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IBP促进人涎腺腺样囊性癌细胞侵袭和上皮间质转化的研究
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作者 熊剑 李鹏 +4 位作者 范舒 申涛 简从相 胡川 周继祥 《临床口腔医学杂志》 2018年第4期202-205,共4页
目的:探讨干扰素调节因子-4结合蛋白(interferon regulatory factor-4 binding protein,IBP)对人涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞侵袭能力和上皮间质转化的影响。方法:采用Transwell试验,将穿膜细胞... 目的:探讨干扰素调节因子-4结合蛋白(interferon regulatory factor-4 binding protein,IBP)对人涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞侵袭能力和上皮间质转化的影响。方法:采用Transwell试验,将穿膜细胞进行染色计数并分析各组细胞侵袭能力的变化,明确IBP对细胞侵袭能力的影响;通过波形蛋白和角蛋白的免疫荧光染色,观察比较ACC2-C1/IBP和ACC2-C1细胞的染色强度。结果:ACC2-C1/IBP细胞侵袭率大于ACC2-C1细胞和ACC2细胞;在波形蛋白中的染色ACC2-C1/IBP细胞强于ACC2-C1细胞,在角蛋白中的染色ACC2-C1/IBP细胞弱于ACC2-C1细胞。结论:IBP有促进SACC细胞侵袭的作用;初步证实了IBP能够促进人涎腺腺样囊性癌细胞上皮间质转化的发生。 展开更多
关键词 干扰素调节因子-4结合蛋白(IBP) 腺样囊性癌(SACC) 上皮间质转化(EMT)
抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体识别的抗原表位区域鉴定 预览
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作者 何莹 胡川 陈安 《国际检验医学杂志》 CAS 2018年第21期2593-2595,共3页
目的对抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)单克隆抗体H5识别的抗原表位区域进行鉴定。方法设计4个NGAL截短体,通过PCR扩增截短体DNA片段并克隆到PET42a质粒中表达GST-NGAL截短体融合短肽。以此为抗原鉴定H5识别的抗原表位区域... 目的对抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)单克隆抗体H5识别的抗原表位区域进行鉴定。方法设计4个NGAL截短体,通过PCR扩增截短体DNA片段并克隆到PET42a质粒中表达GST-NGAL截短体融合短肽。以此为抗原鉴定H5识别的抗原表位区域。随后根据生物信息学预测结果,化学合成2段潜在B细胞表位肽,用ELISA和Westernblot方法进一步鉴定。结果H5能与NGAL蛋白分子第20~36位氨基酸结合。结论单克隆抗体H5的抗原表位结合位点存在于成熟NGAL蛋白分子氨基末端第20~36位氨基酸处,其深入研究为建立高效灵敏的NGAL免疫学检测体系和进一步研究NGAL分子抗原表位结构奠定基础。 展开更多
关键词 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 单克隆抗体 表位
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循证医学思维在《临床生物化学与检验》教学中的实践应用 预览 被引量:1
3
作者 陈莎 彭冰洁 +2 位作者 李淑慧 陈安 胡川 《国际检验医学杂志》 CAS 2017年第20期2934-2935,共2页
循证医学是现代医学研究的热点,是21世纪医学教育的发展方向。《临床生物化学与检验》作为一门与临床紧密结合的学科,需要严谨的思维模式来指导工作。把循证医学的教学观念引入《临床生物化学与检验》的教学实践,能够最大限度地发挥循... 循证医学是现代医学研究的热点,是21世纪医学教育的发展方向。《临床生物化学与检验》作为一门与临床紧密结合的学科,需要严谨的思维模式来指导工作。把循证医学的教学观念引入《临床生物化学与检验》的教学实践,能够最大限度地发挥循证医学的积极作用,培养学生正确的思维方式,提高教学质量。 展开更多
关键词 循证医学 《临床生物化学与检验》 教学
