点基因编号分别为Aave-3192和Aave-2108。为了进一步明确这2个基因的功... 从本实验室构建的西瓜细菌性果斑病菌菌株A13的Mini-Tn5转座子突变体库中筛选出2株致病性丧失的突变菌株166和167,亚克隆及测序结果表明,突变株166和167的Tn5插入位点基因编号分别为Aave-3192和Aave-2108。为了进一步明确这2个基因的功能,分别对这2个基因进行互补。生物学试验结果表明,互补菌株恢复对西瓜果实的致病性,且在游动性、群体感应、胞外多糖、生物膜等性状上部分恢复至野生菌株A13的水平,表明这2个基因与该病菌在西瓜上的致病性相关。 展开更多
关键词 西瓜细菌性果斑病菌 基因突变 基因互补 生物学测定
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内生芽孢杆菌BS2的β-1,4-内切葡聚糖酶基因与定殖相关性 预览 被引量:3
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作者 范晓静 杨瑞先 +1 位作者 邱思鑫 方平 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期262-272,共11页
【目的】克隆植物内生解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)BS2的β-1,4-内切葡聚糖酶基因(β-1,4-endoglucanasegene,eglS),探明BS2中该基因与定殖的相关性。【方法】以枯草芽孢杆菌BSl68基因组为模板扩增组成型启动子r... 【目的】克隆植物内生解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)BS2的β-1,4-内切葡聚糖酶基因(β-1,4-endoglucanasegene,eglS),探明BS2中该基因与定殖的相关性。【方法】以枯草芽孢杆菌BSl68基因组为模板扩增组成型启动子rpsD.依据芽孢杆菌β-1,4-内切葡聚糖酶基因的同源序列设计1对引物,以BS2基因组为模板扩增egl&将rpsD启动子基因和eglS片段用T4连接酶连接,并对连接产物进行PCR扩增,得到eglS表达盒片段。将表达盒片段插入穿梭载体pGFP4412用以构建eglS过表达质粒。设计BI物扩增eglS的同源重组片段,与具有单交换功能的整合载体pMUTIN—GFP’连接构建敲除质粒。eglS的过表达质粒和敲除质粒转化芽孢杆菌感受态细胞分别获得过表达突变体和敲除突变体。将过表达质粒转化敲除突变体感受态细胞获得互补突变体。采用荧光显微镜观察、PCR、平板酶活力检测及实时荧光定量PCR方法鉴定突变体。3,5-二硝基水杨酸比色法(DNS法)测定突变体和野生菌的β-1,4-内切葡聚糖酶活力,同时采用定量灌根接种法检测不同菌株30d内在小白菜各组织中的定殖数量。【结果】获得在荧光显微镜下呈现绿色荧光的过表达突变体和互补突变体。PCR检测结果表明敲除突变体中能够扩增出675bp的目的条带,而以野生菌株和整合载体DNA为模板扩增时没有对应条带,成功得到敲除突变体。野生菌及各突变体β-1,4-内切葡聚糖酶平板活力检测结果显示,野生菌BS2只有一个水解圈且透明,过表达突变体与互补突变体有大于野生菌的双水解圈,内圈的水解圈透明,外圈的水解圈不透明。敲除突变体沿菌体边也有一个小水解圈。实时荧光定量PCR的分析结果证实野生菌及突变体间β-1,4-内切葡聚糖酶基因的表达量存在差异,过表达突变体和互补突变体中伊1,4-内切葡聚糖酶基因� 展开更多
关键词 内生芽孢杆菌BS2 Β-1 4-内切葡聚糖酶 过表达 基因敲除 定殖
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基于锁式探针的番茄溃疡病菌实时荧光PCR快速检测 预览 被引量:7
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作者 王念武 王婷 +1 位作者 沈建国 方平 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期903-911,共9页
