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我国猪圆环病毒2型疫苗研发及应用现状 预览
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作者 陈胜男 +6 位作者 周盼伊 温肖会 周秀蓉 贾春玲 吕殿红 魏文康 《中国动物保健》 2019年第6期52-55,共4页
猪圆环病毒2型(PCV2)是目前已知的最小的猪病毒,但其却给养猪场带来巨大的经济损失。目前,防控PCV2的主要措施是免疫接种。2009年我国引进了首个猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗,同时也投入了大量的研究资金自主研发各种疫苗,目前市场... 猪圆环病毒2型(PCV2)是目前已知的最小的猪病毒,但其却给养猪场带来巨大的经济损失。目前,防控PCV2的主要措施是免疫接种。2009年我国引进了首个猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗,同时也投入了大量的研究资金自主研发各种疫苗,目前市场上出现了多种类型的猪圆环病毒2型疫苗,包括全病毒灭活苗、基因工程疫苗等。本文着重概括一下我国猪圆环病毒2型疫苗研发及应用现状,提出一些看法与展望,希望对广大疫苗研发及使用单位有所启发。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 全病毒灭活苗 基因工程疫苗 合成肽疫苗 嵌合疫苗 多联疫苗
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广东地区猪群新发塞内卡病毒流行株的分离鉴定及遗传进化分析 预览
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作者 林秀银 温肖会 +5 位作者 吕殿红 霍玮 魏文康 杨彩娟 《广东农业科学》 CAS 2019年第6期125-132,共8页
【目的】检测广东两猪场新发的鼻镜与蹄冠水疱病病原,获得新发塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)流行株,为后续研究提供材料。【方法】应用SVA RT-PCR、荧光PCR等方法对采集的病料进行初步筛查,再将水泡皮进行处理接种于ST细胞、BHK-21细胞... 【目的】检测广东两猪场新发的鼻镜与蹄冠水疱病病原,获得新发塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)流行株,为后续研究提供材料。【方法】应用SVA RT-PCR、荧光PCR等方法对采集的病料进行初步筛查,再将水泡皮进行处理接种于ST细胞、BHK-21细胞上,用SVA特异性引物对细胞上清液进行扩增,测序并分析序列,采用蔗糖浓度梯度方法纯化病毒进行电子显微镜形态观察,并对病毒分离株的TCID50进行测定。【结果】经SVA RT-PCR与荧光PCR方法初步诊断该猪群为SVA感染;细胞接毒培养发现,自第6代起,细胞出现典型CPE,电镜观察可见25 nm左右的病毒颗粒,扩增序列提交NCBI Blastn比对鉴定为SVA;测得毒株SVA CH-GDBL1-2016的TCID50为106.8,毒株SVA CH-GDBL2-2016的TCID50为106.7。【结论】SVACH-GDBL1-2016和SVA CH-GDBL2-2016可为后续塞内卡病毒病的诊断和疫苗研制提供材料基础。 展开更多
关键词 塞内卡病毒 口蹄疫 猪原发性水疱病 分离鉴定 序列分析
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猪产气巴氏杆菌广东株的分离鉴定及其16S rDNA基因序列遗传进化分析 预览
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作者 陈胜男 +8 位作者 李垦科 张杰 钟汝情 陈晓倩 谢莹 焦思思 冉承峰 邹育根 《中国动物保健》 2019年第3期53-55,共3页
产气巴氏杆菌是一种人兽共患性病原菌,可引起人和动物不同程度的流产、不孕等繁殖障碍性疾病。本文对广东某猪场采集的母猪产道分泌物进行病原分离检测,在产道拭子中分离到一种疑似巴氏杆菌的菌体。经细菌16S rDNA 基因序列扩增、测序,... 产气巴氏杆菌是一种人兽共患性病原菌,可引起人和动物不同程度的流产、不孕等繁殖障碍性疾病。本文对广东某猪场采集的母猪产道分泌物进行病原分离检测,在产道拭子中分离到一种疑似巴氏杆菌的菌体。经细菌16S rDNA 基因序列扩增、测序,鉴定为猪产气巴氏杆菌,命名为GD01 株。序列分析显示GD01 株与GenBank 数据库中公布的产气巴氏杆菌16SrDNA 核酸同源性为98.5%以上。本研究首次报道了猪产气巴氏杆菌在广东的流行,其在猪群的流行病学意义有待进一步调查研究。 展开更多