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“抗体工程基础与应用”选修课的教学探索 预览
4
作者 杨明珍 陈安 +1 位作者 李淑慧 胡川 《国际检验医学杂志》 CAS 2016年第20期2940-2942,共3页
在学制变革背景下,医学检验教育应转变人才培养理念,加强教育与社会需求的联系,注重创新能力和创新精神的培养。选修课作为学科教学体系的重要组成部分,在大学生教育中起着重要作用。该教研室在3、4年级医学检验专业学生中以专业选修课... 在学制变革背景下,医学检验教育应转变人才培养理念,加强教育与社会需求的联系,注重创新能力和创新精神的培养。选修课作为学科教学体系的重要组成部分,在大学生教育中起着重要作用。该教研室在3、4年级医学检验专业学生中以专业选修课的形式开设了"抗体工程基础与应用"课程。该门课程在增强学生对抗体工程和体外诊断技术(IVD)行业的认识,培养学生检验技术研发能力和创新能力,完善教学体系和加强学科建设等方面均取得了积极有益的效果。 展开更多
关键词 医学检验 选修课 抗体工程
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临床生物化学检验教学改革的探索与思考 预览 被引量:2
5
作者 杨明珍 李淑慧 +1 位作者 陈安 胡川 《国际检验医学杂志》 CAS 2015年第24期3653-3654,共2页
临床生物化学检验是医学检验专业的一门必修课,是在人体正常的生物化学代谢基础上研究疾病状态下生物化学病理性变化的基础理论和相关代谢物的质与量的改变,从而为疾病的临床实验诊断、治疗监测、药物疗效和预后判断、疾病预防等方面,... 临床生物化学检验是医学检验专业的一门必修课,是在人体正常的生物化学代谢基础上研究疾病状态下生物化学病理性变化的基础理论和相关代谢物的质与量的改变,从而为疾病的临床实验诊断、治疗监测、药物疗效和预后判断、疾病预防等方面,提供信息和决策依据的一门学科[1]。其知识体系由生物化学、临床医学、分析化学、遗传学、病理学等多学科交叉渗透形成。伴随着生命科学技术的发展,临床生物化学检验的学科发展也日新月异,其教学内容具有临床实践性强、检验项目繁多、知识点抽象、不易理解等特点。为适应学科发展的要求,培养具有更高素质的检验医学人才,笔者对临床生物化学教学改革进行了一些探索与思考,现介绍如下。 展开更多
关键词 临床生物化学检验 教学改革 医学检验专业 生物化学代谢 临床实验诊断 生命科学技术 疾病状态 病理性变化
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《临床生物化学检验》以疾病为单元模块化实验教学的探索与实践 预览
6
作者 李淑慧 陈莎 +6 位作者 向莉 张竹君 杨明珍 张阳 梁文斌 陈安 胡川 《国际检验医学杂志》 CAS 2015年第8期1155-1155,I0001共2页
《临床生物化学检验》是医学检验专业的一门重要的主干课程,是由分析化学、生物化学、临床医学等学科交叉融合而形成的一门独立学科,也是集技术性、实践性和应用性于一身的以实验为主的学科[1]。临床研究显示,与疾病密切相关的临床生化... 《临床生物化学检验》是医学检验专业的一门重要的主干课程,是由分析化学、生物化学、临床医学等学科交叉融合而形成的一门独立学科,也是集技术性、实践性和应用性于一身的以实验为主的学科[1]。临床研究显示,与疾病密切相关的临床生化指标占检验指标的80%以上,而在现有的教学模式下,仍存在实验教学内容单一,与临床实际脱节的问题。 展开更多
关键词 《临床生物化学检验》 实验教学内容 疾病 模块化 医学检验专业 临床生化指标 主干课程 分析化学
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NGAL测定在急性肾损伤诊断中应用的研究进展 预览 被引量:5
7
作者 何莹 陈安 胡川 《医学综述》 2014年第22期4044-4046,共3页
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)存在于中性粒细胞的过氧化物酶阴性颗粒中,并在人体组织细胞中广泛分布。近年研究发现,NGAL与肾脏关系十分密切,可能参与启动肾脏发育并发挥保护肾脏的作用。众多实验室和临床研究表明,急性肾... 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)存在于中性粒细胞的过氧化物酶阴性颗粒中,并在人体组织细胞中广泛分布。近年研究发现,NGAL与肾脏关系十分密切,可能参与启动肾脏发育并发挥保护肾脏的作用。众多实验室和临床研究表明,急性肾损伤(AKI)时NGAL表达明显增高并分泌释放入体液中。尤其是尿液中的NGAL水平与肾脏损伤的程度密切相关且很早就表现出来,NGAL被认为是新的有效的AKI早期生化标志物。 展开更多