【目的】从口岸进境番茄种子中检测番茄溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis,CMM),一直以来都受检测周期的限制,快速、特异地从种子中检测该病原细菌需要新的方法。研究在锁式探针扩增方式上,选择连接酶依赖... 【目的】从口岸进境番茄种子中检测番茄溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis,CMM),一直以来都受检测周期的限制,快速、特异地从种子中检测该病原细菌需要新的方法。研究在锁式探针扩增方式上,选择连接酶依赖的PCR扩增方式,并结合实时荧光PCR技术,旨在建立番茄溃疡病菌基于锁式探针技术的实时荧光PCR快速检测方法,为口岸番茄种子快速检疫提供技术支持。【方法】根据番茄溃疡病菌的一段特异基因Pat-1序列,设计锁式探针的T1和T2臂,使之与CMM的特异性片段碱基序列互补,再按照锁式探针的设计原则设计锁式探针和扩增引物以及荧光探针。试验时,先将锁式探针与CMM以及参照菌株的DNA模板在DNA连接酶作用下分别进行环化连接,再用核酸外切酶Ⅰ和核酸外切酶Ⅲ消化未环化的线性锁式探针,最后以环化的锁式探针为模板,在扩增引物的作用下进行实时荧光PCR试验。建立CMM基于锁式探针技术的实时荧光PCR检测方法,分别比较该方法的特异性和灵敏度与常规PCR方法的差异,并用该方法对收集的来自日本、韩国和中国台湾的番茄种子以及国内采集的共45份样品进行检测。【结果】基于锁式探针技术的实时荧光PCR检测方法能够从供试的菌株中特异性地检出CMM,在供试的10种菌株中,只有靶标细菌能被特异性地检测到阳性,空白对照和其他参试菌株均没有荧光信号的增加,检测为阴性。比较该检测方法与常规PCR方法,其特异性和常规PCR方法一致。该检测方法检测灵敏度高,DNA最低浓度检测为50 fg·μL-1,而常规PCR方法检测DNA最低浓度为5 pg·μL-1,灵敏度高于常规PCR两个数量级。对收集的样品进行检测,结果显示,45份样品中共有5份样品CMM检测结果为阳性,分别是日本的番茄种子样品2份(编号Jap1214、Jap1102),永泰采集的� 展开更多
关键词 番茄细菌性溃疡病菌 锁式探针 实时荧光PCR 超分支滚环扩增 快速检测 番茄种子
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柑橘溃疡病生防细菌的分离鉴定 预览 被引量:3
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作者 陈娇梅 蔡学清 +1 位作者 邱思鑫 方平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2014年第7期1398-1403,共6页
为了从柑橘上获得能防治柑橘溃疡病的生防细菌,从福州3个地区的柑橘园采集不同柑橘品种的叶片、春稍和花,用稀释分离法分离得到84株细菌菌株,用平板抑菌圈法筛选获得11株对柑橘溃疡病菌具有拮抗作用的菌株;用离体叶片防效筛选获得39株... 为了从柑橘上获得能防治柑橘溃疡病的生防细菌,从福州3个地区的柑橘园采集不同柑橘品种的叶片、春稍和花,用稀释分离法分离得到84株细菌菌株,用平板抑菌圈法筛选获得11株对柑橘溃疡病菌具有拮抗作用的菌株;用离体叶片防效筛选获得39株对柑橘溃疡病具有50%以上防效的菌株,占菌株总数的46.4%.对3株防效显著的拮抗菌株YH1、YS5和NY20进一步进行防效测定,结果表明:菌株培养液的防治效果最好,菌体次之,代谢产物最差;对这3株细菌的β-1,4-葡聚糖酶、蛋白酶和β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酶活性进行测定,结果表明酶活性的强弱与防病效果有一定的相关性.经过16S rDNA序列分析,革兰氏染色、鞭毛染色、芽孢染色和生理生化测定,确定这3个菌株均属于芽孢杆菌属,其中菌株YH1鉴定为短小芽孢杆菌Bacillus pumilus. 展开更多
关键词 柑橘溃疡病 拮抗菌 芽孢杆菌 生物防治
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番茄细菌性叶斑病菌超分支滚环扩增快速检测技术 预览 被引量:2
10
作者 王念武 王婷 +1 位作者 沈建国 方平 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期90-94,122共6页