关键词 产气巴氏杆菌 繁殖障碍 16S rDNA 遗传进化
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虎源犬瘟热病毒核酸疫苗构建及免疫原性初步研究
4
作者 张贺 +3 位作者 罗满林 吕殿红 温肖会 魏文康 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2018年第21期172-175,179,264共6页
为了研究虎源犬瘟热病毒(CDV)主要保护性抗原基因(H基因和F基因)的免疫原性,参照GenBank上发表的CDV基因全长序列(KP793921)设计了两对引物,特异性扩增CDV的F和H基因,利用pcDNA3. 1(+)真核表达载体构建了CDV核酸疫苗(质粒pcDN... 为了研究虎源犬瘟热病毒(CDV)主要保护性抗原基因(H基因和F基因)的免疫原性,参照GenBank上发表的CDV基因全长序列(KP793921)设计了两对引物,特异性扩增CDV的F和H基因,利用pcDNA3. 1(+)真核表达载体构建了CDV核酸疫苗(质粒pcDNA3. 1-F和pcDNA3. 1-H),通过脂质体介导法将这两种真核表达质粒分别转染BHK-21细胞,通过RT-PCR、间接免疫荧光和Western-blot检测重组质粒在体外细胞的表达情况;通过肌肉免疫Balb/c小鼠,检测重组质粒在体内的表达情况。结果表明:真核表达载体pcDNA3. 1-F和pcDNA3. 1-H被成功构建,F、H蛋白均具有免疫原性,但诱导抗体效价不高,有待进一步研究改善。说明pcDNA3. 1-F和pcDNA3. 1-H重组疫苗可以诱导产生抗CDV的中和抗体,但是抗体效价较低,需要进一步试验分析解决。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 F基因 H基因 真核表达 PCDNA3.1(+) BHK-21
全文增补中
广东省禽源大肠杆菌分离株的耐药性调查 预览
5
作者 温肖会 魏文康 +3 位作者 丘婷 周秀蓉 吕殿红 《安徽农业科学》 CAS 2018年第11期74-77,117共5页
[目的]了解广东省不同地区禽源大肠杆菌的耐药情况。[方法]采用纸片扩散法对不同养禽场分离的229株大肠杆菌进行28种抗菌药物的耐药性试验。[结果]229株大肠杆菌对四环素、复方磺胺甲噁唑、阿莫西林和氨苄西林的耐药率较高,分别为89.1%... [目的]了解广东省不同地区禽源大肠杆菌的耐药情况。[方法]采用纸片扩散法对不同养禽场分离的229株大肠杆菌进行28种抗菌药物的耐药性试验。[结果]229株大肠杆菌对四环素、复方磺胺甲噁唑、阿莫西林和氨苄西林的耐药率较高,分别为89.1%、80.0%、76.9%和75.5%,其次是多西环素和链霉素(74.7%和68.6%),但阿米卡星耐药率最低(8.3%)。229株大肠杆菌存在多重耐药性,其中6株大肠杆菌可耐26种药物。[结论]广东省禽源大肠杆菌分离株耐药情况严重,存在多重耐药现象。养殖场应合理使用药物,加强细菌耐药性监测,研究结果为养殖场选用合适药物、控制细菌耐药性的产生和扩散提供了有效的理论依据。 展开更多
关键词 大肠杆菌 药敏试验 耐药性
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羊口疮病毒ORFV/GD-QY/01株的分离鉴定 预览 被引量:1
6
作者 向蓉 +4 位作者 王晓虎 陈晶 黄元 黄忠 向华 《广东农业科学》 CAS 2018年第9期116-120,共5页
利用MDBK细胞对广东清远某羊场的痂皮病例进行病毒分离,获得一株ORFV,命名为ORFV/GD-QY/01。参考NCBI羊口疮病毒(Orfvirus)保守基因B2L序列,设计一对特异性引物进行PCR扩增后测序;运用序列分析软件对获得的羊口疮病毒株B2L基因核... 利用MDBK细胞对广东清远某羊场的痂皮病例进行病毒分离,获得一株ORFV,命名为ORFV/GD-QY/01。参考NCBI羊口疮病毒(Orfvirus)保守基因B2L序列,设计一对特异性引物进行PCR扩增后测序;运用序列分析软件对获得的羊口疮病毒株B2L基因核苷酸序列与其他羊口疮毒株进行多序列比对,构建系统发育进化树。结果表明:接种病料悬液的MDBK细胞出现细胞病变,扩增出ORFVB2L基因,该毒株与台湾山羊株(EU935106、DQ904351)相似性最高(均为99.2%),亲缘关系最近。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 分离鉴定 B2L基因 诊断 遗传进化分析