关键词 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 急性肾损伤 早期诊断
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溶酶体相关膜蛋白2AshRNA对乳腺癌细胞株紫杉醇耐药的影响 被引量:2
8
作者 韩起 陈莎 +4 位作者 杨明珍 张竹君 陈安 胡川 李淑慧 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期351-354,共4页
目的制备针对人溶酶体相关膜蛋白2A(LAMP2A)的shRNA重组慢病毒,获得稳定低表达LAMP2A的MDA-MB-231乳腺癌细胞株,观察LAMP2A分子下调对乳腺癌细胞紫杉醇耐药性的影响。方法通过对LAMP2A的mRNA序列分析,设计了4条shRNA,通过基因重组技... 目的制备针对人溶酶体相关膜蛋白2A(LAMP2A)的shRNA重组慢病毒,获得稳定低表达LAMP2A的MDA-MB-231乳腺癌细胞株,观察LAMP2A分子下调对乳腺癌细胞紫杉醇耐药性的影响。方法通过对LAMP2A的mRNA序列分析,设计了4条shRNA,通过基因重组技术构建pGLV-EGFP-shRNA慢病毒表达质粒,并测序鉴定。将构建的表达质粒和包装质粒共转染人胚肾HEK293T细胞包装产生慢病毒,测定病毒滴度。将构建的shRNA慢病毒表达载体感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞株后,Western blot法检测LAMP2A表达,验证蛋白表达抑制效果。采用1 nmol/L、10 nmol/L、100nmol/L的紫杉醇处理LAMP2A低表达乳腺癌细胞株后,用MTT法观察LAMP2A低表达组和对照组之间增殖效率的差异。结果测序结果显示重组慢病毒质粒构建正确,病毒滴度达2×108TU/mL。乳腺癌稳定细胞株中LAMP2A蛋白表达量显著降低。在10 nmol/L、100 nmol/L紫杉醇处理后,LAMP2A低表达乳腺癌细胞株对紫杉醇耐药性明显降低(P〈0.05)。结论成功构建了人的LAMP2A基因shRNA慢病毒载体,获得了稳定低表达LAMP2A的乳腺癌细胞株,证实LAMP2A下调能够降低乳腺癌细胞株对紫杉醇的耐药性。 展开更多
关键词 溶酶体相关膜蛋白2A 小发夹RNA 慢病毒载体 紫杉醇
医学检验专业学员的心理问题浅析 预览 被引量:2
9
作者 向莉 李淑慧 +3 位作者 张阳 李鹏 陈安 胡川 《国际检验医学杂志》 CAS 2014年第10期1368-1369,共2页
随着越来越多的新项目、新技术、新仪器应用于临床检验,检验医学在疾病的诊断、疗效评估和医疗决策上发挥的作用使其越来越受到临床科室的信任和依赖。培养更具综合实力的复合型医学检验人才是高校教学改革的重点内容[1],了解检验专业... 随着越来越多的新项目、新技术、新仪器应用于临床检验,检验医学在疾病的诊断、疗效评估和医疗决策上发挥的作用使其越来越受到临床科室的信任和依赖。培养更具综合实力的复合型医学检验人才是高校教学改革的重点内容[1],了解检验专业学员心理需求,关注学员的心理健康是检验医学教育工作者亟待研究的课题。 展开更多
关键词 医学检验专业 心理问题 学员 医学检验人才 检验医学 教育工作者 临床检验 临床科室
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抗人心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的制备、表位鉴定及其应用
10
作者 韩起 丛珊 +5 位作者 易维京 陈莎 梁文斌 陈安 胡川 李淑慧 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期620-624,共5页