根据番茄细菌性叶斑病菌(Pseudomonas syringae pv.tomato,Pst)的一段特异蛋白基因序列,按照锁式探针的设计原理设计探针和扩增引物,优化系列反应条件,建立了特异性的Pst超分支滚环扩增技术.试验结果表明:该检测技术能够从供试的10... 根据番茄细菌性叶斑病菌(Pseudomonas syringae pv.tomato,Pst)的一段特异蛋白基因序列,按照锁式探针的设计原理设计探针和扩增引物,优化系列反应条件,建立了特异性的Pst超分支滚环扩增技术.试验结果表明:该检测技术能够从供试的10种不同的病原菌中特异性地检测出番茄细菌性叶斑病菌,DNA检测的最低浓度为500 fg/μL,检测灵敏度高于常规PCR. 展开更多
关键词 番茄细菌性叶斑病菌 超分支滚环扩增 锁式探针
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冷藏车内部流场的数值研究 预览
11
作者 方平 赵文春 《山东工业技术》 2014年第4期179-179,146共2页
我们能够吃到新鲜的蔬菜、瓜果、肉类、海产品等食物,大多依赖于冷藏车的冷藏特性,才能使得新鲜的蔬果避免腐坏,冷藏车已成为我们的生产和生活中必不可少的一部分,冷藏车内部流场,直接决定冷藏车的冷藏质量,对于冷藏车内部流场的... 我们能够吃到新鲜的蔬菜、瓜果、肉类、海产品等食物,大多依赖于冷藏车的冷藏特性,才能使得新鲜的蔬果避免腐坏,冷藏车已成为我们的生产和生活中必不可少的一部分,冷藏车内部流场,直接决定冷藏车的冷藏质量,对于冷藏车内部流场的数值研究已成为国内外研究的重要课题。本文主要通过数值模拟的方式对冷藏车内部流场进行研究。 展开更多
关键词 冷藏车 内部流场 物理模型 数学模型 数值研究
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萝卜软腐病生防菌株Hy11的筛选、鉴定及定殖特性
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作者 杨瑞先 宋美仙 +1 位作者 邱思鑫 方平 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期109-114,共6页
为探讨银杏内生细菌对萝卜软腐病的防病作用,通过块根接种和温室盆栽试验筛选对萝卜软腐菌Pectobacterium carotovorum subsp.carotovorum具有高效抑制作用的生防菌株,共获得8株拮抗作用较强的内生细菌,其中菌株Hy11抑菌作用明显。对生... 为探讨银杏内生细菌对萝卜软腐病的防病作用,通过块根接种和温室盆栽试验筛选对萝卜软腐菌Pectobacterium carotovorum subsp.carotovorum具有高效抑制作用的生防菌株,共获得8株拮抗作用较强的内生细菌,其中菌株Hy11抑菌作用明显。对生防菌株Hy11进行了形态观察、生理生化特性测定、16S rDNA和gyrB基因序列分析,并应用绿色荧光蛋白基因标记菌株Hy11,研究该菌株在萝卜体内的定殖动态。结果显示,该菌株对萝卜软腐病具有较好的防效,对萝卜块根和幼苗的防治效果分别为77.9%和66.7%;对萝卜幼苗的促生率达113.28%。经鉴定,菌株Hy11为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens。标记菌株Hy11-gfp在喷雾接种银杏叶片后0~3 d种群数量呈急剧下降趋势,10 d后保持相对稳定;其在萝卜的根、茎和叶中均能够定殖,在根中的定殖数量最高可达1.2×104CFU/g。 展开更多
关键词 萝卜软腐病 内生细菌 生物防治 鉴定 定殖
利用cDNA-AFLP分析内生解淀粉芽胞杆菌Fy11诱导辣椒差异表达基因 预览 被引量:2
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作者 杨瑞先 范晓静 +2 位作者 邱思鑫 蔡学清 方平 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期2449-2458,共10页