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一例流浪猫巴尔通氏体病的诊断与治疗 预览 被引量:1
7
作者 朱学良 陈意伟 +2 位作者 周秀容 魏文康 《安徽农业科学》 CAS 2016年第27期117-117,159共2页
通过对1例疑似猫巴尔通氏体病患猫进行症状观察、血常规、血液涂片等检查,确诊为猫巴尔通氏体病,并进行对因对症治疗,取得了良好的治疗效果。
关键词 流浪猫 血巴尔通氏体 贫血 发热 血涂片
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1例贵宾犬单侧隐睾病的诊断与治疗 预览
8
作者 朱学良 魏文康 +1 位作者 吕殿红 《安徽农业科学》 CAS 2016年第18期142-143,共2页
隐睾是公犬常见的泌尿生殖系统畸形,会导致其生育能力下降甚至不育,是影响生殖健康的潜在风险。对1例贵宾犬隐睾病的诊断、手术治疗及疗效进行了介绍。
关键词 贵宾犬 隐睾 手术
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广州市部分区域猫泛白细胞减少症流行现状调查 预览 被引量:2
9
作者 温肖会 邱杰 +2 位作者 吕殿红 魏文康 《安徽农业科学》 CAS 2016年第17期120-122,237共4页
[目的]了解猫泛白细胞减少症病毒在广州家猫和流浪猫中的流行情况,分析FPV威胁广州家猫和流浪猫的潜在风险。[方法]采用猫泛白细胞减少症免疫胶体金快速检测试纸条和PCR检测方法对广州5家动物医院采集的3004份猫样品进行检测与分析。[... [目的]了解猫泛白细胞减少症病毒在广州家猫和流浪猫中的流行情况,分析FPV威胁广州家猫和流浪猫的潜在风险。[方法]采用猫泛白细胞减少症免疫胶体金快速检测试纸条和PCR检测方法对广州5家动物医院采集的3004份猫样品进行检测与分析。[结果]猫泛白细胞减少症免疫胶体金快速检测试纸条检出10份疑似猫泛白细胞减少症阳性样品,采用猫泛白细胞减少症PCR检测方法检出13份猫泛白细胞减少症阳性样品。13份阳性样品来源于96份具有临床症状且未免疫样品,49份家猫样品中有6份呈阳性,47份流浪猫样品中有7份呈阳性,阳性率分别为12.2%(6/49)和14.9%(7/47),发病季节以9~10月多发,发病年龄集中在0~6月龄。[结论]与外界接触和未免疫疫苗可能是导致猫感染FPV的重要原因。因此,家猫加强疫苗接种,减少与未知免疫背景的猫只接触,减少家猫感染FPV的潜在风险。 展开更多
关键词 猫泛白细胞减少症 广州市 流行现状
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蛋鸡群沙门氏菌的监测 预览 被引量:2
10
作者 吕殿红 温肖会 +4 位作者 黄忠 杨燕秋 周秀蓉 魏文康 《安徽农业科学》 CAS 2016年第19期163-165,共3页
[目的]了解蛋鸡场沙门氏菌的感染情况。[方法]采用沙门氏菌抗原和抗体检测方法对2012~2015年采集的广东省蛋鸡场样品进行检测。采用ELISA方法对1784血清样品进行了肠炎沙门氏菌和1 387份血清样品进行了鼠伤寒沙门氏菌抗体检测;采用凝集... [目的]了解蛋鸡场沙门氏菌的感染情况。[方法]采用沙门氏菌抗原和抗体检测方法对2012~2015年采集的广东省蛋鸡场样品进行检测。采用ELISA方法对1784血清样品进行了肠炎沙门氏菌和1 387份血清样品进行了鼠伤寒沙门氏菌抗体检测;采用凝集试验方法对1 391份血清样品进行了鸡白痢沙门氏菌抗体检测;采用细菌培养、PCR方法对采自广东省的活鸡/死鸡、环境拭子等1 458份样品进行了沙门氏菌检测。[结果]肠炎、鼠伤寒、鸡白痢3种血清型沙门氏菌抗体的阳性率分别为16.70%、10.09%和1.01%;沙门氏菌抗原检测的阳性率为1.65%。[结论]蛋鸡群中存在肠炎、鼠伤寒、鸡白痢等3种沙门氏菌不同程度的感染,但是蛋鸡群的总体感染率不高。 展开更多
关键词 沙门氏菌 感染 抗体 阳性率
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一例黑山羊肝片吸虫病的诊治 预览