目的制备抗人心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)单克隆抗体(mAb),鉴定其基本特性并通过配对检测临床样本血清,对已配对的mAb进行表位鉴定。方法通过已制备的H-FABP抗原和合成肽免疫BALB/c小鼠,常规融合筛选后进行抗体亚型鉴定、效... 目的制备抗人心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)单克隆抗体(mAb),鉴定其基本特性并通过配对检测临床样本血清,对已配对的mAb进行表位鉴定。方法通过已制备的H-FABP抗原和合成肽免疫BALB/c小鼠,常规融合筛选后进行抗体亚型鉴定、效价和亲和力检测,纯化mAb后通过间接ELISA、Westernblot法对mAb进行特异性检测;将获得的mAb分别作为捕获和检测抗体,经过配对建立检测重组H-FABP的ELISA体系,并初步用于临床血清检测;采用生物信息学分析设计2段H.FABP表位,通过原核表达获得其短肽并纯化,通过Westemblot法对配对的mAb进行表位鉴定。结果成功获得4株抗H-FABP特异性mAb,亚类分别为IgG2a和IgG2b,抗体效价为1:51200-1:1024000,亲和力最高可达到9.02×10^9mol/L;经Westernblot法和间接ELISA鉴定均能够特异检测重组H-FABP蛋白,经过配对发现mAb3-H5和1-F10能够检测重组H-FABP,并在其临床血清样本检测中发现正常组和急性心梗组之间H-FABP水平具有显著性统计学差异;通过表位鉴定发现未知表位的mAb 1-F10能够特异识别位点为H-FABP的第86到第133位氨基酸。结论制备了4株高特异性和高亲和力的抗H-FABPmAb,成功建立了检测临床样本血清中的ELISA体系,并对其表位进行了分析鉴定。 展开更多
关键词 H-FABP 单克隆抗体 ELSIA体系检测 表位鉴定
抗人NGAL单克隆抗体的制备及其定量检测方法的建立 被引量:9
11
作者 何莹 郑怡麟 +2 位作者 陈安 易维京 胡川 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期50-54,共5页
目的获得抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)特异性单克隆抗体并建立双抗体夹心ELISA免疫定量检测方法。方法通过杂交瘤技术制备了抗人NGAL高亲和力高特异性单克隆抗体,筛选... 目的获得抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)特异性单克隆抗体并建立双抗体夹心ELISA免疫定量检测方法。方法通过杂交瘤技术制备了抗人NGAL高亲和力高特异性单克隆抗体,筛选能够结合天然NGAL的单克隆抗体并建立双抗体夹心ELISA系统。以重组人NGAL为检测对象,对系统线性范围、灵敏度、精密度和准确度(回收试验)进行全面分析和评价。通过对肾病患病组和对照组尿液标本检测初步研究其在临床上的分析性能。结果获得了8株能稳定分泌抗人NGAL单克隆抗体的杂交瘤细胞株.筛选得到F2和G2两株单克隆抗体可用于双抗夹心ELISA免疫检测。本方法线性范围为0~40ng/ml,灵敏度为4.8ng/ml,批内变异CV≤10.04%,批间变异CV≤9.76%,平均回收率为101.9%。临床标本检测显示肾病组与对照组有显著差异(P〈0.01)。结论本研究制备了高亲和力特异性单克隆抗体并建立了双抗体夹心ELISA方法,该方法灵敏度、精密度和准确性良好,能够检测体液标本中的天然NGAL蛋白,检测结果与临床基本符合.为其临床应用和推广奠定了基础。 展开更多
关键词 NGAL 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA 临床应用
虚拟实验在《临床生物化学检验》教学中的应用探析 预览 被引量:6
12
作者 李淑慧 韩起 +4 位作者 陈莎 张竹君 杨明珍 陈安 胡川 《国际检验医学杂志》 CAS 2013年第1期116-117,共2页
《临床生物化学检验》是医学检验专业重要的主干课程,是由生物化学、分析化学、临床医学等学科交叉融合形成的独立学科,也是集实践性、技术性和应用性于一身的以实验为主的学科[1]。随着检验医学的快速发展,新知识、新技术不断推出,
关键词 《临床生物化学检验》 应用 实验 教学 虚拟 医学检验专业 主干课程 分析化学
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超敏CRP单克隆抗体制备及其ELISA体系的初步建立 被引量:3
13
作者 王伟 何莹 +2 位作者 韩起 陈安 胡川 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期697-701,共5页