【目的】分析内生解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)Fy11诱导辣椒(Capsicum annuum)幼苗差异表达基因,了解辣椒与内生芽胞杆菌互作的分子机制。【方法】利用cDNA-AFLP技术,采用256对引物,分析辣椒幼苗接种内生解淀粉芽胞... 【目的】分析内生解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)Fy11诱导辣椒(Capsicum annuum)幼苗差异表达基因,了解辣椒与内生芽胞杆菌互作的分子机制。【方法】利用cDNA-AFLP技术,采用256对引物,分析辣椒幼苗接种内生解淀粉芽胞杆菌Fy11后5个时间点的基因表达谱;利用qRT-PCR分析差异基因表达模式,验证cDNA-AFLP表达谱。【结果】256对引物共产生18 620个转录本(TDF),筛选获得353条差异表达条带,占扩增条带总数的1.89%。经克隆、测序分析,最终获得257个差异TDF,聚类分析得到229个独立基因(EST,unigenes),其中144个基因上调表达,85个基因下调表达。经Blastx比对和功能分类分析,其中65条EST(28.38%)未找到同源性匹配,8条(3.49%)与未知功能蛋白同源性较高。其余156条EST主要涉及基础代谢基因(10.92%);与能量和抗病与防御类相关基因,各占8.73%;信号转导基因占7.42%;转运子或转座子基因占6.99%;与细胞结构相关基因占6.55%;参与转录调控基因占5.68%;细胞生长类基因占3.93%;参与蛋白质运输和储存有8个基因,占3.49%;蛋白质合成类基因占2.18%;次生代谢类和胞间运输类基因,其数量相对较少,各占1.75%。选取与抗病防御、转录调控及信号转导类等相关的10个差异基因,qRT-PCR分析结果显示其表达模式符合cDNA-AFLP表达谱。【结论】内生细菌与植物互作的分子机制涉及植物多方面生理生化反应,包括抗病防御、转录调控、蛋白质代谢、信号转导、以及非生物胁迫等多种途径相关基因的协同控制。 展开更多
关键词 辣椒 内生解淀粉芽胞杆菌 互作 基因表达 CDNA-AFLP QRT-PCR
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果胶酶基因在内生芽孢杆菌中的过表达及其对定殖的影响 被引量:2
14
作者 范晓静 杨瑞先 +1 位作者 邱思鑫 方平 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期805-810,共6页
为探讨果胶酶基因与内生芽孢杆菌在植物体内定殖的相关性,PCR克隆了2株内生芽孢杆菌的果胶酶全长基因,并将全基因序列插入穿梭载体pGFP4412,构建了果胶酶基因过表达载体,转化内生细菌实现了果胶酶过表达. 平板果胶酶酶活检测表明野... 为探讨果胶酶基因与内生芽孢杆菌在植物体内定殖的相关性,PCR克隆了2株内生芽孢杆菌的果胶酶全长基因,并将全基因序列插入穿梭载体pGFP4412,构建了果胶酶基因过表达载体,转化内生细菌实现了果胶酶过表达. 平板果胶酶酶活检测表明野生菌的水解圈直径仅为过表达突变体水解圈直径的50%. 通过实时荧光定量 PCR分析突变体和对照菌株(BS2-gfp和TB2-gfp)中果胶酶基因的表达情况,发现突变体的表达量分别是对照菌株表达量的82和85倍. 统计了突变体与对照菌株28 d内在小白菜各组织中的定殖数量,结果表明:接种后1-3 d,突变体在根茎叶中的定殖数量与对照菌株比较,差异性显著(P<0.05). 接种后7-28 d,除第7天(d 7)过表达菌株与对照菌株在根中的定殖菌量有显著性差异(P<0.05)外,其余统计结果均无显著性差异(P>0.05). 在为期28 d的分离过程中,突变体的定殖数量经历了一个由显著高于对照菌株,到略高或逐渐与对照菌株的菌量趋于一致的过程. 本研究初步证明了果胶酶基因在内生芽孢杆菌的定殖初期起到了一定的作用. 图7 表2 参23 展开更多
关键词 内生芽孢杆菌 果胶酶基因 实时荧光定量PCR 过表达 定殖
两株银杏内生拮抗细菌菌株的鉴定及生防功能基因研究 预览 被引量:2
15
作者 杨瑞先 范晓静 +2 位作者 蔡学清 陶玉凤 方平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2013年第3期466-472,共7页