11
作者 张贺 +2 位作者 周霞 吕殿红 魏文康 《广东畜牧兽医科技》 2016年第4期20-21,35共3页
2016年7月5日,广东省某黑山羊养殖场(存栏约200只)发生山羊不明原因发病及死亡情况,发病率和死亡率分别约为50%和20%。剖检病死山羊,可见严重腹水、肝脏损伤等病变,其他脏器无明显病变;在肝脏组织及胆囊中发现大量肝片吸虫。结合发病... 2016年7月5日,广东省某黑山羊养殖场(存栏约200只)发生山羊不明原因发病及死亡情况,发病率和死亡率分别约为50%和20%。剖检病死山羊,可见严重腹水、肝脏损伤等病变,其他脏器无明显病变;在肝脏组织及胆囊中发现大量肝片吸虫。结合发病情况和病死羊的剖检特征等,确定该群山羊发病及死亡原因为肝片吸虫感染。按照肝片吸虫病感染治疗原则,采取药物治疗及羊群隔离等综合防控处理措施,1周后回访,除此前严重感染的羊只死亡外,未有新增发病和死亡病例,羊群逐步恢复健康。 展开更多
关键词 黑山羊 肝片吸虫病 诊断 治疗
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犬博卡病毒PCR检测方法的建立及其应用 预览
12
作者 陈意伟 温肖会 +3 位作者 朱学良 吕殿红 魏文康 《安徽农业科学》 CAS 2016年第10期148-149,285共3页
[目的]建立犬博卡病毒(Canine bocavirus,CBo V)的PCR检测方法,了解其流行情况。[方法]根据Gen Bank数据库上CBo V的VP2基因序列合成1对引物,建立PCR检测方法,并运用该方法对临床样品进行检测。[结果]特异性试验中,除CBo V有目的条带... [目的]建立犬博卡病毒(Canine bocavirus,CBo V)的PCR检测方法,了解其流行情况。[方法]根据Gen Bank数据库上CBo V的VP2基因序列合成1对引物,建立PCR检测方法,并运用该方法对临床样品进行检测。[结果]特异性试验中,除CBo V有目的条带出现外,犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、犬传染性肝炎(ICHV)、犬副流感病毒(CPIV)、猫瘟热(FDV)等均无条带出现。敏感性试验表明,此检测方法对CBo V的最低检测量为4.806 2 pg/μL。重复性试验表明,多次重复试验结果一致,表明此方法重复性好。425份样品中仅有1份样品扩增出目的条带,经测序比对鉴定为CBo V。初步的流行病学调查结果表明,CBo V在犬中的流行率与感染率极低。[结论]建立的PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、可重复性强等特点。 展开更多
关键词 犬博卡病毒 PCR检测方法 应用
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小反刍兽疫RT-PCR的鉴定及N基因序列分析 预览
13
作者 李小鹏 陈华良 +5 位作者 俊琼 周霞 程松 张文娟 罗满林 《亚洲兽医病例研究》 2015年第4期31-38,共8页
根据小反刍兽疫病毒(PPRV) P、N基因保守序列设计了两对引物,分别扩增部分P基因及N基因的全长阅读编码框(ORF),对疑似小反刍兽疫病毒的样品抽取RNA并以其为模板,在RT-PCR的体系中能扩增出预期大小分别为766 bp、1578 bp的目的片段,同时... 根据小反刍兽疫病毒(PPRV) P、N基因保守序列设计了两对引物,分别扩增部分P基因及N基因的全长阅读编码框(ORF),对疑似小反刍兽疫病毒的样品抽取RNA并以其为模板,在RT-PCR的体系中能扩增出预期大小分别为766 bp、1578 bp的目的片段,同时对退火温度,敏感性及特异性等RT-PCR反应条件进行了优化。在最佳反应条件下,该RT-PCR能检出最低850拷贝的PPRV基因组。对N全基因进行RT-PCR扩增并对PCR产物克隆于pMD-19T载体,转化感受态细胞DH5α后,对重组质粒测序,结果表明N基因全长大小与预期完全一致。并且这两个基因与新疆伊犁、北京所发生的小反刍兽疫病毒同源性高达100%,说明该病毒在中国南北方都有存在,其亚型为基因4型。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 P、N基因 逆转录–聚合酶联反应 同源性 序列分析
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一例山羊前后盘吸虫病的诊治 预览