目的获得CRP特异性单克隆抗体并建立能够检测超敏CRP(hs-CRP)的双抗体夹心ELISA免疫定量检测方法。方法从NCBI核酸数据库中获得人CRP编码序列并进行密码子偏嗜性改造,利用E.coli表达系统表达CRP重组蛋白。用pET22b-CRP重组质粒表达的... 目的获得CRP特异性单克隆抗体并建立能够检测超敏CRP(hs-CRP)的双抗体夹心ELISA免疫定量检测方法。方法从NCBI核酸数据库中获得人CRP编码序列并进行密码子偏嗜性改造,利用E.coli表达系统表达CRP重组蛋白。用pET22b-CRP重组质粒表达的CRP重组蛋白(rhCRP-22b)作为免疫原免疫Balb/c小鼠并通过杂交瘤技术制备CRP特异性单克隆抗体,鉴定并筛选能够建立双抗体夹心ELISA系统的抗体配对。以pET28a-CRP重组质粒表达的CRP重组蛋白(rhCRP-28a)作为标准品,对该系统线性范围、灵敏度、精密度和准确度(回收试验)进行分析和评价。结果获得5株CRP单克隆抗体,筛选得到2株单克隆抗体可用于hs-CRP的ELISA免疫检测。通过鉴定2株抗体具有良好的效价和特异性。ELISA检测系统线性范围为0~166 ng/ml,灵敏度为5.2 ng/ml,批内CV≤6.43%,批间CV≤5.93%,平均回收率为98.9%,与Orion公司hs-CRP诊断试剂检测结果有良好的可比性。结论本研究制备了高效特异的CRP单克隆抗体并建立了能够检测hs-CRP的双抗体夹心ELISA方法,该方法灵敏度、精密度和准确性良好,能够达到hs-CRP的检测要求,为进一步研发和建立具有自主知识产权的免疫检测试剂盒及其他检测方法体系奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 超敏C-反应蛋白 蛋白原核表达 单克隆抗体 ELSIA 方法学评价
IBP表达抑制后活化T淋巴细胞基因表达谱变化分析
14
作者 向莉 李鹏 +3 位作者 张竹君 杨明珍 陈安 胡川 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期109-113,共5页
目的利用全基因组寡核苷酸芯片检测干扰素调节因子-4结合蛋白(IRF4 binding protein,IBP)表达抑制后活化T淋巴细胞基因表达谱的差异。方法采用本室构建的IBP表达抑制的JurkatT细胞及相应对照细胞为实验对象,Anti-CD3、CD28mAb处理... 目的利用全基因组寡核苷酸芯片检测干扰素调节因子-4结合蛋白(IRF4 binding protein,IBP)表达抑制后活化T淋巴细胞基因表达谱的差异。方法采用本室构建的IBP表达抑制的JurkatT细胞及相应对照细胞为实验对象,Anti-CD3、CD28mAb处理细胞后提取刺激24、48h的细胞总RNA,利用北京博奥生物有限公司22K Human Genome Array芯片检测基因表达的差异,以MAS.doc.V1软件,结合KEGG、NCBI等生物信息学数据库检索分析差异表达基因功能和网络关系。结果IBP基因表达抑制的JurkatT细胞在TCR信号刺激24、48h后,细胞能量代谢、周期生长、转录调控及凋亡等多种类型的基因发生差异表达改变,2个时相组共有56个差异表达趋势一致基因,其中17个基因共同上调,39个基因共同下调。结论在活化的JurkatT细胞中IBP表达抑制所致多个基因差异表达。 展开更多
关键词 干扰素调节因子4结合蛋白 T淋巴细胞 基因芯片
RNAi介导的IBP表达抑制对人乳腺癌MDA—MB-231细胞细胞骨架的影响 预览 被引量:1
15
作者 陈忠蛟 李鹏 +2 位作者 杨明珍 陈安 胡川 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期1-5,共5页
目的研究干扰素调节因子4结合蛋白(IBP)的表达抑制对人乳腺癌MDA—MB-231细胞中微丝、微管的影响。方法设计并合成针对人IBPmRNA的RNA干扰(RNAi)序列,构建RNAi慢病毒表达载体,与包装质粒共转染人胚肾293FT细胞获得病毒颗粒,以病... 目的研究干扰素调节因子4结合蛋白(IBP)的表达抑制对人乳腺癌MDA—MB-231细胞中微丝、微管的影响。方法设计并合成针对人IBPmRNA的RNA干扰(RNAi)序列,构建RNAi慢病毒表达载体,与包装质粒共转染人胚肾293FT细胞获得病毒颗粒,以病毒感染MDA—MB-231细胞。采用免疫印迹及实时聚合酶链反应(RT—PCR)确定能有效抑制IBP的RNAi序列,筛选出获得稳定感染的细胞株并进行微丝、微管染色。结果成功构建了IBP特异性的RNAi慢病毒表达载体和对照载体,对MDA—MB-231细胞IBP的沉默效率为69.9%;通过微丝、微管染色证实IBP表达下调后,细胞形态出现明显变化,细胞体增大,丝状伪足减少,片状伪足增多,微管排列紊乱。结论IBP蛋白通过影响微管、微丝的排列而改变MDA—MB-231细胞生物聿行为, 展开更多