从表面消毒的银杏叶片中获得两株具有广谱拮抗活性的内生细菌菌株Zy25和Hy7;应用绿色荧光蛋白GFP基因标记该拮抗菌株.培养的菌液摩擦接种银杏叶片.分离结果表明两个菌株可在银杏叶片内稳定定殖:通过形态观察、生理生化指标测定及16S... 从表面消毒的银杏叶片中获得两株具有广谱拮抗活性的内生细菌菌株Zy25和Hy7;应用绿色荧光蛋白GFP基因标记该拮抗菌株.培养的菌液摩擦接种银杏叶片.分离结果表明两个菌株可在银杏叶片内稳定定殖:通过形态观察、生理生化指标测定及16SrDNA和DNAgyraseBsubunit(gyrB)基因序列同源性分析.鉴定两个菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens):利用特异引物对菌株的生防功能基因进行扩增,结果表明:bmyB、fenD、ituC、s(Aa、s(AB、bioA、yngC和yndJ基因簇的片段在两个菌株中均存在,表明生防菌株Zv25和Hv7可能具有合成脂肽类物质的能力。 展开更多
关键词 内生细菌 拮抗活性 鉴定 生防功能基因
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银杏内生细菌的分离鉴定及抑菌活性初探 被引量:9
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作者 范晓静 黄未 +1 位作者 邱思鑫 方平 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1638-1648,共11页
【目的】从银杏(Ginkgo biloba)茎叶中分离鉴定内生细菌, 测定其体外抑菌活性及对辣椒果疫病的防治效果。【方法】采用平板对峙法筛选出对辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)有拮抗作用的内生细菌, 并用平板对扣法测定其中一株防治... 【目的】从银杏(Ginkgo biloba)茎叶中分离鉴定内生细菌, 测定其体外抑菌活性及对辣椒果疫病的防治效果。【方法】采用平板对峙法筛选出对辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)有拮抗作用的内生细菌, 并用平板对扣法测定其中一株防治效果较好的内生细菌产生的挥发性物质对辣椒疫霉菌生长的影响。通过生防菌液和病原菌孢子悬浮液喷雾接种辣椒果测定该菌株对辣椒果疫病的防治效果。基于形态特征、生理生化特性、16S rDNA和gyrA基因序列同源性分析鉴定该生防菌株。【结果】从银杏的茎和叶中分离获得9株内生细菌。平板对峙生长试验结果表明, 菌株W5对供试的辣椒疫霉菌、稻瘟病菌(Pyricularia grisea)、水稻纹枯菌(Rhizoctonia solani)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、荔枝霜疫霉菌(Peronophythora litchi)、荔枝酸腐菌(Geotrichum candidum)均有抑制作用, 其中对辣椒疫霉菌、稻瘟病菌和荔枝霜疫霉菌的抑菌效果显著, 抑菌率分别为88.9%、86.3%和90.2%。其产生的挥发性物质能明显抑制辣椒疫霉菌菌丝的生长。对辣椒采后果疫病的防治效果表明, 先喷雾接种W5菌悬液24 h后再接种辣椒疫霉病菌孢子悬浮液的防治效果最好, 可将辣椒果的保鲜期延长2?3 d。该菌株被鉴定为解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。【结论】获得了一株对植物病原菌物有良好防治效果的银杏内生解淀粉芽胞杆菌W5, 对辣椒采后果疫病及其他病原真菌的防治具有潜在应用价值。 展开更多
关键词 银杏 内生细菌 抑菌活性 挥发性物质 鉴定
基于Ansys的赛车车架模态及碰撞分析 预览 被引量:1
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作者 龚建全 文阳 +2 位作者 方平 黄唯真 康强 《中国机械》 2013年第11期215-216,共2页