14
作者 肖伟燕 吕殿红 +2 位作者 温肖会 魏文康 《畜禽业》 2015年第10期87-89,共3页
2015年7月28日,某羊场有一批山羊(280只左右)近期出现消瘦、食欲减退、贫血等临床症状,一周内死亡7只剖检发现瘤胃有大量肉红色寄生虫虫体,经镜检虫体为山羊前后盘吸虫。按患羊体重使用硝氯酚伊维菌素片冲水口服,加之羊舍环境消... 2015年7月28日,某羊场有一批山羊(280只左右)近期出现消瘦、食欲减退、贫血等临床症状,一周内死亡7只剖检发现瘤胃有大量肉红色寄生虫虫体,经镜检虫体为山羊前后盘吸虫。按患羊体重使用硝氯酚伊维菌素片冲水口服,加之羊舍环境消毒和限制自由放牧措施,一周后,病羊没有出现死亡,逐步恢复健康。 展开更多
关键词 山羊 前后盘吸虫病 诊断 治疗
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猫泛白细胞减少症病毒VP2基因快速检测方法的建立与应用 预览 被引量:4
15
作者 邱杰 温肖会 +3 位作者 吕殿红 宁章勇 魏文康 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第2期21-25,共5页
为了调查猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)在猫群中的流行情况,根据GenBank已登录的FPVVP2基因序列设计PCR引物,建立了FPV PCR快速检测方法,并对3004份猫样品进行了检测.结果显示,该方法扩增的VP2基因片段为468... 为了调查猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)在猫群中的流行情况,根据GenBank已登录的FPVVP2基因序列设计PCR引物,建立了FPV PCR快速检测方法,并对3004份猫样品进行了检测.结果显示,该方法扩增的VP2基因片段为468 bp左右,检出的最小基因组DNA浓度为6.19×10^-8 μg/μL,检出DNA浓度低于1fg/μL,从3004份样品中检测出13份猫泛白细胞减少症病毒核酸阳性样品.本研究针对FPV VP2基因建立的PCR快速检测方法可作为FPV临床早期诊断及快速筛查手段. 展开更多
关键词 猫泛白细胞减少症病毒 VP2基因 PCR
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H1N1亚型猪流感诊断方法的研究新进展 预览 被引量:1
16
作者 蔡春梅 +4 位作者 温肖会 林美玲 严颖 周秀蓉 袁洁 《安徽农业科学》 CAS 2015年第5期127-128,207共3页
2009年,甲型H1N1流感在全球多个地方猪和人群中暴发,给人民群众的生命健康带来了巨大威胁,给经济发展和社会稳定产生了严重影响。及时快速的诊断是有效控制疫情大规模暴发的最有效途径之一。近几年随着现代分子生物学技术发展,猪流感诊... 2009年,甲型H1N1流感在全球多个地方猪和人群中暴发,给人民群众的生命健康带来了巨大威胁,给经济发展和社会稳定产生了严重影响。及时快速的诊断是有效控制疫情大规模暴发的最有效途径之一。近几年随着现代分子生物学技术发展,猪流感诊断方法在快速、准确性方面有了很大提高。对H1N1猪流感概况及猪流感的诊断方法进行了综述。 展开更多
关键词 甲型流感 H1N1 猪流感 诊断方法
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猪圆环病毒2型广东分离株的遗传演化分析 被引量:3
17
作者 胡俊 程松 +2 位作者 刘建奎 罗满林 《畜牧与兽医》 北大核心 2015年第7期5-9,共5页
为了解广东地区猪圆环病毒2型(PCV2)毒株的遗传变异情况,从广东不同地区的规模化猪场采集疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)病猪的淋巴结、肺脏和脾脏。对PCR鉴定为阳性的病料在PK-15细胞上增殖培养6代,采用PCR和相关分子生物学... 为了解广东地区猪圆环病毒2型(PCV2)毒株的遗传变异情况,从广东不同地区的规模化猪场采集疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)病猪的淋巴结、肺脏和脾脏。对PCR鉴定为阳性的病料在PK-15细胞上增殖培养6代,采用PCR和相关分子生物学软件对12个分离株进行全基因组克隆和测序分析。结果显示,分离株基因组全长为1 767 nt或1 768 nt,核苷酸序列同源性为94.6%~99.9%。遗传演化分析表明,12个分离株分布于3个大群,其中5株属于PCV2b,4株属于PCV2d,3株属于PCV2e,提示广东地区PCV2流行毒株已发生变化。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 全基因克隆 序列分析 遗传变异