关键词 转染 RNA干扰 慢病毒感染 细胞骨架 基因 IBP
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抗人降钙素原特异性单克隆抗体的制备鉴定及初步应用 被引量:9
16
作者 郑怡麟 何莹 +2 位作者 陈安 易维京 胡川 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期523-526,共4页
目的获得抗人降钙素原(procalcitonin,PCT)单克隆抗体,并鉴定其基本特性。方法从NCBI数据库中获得PCT编码序列,以原核表达系统表达PCT重组蛋白,经镍亲和层析柱纯化,获得筛选单克隆抗体的筛选原;综合应用多种生物信息学分析软件... 目的获得抗人降钙素原(procalcitonin,PCT)单克隆抗体,并鉴定其基本特性。方法从NCBI数据库中获得PCT编码序列,以原核表达系统表达PCT重组蛋白,经镍亲和层析柱纯化,获得筛选单克隆抗体的筛选原;综合应用多种生物信息学分析软件预测PCT中潜在的B细胞表位肽,用合成肽对BALB/c小鼠进行免疫,纯化单克隆抗体,通过间接ELISA、Westernblot和免疫组化鉴定获得的单克隆抗体。将获得的单克隆抗体作为捕获抗体,经过配对建立检测重组PCT的ELISA体系,并初步对临床血清进行了检测。结果成功获得3株PCT特异性单克隆抗体,分别为2-D7、2-H12和4-H12,亚类分别为IgGl和IgG2a,最高效价为1:1024000,亲和力最高可达到1.3×10^9L/mol;选取2一D7经Westernblot鉴定能够检测重组PCT蛋白,经免疫组化证实能特异性识别甲状腺组织中PCT蛋白,经过配对成功建立了检测重组PCT的ELISA体系,运用建立体系检测临床血清PCT含量时发现正常组与细菌培养阳性组之间具有显著差异。结论成功表达了人PCT重组蛋白,获得了3株高特异性和高亲和力的PCT单克隆抗体,成功建立了检测重组PCT的ELISA体系,并初步用于临床样本检测。 展开更多
关键词 降钙素原 原核表达 单克隆抗体 特性鉴定 ELSIA检测
人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白真核表达载体的构建和鉴定 预览
17
作者 何莹 罗阳 +2 位作者 王英翔 陈安 胡川 《国际检验医学杂志》 CAS 2013年第13期1633-1634,1637共3页
目的构建人NGAL重组蛋白真核表达载体并转染HEK293T细胞进行瞬间表达。方法从人白细胞中提取总RNA,经RT-PCR扩增NGAL基因并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1/HisA中构建真核重组表达质粒pcDNA3.1/His A-NGAL,经测序鉴定正确后用脂质体转... 目的构建人NGAL重组蛋白真核表达载体并转染HEK293T细胞进行瞬间表达。方法从人白细胞中提取总RNA,经RT-PCR扩增NGAL基因并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1/HisA中构建真核重组表达质粒pcDNA3.1/His A-NGAL,经测序鉴定正确后用脂质体转染HEK293T细胞,用Western blot和ELISA方法鉴定表达产物。结果获得长度597bp的NGAL蛋白基因并构建pcDNA3.1/His A-NGAL真核表达载体,测序正确后转染,用Western blot和ELISA方法证实HEK293T细胞可以表达NGAL重组蛋白并分泌出胞。结论成功构建人NGAL重组蛋白真核表达载体,转染HEK293T细胞表达出相应蛋白,为下一步的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 中性白细胞 载脂蛋白类 明胶酶类 逆转录聚合酶链反应 重组 遗传
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医学检验专业创新型人才的培养与实践 预览 被引量:5
18
作者 李淑慧 韩起 +6 位作者 陈莎 杨明珍 张竹君 张阳 向莉 陈安 胡川 《国际检验医学杂志》 CAS 2013年第9期1187-1188,共2页