赛车车架是赛车的关键部位,其结构性能对整车性能的发挥有着重要影响。因此车架结构必须有足够抗震动性和抗碰撞性以保证其装配和使用要求。首先运用Solidworks软件建立CAD模型,再用Ansys软件进行模态和碰撞分析,为整车优化设计及进... 赛车车架是赛车的关键部位,其结构性能对整车性能的发挥有着重要影响。因此车架结构必须有足够抗震动性和抗碰撞性以保证其装配和使用要求。首先运用Solidworks软件建立CAD模型,再用Ansys软件进行模态和碰撞分析,为整车优化设计及进一步的研究与实验提供参考依据。 展开更多
关键词 ANSYS 赛车车架 模态分析 碰撞分析
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番茄细菌性斑点病生防菌的鉴定、防病及定殖力 预览 被引量:3
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作者 范晓静 杨春泉 +1 位作者 邱思鑫 方平 《福建农林大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2013年第4期337-341,共5页
从4种茄科植株中分离得到28株对番茄细菌性斑点病菌有拮抗作用的内生细菌.其中,从番茄中分离的Fq7菌株抑菌效果最好,抑菌圈半径为8mm;室内盆栽条件下,处理7d后对番茄细菌性斑点病的防治效果达62.71%.通过形态特征观察、生理生... 从4种茄科植株中分离得到28株对番茄细菌性斑点病菌有拮抗作用的内生细菌.其中,从番茄中分离的Fq7菌株抑菌效果最好,抑菌圈半径为8mm;室内盆栽条件下,处理7d后对番茄细菌性斑点病的防治效果达62.71%.通过形态特征观察、生理生化特性测定和16SrDNA序列分析,Fq7菌株被鉴定为解淀粉芽孢杆菌.Fq7菌株在番茄体内的定殖结果表明t采用涂抹叶片和浇灌土壤的方法接种于番茄,均可在番茄根、茎、叶中分离回收到细菌菌株,表明Fq7菌株可以在植株体内繁殖和传导,具有沿维管束转运的能力. 展开更多
关键词 番茄 内生细菌 分离鉴定 番茄细菌性斑点病 拮抗作用 定殖
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超分支滚环扩增技术快速检测番茄溃疡病菌 被引量:4
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作者 王念武 王婷 +1 位作者 沈建国 方平 《植物检疫》 北大核心 2013年第5期66-70,共5页
根据番茄溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis,cmm)的一段特异致病基因pat-1序列,按照锁式探针的设计原理设计探针和扩增引物,优化系列反应条件,建立了特异性的cmm超分支滚环扩增技术。实验结果表明该检测技术能... 根据番茄溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis,cmm)的一段特异致病基因pat-1序列,按照锁式探针的设计原理设计探针和扩增引物,优化系列反应条件,建立了特异性的cmm超分支滚环扩增技术。实验结果表明该检测技术能够从供试的10种菌中特异性地检出番茄溃疡病菌,检测灵敏度高,DNA最低检测浓度为500 fg/μL。 展开更多
关键词 番茄溃疡病菌 超分支滚环扩增 锁式探针 检测
让“知音”不再难觅——建筑企业如何高效招聘员工
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作者 方平 《施工企业管理》 2012年第4期 98-99,共2页
招聘是现代组织管理过程中一项具体、重要且经常性的工作,是人力资源管理活动的基础和关键环节之一,它直接关系到组织各级人员的质量以及各项工作的顺利开展。人员招聘工作对公司的发展来说意义非常重大,因为好的人才基础才能实现企... 招聘是现代组织管理过程中一项具体、重要且经常性的工作,是人力资源管理活动的基础和关键环节之一,它直接关系到组织各级人员的质量以及各项工作的顺利开展。人员招聘工作对公司的发展来说意义非常重大,因为好的人才基础才能实现企业效率的提升,就如同高性能的电脑必须有高质量的配件一样,组织的生存和发展也必须有高质量的人力资源, 展开更多
关键词 招聘工作 建筑企业 人力资源管理 员工 管理过程 企业效率 组织 质量
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