一例山羊口疮的诊治 预览 被引量:1
18
作者 吕殿红 +5 位作者 温肖会 吴大成 袁洁 周秀蓉 贾春玲 魏文康 《广东畜牧兽医科技》 2015年第6期48-49,共2页
2014年10月,广州某湿地公园羊场饲养的羊只发病。病羊在唇、嘴角、舌头发生溃疡、生疮、结痂;发病率为100%,死亡率为11.8%;个别羊有发烧、呼吸道症状和腹泻。根据临床特征、病理变化和PCR检测,诊断为羊口疮。使用利巴韦林颗粒... 2014年10月,广州某湿地公园羊场饲养的羊只发病。病羊在唇、嘴角、舌头发生溃疡、生疮、结痂;发病率为100%,死亡率为11.8%;个别羊有发烧、呼吸道症状和腹泻。根据临床特征、病理变化和PCR检测,诊断为羊口疮。使用利巴韦林颗粒和阿奇霉素颗粒冲水口服,并用0.1%高锰酸钾和5%碘甘油对生疮部进行涂擦治疗1周左右,收到很好的治疗效果。 展开更多
关键词 羊口疮 PCR 诊断 治疗
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四例山羊放线菌病的诊断与治疗 预览
19
作者 吕殿红 +5 位作者 吴大成 温肖会 袁洁 周秀蓉 贾春玲 魏文康 《广东畜牧兽医科技》 2015年第5期51-52,共2页
2014年8月至2015年7月,在临床服务过程中遇到4例山羊耳下、肩前、腹下等部位出现脓包、肿块为主要特征的病例,结合流行病学调查、脓汁涂片检查等诊断为山羊放线菌病。对于脓包较大的病例,手术引流脓汁配合局部消炎有很好的治疗效果;对... 2014年8月至2015年7月,在临床服务过程中遇到4例山羊耳下、肩前、腹下等部位出现脓包、肿块为主要特征的病例,结合流行病学调查、脓汁涂片检查等诊断为山羊放线菌病。对于脓包较大的病例,手术引流脓汁配合局部消炎有很好的治疗效果;对于脓包较小的病例,采用封闭治疗效果较好。 展开更多
关键词 羊放线菌病 脓包 诊断 治疗
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H1N1亚型猪流感病毒HA和NA基因双重RT-PCR定型检测方法的建立与应用 预览 被引量:1
20
作者 温肖会 蔡春梅 +6 位作者 魏文康 吕殿红 贾春玲 袁洁 黄忠 周秀蓉 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第4期29-34,共6页
为了建立适用于临床诊断的H1N1亚型猪流感病毒快速检测方法,本研究根据GenBank已登录的H1N1亚型猪流感病毒HA和NA基因序列设计RT-PCR扩增引物,以H1N1亚型猪流感病毒、H3N2亚型猪流感病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒为试验对... 为了建立适用于临床诊断的H1N1亚型猪流感病毒快速检测方法,本研究根据GenBank已登录的H1N1亚型猪流感病毒HA和NA基因序列设计RT-PCR扩增引物,以H1N1亚型猪流感病毒、H3N2亚型猪流感病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒为试验对照,通过优化RT-PCR反应条件和反应体系,建立了H1N1亚型猪流感病毒HA和NA基因双重RT-PCR定型检测方法。同时,运用H1N1亚型猪流感病毒血凝和血凝抑制试验方法和本研究建立的方法对165份猪病料样品进行了对比验证。结果表明,本研究建立的H1N1亚型猪流感病毒双重RT-PCR具有良好的特异性、敏感性、重复性,所扩增的目的基因片段大小分别为428 bp和678 bp左右,可检出最小基因组RNA浓度为2.9×10-5μg/μL。本研究建立的方法和H1N1亚型猪流感病毒血凝和血凝抑制试验方法均从同一份猪肺脏样品中检测出H1N1亚型猪流感病毒,其余样品中均未检出H1N1亚型猪流感病毒,两种方法符合率为100%。本研究建立的方法适用于H1N1亚型猪流感病毒双基因定型检测,可在H1N1亚型猪流感病毒流行病学调查和临床诊断中应用。 展开更多
关键词 H1N1亚型猪流感 双重RT-PCR方法 HA基因 NA基因
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