具有创新意识、创新精神和创新能力的人才是一个国家和民族最宝贵的财富。传统的医学检验教学模式是以教师向学生传输知识为主的知识继承型教学模式,忽略了学生的主体地位和创新能力,不能适应新世纪对创新型人才的实际需求。如何培养具... 具有创新意识、创新精神和创新能力的人才是一个国家和民族最宝贵的财富。传统的医学检验教学模式是以教师向学生传输知识为主的知识继承型教学模式,忽略了学生的主体地位和创新能力,不能适应新世纪对创新型人才的实际需求。如何培养具有综合创新能力的医学检验人才已成为高校教育的重要课题。文章从营造"以学生为中心"的教学环境、 展开更多
关键词 医学检验专业 创新型人才 培养 以学生为中心 创新能力 医学检验人才 教学模式 创新意识
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调节自噬对乳腺癌细胞紫杉醇耐药性影响的实验研究 预览 被引量:6
19
作者 陈莎 韩起 +5 位作者 王旭辉 杨明珍 张竹君 陈安 胡川 李淑慧 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期516-519,共4页
目的观察调节自噬对乳腺癌细胞紫杉醇耐药性的影响。方法选取两株乳腺癌细胞MDA-MB-231及MDA-MB-468细胞,分为不同浓度的紫杉醇(PTX)组、联合自噬激动剂雷帕霉素(PTX+Rapa)组和联合自噬抑制剂3-MA(PTX+3-MA)组(对照组给予相应... 目的观察调节自噬对乳腺癌细胞紫杉醇耐药性的影响。方法选取两株乳腺癌细胞MDA-MB-231及MDA-MB-468细胞,分为不同浓度的紫杉醇(PTX)组、联合自噬激动剂雷帕霉素(PTX+Rapa)组和联合自噬抑制剂3-MA(PTX+3-MA)组(对照组给予相应溶剂),分别作用24 h、48 h及72 h后,应用MTT比色法检测各组细胞的存活率及抑制率。结果 PTX+Rapa组对两株乳腺癌细胞的抑制作用均显著优于单独给药的PTX组及PTX+3-MA给药组(P〈0.01),而PTX+3-MA组对两株乳腺癌细胞的抑制作用则明显弱于单独给药的PTX组(MDA-MB-231,P〈0.05;MDA-MB-468,P〈0.01),提示自噬激动剂雷帕霉素(10 nm)可降低乳腺癌细胞对紫杉醇耐药性,增强紫杉醇对乳腺癌细胞的抑制作用,而自噬抑制剂3-MA(10 mm)在一定程度上增强乳腺癌细胞紫杉醇耐药性,拮抗紫杉醇对乳腺癌细胞的抑制作用。结论调节自噬能明显影响乳腺癌细胞对紫杉醇的耐药性,这为自噬与乳腺癌细胞紫杉醇耐药性关系的研究提供了新的思路。 展开更多
关键词 自噬 乳腺癌 紫杉醇 耐药
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心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)原核表达、纯化及多克隆抗体制备研究 预览 被引量:2
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作者 丛珊 张阳 +5 位作者 张竹君 易维京 陈安 胡川 余晓东 李淑慧 《中国医药指南》 2012年第4期 1-3,5,共4页
目的 构建H-FABP 高效原核表达载体,并实现H-FABP 的高效原核表达、纯化及多克隆抗体的制备.方法 通过RT-PCR 扩增人H-FABP 的基因序列,将目的 基因克隆入质粒pET28a 构建原核表达重组质粒pET28a-H-FABP.将重组质粒转化入大肠杆菌BL21 ... 目的 构建H-FABP 高效原核表达载体,并实现H-FABP 的高效原核表达、纯化及多克隆抗体的制备.方法 通过RT-PCR 扩增人H-FABP 的基因序列,将目的 基因克隆入质粒pET28a 构建原核表达重组质粒pET28a-H-FABP.将重组质粒转化入大肠杆菌BL21 中,通过IPTG 诱导H-FABP 的表达,采用Q Sepharose F.F.阴离子层析柱等方法建立H-FABP 的纯化工艺.用免疫胶体金法和Western blot 鉴定纯化后重组蛋白免疫特异性,用重组表达蛋白制备兔抗H-FABP 多克隆抗体.结果 成功构建人H-FABP 重组蛋白原核表达载体,重组蛋白以包涵体形式表达,其相对分子质量为15kD,与预期一致.亲和层析纯化产物的SDS-PAGE 和Western blotting 鉴定表明获得纯度>95%的目的 重组蛋白.制备的抗H-FABP 多克隆抗体的抗血清ELISA 效价可达1:512000.结论 本研究在原核系统中成功表达了H-FABP重组蛋白,并制备多克隆抗体,为H-FABP 的结构和功能研究及开发临床诊断试剂盒打下了基础. 展开更多
关键词 心脏型脂肪酸结合蛋白 表达载体构建 表达 纯化
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